基于超快速气相电子鼻对不同产地枸杞子快速识别及气味差异物质研究

  目的  通过气味测定研究, 快速识别不同产地枸杞子及气味差异物质。  方法  收集甘肃、内蒙古、宁夏、新疆及青海等5个产地枸杞子, 利用超快速气相电子鼻对样品进行检测, 建立气味指纹图谱, 并利用AroChemBase数据库对13个共有气味峰进行指认。运用判别因子分析(Discriminant factor analysis, DFA)、卷积神经网络(Convolutional neural networks, CNN)判别模型、主成分分析(Principal component analysis, PCA)及偏最小二乘判别分析(Partial least squares discriminant analysis, PLS-DA)对所得数据进行处理, 并通过变量权重重要性排序(Variable importance in projection, VIP)值作图筛选差异成分。  结果  不同产地枸杞子能区分开, 气味色谱峰峰8(己醛)、峰9(糠醛)为5个产地枸杞子样品间的主要差异成分, 己醛含量排序为: 内蒙古>甘肃>宁夏>新疆>青海; 糠醛含量排序为: 甘肃>新疆>宁夏>青海>内蒙古。  结论  超快速气相电子鼻可较好分析枸杞子气味特征, 并快速、准确识别差异物质, 为不同产地枸杞子的用药选择和综合利用提供参考。      

基于ITS序列PCR-RFLP鉴别木香、川木香和藏木香

  目的  利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术, 建立快速鉴别木香、川木香和藏木香的方法。  方法  通过比对木香、川木香和藏木香3个物种ITS基因序列, 筛选限制性内切酶并设计鉴别引物。优化PCR扩增和酶切反应条件, 并进行方法学考察和统计学分析。  结果  退火温度为60 ℃、循环数为30时, 能检出500~750 bp单一DNA条带; 底物为10 μL、酶切时间为15 min时, BsaHⅠ酶可将木香、川木香及藏木香在一定范围内切割成大小不一的DNA条带, 方法学和统计学结果较好。  结论  建立的PCR-RFLP方法能够准确地鉴别木香、川木香及藏木香3种药材, 避免此3类药材的混用, 保证临床用药安全。      

天然药物苏木对人工脱矿釉质龋的再矿化作用

  目的  观察苏木乙醇提取物、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取部位对人工脱矿釉质龋的作用。  方法  将牛切牙制成人工脱矿釉质龋后，测定苏木乙醇提取物和不同萃取部位对牛切牙釉质表面显微硬度的影响，扫描电镜观察各实验组对釉质龋表面形态的影响。  结果  乙醇提取物和各萃取部位都有提高釉质龋表面硬度的作用，其中水萃取部位对釉质硬度恢复效果最好，硬度恢复率达到66.9% （P < 0.05）。扫描电镜观察到各实验组的釉质龋表面覆盖有大量颗粒状沉积物。  结论  苏木乙醇提取物及各萃取部位对人工脱矿釉质龋均有再矿化作用。     

当归补血汤通过miR-27a/TGF-β1/Smad3通路抑制HK-2细胞纤维化作用及机制研究

  目的  探讨当归补血汤通过miR-27a调控HK-2细胞纤维化的机制。  方法  HK-2细胞分为对照组、高糖组、高糖+空白血清组、高糖+当归补血汤含药血清组。采用MTT法检测各组细胞增殖情况; 采用Western blot法检测纤维化相关因子波形蛋白(Vimentin)、Ⅳ型胶原(COL Ⅳ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p-Smad3/Smad3和转化生长因子(TGF)-β1蛋白的表达情况; qPCR法检测miR-27a及纤维化相关因子mRNA的表达情况; 通过转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA并向培养基中加入TGF-β1, 观察miR-27a的表达和纤维化相关蛋白表达的情况。  结果  MTT结果显示, 与对照组相比, 高糖组细胞增殖率明显降低(P < 0.05, P < 0.001), 当归补血汤含药血清作用24、48 h后细胞增殖率明显提高(P < 0.05, P < 0.001)。Western blot结果显示, 当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞纤维化相关蛋白COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3的表达(P < 0.05, P < 0.01)。qPCR结果显示, 当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1 mRNA和miR-27a的表达(P < 0.05, P < 0.01)。TGF-β1处理细胞后, 细胞纤维化加重, miR-27a的表达升高(P < 0.05, P < 0.01), 当归补血汤含药血清可明显降低TGF-β1诱导的纤维化细胞中miR-27a的表达升高(P < 0.001)。转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA可明显降低TGF-β1诱导的细胞纤维化蛋白COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3表达的升高(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  当归补血汤含药血清可促进HK-2细胞增殖, 并通过miR-27a/TGF-β1/Smad3信号通路调控HK-2细胞纤维化。      

