当归的炮制对当归补血汤中活性成分的影响

当归补血汤为金元四大家之一的李东垣所创,至今已有近800年的历史,由当归与黄芪两味中药按照质量比1∶5组成,具有补气生血的功效。主治血虚发热或妇女经期、产后血虚发热头痛之症。原方中当归要用酒制(酒洗)才可入药。然而现代研究中,不论是当归补血汤方剂还是由此衍生的成药,如当归补血丸、当归补血胶囊、当归补血口服液中,当归都没有要求炮制使用。当归所含阿魏酸、藁本内酯、当归多糖,黄芪中所含黄芪甲苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、黄芪多糖为当归补血汤中补血的有效成分[1,2]。为探讨酒制当归对该方剂的影响,本实验对当归炮制前后当归补血…     

当归补血汤实验研究进展

当归补血汤出自金元时期李杲<内外伤辨惑论>,组成为炙黄芪一两、当归二钱,功效补气生血,为治疗血虚的名方,主治劳倦内伤,气血虚弱,以及妇人经行、产后血虚发热、头痛,或疮疡溃后久不愈合等症.近些年来,对其研究报道甚多,现简要评述如下.     

当归补血作用研究进展

查阅近年来关于当归在补血作用方面的研究文献,从当归对血细胞、造血微环境、细胞凋亡、造血器官、免疫调节、血虚动物代谢组学和蛋白组学的影响等6个方面进行概述,以阐明当归补血功效的现代药理学机制,明确当归补血作用的科学内涵,为当归的综合开发和临床合理应用提供参考。     

当归补血作用研究进展

查阅近年来关于当归在补血作用方面的研究文献,从当归对血细胞、造血微环境、细胞凋亡、造血器官、免疫调节、血虚动物代谢组学和蛋白组学的影响等6个方面进行概述,以阐明当归补血功效的现代药理学机制,明确当归补血作用的科学内涵,为当归的综合开发和临床合理应用提供参考。     

当归补血汤的药理学研究进展

总结了当归补血汤最近几年来新的研究成果,从三个方面不同层次对当归补血汤的研究结果进行概括.即：免疫调节的作用研究,循环系统的药理研究,立方基础、护肾、镇痛的研究.     

当归补血汤的实验研究进展

当归补血汤出自李东垣的《内外伤辨惑论暑伤胃气论》,全方由黄芪当归（５∶１）组成,为经典的气血双补名方,主治劳倦内伤、气　弱血虚、阳浮外越。在国内该方不但临床应用十分广泛,药理研究亦十分活跃。本文试从免疫系统、血液系统、心血管系统及配伍等方面对当归补血汤作一总述。１　对免疫系统的作用当归补血汤是治疗气血虚的有效名方,祖国医学认为"脾为之卫",可见脾与体的防御、免疫等功能有关。王斌等实验表明,当归补血汤可使脾虚小鼠的体重迅速增加并恢复接近正常对照水平,同时使脾气虚小鼠的症状逐渐消失,且能使脾气虚小鼠低…     

高效液相法测定当归补血片中阿魏酸的含量

当归补血片由当归、黄芪等构成，主治气血不足、心虚惊悸等，具有补血、养血安神的功效。在此片剂中，当归为主要成分，阿魏酸又为当归的主要成分。所以我们采用高效液相色谱法对制剂中的有效成分阿魏酸的含量进行测定，以建立当归补血片的质量控制标准的定量方法，该法具有简单、快速、准确、灵敏等特点。     

当归补血汤的镇痛作用

目的　研究当归补血汤的镇痛作用。方法　采用小鼠扭体法、小鼠热水缩尾法、小鼠热板法及小鼠福尔马林实验。结果　当归补血汤 (2、4g·kg-1·d-1,3d ,ig)可明显抑制小鼠扭体反应 ,抑制小鼠福尔马林实验Ⅱ相反应 ,明显延长小鼠热水缩尾和热板舔足反应潜伏期。结论　当归补血汤具有镇痛作用。     

当归补血汤加味治疗冠心病的临床研究

当归补血汤加味治疗冠心病的临床研究刘康永张秉琴张毅马宜明冯振兴（安徽中医学院附属医院合肥２３００３１）关键词：当归补血汤;冠心病中图法分类号：Ｒ５４１．４;Ｒ２４２作者曾报道了以当归补血汤加味方为基础治疗冠心病的疗效观察〔１〕,为了进一步...     

