自拟龙牡五加柴参汤治疗失眠症60例疗效分析

采用自拟的龙牡五加柴参汤治疗60例失眠症,利用西药舒乐安定片为对照组观察30例,治疗前后比较其疗效。中药龙牲五加柴参汤治疗组愈显率为55％,有效率为35％,总有效率为90％。西药组愈显率为33．33％,有效率为36．67％,总有效率为70％。中药龙牡五加柴参汤疗效明显优于西药对照组,因中药无副作用,故有较好临床意义。     

自拟柴青解郁汤对抑郁症小鼠的抗抑郁作用

目的探讨自拟柴青解郁汤在抑郁症小鼠的抗抑郁作用。方法将50只昆明种雄性小鼠随机分为5组:对照组、模型组、盐酸氟西汀组、柴青解郁汤组、柴青解郁汤与盐酸氟西汀联合组(联合用药组),每组10只。采用慢性轻度不可预见性应激加孤养复制抑郁症小鼠模型,观察各组小鼠体质量变化、糖水消耗实验、悬尾实验及强迫游泳实验结果并进行比较。结果实验前(0 d)各组小鼠体质量及糖水偏爱百分比比较差异均无统计学意义(P>0.05);造模后(14 d),模型组、盐酸氟西汀组、柴青解郁汤组和联合用药组小鼠体质量及糖水偏爱百分比显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);但模型组、盐酸氟西汀组、柴青解郁汤组和联合用药组之间小鼠体质量及糖水偏爱百分比比较差异均无统计学意义(P>0.05)。给药后(35 d)盐酸氟西汀组、柴青解郁汤组和联合用药组小鼠体质量及糖水偏爱百分比显著高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05);联合用药组小鼠体质量及糖水偏爱百分比显著高于盐酸氟西汀组和柴青解郁汤组,差异均有统计学意义(P<0.05);盐酸氟西汀组和柴青解郁汤组小鼠体质量及糖水偏爱百分比比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间显著长于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);盐酸氟西汀组、柴青解郁汤组、联合用药组小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间显著短于模型组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);联合用药组小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间显著短于盐酸氟西汀组和柴青解郁汤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论自拟柴青解郁汤具有抗抑郁作用,且与盐酸氟西汀联合用药抗抑郁效果更佳。     

艾灸对腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠及下丘脑组织中P物质、血管活性肠肽表达的影响

目的 观察艾灸对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠结肠及下丘脑组织中P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)表达的影响.方法 将36只SPF级健康SD雄性大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、艾灸组3组,每组12只.除空白组外,艾灸组和模型组大鼠采用慢性束缚联合番泻叶溶液灌胃的方法 制备IBS-D模型.艾灸组采用...     

藿香正气提取物对IBS-D大鼠引起的肠动力紊乱及血清NO含量变化的影响

目的：探讨藿香正气提取物对IBS（肠易激综合征）-D大鼠肠动力紊乱的调节作用。方法：将40只大鼠随机分为正常组、模型组、用药高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组8只,采用番泻叶灌胃十四肢束缚应激方法建立IBS-D大鼠模型,用药各组分别灌服804,536,268mg／kg藿香正气提取物,1次／d,连续4d,采用碳末推进及硝酸还原酶法观察藿香正气提取物对IBS-D大鼠小肠推进率及血清NO含量变化的影响。结果：与正常组比较,模型组大鼠小肠推进率明显加快（P〈0.01）,血清中NO含量明显降低（P〈0.01）;用药中剂量组可使大鼠小肠推进率降低（P〈0.05）,用药高、中剂量组可明显提高IBS-D大鼠血清NO含量（P〈0.01）。结论：藿香正气提取物对IBS-D大鼠肠道功能紊乱具有正向调节作用。     

温阳止泻汤治疗腹泻型肠易激综合征(脾肾阳虚证)的临床观察

目的 探讨温阳止泻汤治疗腹泻型肠易激综合征(IBS-D)的疗效.方法 将78个确诊为IBS-D且证型属于脾肾阳虚的患者纳入研究并随机分组,对照组40例予口服马来酸曲美布汀胶囊,0.1 g/次,3次/d;观察组38例予温阳止泻汤治疗,150 mL/次,2次/d,对照组与观察组均以28 d为1个疗程.观察症状积分、胆囊收缩素(CCK)情况;比较对照组与观察组临床疗效及不良反应情况.结果 经治疗,2组患者症状较治疗前改善,但观察组治疗后症状积分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后2组CCK均较治疗前改善,对照组治疗后CCK水平为(4.16±1.63)pg/mL,观察组则为(3.22±0.84)pg/mL,观察组改善更显著,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后对照组治疗总有效率为67.50%,观察组为89.47%,观察组总有效率更高,差异有统计学意义(P<0.05);2组均未发现不良反应.结论 温阳止泻汤治疗IBS-D疗效显著,能更好地改善症状及CCK水平,安全可靠,值得进一步推广.     