不同方法炮制的熟地黄的补血作用比较

目的分析不同方式炮制的熟地黄的补血作用。方法回顾性分析40例使用生地黄产地加工饮片炮制一体化熟地黄治疗的贫血患者的临床资料,记为甲组,另回顾性分析40例使用传统酒制地黄治疗的贫血患者的临床资料,记为乙组。对比用药前后不同组别相关临床指标。结果用药前不同组别白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HB)、促红细胞生成素(EPO)不具有明显差异(P0.05),用药后均升高(P0.05),研究组明显高于对照组(P0.05)。结论与传统酒制地黄相比,生地黄产地加工饮片炮制一体化的补血作用更强。     

当归的炮制对当归补血汤中活性成分的影响

当归补血汤为金元四大家之一的李东垣所创,至今已有近800年的历史,由当归与黄芪两味中药按照质量比1∶5组成,具有补气生血的功效。主治血虚发热或妇女经期、产后血虚发热头痛之症。原方中当归要用酒制(酒洗)才可入药。然而现代研究中,不论是当归补血汤方剂还是由此衍生的成药,如当归补血丸、当归补血胶囊、当归补血口服液中,当归都没有要求炮制使用。当归所含阿魏酸、藁本内酯、当归多糖,黄芪中所含黄芪甲苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、黄芪多糖为当归补血汤中补血的有效成分[1,2]。为探讨酒制当归对该方剂的影响,本实验对当归炮制前后当归补血…     

基于不同皮肤模型的复方南星止痛膏透皮吸收行为研究

  目的  制备复合磷脂脂质体人工皮肤膜(Composite phospholipid liposome-based artificial skin membrane, CPLASM)以评价复方南星止痛膏(Compound Nanxing Zhitong Plaster, CNZP)的透皮吸收行为。  方法  建立同时测定CNZP中5种活性成分(桂皮醛、丹皮酚、丁香酚、水杨酸甲酯和欧前胡素)的HPLC分析方法。制备CPLASM并与市售人工皮肤膜Strat-MTM、真实皮肤(猪耳皮和大鼠皮)一起用于考察CNZP体外透皮吸收行为, 通过透皮吸收参数分析, 比较不同人工皮肤膜与真实皮肤之间的相似度。  结果  HPLC法能同时测定CNZP中5种活性成分的含量。在活性成分中, 桂皮醛和丁香酚的透皮吸收能力最强。CPLASM、Strat-MTM与猪耳皮测定的5种活性成分表观渗透系数相关系数分别为0.965 8和0.943 3, 与大鼠皮测定的5种活性成分表观渗透系数相关系数分别为0.949 3和0.946 0。  结论  应用CPLASM能够有效表征CNZP中活性成分体外透皮吸收行为。      