TRAIL-Mu3蛋白的体内外抗肿瘤活性及其机制研究

  目的  TRAIL-Mu3是通过将野生型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL)的N端突变为8个连续的精氨酸(第114～122位氨基酸)得到的可溶性蛋白突变体。本研究在前期药物构建和制备已经完成的基础上进一步对TRAIL-Mu3蛋白的体内外药效和机理进行初步探索。  方法  采用CCK-8法检测TRAIL-Mu3对肺癌细胞株NCI-H460、A549、NCI-H1299、calu-1的增殖抑制作用,通过流式细胞术（FCM）检测TRAIL-Mu3对A549和NCI-H460细胞凋亡诱导作用,并通过Western blot法检测体外凋亡相关蛋白死亡受体4（death receptor 4, DR4）、死亡受体5（death receptor 5, DR5）、Caspase-3、Caspase-8、X连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein, XIAP）的表达情况。建立肺癌细胞株NCI-H460荷瘤小鼠移植瘤模型,TRAIL-Mu3给药方式为尾静脉注射,给药频率分为每日注射1次、隔日注射1次、每周注射3次,观察不同给药频率对移植瘤模型的治疗效果,并进行免疫组织化学法检测肿瘤组织凋亡相关蛋白DR4、DR5、Caspase-3、Caspase-8、XIAP的体内表达情况。  结果  通过细胞增殖及凋亡检测等体外实验证实TRAIL-Mu3较野生型TRAIL表现出更强的体外肿瘤细胞毒性和凋亡诱导能力,并可在体外上调DR4、Caspase-3、Caspase-8的表达或活化（P<0.05）。动物实验结果显示,TRAIL-Mu3隔日给药与每周3次给药抑制作用相近,优于每日给药（P<0.05）,但3种给药方案均可显著抑制荷瘤小鼠移植瘤的生长。免疫组化结果表明其可在体内上调DR4、Caspase-3的表达或活化,下调XIAP的活化（P<0.05）。  结论  突变体TRAIL-Mu3通过上调死亡受体DR4的表达、增加凋亡相关蛋白Caspase-3/-8的活化、减少XIAP的活化而展现出良好的体内外抑瘤效果。     

土鳖虫醇提蛋白的分离纯化及其体外抗肝癌与抑制肝纤维化活性研究

目的 采用体外细胞实验评价土鳖虫醇提物中大分子蛋白各分离产物的抗肝癌与抑制肝纤维化活性,明确土鳖虫的有效部位与成分。方法 采用盐析法从土鳖虫醇提物中回收蛋白类成分,将土鳖虫粗蛋白产物按分子量差异进行超滤,将其分为EEPA、EEPB及EEPC三个不同的蛋白部位,以抑制肝异常细胞增殖活性为导向,筛选最佳活性蛋白部位;接着经过DEAE阴离子层析及Sephadex G-100凝胶层析对活性粗蛋白部位进一步的纯化,从EEPC中分离出一种纯化蛋白PC3-Ⅲ,并对其进行LC-MS/MS分析;最后利用细胞实验评价EEPC及PC3-Ⅲ体外抗肝癌及抑制肝纤维化的活性。结果 在EEPA、EEPB及EEPC中,分子量最大的蛋白部位EEPC表现出最高的抑制肝异常细胞增殖活性;纯化蛋白PC3-Ⅲ分子量为10 kDa左右,经LC-MS/MS鉴定表明,PC3-Ⅲ对同源蛋白A0A0M3STY1的覆盖率达到35%,查库得到的肽段序列为QYSINFISAR、CNGDSCVCTFR和SNNFR;体外细胞实验证明PC3-Ⅲ不仅通过抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞迁移来共同发挥抗肝癌药效,还能抑制活化的肝星状细胞...     

