α晶体蛋白在视神经损伤后再生中的作用研究进展

α晶体蛋白是构成晶状体的重要结构蛋白,属于小分子热休克蛋白（ sHSPs）家族,除了具有热休克蛋白（ HSPs）的共性,还具有抗细胞凋亡等作用。近年来研究还发现,α晶体蛋白可与视网膜神经节细胞（ RGCs）的细胞膜结合来促进RGCs的存活和轴突的再生,进而部分改善视功能,但其相关机制仍无统一的结论。本文就α晶体蛋白的基本结构与功能、α晶体蛋白在视神经损伤后对RGCs的保护作用及其机制展开综述。     

人脐血干细胞玻璃体腔移植对大鼠外伤性视神经损伤的保护作用

目的观察人脐血干细胞(human umbilical cord blood stem cells,h UCBSC)移植对视神经部分受损SD大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)的保护作用。方法将48只健康成年SD大鼠随机分为2组,2组SD大鼠暴露视神经,应用40 g夹持力的视神经夹在大鼠眼球后2 mm处夹视神经30 s造成部分视神经损伤模型,均损伤左眼。A组:伤后1周玻璃体腔注射脐血干细胞载体PBS,24只。B组:伤后1周玻璃体腔注射h UCBSC,24只;2组均于注射后7 d、14 d、21 d、28 d处死动物。处死前7 d双上丘注射50 g·L-1荧光金逆行标记双眼RGC。然后按时间先后处死大鼠分离视网膜置于荧光显微镜下,计数2组RGC并计算RGC标识率。结果 A、B两组视神经损伤眼RGC计数均低于未损伤眼(均为P<0.05),且随时间延长两组RGC标识率均呈下降趋势(均为P<0.05),但B组注射后7 d、14 d、21 d、28 d RGC标识率(77.52±6.33)%、(74.12±8.23)%、(64.78±5.21)%、(59.93±9.00)%下降幅度明显较A组(75.68±8.74)%、(68.21±10.59)%、(56.24±9.34)%、(48.91±8.81)%平缓。同时间段B组RGC标识率均高于A组,且差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论玻璃体腔注射h UCBSC可减缓外伤性视神经损伤大鼠视网膜中RGC的凋亡,对RGC具有一定的保护作用。     

氨基胍对视神经损伤后视网膜神经节细胞的保护性作用

视神经损伤是眼科常见疾病,多并发于颅脑外伤,预后不良,常致患者失明。由于视神经损伤的发病机制尚未完全明了,所以迄今为止其治疗仍是国内外眼科界的一大难题。现将视神经损伤后视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）凋亡及氨基胍（Aminogunidine,AG）对其保护性作用做一综述。     

黄体酮在大鼠视神经损伤再生中的保护作用

目的　探讨黄体酮对外伤引起的视网膜及视神经损伤后再生的作用及机制。方法　８０只大鼠随机分为正常组（不作任何处理）、假损伤组（只暴露视神经,不夹伤）、损伤１组（行视神经不完全损伤处理,伤后即刻给予腹腔注射生理盐水）、损伤２组（行视神经不完全损伤处理,伤后１ｈ给予腹腔注射黄体酮注射液）。分别于损伤后１ｄ、３ｄ、７ｄ、１４ｄ将各组５只大鼠右眼球摘除,取视网膜组织,ＨＥ染色光学显微镜观察视网膜形态学变化,免疫组织化学染色观察视网膜组织中谷氨酸转运体-１（ｇｌｕｔａｍａｔｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ-１,ＧＬＴ-１）及活化Ｐ３８-ＭＡＰＫ（ｐ-ｐ３８）的表达变化。结果　经黄体酮治疗的损伤２组各个时间点大鼠视网膜细胞核排列整齐,稀疏程度及空泡化较轻,视网膜形态改变轻微。免疫组织化学染色检测损伤１组视网膜ＧＬＴ-１在损伤后１ｄ、３ｄ、７ｄ、１４ｄ表达的平均光密度值分别为０．３６８±０．０３３、０．１５１±０．０２７、０．１０６±０．０３１和０．０７６±０．０２０,损伤２组分别为０．４６１±０．０１１、０．２３１±０．０２１、０．１３２±０．０２２和０．１０３±０．０１３,各时间点损伤２组较损伤１组均有所增加,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。损伤１组视网膜ｐ-ｐ３８在损伤后１ｄ、３ｄ、７ｄ表达的平均光密度值分别为０．４５９±０．０２９、０．３２４±０．０２３和０．２０１±０．０２４,损伤２组分别为０．３３９±０．０１９、０．２４５±０．０１４和０．１５４±０．０３２,各时间点损伤２组较损伤１组均明显降低,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　黄体酮对外伤性视网膜及视神经损伤均具有保护作用。     

