不同波长人工发光二极管光照对大鼠视网膜的影响

目的　探讨红、绿、蓝、白四种不同波长人工发光二极管(LED)光照对大鼠视网膜的影响。方法　45只3周龄SD大鼠作为实验动物,分为空白对照组,以及1000 lux和2000 lux照度下的红光照射组、绿光照射组、蓝光照射组、白光照射组,每组各5只。空白对照组大鼠自然光线下饲养1个月,不同光照组采用相应波长LED进行光照,每天照射10 min,连续1个月。取各组大鼠左眼视网膜行TUNEL染色观察细胞凋亡情况,取各组大鼠右眼视网膜行Western blot检测视网膜中PARP和GFAP的蛋白相对表达量。结果　照度1000 lux时,红光照射组、绿光照射组、蓝光照射组、白光照射组大鼠视网膜TUNEL染色均未见明显的细胞核阳性染色;Western blot检测结果显示,各组大鼠视网膜中cleved-PARP及GFAP蛋白相对表达量与空白对照组相比,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。照度为2000 lux时,除空白对照组和红光照射组外,绿光照射组、蓝光照射组、白光照射组大鼠视网膜TUNEL染色后视网膜感光细胞层均可见细胞核点状阳性着染,提示存在DNA的降解断端;Western blot检测结果显示,蓝光照射组大鼠视网膜中cleved-PARP蛋白表达量（1.414±0.192）较空白对照组（0.624±0.148）增加,差异有统计学意义（P<0.05）,红光照射组（0.660±0.067）、绿光照射组（0.764±0.127）、白光照射组（0.748±0.160）大鼠视网膜cleved-PARP蛋白表达与空白对照组相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05);各组大鼠视网膜中GFAP蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论　照度2000 lux、每天10 min光照1个月,蓝光照射的大鼠会出现视网膜光损伤表现。     

基于JAK2/STAT3通路分析姜黄素对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响

目的　探讨姜黄素（CUR）对视网膜缺血-再灌注损伤（RIRI）大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响,并通过JAK2/STAT3通路探讨其机制,以期为CUR的临床应用提供理论依据。方法　健康雄性成年Sprague Dawley大鼠36只,随机分为假手术（Sham）组、RIRI组与CUR组,每组各12只。RIRI组和CUR组大鼠右眼采用高眼压法建立RIRI模型,Sham组仅将针头刺入大鼠右眼前房,不升高眼压。CUR组大鼠于建模前30 min腹腔注射CUR（100 mg·kg^-1）,RIRI组和Sham组大鼠腹腔注射等剂量生理盐水。造模后24 h,采用HE染色及免疫组织化学染色法观察各组大鼠视网膜形态及视网膜神经节细胞（RGC）数变化,Iba-1/CD16、Iba-1/Arg1免疫荧光双标法检测CUR对RIRI大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响,免疫组织化学结合Western blot检测观察CUR对RIRI大鼠RGC及JAK2/STAT3通路信号分子表达的影响。结果　HE染色及免疫组织化学染色结果显示,Sham组大鼠视网膜细胞排列整齐,神经节细胞层见大量Brn-3a⁺细胞（即RGC）;与Sham组相比,造模后24 h,RIRI组大鼠内层视网膜厚度显著增加、RGC数显著减少,而CUR组大鼠内层视网膜厚度较RIRI组显著变薄,RGC数显著多于RIRI组（均为P<0.05）。免疫荧光双标染色结果显示,RIRI组大鼠视网膜Iba-1⁺CD16⁺细胞（M1型小胶质细胞）数较Sham组显著增加,而CUR组大鼠视网膜Iba-1⁺CD16⁺细胞数显著少于RIRI组,但仍多于Sham组（均为P<0.05）;RIRI组大鼠视网膜Iba-1⁺Arg1⁺细胞（M2型胶质细胞）数较Sham组增加,而CUR组大鼠视网膜Iba-1⁺Arg1⁺细胞数显著高于RIRI组（均为P<0.05）。免疫组织化学染色结果显示,与Sham组相比,RIRI组大鼠视网膜p-JAK2⁺、p-STAT3⁺细胞数均较Sham组增多,而CUR组大鼠视网膜p-JAK2⁺、p-STAT3⁺细胞数均显著少于RIRI组（均为P<0.05）。Western blot检测结果显示,Sham组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平较低;造模后24 h,RIRI组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3 蛋白表达显著升高,而CUR组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3蛋白表达量均较RIRI组显著下降,但仍高于Sham组（均为P<0.05）。结论　CUR可调控小胶质细胞由M1型向M2型极化,从而减轻大鼠RIRI,具有神经保护作用,其机制可能与JAK2/STAT3信号通路激活有关。     