腹泻型肠易激综合征患者内脏敏感性、肠屏障功能及 自主神经功能的评价

目的：评价腹泻型肠易激综合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)患者的内脏敏感性、 肠屏障功能和自主神经功能(autonomic nerve function,ANF),探索它们在IBS-D病理生理学中的作用。方法：以2015 年10月至2016年3月就诊于中日友好医院消化内科的46例IBS-D患者(IBS-D组)和20例健康志愿者(对照组)为研究对象, 采用问卷评估其临床及精神心理症状,并检测内脏敏感性、肠屏障功能及ANF,比较两组上述各指标的差异,并分 析IBS-D组中各指标间的相关性。结果：IBS-D组的病情尺度调查表(IBS symptom severity scale,IBS-SSS)、汉密尔顿焦 虑量表(Hamilton anxiety scale,HAMA)、汉密尔顿抑郁量表(Hamilton depression scale,HAMD)和内脏敏感指数(visceral sensitivity index,VSI)评分均显著高于对照组(P<0.01)。内脏敏感性检测中,IBS-D组对直肠扩张刺激的最大耐受阈值 显著低于对照组(P<0.01),初始感觉阈值和持续排便阈值两组差异无统计学意义(P>0.05)。肠屏障功能血清标志物 二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)和D-乳酸在IBS-D组中均显著升高(均P<0.05)。IBS-D组的ANF总分和副交感计分 以及两者的异常比例均显著高于对照组(均P<0.05)。在IBS-D组各指标相关性分析中,HAMA,VSI和血清DAO与IBSSSS 呈显著正相关(分别r=0.528,0.575,0.507;P<0.01),3个内脏感觉阈值均与IBS-SSS呈显著负相关(分别r=–0.636, –0.476,–0.697,P<0.01);与内脏感觉阈值呈显著负相关的指标除IBS-SSS外,还有HAMA,HAMD,VSI和血清 DAO(均P<0.05);ANF与其他指标间未发现关联。结论：IBS-D患者存在精神心理异常、内脏高敏感、肠屏障受损和 以副交感神经功能异常为主的ANF失调,前三者均与病情程度相关,可能在IBS-D病理生理学中发挥了重要作用。     

痛泻安脾汤对腹泻型肠易激综合征大鼠5-羟色胺、5-羟色胺转运蛋白的影响

目的:观察痛泻安脾汤对腹泻型肠易激综合征(diarrhea irritable bowel syndrome,IBS-D)模型大鼠5-羟色胺(5-hydroxytrypta mine,5-HT)、5-羟色胺转运蛋白(serotonintransporter,SERT)影响。方法:48只雌雄各半的SPF级SD大鼠进行适应性饲养1周后,遵循随机原则将大鼠分为正常组12只,造模组36只(模型组、中药组、西药组),每组各12只,采用束缚+番泻叶灌胃法建立IBS-D肝郁脾虚证模型。造模成功后,正常组、模型组给予生理盐水灌胃,西药组给予阿洛司琼溶液,中药组给予痛泻安脾汤灌胃。酶联免疫吸附法检测血清5-HT水平,免疫组织化学法检测结肠组织、脑组织中5-HT、结肠组织SERT水平,Western blot法检测结肠组织中5-HT蛋白的表达。结果:血清5-HT水平比较:与正常组大鼠血清5-HT水平比较,模型组大鼠血清5-HT水平升高明显(P<0.05);与模型组大鼠大鼠血清5-HT水平比较,中药组、西药组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结肠组织Western blot检测结果比较:与模型组大鼠大鼠比较,中药组、西药组大鼠结肠5-HT蛋白表达显著降低(P<0.01);与正常组大鼠比较,模型组大鼠结肠5-HT蛋白表达水平升高(P<0.01)。结肠和脑组织(5-HT)免疫组织化学结果比较:与正常组大鼠比较,模型组大鼠5-HT水平升高明显(P<0.01);中药组、西药组血清5-HT水平显著低于模型组(P<0.01)。结肠免疫SERT结果比较:在模型组大鼠肠黏膜中SERT呈低表达状态,且显著低于正常组(P<0.01);中药组、西药组大鼠肠组织SERT表达水平显著高于模型组(P<0.01)。结论:痛泻安脾汤能够调节IBS-D大鼠5-HT、SERT水平,缓解腹痛、腹泻、腹胀等不适症状。     