视神经损伤后修复与再生的研究进展

视神经损伤后的治疗和功能恢复是医学领域的历史性难题。由于作为中枢神经系统一部分的视神经损伤后缺乏神经修复和再生所需的微环境,为此,有效的神经保护、防止神经元死亡和促进神经修复至关重要。大量研究证明:视功能的恢复与视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的损伤程度、轴浆转运物质合成功能状态、自身修复和再生能力均密切相关。近10a来,随着对神经损伤机制的深入了解,各类神经保护的研究也有了很大进展,在治疗视神经损伤方面展现出诱人的前景。我们通过阅读近年国内外相关文献,针对视神经损伤后RGCs再生及视神经保护相关实验研究和临床治疗方法作一综述。     

大鼠视神经损伤后视网膜小胶质细胞表达的初步观察

目的 研究大鼠视神经损伤后视网膜中小胶质细胞的表达情况.方法 实验研究.选取30只成年雌性健康SD大鼠,按照随机数字表法分为实验组和对照组各15只,分别用于细胞计数、免疫组织化学及免疫印迹实验.实验组在眼球后约1.5 ～2.0 mm处行右眼视神经鞘内切断术,术后5d于视神经断端处用荧光金逆行标记视网膜节细胞,手术后7d处死取材.对照组小鼠右眼行视神经切断术并标记,2d后处死取材.视网膜做铺片用于计数.用免疫组织化学法于视网膜切片上行小胶质细胞的表面标记物Iba-1染色,观察小胶质细胞的形态及数量,同时应用免疫印迹法检测视网膜内Iba-1蛋白含量的变化.两组间比较采用非配对student t-检验进行统计学分析.结果 对照组视网膜中有少量小胶质(Iba-1阳性)细胞表达,并呈非活化状态.视神经切断7d后小胶质细胞明显增多且呈半活化状态,免疫印迹结果显示损伤后Iba-1蛋白表达量明显增加到对照组的2.3倍(t=7.669,P=0.001).视视神经切断7d后节细胞数量为(1182±64)个/mm2,明显减少至对照组的51％(t=23.850,P＜0.01).结论 大鼠视神经损伤后小胶质细胞表达增多且呈部分激活状态,可能是视网膜受损后自我保护的表现之一.     

兔视神经损伤后视网膜神经节细胞MDA/SOD的变化

目的:观察兔视神经损伤后视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)丙二醛(malondialdehyde,MDA)/超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的变化。方法:选用新西兰白兔32只,分为对照组和损伤组,损伤组再根据损伤后不同时间分为3,7,14d组,每组8只16眼。采用硫代戊巴比妥酸法和黄嘌呤氧化法分别测定视网膜MDA/SOD含量。结果:损伤实验组MDA含量分别为5.95±0.78,7.67±0.64和8.29±1.02μmol/g,均明显高于正常对照组(3.82±0.54μmol/g);实验各组SOD含量分别为510±44,415±29和398±36μkat/g,均明显低于正常对照组(727±52μkat/g)。结论:自由基代谢在兔视神经损伤后RGC凋亡中起着重要作用,MDA/SOD含量测定在RGC凋亡的研究中有一定的意义。     

兔视神经损伤后视网膜神经节细胞线粒体跨膜电位的变化观察

目的观察兔视神经损伤后视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell,RGC）线粒体跨膜电位（mitochondrial transmembrane potentials,△ψm）的变化。方法选用新西兰白兔32只,分为对照组和损伤组,损伤组再根据损伤后不同时间分为3d、7d、14d组,共4组,每组8只兔16眼。采用Rh123染色,流式细胞术测定RGC△ψm。结果正常新西兰白兔RGC△ψm为3836.67±21.32。在损伤后3d、7d、14d,视网膜细胞△ψm分别为3055.41±7.74、1822.07±18.66、2617.38±7.37。各时间点的△ψm均明显低于正常对照组,且各时间点间△ψm差异有统计学意义（P〈0.05）。结论△ψm在RGC凋亡早期的观测中有一定的意义,并且能进行定量分析研究。     