LncRNA-MIAT靶向miR-150-5p对病理性血管化角膜及VEGF、MMP-9的影响

目的　探讨长链非编码核糖核酸心肌梗死相关转录本（LncRNA-MIAT）靶向miR-150-5p对病理性血管化角膜血管内皮生长因子（VEGF）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的影响。方法　100只大鼠随机分为对照组、模型组、MIAT-NC组、MIAT组和sh-MIAT组,除对照组外,其余大鼠以碱烧伤法建立角膜血管化模型。实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测大鼠角膜组织中LncRNA-MIAT和miR-150-5p相对表达情况;双荧光素酶实验验证LncRNA-MIAT和miR-150-5p的靶向关系;ELISA检测大鼠角膜组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6、IL-8水平;HE染色观察大鼠角膜组织中血管病理变化;Western blot检测大鼠角膜组织中VEGF、MMP-9相对表达情况。结果　与对照组比较,模型组大鼠角膜组织中LncRNA-MIAT相对表达水平,TNF-α、IL-6、IL-8水平,VEGF和MMP-9蛋白相对表达量均升高,miR-150-5p相对表达水平降低（均为P<0.05）;与模型组和MIAT-NC组比较,MIAT组大鼠角膜组织中LncRNA-MIAT相对表达水平,TNF-α、IL-6、IL-8水平,VEGF和MMP-9蛋白相对表达量均升高,miR-150-5p相对表达水平降低（均为P<0.05）,sh-MIAT组上述指标与MIAT组呈相反趋势（均为P<0.05）。双荧光素酶实验结果显示,LncRNA-MIAT可靶向调控miR-150-5p表达。结论　LncRNA-MIAT可促进VEGF、MMP-9的表达,加速角膜血管化的发生,其机制可能与抑制miR-150-5p的表达有关。     

过表达TBK1通过调控RIPK1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡的抑制作用

目的　探讨TANK结合激酶1（TBK1）对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的作用机制。方法　按60 mg·kg^-1腹腔一次性注射链脲佐菌素制备糖尿病模型。模型制备完成后,随机分成三组:糖尿病(DM)组、TBK1过表达(TBK1-OE)组 (大鼠玻璃体内单次注射TBK1过表达慢病毒载体5 μL,病毒滴度为 1.0×10⁹ IU·mL^-1)、TBK1空载体(TBK1-NC)组(玻璃体内注射等剂量病毒包装的阴性对照液),另取正常大鼠作为对照(CON)组,每组15只。12周后,免疫荧光染色检测大鼠视网膜TBK1蛋白表达定位,Hoechst 33342染色检测大鼠视网膜RGC凋亡,ELISA检测大鼠视网膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量,Western blot检测大鼠视网膜TBK1、受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1）、Caspase-3蛋白相对表达量。结果　TBK1在大鼠RGC中特异表达。与CON组相比,DM组、TBK1-NC组大鼠RGC凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,RIPK1、Caspase-3蛋白相对表达量均明显增加,TBK1蛋白相对表达量均明显降低(均为P<0.01);TBK1-OE组各指标均增加（均为P<0.01);而与DM组相比,TBK1-OE 组大鼠RGC凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,RIPK1、Caspase-3蛋白相对表达量均明显降低,TBK1蛋白相对表达量明显增加(均为P<0.01)。而DM组与TBK1-NC组大鼠之间RGC凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,TBK1、RIPK1、Caspase-3蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论　过表达TBK1对糖尿病大鼠RGC凋亡具有抑制作用,其机制与阻断RIPK1信号通路激活有关。     