肠康颗粒对腹泻型肠易激综合征大鼠的药效学研究

目的 观察肠康颗粒对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠的治疗作用,初步探讨其作用机制。方法 乳大鼠出生后第8~21天,每天接受直结肠扩张刺激建立IBS-D内脏高敏感模型。60只大鼠随机分为6组,即正常对照组、模型对照组、阳性药组、肠康颗粒高、中、低剂量组,连续30d分别灌胃给药。进行腹壁撤退反射(AWR)评分。酶联免疫分析法检测大鼠血清降钙素基因相关肽（CGRP）,大鼠结肠组织血管活性肠肽（VIP）。免疫组化法测定大鼠结肠黏膜层血管P物质（SP）阳性表达。结果 与正常对照组比较,模型对照组大鼠AWR评分明显升高（P<0.01）,血清CGRP含量、结肠组织VIP含量及结肠黏膜层血管SP阳性表达细胞数均显著降低（P<0.01）。与模型对照组比较,肠康颗粒各组大鼠的AWR评分明显降低（P<0.01）,血清CGRP含量、结肠组织VIP含量明显升高（P<0.05～0.01）,肠康颗粒中、高剂量组大鼠结肠黏膜层血管SP阳性表达细胞数明显的升高（P<0.05～0.01）。结论 肠康颗粒对IBS-D大鼠有一定治疗作用。其作用机制可能与抑制IBS-D大鼠血清CGRP及结肠组织VIP含量的下降,抑制大鼠结肠黏膜层血管SP阳性表达下降有关。      

穴位贴敷联合加味葛根芩连汤治疗腹泻型肠易激综合征脾胃湿热证临床疗效观察

目的 观察穴位贴敷联合加味葛根芩连汤治疗腹泻型肠易激综合征（diarrhea type irritable bowel syndrome,IBS-D）脾胃湿热证的临床疗效。方法 将60例IBS-D脾胃湿热证患者随机分为对照组和治疗组,每组30例。对照组予以加味葛根芩连汤治疗,治疗组采用穴位贴敷联合加味葛根芩连汤治疗,疗程均为2周。观察两组临床疗效及生活质量改善情况。结果 治疗组临床疗效优于对照组（P＜0.05）;与治疗前比较,两组治疗后腹泻、腹痛、口渴、小便短黄、肛门灼热积分和总积分均显著降低（P＜0.05）,治疗组腹泻积分和总积分降低程度显著大于对照组（P＜0.05）。两组生活质量评分（SF-12）总分均明显提高（P＜0.05）,但治疗组较对照组提高更为显著（P＜0.05）。结论 加味葛根芩连汤能改善IBS-D脾胃湿热证患者的临床症状,提高其生活质量,联合穴位贴敷治疗疗效更佳。     