视神经损伤对视网膜结构的形态学研究

研究正常视网膜神经节细胞（RGC）核的形态。分类和视神经不完全损伤对其影响；建立视神经不全损伤豚鼠模型，术后3月，测量RGC核的平均体积和体密度，视网膜各层的厚度；正常豚鼠RGC核按其体积大小分成大、中、小3群，其平均体积分别为36．35μm3、185、3μm3、80.0μm3，所占比例分别为20．9％，28．6％，49．5％，外伤3月后每群节细胞核的平均体积不大，但所占比例分别为1．74％，14．2％，84．1％；细胞核体密度从7．2％下降到3．7％；视网膜各层厚度均有下降，以内视网膜层的变化最敏感；进行RGC核体积分型能更好地体现节细胞对损伤的反应；大型节细胞对外伤最敏感。     

干细胞在视神经损伤修复中的应用

许多致盲性眼病是由视网膜神经节细胞（RGCs）损伤造成的,目前临床上缺乏有效的治疗方法。最近的研究显示干细胞可以替代或再生RGCs,从而有望修复受损的视功能。这些结果提供了新颖的视神经再生模式,但具体到临床应用,仍存在一系列问题需要解决。就应用干细胞再生视神经的研究进展进行综述。     

视神经损伤药物治疗的研究进展

视神经损伤是眼科常见的致盲性眼病，目前临床上尚无特效治疗方法。临床上常用的视神经损伤治疗方法主要有药物和手术两大类。治疗视神经损伤的药物主要有糖皮质激素、血管舒张剂、神经营养因子、钙离子通道阻滞剂、N-甲基-D-天门冬氨酸受体拮抗剂、Rho激动酶抑制剂以及抗氧化剂等。但传统激素和神经营养因子的疗效有限，为此，各国研究者仍在不断探索新的治疗药物。本文就近年来国内外视神经损伤药物治疗的研究进展进行综述。     

大鼠外伤性视神经损伤模型的建立

目的建立大鼠定量视神经损伤模型,为研究视神经损伤的发病机制及治疗效果奠定基础。方法健康Sprague-Dawley大鼠27只,随机分为3组,分别为A组(损伤组)12只、B组(假损伤对照组)12只、C组(正常对照组)3只。A组暴露视神经,应用40g力的视神经夹在大鼠眼球后2mm处夹视神经30s,B组仅暴露视神经,C组不做任何处理。A、B组按损伤后不同时间分为3d组、7d组、14d组、28d组,采用双上丘注射50g.L-1荧光金标记双眼视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells RGCs)。视网膜铺片荧光照相,计算RGCs计数,RGCs标识率及RGCs丧失率。结果 C组与B组RGCs计数及RGCs标识率比较,无明显差异;A组与B组各时间点RGCs计数及RGCs标识率比较,均有明显差异;A组视神经损伤后不同时间RCCs计数逐渐下降(3d:152.26±25.12,7d:111.19±20.32,14d:101.23±17.19,28d:94.86±18.26),14d组与28d组比较无统计学意义,其他时间点比较有统计学意义,视神经损伤后RGCs标识率随时间延长渐进性降低(3d:79.35%±8.29%,7d:59.76%±7.79%,14d:53.26%±7.26%,28d:51.29%±3.26%),而RGCs丧失率随时间延长渐进性增加(3d:20.65%±3.15%,7d:40.24%±5.63%,14d:46.74%±4.37%,28d:48.71%±5.12%)。结论应用40g力视神经夹在大鼠眼球后2mm处夹视神经30s能成功建立定量视神经损伤动物模型。     

干细胞对视神经损伤的修复作用

视网膜神经节细胞损伤或死亡往往会导致视功能不可逆性损害。目前尚无有效的治疗方法修复损伤的视神经,恢复受损的视功能。干细胞具有多向分化潜能,其在视神经保护及损伤修复中的作用日渐成为研究热点。本文旨在对干细胞在视神经损伤修复基础和临床研究方面的进展进行综述。     

视神经保护的研究进展

视神经作为中枢神经的代表,它的再生和保护机制近年来得到深入而广泛的研究,视神经损伤后对视网膜神经节细胞的保护主要是停止或防止其发生凋亡,主要途径有:谷氨酸抑制剂、一氧化氮抑制剂、神经营养因子、基因治疗、针灸、中药等。但是迄今还没有一种药物或手术方法对视神经损伤的修复有明确的疗效。视神经保护仍处于研究探索阶段,任重而道远。     