葡萄籽原花青素调控NLRP3/Caspase-1通路介导的焦亡途径对糖尿病视网膜病变大鼠的保护作用

目的　探讨葡萄籽原花青素调控NLRP3/Caspase-1通路介导的焦亡途径对糖尿病视网膜病变（DR）大鼠的保护作用。方法　建立DR大鼠模型，随机分为模型组、葡萄籽原花青素组、VX-765组、葡萄籽原花青素+VX-765组（每组各12只），另取12只大鼠为对照组，药物干预14 d，HE染色观察各组大鼠视网膜组织病理学变化；TUNEL染色检测各组大鼠视网膜神经节细胞（RGC）焦亡情况；采用试剂盒测定各组大鼠视网膜组织超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）及血清中炎症因子糖基化终末产物（AGEs）、白细胞介素（IL）-1β与IL-18水平；Western blot检测各组大鼠视网膜组织NLRP3/Caspase-1通路蛋白表达水平。结果　与对照组相比，模型组大鼠视网膜组织明显变薄，结构疏松，细胞结构层次紊乱、排列不规则，RGC变少、稀疏，呈现严重病理损伤变化，RGC焦亡率，ROS与MDA水平，AGEs、IL-1β、IL-18水平，NLRP3与Caspase-1蛋白表达水平均显著升高（均为P<0.05），SOD与CAT水平均显著降低（均为P<0.05）。与模型组相比，葡萄籽原花青素组、VX-765组大鼠视网膜组织形态结构得到恢复，病理损伤均有不同程度减轻，RGC焦亡率，ROS与MDA水平，AGEs、IL-1β与IL-18水平，NLRP3与Caspase-1蛋白表达水平均降低（均为P<0.05），SOD与CAT水平均升高（均为P<0.05）。与葡萄籽原花青素组及VX-765组分别相比，葡萄籽原花青素+VX-765组大鼠视网膜组织病理损伤进一步减轻，形态结构几乎恢复正常，RGC焦亡率，ROS与MDA水平，AGEs、IL-1β与IL-18水平，NLRP3与Caspase-1蛋白表达水平均降低（均为P<0.05），SOD与CAT水平均升高（均为P<0.05）。结论　葡萄籽原花青素可以抑制炎症发生发展，增强DR大鼠抗氧化活性，减轻过氧化反应，缓解视网膜组织病理学损伤，减少RGC焦亡，可能是通过抑制NLRP3/Caspase-1信号通路实现的。     

GPR120通过抑制核因子-κB信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的　探讨GPR120对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的影响及可能机制。方法　健康雄性SD大鼠按55 mg·kg^-1腹腔一次性注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。模型诱导成功后,将大鼠随机分成三组:糖尿病组、鱼油预处理组(鱼油1 g·kg^-1每天1次灌胃;鱼油的主要成分为omega-3,omega-3为GPR120通路激活剂)、安慰剂组(玉米油1 g·kg^-1每天1次灌胃),每组15只,另取15只正常大鼠作为对照组（对照组和糖尿病组大鼠每天1次灌胃等剂量PBS缓冲液）。12周后,气相色谱法检测各组大鼠视网膜组织中二十二碳六烯酸（DHA）和二十碳五烯酸（EPA）含量,HE染色检测RGC密度,免疫荧光染色检测视网膜GPR120蛋白表达,Western blot检测视网膜GPR120、核因子-κB（NF-κB）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）蛋白相对表达量。结果　与对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜组织中DHA、EPA含量均明显减少（均为P<0.01);与糖尿病组相比,鱼油预处理组大鼠视网膜组织中DHA、EPA含量均明显增加（均为P<0.01)。GPR120主要分布于RGC层。对照组大鼠RGC密度为(437.06±4.72) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量分别为(35.65±0.89)%、(12.42±0.58)%、(13.76±0.08)%;糖尿病组大鼠RGC密度为 (329.75±3.51) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3 蛋白相对表达量分别为(24.14±0.46)%、(38.94±0.45)%、(25.14±0.45)%;鱼油预处理组大鼠RGC密度为(412.44±3.62) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量分别为(31.59±0.77)%、(18.11±0.58)%、(20.14±0.61)%。与对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量均明显增加,RGC密度、GPR120蛋白相对表达量均明显降低;与糖尿病组相比,鱼油预处理组大鼠视网膜NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量均明显降低,RGC密度、GPR120蛋白相对表达量均明显增加(均为P<0.01)。糖尿病组与安慰剂组相比,各指标差异均无统计学意义(均为P＞0.05)。结论　GPR120激活对糖尿病大鼠RGC损伤具有保护作用,其机制可能与抑制NF-κB通路有关。     