从内脏敏感性角度探讨安肠汤治疗腹泻型肠易激综合征的临床疗效及其对血清5-羟色胺水平的影响研究

背景　腹泻型肠易激综合征（IBS-D）作为消化系统的常见病和多发病之一,目前单纯应用西医治疗方案对于IBS-D患者的诊疗特别是内脏敏感性的调节治疗效果不够显著,且容易复发,因此寻找一种更为有效的治疗IBS-D的方法显得尤为重要。目的　从内脏敏感性角度,探讨安肠汤治疗IBS-D的临床疗效及其对血清5-羟色胺（5-HT）水平的影响。方法　选取2017年1月—2018年1月在广西中医药大学附属瑞康医院消化内科住院及门诊就诊的IBS-D患者80例。采用随机数字表法将患者分为对照组40例和观察组40例。对照组给予口服马来酸曲美布汀胶囊治疗,观察组在对照组的基础上加口服安肠汤治疗,两组均治疗8周。比较两组治疗开始前与治疗结束后的临床症状严重程度〔肠易激综合征症状严重程度量表（IBS-SSS）得分〕、内脏敏感性〔内脏敏感指数量表（VSI）得分〕、直肠动力指标〔肛管静息压（ARP）、肛管收缩压（ASP）、肛管最大收缩压（AMCP）、直肠静息压（RRP）、直肠排便压（IRP）〕、内脏感觉指标〔初始感觉阈值、初始排便冲动阈值、最大耐受容量〕、血清5-HT水平。结果　治疗后观察组患者IBS-SSS、VSI得分低于对照组（P<0.05）;对照组、观察组患者治疗后IBS-SSS、VSI得分均低于本组治疗前（P<0.05）。治疗后观察组患者ARP、初始感觉阈值、初始排便冲动阈值、最大耐受容量大于对照组（P<0.05）;对照组、观察组患者治疗后ARP、初始感觉阈值、初始排便冲动阈值、最大耐受容量均大于本组治疗前（P<0.05）。治疗后观察组患者血清5-HT水平低于对照组（P<0.05）;对照组、观察组患者血清5-HT水平均低于本组治疗前（P<0.05）。结论　从内脏敏感性的角度,安肠汤能够从整体上改善IBS-D患者的症状严重程度及内脏高敏感性,其可能是通过降低IBS-D患者血清5-HT水平,提高ARP、初始感觉阈值、初始排便冲动阈值及最大耐受容量,调节患者的内脏高敏感性,从而缓解其腹痛、腹泻、腹胀等症状。     

固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠气道上皮紧密连接蛋白及CCSP的影响

  目的  研究固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠气道上皮紧密连接蛋白及Clara细胞分泌蛋白(CCSP)的影响, 探讨其防治缓解期哮喘的可能机制。  方法  联合使用卵清蛋白(OVA)及呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)建立哮喘缓解期小鼠模型, 将36只Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、固本防哮饮低剂量组、固本防哮饮中剂量组、固本防哮饮高剂量组和孟鲁司特钠组, 每组6只。模型建立完成后, 固本防哮饮各剂量组分别予不同剂量(12、24、36 g·kg-1)固本防哮饮, 孟鲁司特钠组予2.6 mg·kg-1孟鲁司特钠,各组均灌胃28 d。末次给药后24 h留取样本。使用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组小鼠肺组织病理; Western blot、qPCR及免疫组化检测各组小鼠肺组织中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)等气道上皮紧密连接蛋白表达; ELISA法检测肺组织及肺泡灌洗液(BALF)中CCSP的表达。  结果  HE染色结果显示, 与正常组相比, 模型组小鼠肺组织中可见明显的炎性细胞浸润(P < 0.01), 固本防哮饮中、高剂量组小鼠肺组织中炎性细胞浸润减少(P < 0.05,P < 0.01);与正常组相比,模型组中ZO-1、闭合蛋白(Occludin)和桥粒芯胶蛋白(Desmocollin)的蛋白表达水平显著降低(P < 0.05,P < 0.01),免疫组化结果显示上述指标蛋白在模型组中表达减少(P < 0.01, P < 0.001)且排列松散, 固本防哮饮各剂量组对上述蛋白表达有不同程度地回调; 同时,模型组中ZO-1、ZO-2、纽带蛋白(Vinculin)、连环蛋白(Catenin) mRNA的表达水平显著降低(P < 0.05,P < 0.01),固本防哮饮高剂量组ZO-1、ZO-2、Vinculin、Catenin mRNA表达水平显著升高(P < 0.05);与正常组相比, 模型组小鼠肺组织及BALF中CCSP的表达显著下降(P < 0.01), 低、高剂量固本防哮饮显著增加肺组织及BALF中CCSP的表达(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  固本防哮饮能够上调气道上皮紧密连接蛋白以及CCSP的表达水平, 修复上皮损伤, 恢复上皮屏障功能, 从而防治哮喘。      