Advances in researches on the optic nerve protection

The mechanisms of regeneration and protection of optic nerve, the represent of central nerves, are researched more and more profoundly and extensively in recent years. The retinal ganglion cells(RGCs) protection after injury is stopping or preventing it from apoptosis mainly. The methods include glutamic acid inhibitor, nitric oxide (NO) inhibitor, neurotrophic factor, gene therapy, acupuncture, traditional Chinese medicine and so on. However, there are no medicines or operations that play definite curative role in the RGCs protection after injury up to now. So the ganglion cells protection is at its exploratory research stage, which will shoulder heavy responsibilities     

细胞因子对视神经损伤修复作用的研究进展

创伤、代谢、高眼压等多种因素均可能造成视网膜神经节细胞和或视神经损伤，而视网膜神经节细胞损伤凋亡后无法自主再生，因此往往会造成视力下降甚至丧失等严重后果。对于视神经损伤，目前临床上尚无非常有效的治疗方法。近年有研究发现细胞因子可以明显促进视网膜神经节细胞的存活和轴突再生。本文就其中睫状神经营养因子、胶质源性神经营养因子、色素上皮衍生因子、粒细胞集落刺激因子、血浆凝血因子、促红细胞生成素等几种细胞因子促进视神经损伤修复作用的研究进展进行综述。     

Histological observation of RGCs and optic nerve injury in acute ocular hypertension rats

AIM: To explore the injury of retinal ganglion cells (RGCs) and optic nerves in acute ocular hypertension (OHT) rats. METHODS: We retrogradely labeled RGCs and optic nerves of Sprague-Dawley rats by injecting 20g/L fluorogold (FG) into bilateral superior colliculi. Twenty-four hours after the injection, the right eyes were performed physiological saline anterior chamber perfusion with intraocular pressure maintained at 100mmHg for 60 minutes, while the contralateral eyes were performed sham procedure as control group without elevation of the saline bottle. Retinal hematoxylin and eosin (HE) sections, retinal whole mounts and frozen sections were made 14 days later to observe the morphology and survival of RGCs. Frozen sections and transmission electron microscopy were utilized to investigate the histological manifestations of optic nerves at the same time. RESULTS: A larger number of RGCs presented in control group. It had an average density of 1995±125/mm2 and distributed uniformly, while RGCs in OHT eyes reduced significantly to 1505±43/mm2 compared with control group (P<0.05). The optic nerves in control group showed stronger and more uniform fluorescence on the frozen sections, and the auxiliary fibers as well as myelin sheaths were in even and intact organization by transmission electron microscopy. However, exiguous fluorescence signals, vesicular dissociation and disintegration of myelin sheaths were found in OHT group. CONCLUSION: The present study suggested that fluorogold retrograde tracing is a feasible, convenient method for quantitative and qualitative study of neuronal populations and axonal injury in acute ocular hypertension rats.     

横向定量牵拉法制作大鼠视神经精确损伤模型

目的:采用横向定量牵拉法制作大鼠视神经损伤模型,并利用荧光金逆行标记评价视神经牵拉伤后视网膜节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的存活率.方法:将25只雄性Wistar大鼠随机均分为5组,即假手术组和视神经牵拉伤后1、3、7、14d组.模型组用横向张力计牵拉左眼视神经,假手术组仅暴露左眼视神经但不予牵拉,各组以右眼为正常对照.用荧光金逆行标记,并观察假手术组及视神经牵拉伤后1、3、7、14d组RGCs的密度.结果:正常对照组RGCs形态多呈圆形或椭圆形,边界清楚,细胞外无明显荧光染料渗漏,部分可见明显细胞突起;而视神经牵拉伤后RGCs随时间延长而不断减少,细胞分布不均匀,并可见大量荧光渗漏及小胶质细胞.与正常对照组相比,假手术组RGCs形态和密度无明显差异(P＞0.05);视神经牵拉伤后第1、3、7、14d的RGCs数量进行性减少,且其密度均明显低于正常对照组(P＜0.01);视神经牵拉伤后第1、3、7、14d的RGCs存活率分另别为78.94％±0.92％、60.07％±0.90％、38.92％±1.42％和17.31％±0.97％.结论:横向定量牵拉法可以建立易于量化的视神经损伤模型,为进一步研究视神经损伤后的治疗方法提供有力工具.