金雀异黄酮对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　探讨金雀异黄酮（GEN）对大鼠视网膜缺血-再灌注（I/R）损伤的保护作用。方法　选取30只健康SPF级大鼠，按照随机数字表法将其分为假手术组、I/R组和I/R+GEN组，每组各10只。I/R组和I/R+GEN组大鼠采用前房灌注生理盐水升高眼压法制备视网膜I/R损伤大鼠模型，I/R组大鼠术后每天给予注射生理盐水（1 mL·kg^-1·d^-1）；I/R+GEN组大鼠术后每天给予注射GEN （40 mL·kg^-1·d^-1）；假手术组大鼠行相应假手术后每天予以注射生理盐水（1 mL·kg^-1·d^-1），连续7 d后，颈椎脱臼法处死各组大鼠，取眼部组织。HE染色观察各组大鼠视网膜的形态以及内丛状层（IPL）、内核层（INL）和神经节细胞层（GCL）厚度；免疫荧光分析观察各组大鼠视网膜神经节细胞（RGC）的存活率；TUNEL染色检测各组大鼠视网膜细胞凋亡水平；检测各组大鼠视网膜组织中过氧化氢酶（CAT）、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平以反映视网膜氧化应激状态；Western blot分析三组大鼠视网膜中NLRP3、ASC、Caspase-1的蛋白表达。结果　I/R组、I/R+GEN组和假手术组大鼠视网膜总厚度分别为(114.37±7.32）μm、（155.31±6.83）μm和（178.98±13.65）μm（t=14.284，P<0.01），I/R组低于假手术组和I/R+GEN组，差异均有统计学意义（均为P<0.01）。I/R组大鼠视网膜IPL、INL和GCL厚度分别为（18.95±5.06）μm、（17.62±4.69）μm和（19.03±4.74）μm，I/R+GEN组大鼠视网膜IPL、INL和GCL厚度分别为（20.69±8.13）μm、（25.74±6.78）μm和（26.71±7.85）μm，假手术组大鼠视网膜IPL、INL和GCL厚度分别为（11.73±3.15）μm、（11.97±3.56）μm和（12.59±3.24）μm（均为P<0.05），I/R组与假手术组和I/R+GEN组三个指标比较差异均有统计学意义（均为P<0.01）。I/R组、I/R+GEN组和假手术组大鼠视网膜中RGC相对存活率分别为（26.87±3.12）%、（73.46±7.80）% 和（100.00±5.64）%（t=16.825，P<0.01），I/R组RGC相对存活率低于假手术组和I/R+GEN组，差异均有统计学意义（均为P<0.01）。I/R组、I/R+GEN组和假手术组大鼠视网膜中CAT、MDA、SOD含量总体比较差异均有统计学意义（均为P<0.01），I/R组与I/R+GEN组和假手术组三个指标比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Western blot检测结果显示，三组大鼠视网膜中NLRP3、ASC、Caspase-1的蛋白表达总体比较差异均有统计学意义（均为P<0.01），组间两两比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　GEN可通过提高视网膜细胞抗炎和抗氧化能力抑制视网膜细胞凋亡，从而起到对大鼠视网膜I/R损伤的保护作用。     