不同产地山羊角多类型资源性化学成分分析及差异研究

  目的  分析不同产地山羊角中多类型资源性化学成分差异, 为其资源利用提供依据。  方法  分别采用超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、分光光度法对32批不同产地山羊角中核苷类及氨基酸类成分、水溶性蛋白、含巯基类化合物、无机元素类成分含量进行分析评价; 利用主成分分析法(PCA)和偏最小二乘判别法(PLS-DA)对山羊角产地差异进行综合评价。  结果  山羊角中检测出9种核苷类成分、18种游离氨基酸类成分, 核苷类成分平均总量为20.88 μg · g-1, 氨基酸类成分平均总量为642.41 μg · g-1; 山羊角中水溶性蛋白、总巯基和游离巯基类成分的平均含量分别为51.07 mg · g-1,22.48 μmol · g-1,9.97 μmol · g-1;山羊角中检测出常量元素5种,必须微量元素9种,重金属元素4种, 平均总量分别为45.09 mg · g-1,295.32 μg · g-1,7.74 μg · g-1; PCA和PLS-DA结果表明, 基于48种化学成分分析结果, 不同产地山羊角存在显著差异, 西南地区产山羊角与华东、华北地区产山羊角差异较大, 华东地区产山羊角综合得分较高。  结论  不同产地山羊角所含资源性成分种类基本一致, 但各类型成分含量差异较大, 华东地区产山羊角资源性成分含量相比其他产区较高, 研究结果可为山羊角药用产地选择及综合利用提供一定参考。      

岷当归民间加工炮制方法初探

针对当前中医所使用的“酒洗当归”“土炒当归”“油炒当归”等饮片商品供应出现的断档现象,挖掘和整理流失于民间的岷当归传统加工炮制方法。对岷当归的产地初加工、切制和炮制方法进行了系统的调研和归纳、整理,为岷当归今后的开发和引用提供初步依据。     

不同加工方式亳白芍的高效液相指纹图谱及多成分含量比较

目的 评价不同加工方式亳白芍饮片质量,验证亳白芍产地加工与炮制一体化工艺应用的可行性。方法 采用高效液相色谱法建立不同加工方式亳白芍饮片标准煎液的指纹图谱,同时对没食子酸等7种成分含量进行测定,并以指纹图谱共有峰相对峰面积对所有样品进行聚类分析。结果 亳白芍趁鲜片标准煎液指纹图谱相似度较亳白芍生斜片标准煎液相似度高;不同加工方式白芍饮片标准煎液中没食子酸等7种成分含量有一定差异;聚类分析结果将白芍趁鲜片与白芍传统片聚为一类,而白芍生斜片自成一类。结论 产地加工与炮制一体化加工的亳白芍趁鲜片质量与传统片差异较小,可与传统片一并应用,生斜片质量差异略大,能否作为白芍饮片在临床进行应用还需进一步研究。     

AS-PCR法鉴别炮制辅料鳖血和常见掺伪品的研究

  目的  建立一种炮制辅料鳖血等位基因特异性PCR(AS-PCR)鉴别方法, 快速、准确地鉴别鳖血与其它常见动物血液。  方法  通过比较鳖血基原中华鳖和驴、牛、羊、鸡、猪、兔为代表的常见动物的CO Ⅰ序列差异, 根据SNP位点设计鳖血特异性鉴别引物, 优化PCR反应体系, 并进行耐受性、适用性、掺伪灵敏度考察验证。  结果  实验条件为退火温度62 ℃、循环次数29次、引物用量0.2 μL、DNA模板浓度100 ng时, 鳖血使用设计的ZHB286引物经PCR扩增和凝胶电泳后出现约286 bp的明亮条带, 其他动物血液样品均无条带出现。  结论  该AS-PCR鉴别方法具有高度特异性, 能准确鉴别鳖血和其他常见动物血液, 进而可用于鳖血与驴、牛、羊、鸡、猪、兔血掺伪鉴别, 在血液类药材分子鉴定中具有广泛应用价值。      