基于网络药理学研究杜仲叶提取物改善非酒精性脂肪肝的作用及机制

  目的  基于网络药理学探讨杜仲叶提取物(Eucommia ulmoides leaf extracts, ELE)改善非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)的有效成分、作用靶点及可能的作用机制。  方法  使用CNKI、万方、TCMSP、Pubmed等数据库、获取并筛选杜仲叶活性成分; 使用TCMSP数据库和SwissTargetPrediction数据库检索并预测ELE活性成分的靶点; 使用Genecard数据库和Drugbank数据库收集NAFLD疾病的靶点; 使用String 11.0构建蛋白互作(Protein-protein interaction)网络图, 分析蛋白靶点之间的关系; 使用Cytoscape 3.7.1软件构建化合物-疾病靶点-通路网络图, 分析三者之间相互作用的关系; 使用DAVID数据库, 对靶点进行GO分析和KEGG通路富集分析, 并对关键靶点进行实验验证。  结果  ELE改善NAFLD疾病靶点网络主要包含9个化合物和35个靶点, 与脂质代谢相关的靶点有PPARα和CPT-1A, 与NAFLD相关的通路主要有胰岛素抵抗、AMPK信号通路。体内、体外实验发现ELE能通过激活AMPKα及增强靶点PPARα和CPT-1A的表达, 增强脂质氧化, 改善NAFLD。  结论  ELE能增强脂质代谢, 改善NAFLD, 其机制主要与AMPK信号通路相关。      

一种中药肾毒性成分体外检测方法的建立

通过常规方法培养可稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的HK-2细胞,应用Western blotting和荧光显微镜分析肾毒性药物阿米卡星对HK-2细胞GFP表达及荧光强度的影响。通过测算已知的4种中药肾毒性成分（汉防已碱、马兜铃酸、雷公藤甲素、芦荟大黄素）的IC₅₀和FC₅₀,分析两者的相关性。结果显示阿米卡星可诱发HK-2细胞内的荧光产生并在24 h内逐渐增强,GFP蛋白的表达在24 h时明显增加（与对照组比,P<0.01）。4种中药肾毒性成分的IC₅₀和FC₅₀之间具有良好的相关性。稳定表达GFP的HK-2细胞内的荧光强度的变化可以较好地反映细胞损伤程度。该方法的建立为中药成分的肾毒性的检测和早期预测提供了有力的工具。     

漆黄素抗卵巢癌的体内外作用研究

目的 观察漆黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3及其移植瘤的抑制作用,探索漆黄素的抗卵巢癌作用。方法 电镜直接观察漆黄素干预人卵巢癌细胞SKOV3前后的形态学变化。不同浓度梯度的漆黄素处理人卵巢癌SKOV3细胞株不同时间后,采用MTT法观察肿瘤细胞存活率,流式细胞术检测凋亡。建立人卵巢癌细胞株SKOV3的裸鼠移植瘤模型,观察漆黄素对移植瘤的生长抑制作用,通过Western blot测定Bcl-2、Bax、聚腺苷二磷酸核糖多聚酶（PARP）等蛋白的表达,探讨漆黄素抑制肿瘤生长的信号通路。结果 电镜下可见漆黄素作用人卵巢癌SKOV3细胞后,细胞染色质聚集和凋亡小体产生。MTT实验显示漆黄素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用具有浓度依赖性。流式细胞术显示漆黄素可诱导人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡。裸鼠移植瘤模型显示,漆黄素干预后移植瘤体积和质量均明显下降;Western blot结果显示漆黄素作用后,移植瘤内凋亡因子Bax的表达明显增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降,凋亡蛋白PARP被明显剪切;上述变化尤以高浓度（400 mg/kg)漆黄素干预组明显。结论 漆黄素可通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,发挥抗卵巢癌作用,其有望成为一种预防和治疗卵巢癌的安全有效的天然药物。     

体外少突胶质细胞培养的新方法

目的 探讨小鼠鼠婴大脑皮质体外少突胶质细胞培养的新方法。方法 取C57/BL6新生小鼠P0~P2（出生后0~2天）的大脑皮质,accummax室温消化10min,然后用含10%FBS的DMEM/F-12高糖培养基体外培养,培养至第7天时,运用巴氏管吹打,从混合培养的细胞中分离纯化少突胶质前体细胞,然后加入促分化培养基促使少突胶质前体细胞分化发育成熟,行细胞免疫荧光进行鉴定。结果 少突胶质前体细胞纯度较高,达到93.3%左右。加入促分化培养基后,少突胶质前体细胞可快速分化发育成熟。结论 该体外少突胶质细胞培养方法较简单,细胞纯度及产量高,对临床脱髓鞘疾病的研究具有很大的应用价值。     