藏红花素对视网膜缺血再灌注损伤小鼠视网膜神经节细胞的保护作用及其机制研究

目的　研究藏红花素对视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）小鼠视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用及其机制。方法　将144只C57BL/6小鼠随机分为3组:假手术组、模型组、藏红花素治疗组。模型组和藏红花素治疗组小鼠建立RIRI模型,藏红花素治疗组小鼠造模前30 min腹腔注射50 mg·kg^-1藏红花素。RIRI后14 d,视网膜铺片染色比较各组小鼠RGC密度差异。RIRI后24 h,HE染色比较各组小鼠视网膜内层厚度差异。于RIRI后不同时间点（0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、15 h）取各组小鼠视网膜组织,通过多重基因定量分析系统检测NLRP3、ASC、Caspase-1、白细胞介素-1β（IL-1β） mRNA的表达变化。RIRI后6 h和12 h取各组小鼠视网膜组织,Western blot检测NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白的表达,ELISA检测IL-1β蛋白的含量,并对比分析。结果　小鼠RIRI后14 d,视网膜铺片染色结果显示,藏红花素治疗组较模型组小鼠RGC密度增加约18.5%（P<0.05）。RIRI后24 h,HE染色结果显示,藏红花素治疗组小鼠视网膜内层厚度较模型组显著降低（P<0.01）。多重定量分析系统检测结果显示,RIRI后6 h、9 h及12 h,藏红花素治疗组小鼠视网膜组织中Caspase-1以及IL-1β mRNA表达较模型组均显著降低（均为P<0.05)。Western blot检测结果显示,藏红花素治疗组小鼠视网膜组织中Caspase-1以及IL-1β蛋白表达较模型组均显著降低（均为P<0.05)。RIRI后6 h、12 h,模型组小鼠视网膜组织中NLRP3、ASC mRNA和蛋白表达与假手术组相比无显著变化（均为P>0.05)。ELISA检测结果进一步证实,RIRI后6 h和12 h,藏红花素治疗组小鼠视网膜组织中IL-1β蛋白含量较模型组均显著降低（均为P<0.05)。结论　藏红花素通过抑制Caspase-1和IL-1β表达保护RIRI小鼠RGC。     

KLF7对TLR4/NLRP3炎症小体激活的抑制作用及其对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的 探讨Krüppel样因子7(KLF7)通过抑制Toll样受体4/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 (TLR4/NLRP3)炎症小体的激活对视网膜缺血-再灌注(RIR)损伤大鼠视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响。方法 将60只大鼠随机分为对照组、RIR组和KLF7组,每组20只。RIR组和KLF7组建立RIR模型,KLF7组大鼠腹腔注射2μL AAV2-KLF7腺病毒,对照组和RIR组大鼠注射100μL PBS。HE染色观察大鼠视网膜形态变化,显微镜下测量神经节细胞层(GCL)厚度和GCL中RGC数量,Western blot检测大鼠视网膜组织中KLF7、TLR4、髓样分化因子初次应答基因88(MYD88)、NLRP3、肿瘤坏死因子受体相关分子6(TRAF6)蛋白表达水平,TUNEL检测RGC凋亡,ELISA法检测大鼠视网膜组织中白细胞介素(IL)-18和IL-1β表达水平。结果 对照组大鼠的视网膜内界膜平滑完整。RIR组大鼠内核层、外核层细胞排列明显疏松、紊乱,RGC数量减少。KLF7组大鼠RGC数量较RIR组减少,视网膜较前变薄,但视网膜损伤程度较RIR组明显减轻。与对照组...     