土鳖虫醇提蛋白的分离纯化及其体外抗肝癌与抑制肝纤维化活性研究

  目的  采用体外细胞实验评价土鳖虫醇提物中大分子蛋白各分离产物的抗肝癌与抑制肝纤维化活性, 明确土鳖虫的有效部位与成分。  方法  采用盐析法从土鳖虫醇提物中回收蛋白类成分, 将土鳖虫粗蛋白产物按分子量差异进行超滤, 将其分为EEPA、EEPB及EEPC三个不同的蛋白部位, 以抑制肝异常细胞增殖活性为导向, 筛选最佳活性蛋白部位; 接着经过DEAE阴离子层析及Sephadex G-100凝胶层析对活性粗蛋白部位进一步的纯化, 从EEPC中分离出一种纯化蛋白PC3-Ⅲ, 并对其进行LC-MS/MS分析; 最后利用细胞实验评价EEPC及PC3-Ⅲ体外抗肝癌及抑制肝纤维化的活性。  结果  在EEPA、EEPB及EEPC中, 分子量最大的蛋白部位EEPC表现出最高的抑制肝异常细胞增殖活性; 纯化蛋白PC3-Ⅲ分子量为10 kDa左右, 经LC-MS/MS鉴定表明,PC3-Ⅲ对同源蛋白A0A0M3STY1的覆盖率达到35%, 查库得到的肽段序列为QYSINFISAR、CNGDSCVCTFR和SNNFR; 体外细胞实验证明PC3-Ⅲ不仅通过抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞迁移来共同发挥抗肝癌药效, 还能抑制活化的肝星状细胞增殖从而延缓肝纤维化的进程, 疗效与EEPC相当。  结论  研究证实了土鳖虫大分子蛋白的抗肿瘤与抗肝纤维化的活性, 并分离得到均一蛋白产物PC3-Ⅲ, 为推进土鳖虫功效物质基础的认识与相关产品研发奠定了基础。      

结核分枝杆菌基因Rv2660c、Rv2460c、Rv3875、Rv3804c细胞表位融合蛋白的表达及其免疫原性评价

  目的  评价结核分枝杆菌基因Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c的细胞表位融合蛋白的免疫原性,为研制新型多阶段结核疫苗提供可靠的靶抗原。  方法  将Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c基因中的细胞表位串联构成融合抗原基因(命名为msv),克隆到原核表达载体pEASY-Blunt E1中,诱导表达后采用亲和层析纯化表达产物,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用纯化的融合抗原蛋白免疫小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度;分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,采用淋巴细胞增殖法检测其免疫原性。  结果  成功构建了能表达融合抗原基因msv的原核表达质粒;SDS-PAGE和Western blot结果表明,表达产物亲和层析纯化后,获得相对分子质量为41.3×103的目的蛋白;ELISA检测免疫小鼠血清抗体滴度,结果表明特异性抗体效价约为1:81 920;淋巴细胞增殖实验结果表明,抗原致敏的淋巴细胞经融合蛋白msv刺激后明显增殖。  结论  成功表达并纯化出融合蛋白msv,该融合蛋白可诱导小鼠特异性抗体表达和刺激细胞免疫应答,可作为结核疫苗的抗原组分。     

AY358935基因抗水疱口炎病毒的作用及其机制探讨

  目的  初步探讨本课题组前期克隆的AY358935基因对水疱口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)的作用及机制。  方法  将构建完整的pcDNA3.1-AY358935质粒及pcDNA3.1空载体分别稳定转染HEK293细胞,并以VSV感染已转染上述基因或空白的HEK293细胞,感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.001。蚀斑分析法检测以上3组细胞上清液中不同时间点的病毒滴度,感染VSV 24 h后用台盼蓝排斥试验检测各组细胞死亡率;对稳定转染目的基因的细胞提取总RNA,进行全基因组cDNA芯片分析。  结果  ① 病毒滴度:感染VSV 12 h后,pcDNA3.1-AY358935组细胞上清病毒滴度较pcDNA3.1组和空白组低。18 h时3组病毒滴度分别为(7.16±2.33)×105 PFU/mL、(6.25±2.05)×106 PFU/mL、(7.75±2.54)×106 PFU/mL,pcDNA3.1-AY358935组细胞上清病毒滴度与其余两组的差异接近10倍(P < 0.01);②细胞死亡率:病毒感染24 h后,pcDNA3.1-AY358935组、pcDNA3.1组和空白组的细胞死亡率分别为(35.00±6.68)%、(78.33±15.03)%和(83.34±14.98)%,pcDNA3.1-AY358935组的细胞死亡率较其余两组降低(P < 0.01);③基因芯片分析结果:与pcDNA3.1空载体组比较,稳定转染pcDNA3.1-AY358935的细胞有30个基因表达上调在3倍以上,其中,干扰素激活基因、干扰素效应基因、细胞因子与趋化因子所占比例分别为27%、17%、20%。  结论  AY358935基因具有抗VSV作用,其机制可能涉及干扰素相关的天然免疫应答。     