载天冬酰胺酶纳米囊的活性及体外稳定性评价

目的 制备载天冬酰胺酶(asparaginase,AN)透明质酸-聚乙二醇[hyaluronic acid-graft-poly(ethylene glycol),HA-g-PEG]/α-环糊精(α-cyclodextrin,α-CD)纳米囊(HA-g-PEG/α-CD hollow nanocapsules loaded with asparaginase,AHAPs),并对其体外活性及稳定性进行初步考察.方法 采用自组装法制备AHAPs,测定AHAPs的最适温度、最适pH、粒径、zeta电位和包封率,并通过热稳定性、酸碱稳定性、抗胰蛋白酶水解能力、抗金属离子和有机化合物能力、血浆稳定性和贮存稳定性实验对游离AN与AHAPs的体外稳定性差异进行考察.通过荧光实验对AN与空白HA-g-PEG/α-CD纳米囊的相互作用进行研究.结果 AHAPs的最适温度为50℃,最适pH值为7.0,测得平均粒径为(424.53±7.25) nm,zeta电位为(-48.77±0.99) mV.经计算,AHAPs的平均包封率为(64.40±1.82)％.稳定性实验结果显示,AHAPs中AN的体外稳定性及活性明显优于游离AN,且部分实验结果差异具有统计学意义(P＜0.05).荧光实验结果表明,AHAPs中AN生物活性的提高可能与AN和空白HA-g-PEG/α-CD纳米囊的相互作用引起蛋白质残基微环境和酶构象改变相关.结论 AHAPs不仅提高了AN的活性,而且明显增强了AN的体外稳定性.     

聚乙二醇硬脂酸酯15对黄芩苷角膜透过性研究

[目的]研究聚乙二醇硬脂酸酯15(Sol)对黄芩苷离体角膜透过率的影响,探讨其在眼用制剂中的应用。[方法]采用离体角膜渗透技术考察不同质量浓度的Sol对黄芩苷角膜透过率的影响。[结果]0.4%和0.8%的Sol使黄芩苷的表观渗透系数分别增加了2.05倍和1.65倍,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),而0.2%、1.0%和2.0%的Sol未能显著增大黄芩苷的表观渗透系数(P>0.05)。[结论]0.4%和0.8%的Sol能够显著增大Sol的表观渗透系数,且对角膜无刺激性。     

T淋巴细胞体外发育方法的研究进展

T淋巴细胞（简称T细胞）在细胞过继免疫治疗（ACT）中发挥重要作用,利用T细胞体外发育方法可获得来源稳定且获取简便的T细胞,相比从自体或同种异体组织分离得到T细胞的传统方法更有优势。目前T细胞体外发育方法有胎儿胸腺器官培养、重组胸腺器官培养和Notch信号驱动的二维培养三种。其中胎儿胸腺器官培养操作简便,离体胸腺在体外培养即可支持T细胞分化发育至成熟,但完整的胸腺导致培养物维持时间有限、细胞收获困难;重组胸腺器官培养将各类胸腺基质细胞分散再重组构建三维培养环境,在体内外实验中均可支持T细胞成熟,但生物材料和三维环境导致培养物维持时间和细胞产量均受限;Notch信号驱动的二维培养采用人工呈递Notch信号通路配体来驱动T细胞分化发育,培养体系结构简单且稳定,但仅能支持T细胞发育至早期未成熟阶段。本文综述了上述培养方法的研究进展和不足之处,并讨论了T细胞体外发育未来发展的要求和方向,以助力ACT的推广和应用。     

吸入用瑞德西韦脂质体的制备及其体外评价

制备吸入用瑞德西韦脂质体并对其体外性质进行评价。首先对瑞德西韦脂质体制备方法进行考察,通过单因素实验确定了制剂的处方组成和制备工艺。然后对瑞德西韦脂质体吸入剂的基本性质、体外沉积性质和空气动力学粒径等进行了全面评价。结果显示,以薄膜分散法制备并以pH 6.5磷酸盐缓冲液为水化介质制得的脂质体其粒径较小、包封率高、48 h几乎无沉淀产生。优化后的处方中药物与二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）的比例为1∶20,胆固醇占总脂材的10%,并加入20%二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-mPEG 2000）以提高脂质体稳定性。在冷冻干燥过程中加入4%海藻糖作为冻干保护剂,得到的冻干剂具有理想的外观并且复溶前后粒径变化较小、稳定性良好。透射电镜下观察到脂质体的微观形态呈表面光滑的球状结构,且粒径分布均匀。体外释放显示,经雾化器雾化前后脂质体混悬液的释放曲线无明显改变;体外沉积性质考察表明,使用新一代撞击器测得的细颗粒占51.4%,质量中值空气动力学粒径小于5 μm。实验结果表明,吸入用瑞德西韦脂质体具有良好的包封率和稳定性,雾化后的脂质体混悬液粒度分布均匀,能够有效地在肺部沉积,为新型冠状病毒肺炎的治疗提供了新的思路。