叔丁基对苯二酚对糖尿病大鼠视网膜的保护作用及其机制研究

目的　探讨叔丁基对苯二酚（tert-Butylhydroquinone,tBHQ）对糖尿病大鼠视网膜的保护作用及其机制,为DR防治提供新靶点。方法　18只雄性SD大鼠随机分成3组:正常组、糖尿病组（高脂高糖饮食）和tBHQ干预组（高脂高糖饮食中加入质量分数1%tBHQ）,后两组饮食干预4周后建立糖尿病大鼠模型,饮食干预3个月后处死各组大鼠。采集大鼠空腹血用于测定生化和胰岛素相关指标,HE染色观察大鼠视网膜各层组织变化,使用miRNA表达谱芯片测量大鼠视网膜差异性miRNA,实时定量PCR验证特定miRNA在3组大鼠视网膜的表达水平,分析差异性miRNA的相关通路。结果　tBHQ干预组［（15.073±7.079）mmol·L^-1］较正常组［（7.635±1.421）mmol·L^-1］空腹血糖升高（P<0.05）,较糖尿病组［（22.331±1.824）mmol·L^-1］降低（P<0.05）。tBHQ干预组［（47.961±15.256）μU·L^-1］血清胰岛素较正常组［（78.090±20.974）μU·L^-1］减少,而较糖尿病组［（17.533±3.959）μU·L^-1］增多（均为P<0.01）。HE染色结果示,糖尿病组大鼠视网膜出现严重水肿,各层结构不清,tBHQ干预组视网膜改变相对轻微。与糖尿病组大鼠相比,tBHQ干预组视网膜中miR-325-3p（>2.0倍）和miR-551b-3p（>1.5倍）上调,miR-652-3p（>2.0倍）下调。实时定量PCR验证miR-325-3p和miR-551b-3p为差异性miRNA,靶基因预测分析示miR-325-3p可介导21条信号通路。结论　tBHQ可能通过miR-325-3p介导的信号通路对2型糖尿病大鼠视网膜起保护作用。     

circRNA＿0051079通过靶向miR-26a-5p/PTEN轴诱导视网膜神经变性的分子机制

目的 探讨circ＿0051079对缺血/再灌注(I/R)损伤诱导的视网膜神经变性的影响及机制。方法 从C57BL/6J乳鼠眼球中分离视网膜神经节细胞(RGC),随机分为对照组、siRNA组(转染阴性siRNA)、si＿circ＿0051079组(转染si-circ-0051079干扰RNA)、模拟物对照组(转染Scr mimic)、miR-26a-5p组(转染miR-26a-5p mimic)、miR-26a-5p+vector组(转染pcDNA 3.1)、miR-26a-5p+PTEN组(转染pcDNA 3.1-PTEN),分别在正常、缺氧(体积分数1%O₂暴露)或氧化应激(50μmol·L^-1H₂O₂暴露)条件下培养24 h,进行RT-qPCR、CCK-8、TUNEL、RNA免疫沉淀(RIP)等检测。于15只C57BL/6小鼠左眼中建立I/R损伤模型,对侧眼保持正常眼压作为对照,I/R损伤后0 d、3 d和7 d各取5只小鼠收集视网膜检测circ＿0051079表达。另取20只C57BL/6小...     

miR-26 a/PTEN在糖尿病小鼠视网膜神经变性中的作用及其机制

目的 探讨microRNA-26a-5p(miR-26a)/PTEN在早期糖尿病小鼠视网膜神经变性(DRN)中的作用及其机制.方法 66只C57BL/6J小鼠随机分为实验组和对照组,实验组小鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病动物模型.实验组小鼠造模成功后随机分为糖尿病组和miR-26a组,miR-26a组小鼠玻璃体内注射m...     

miR-155-5p/SOCS1在大鼠角膜移植排斥反应中的作用

目的 探讨miR-155-5p/细胞因子信号转导抑制物1(SOCS1)在大鼠角膜移植免疫排斥反应中的作用及典必殊能否抑制miR-155-5p/SOCS1 通路延缓排斥反应.方法 建立大鼠角膜移植模型,随机分为对照组、自体移植组、同种异体移植组、同种异体移植+典必殊组(典必殊组).术后每天按Larkin 法行角膜植片排斥...     