HS-SPME-GC-MS结合化学计量法分析刺五加不同部位的挥发性成分

目的 对刺五加不同部位的挥发性成分进行比较分析,为其后续的临床应用及开发提供科学参考。方法 采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用法(HS-SPME-GC-MS),提取分析刺五加各部位样品的挥发性成分,用峰面积归一化法测定和比对各成分的相对含量,并结合主成分分析(PCA)和聚类分析(HCA)方法分析其成分的差异。结果 从刺五加各部位样品中共鉴定出167种挥发性成分,根、皮、茎、叶、果分别鉴定出71、61、59、48、54种挥发性成分,主要以烯类和醇类化合物为主。5个部位有10个共有成分,包括萜品油烯、β-石竹烯、α-律草烯等。HCA分析结果将刺五加根、果聚为一类,皮、叶聚为一类,茎单独一类;PCA综合得分依次为根、茎、果、叶、皮。结论 刺五加各部位挥发性成分的种类和含量均有差异,为刺五加非常规药用部位的药食两用深入开发利用提供科学依据。     

不同富集培养方法对噬菌体PEf771的滴度影响

目的 对比3种不同富集培养方法对噬菌体PEf771的滴度影响,探讨有效提高噬菌体PEf771滴度的方法.方法 通过噬菌体PEf771/粪肠球菌E.faecalis YN771比例法、挖斑法和丝裂霉素C诱导法在E.faecalis YN771不同生长时期加入PEf771原液进行富集,来获得较高的PEf771的滴度.结果 ...     

藏药佐摸兴的本草考证及用药调查

目的 厘清藏药佐摸兴的基原、药用部位、临床及市场流通使用情况,为其进一步研究和开发提供参考。方法 采用本草文献考证针对佐摸兴基原、药用部位及制剂等进行梳理;对四川、青海、西藏、云南4省区、41个市县、21家藏医院、13个制药厂及药材公司、6位藏医药专家进行了基原及药用情况调查,并结合所收集的药材鉴定结果推导出相应基原使用情况。结果 文献考证显示佐摸兴涉及10个基原,药用木质部心材、煎膏、叶、花等。调研结果显示最广泛认可的佐摸兴基原为昌都锦鸡儿Caragana changduensis Y. X. Liou,其次是鬼箭锦鸡儿C.jubata(Pall.) Poir.,主要以昌都锦鸡儿红色心材入药,质量最佳,其他颜色鬼箭锦鸡儿心材使用较少,效果稍差。市场上流通佐摸兴药材以昌都锦鸡儿为主,少数藏医院使用鬼箭锦鸡儿。文献考证和调查总计涉及成方制剂20个,佐摸兴在制剂中常用的功效主要为降压、清血热、化血瘀,并可治疗多血症。结论 明确了藏药佐摸兴药材的主要来源为昌都锦鸡儿的红色心材,可为其进一步开发利用提供依据。     

当归破壁粉粒补血作用及急性毒性实验研究

目的探讨当归破壁粉的补血作用及急性毒性作用。方法建立失血性贫血小鼠模型,以白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)等血常规指标衡量当归破壁粉粒对贫血的治疗作用,并以当归破壁粉粒及其饮片80 g/kg给小鼠灌胃后7 d,观察其对小鼠的急性毒性。结果当归破壁粉粒能明显改善小鼠贫血指标,且未观察到当归破壁粉粒及其饮片的急性毒性发生。结论当归破壁粉粒具有补血作用且无急性毒性作用。