2型糖尿病患者血清与粪便的代谢组学研究

  目的  研究2型糖尿患者与健康者血清和粪便的代谢组学差异，分析差异代谢物与2型糖尿病之间的相关性。  方法  选择2018年1月至2019年3月在昆明医科大学第二附属医院内分泌科住院的2型糖尿病患者53例，以及同期常规体检健康对照人群30例，采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱技术对两组研究对象的血清代谢物及30例糖尿病患者与对照组的粪便代谢物进行非靶向和靶向的代谢组学研究。应用Spearman相关性分析方法对血清和粪便中的差异代谢物与2型糖尿病相关指标的相关性进行分析。  结果  在2型糖尿病组与健康对照组血清样本中鉴定出15个差异代谢物，在粪便样本中鉴定出的差异代谢物则有6个。其中，糖尿患者血清中的谷氨酰胺、壬二酸、癸二酸及3-羟基癸二酸等二羧酸类羟基化衍生物明显低于健康对照组，差异有统计学意义（P < 0.01），而琥珀酰乙酰乙酸、缬氨酸、亮氨酸、葡萄糖、乳酸的含量则高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.01），并且琥珀酰乙酰乙酸、乳酸与糖化血红蛋白、餐后2 h血糖及空腹血糖浓度具有较强的正相关性，而壬二酸、癸二酸及二羧酸类羟基化衍生物与血糖浓度则具有较强的负相关；在粪便代谢物中，去氧胆酸和鹅去氧胆酸等胆汁酸与受检者的血糖浓度也有着一定的正相关性，并且单变量分析结果显示，与健康对照组相比糖尿病患者血清中的去氧胆酸和鹅去氧胆酸均显著性升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。  结论  2型糖尿患者的血清代谢组学与健康者具有明显的差异，这些差异代谢物与糖尿病的发生和发展具有较强的关联性。在粪便代谢组学中，糖尿患者的胆汁酸水平与血糖的浓度变化也密切相关。     

黄芪汤调节TLR4/NF-κB信号通路改善高糖诱导足细胞损伤的研究

  目的  探讨黄芪汤对高糖诱导足细胞损伤的作用及机制。  方法  体外培养人足细胞, 采用30 mmol·L-1葡萄糖干预24 h诱导足细胞损伤, 分别设置对照组、模型组、黄芪汤低浓度组(10 μg·mL-1)、黄芪汤中浓度组(30 μg·mL-1)和黄芪汤高浓度组(100 μg·mL-1)。采用CCK-8法检测细胞增殖能力, 划痕实验检测细胞迁移能力,qPCR法检测TNF-α、IL-6等炎症因子mRNA表达, ELISA法检测足细胞上清TNF-α、IL-6的含量,Western blot法检测足细胞TLR4、NF-κB、p-NF-κB、TNF-α及IL-6蛋白表达。  结果  与对照组比较, 模型组细胞划痕愈合率明显降低(P < 0.01),足细胞中TNF-α、IL-6、CCL24 mRNA表达水平,上清液中TNF-α、IL-6的含量和TLR4、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α及IL-6蛋白表达均显著增加(P < 0.05,P < 0.01)。与模型组相比, 黄芪汤组细胞划痕率明显升高(P < 0.01),足细胞中TNF-α、IL-6的含量和mRNA表达,以及TLR4、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达均显著减少(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  黄芪汤能有效减轻高糖对人足细胞的炎症损伤, 增强细胞增殖、迁移能力, 抑制细胞凋亡, 其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路、下调炎症因子的表达有关。      

胆南星拮抗热性惊厥模型小鼠脑组织损伤及炎症的作用研究

  目的  研究胆南星拮抗热性惊厥模型小鼠脑组织损伤及炎症的药效作用。  方法  采用干酵母混悬液及戊四氮溶液构建热性惊厥小鼠模型, 考察不同剂量胆南星水提物对模型小鼠肛温、惊厥潜伏期及惊厥持续时间的影响, HE染色观察小鼠海马神经元形态, ELISA法检测小鼠血清cAMP、PGE₂水平, Western blot法检测脑组织COX-2、iNOS、γ-氨基丁酸A型受体(GABAAR)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)蛋白表达, qPCR法检测海马组织炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达。  结果  与模型组比较, 胆南星高剂量组能够降低模型小鼠肛温(P < 0.05), 延长惊厥潜伏期(P < 0.05), 缩短惊厥持续时间(P < 0.01), 上调GABAAR蛋白表达(P < 0.05);同时降低血清cAMP、PGE₂水平(P < 0.01), 改善海马神经元细胞形态学变化, 下调脑组织COX-2、iNOS、GFAP蛋白表达(P < 0.05), 降低海马组织炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达水平(P < 0.05)。  结论  胆南星具有良好的抗热性惊厥作用, 其机制可能与解热、拮抗脑组织炎症有关。      

绿原酸通过TLR4/NF-κB信号通路调控脓毒症大鼠肠上皮细胞屏障功能的研究

目的 观察绿原酸通过调控TLR4/NF-κB信号通路减轻脓毒症(sepsis)大鼠肠道氧化应激损伤、改善肠上皮细胞屏障功能的作用。方法 选取SD大鼠60只,采用随机数字表法分成假手术组、模型对照组、绿原酸(低、高剂量)组,每组15只。术后24 h,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10;比色法测定小肠组织中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;采用Western blotting法测定小肠组织中的蛋白表达[密封蛋白-1(Claudin-1)、闭锁连接蛋白-1(ZO-1)及TLR-4/NF-κB通路相关的蛋白]。结果 与模型对照组[(4.45±0.14)分]比较,低剂量组[(4.17±0.22)分]、高剂量组[(1.95±0.08)分]Chiu评分明显下降(t=4.159、60.048,均P<0.001);高剂量组血清TNF-α、IL-6、IL-10水平及小肠组织中NO、MDA含量均显著降低(均P<0.05),SOD含量、Claudin-1、ZO-1蛋白表达量及MyD88...     

清肺口服液黄酮类成分改善RSV感染小鼠肺上皮屏障损伤的机制研究

  目的  探讨清肺口服液黄酮类成分(Fla)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠肺上皮屏障损伤的保护机制。  方法  将BALB/c小鼠随机分为正常组,模型组,Fla低、高剂量组(30、60 mg·kg-1·d-1),阳性药利巴韦林组(46 mg·kg-1·d-1)。建立RSV感染的小鼠模型, 持续给药4 d后, HE染色观察肺组织病理学变化; ELISA检测肺泡灌洗液(BALF)中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量; 以BALF蛋白含量和BALF/血清荧光比评估肺上皮通透性; Western blot检测肺组织紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、p-p38 MAPK、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)的蛋白表达。  结果  与模型组相比, Fla高、低剂量组小鼠肺组织病理损伤减轻(P < 0.05, P < 0.01), BALF中IL-1β、TNF-α含量下降(P < 0.05, P < 0.01), BALF蛋白含量和BALF/血清荧光比降低(P < 0.05, P < 0.01), 肺组织中Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达升高(P < 0.05, P < 0.01), p-p38 MAPK/p38 MAPK、TLR4、MyD88蛋白表达下降(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  Fla可能通过抑制TLR4/MyD88/p38 MAPK通路, 促进紧密连接蛋白表达, 减轻肺部炎症, 从而改善RSV导致的肺上皮屏障损伤。      

肠愈宁对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织claudin-1、ZO-1、occludin蛋白表达的影响

  目的  探讨肠愈宁对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织紧密连接(TJ)关键蛋白咬合蛋白(occludin)、闭合蛋白-1(claudin-1)、带状闭合蛋白-1(ZO-1)表达的影响。   方法  将60只健康雄性SD大鼠按照随机数字表法分为空白对照组、模型对照组、肠愈宁组、美沙拉嗪组,每组各15只。采用2, 4, 6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇复合液(100 mg/kg TNBS+50%乙醇0.25 mL)一次性灌肠制备UC大鼠模型,造模成功后,药物干预7 d。光镜下观察大鼠结肠组织病理形态学变化,透射电镜观察大鼠结肠黏膜超微结构,免疫荧光染色法观察大鼠结肠组织occludin、claudin-1、ZO-1蛋白荧光强度。   结果  光镜与电镜观察显示,模型对照组大鼠结肠黏膜充血、水肿,炎症渗出明显,细胞间紧密连接断裂;而经肠愈宁干预后,大鼠结肠黏膜病理状态明显改善,细胞间紧密连接少部分断裂。免疫荧光染色结果显示,模型对照组大鼠结肠组织claudin-1、ZO-1、occludin蛋白荧光强度(0.11±0.01、0.11±0.01、0.09±0.01)较空白对照组明显降低(0.14±0.01、0.15±0.03、0.13±0.00,均P＜0.05);经肠愈宁干预后,大鼠结肠组织claudin-1、ZO-1、occludin荧光强度较模型对照组明显升高(0.13±0.00、0.14±0.02、0.12±0.01,均P＜0.05)。   结论  肠愈宁可通过上调TJ关键蛋白claudin-1、ZO-1、occludin的表达修复结肠黏膜损伤,治疗UC。      

当归补血汤通过miR-27a/TGF-β1/Smad3通路抑制HK-2细胞纤维化作用及机制研究

  目的  探讨当归补血汤通过miR-27a调控HK-2细胞纤维化的机制。  方法  HK-2细胞分为对照组、高糖组、高糖+空白血清组、高糖+当归补血汤含药血清组。采用MTT法检测各组细胞增殖情况; 采用Western blot法检测纤维化相关因子波形蛋白(Vimentin)、Ⅳ型胶原(COL Ⅳ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p-Smad3/Smad3和转化生长因子(TGF)-β1蛋白的表达情况; qPCR法检测miR-27a及纤维化相关因子mRNA的表达情况; 通过转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA并向培养基中加入TGF-β1, 观察miR-27a的表达和纤维化相关蛋白表达的情况。  结果  MTT结果显示, 与对照组相比, 高糖组细胞增殖率明显降低(P < 0.05, P < 0.001), 当归补血汤含药血清作用24、48 h后细胞增殖率明显提高(P < 0.05, P < 0.001)。Western blot结果显示, 当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞纤维化相关蛋白COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3的表达(P < 0.05, P < 0.01)。qPCR结果显示, 当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1 mRNA和miR-27a的表达(P < 0.05, P < 0.01)。TGF-β1处理细胞后, 细胞纤维化加重, miR-27a的表达升高(P < 0.05, P < 0.01), 当归补血汤含药血清可明显降低TGF-β1诱导的纤维化细胞中miR-27a的表达升高(P < 0.001)。转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA可明显降低TGF-β1诱导的细胞纤维化蛋白COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3表达的升高(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  当归补血汤含药血清可促进HK-2细胞增殖, 并通过miR-27a/TGF-β1/Smad3信号通路调控HK-2细胞纤维化。      

NF-κB/iNOS信号通路在感音神经性听力损失小鼠模型中对螺旋神经节的影响

  目的  探究在3-硝基丙酸（3-NP）诱导的感音神经性听力损失小鼠模型中核转录因子κB（NF-κB）/诱导型一氧化氮合酶（iNOS）信号通路的表达水平变化对听力损失的影响。   方法  本研究采用鼓室注射法进行动物建模。将C57BL/6雄性小鼠分为3个组,每组9只。3-NP组（鼓室内注射3-NP溶液）,3-NP+EVP4593组（鼓室内注射3-NP溶液,腹腔注射NF-κB抑制剂EVP4593溶液）,以及对照组〔鼓室内注射磷酸缓冲液（PBS）〕。在注射前后进行听性脑干反应检测。4周后取出耳蜗,并进行NF-κB p65、RelB、iNOS、Caspase-3抗体的免疫组织化学及实时荧光染色定量（qRT）-PCR检测。   结果  3-NP组小鼠反应阈值较对照组和3-NP+EVP4593组高（P<0.05）,且3-NP+EVP4593组的听阈比对照组高（P<0.05）。免疫荧光染色和qRT-PCR结果显示3-NP暴露可导致螺旋神经节区域NF-κB p65和RelB、iNOS表达较对照组增加（P<0.05）,其表达可随着EVP4593的应用而减少（P<0.05）。3-NP组螺旋神经节细胞Caspase-3表达高于对照组,3-NP+EVP4593组Caspase-3的表达较3-NP组减少（P<0.05）。   结论  3-NP可通过激活NF-κB/iNOS信号通路导致感音神经性听力损失模型小鼠的耳蜗螺旋神经节发生炎症反应,这可能在感音神经性听力损失的发病中起重要作用。     

Si-GATA-3对AR小鼠PBMCs中Th1/Th2细胞亚群功能的体外调节

目的 研究RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体si-GATA-3在体外对变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）小鼠PBMCs中Th2、Th1细胞亚群功能的调节作用。方法 构建RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体siGATA-3,并进行包装、纯化和滴定。BALB/C小鼠随机分为AR组和正常对照组。用卵蛋白构建BALB/C小鼠变应性鼻炎模型,抽取其外周血并分离外周血中单个核细胞（PBMCs）,随机分为3组,即si-GATA-3组、siNC组和AR组。进行细胞培养,然后分别用si-GATA-3、si-NC和生理盐水对3组变应性鼻炎小鼠的PBMCs进行干预72 h,用生理盐水代替si-GATA-3干预正常对照组小鼠的PBMCs。干预结束分离PBMCs和细胞培养上清液。分别用荧光定量qPCR和Western bloting方法检测PBMCs中GATA-3 mRNA、T-bet mRNA和GATA-3、T-bet蛋白的相对表达量;用ELISA技术检测细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ的含量。结果 构建出RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体si-GATA-3,其滴度为5...