PTEN/SOCS3缺失对视神经损伤大鼠视网膜神经节细胞存活和轴突再生的影响

目的　探讨磷酸酶-张力蛋白同源物(PTEN)和细胞因子信号转导抑制蛋白3(SOCS3)缺失对视神经损伤大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）存活和轴突再生的影响。方法　将Thy1-YFP/PTEN^F/FSOCS3^F/F大鼠作为对照组,玻璃体内注射腺相关病毒（AAV）介导PTEN基因缺失的Thy1-YFP/PTEN^F/F大鼠为PTEN^-/-组;玻璃体内注射AAV介导SOCS3基因缺失的Thy1-YFP/SOCS3^F/F大鼠为SOCS3^-/-组;玻璃体内注射AAV介导PTEN基因和SOCS3基因均缺失的Thy1-YFP/PTEN^F/F SOCS3^F/F大鼠为PTEN^-/-SOCS3^-/-组,每组各20只。HE染色观察各组大鼠视网膜组织病理学形态,免疫荧光染色鉴定各组大鼠RGCs存活情况,流式细胞仪检测各组大鼠RGCs凋亡情况,并对比轴突再生数量;利用Western blot检测各组大鼠RGCs中GFAP和GAP-43的蛋白相对表达水平。结果　对照组大鼠视网膜细胞炎症反应明显,细胞间层次结构混乱、连接差,分散性强;PTEN^-/-组和SOCS3^-/-组大鼠视网膜整体结构较规则,层次较清晰,炎症反应有所减轻;PTEN^-/-SOCS3^-/-组大鼠视网膜结构清晰,较规则,细胞之间连接紧密,炎症反应明显减轻。PTEN^-/-组和SOCS^-/-组大鼠RGCs存活率均显著高于对照组（均为P<0.001）。PTEN^-/-SOCS3^-/-组大鼠RGCs存活率均明显高于PTEN^-/-组和SOCS3^-/-组（均为P<0.001）。PTEN^-/-组和SOCS3^-/-组大鼠RGCs凋亡率显著低于对照组（均为P<0.001）,PTEN^-/- SOCS3^-/-组大鼠RGCs凋亡率均明显低于PTEN^-/-组和SOCS3^-/-组（均为P<0.001）。PTEN^-/-组和SOCS3^-/-组大鼠视神经轴突数目均显著多于对照组（均为P<0.001）,PTEN^-/-SOCS3^-/-组大鼠视神经轴突数目均明显多于PTEN^-/-组和SOCS3^-/-组（均为P<0.001）。PTEN^-/-组和SOCS3^-/-组大鼠RGCs中GFAP和GAP-43蛋白表达均显著低于对照组（均为P<0.001）,PTEN^-/-SOCS3^-/-组大鼠RGCs中GFAP和GAP-43蛋白表达均明显低于PTEN^-/-组和SOCS3^-/-组（均为P<0.001）。结论　PTEN和SOCS3基因缺失与视神经损伤大鼠RGCs存活和轴突再生具有一定的关系,不仅能够促进RGCs的增殖,抑制其凋亡,还能够促进视神经轴突再生,同时敲减PTEN和SOCS3基因最为显著。     

长链非编码RNA(LncRNA)母系表达基因3(MEG3)对糖尿病视网膜病变大鼠模型视网膜血管内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)母系表达基因3(MEG3)对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠模型视网膜血管内皮细胞凋亡的影响。方法 取SPF级雄性SD大鼠以及体外培养的人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC),均随机分为对照组、模型组、LncRNA MEG3过表达组、miR-145-5p agomir组、共转染(LncRNA MEG3过表达质粒+miR-145-5p agomir)组、共转染阴性对照(LncRNA MEG3空载质粒+miR-145-5p agomir阴性对照质粒)组,采用腹腔注射链脲佐菌素建立DR大鼠模型,25 mmol·L^-1葡萄糖诱导DR细胞模型。对照组大鼠腹腔注射柠檬酸缓冲液,对照组细胞以正常培养基培养,将大鼠与细胞均分组进行处理,以LncRNA MEG3质粒、miR-145-5p agomir转染处理后,通过伊文思蓝(EB)检测大鼠视网膜血管通透性;TUNEL染色检测大鼠视网膜血管内皮细胞凋亡率;EdU染色与Hoechst 33258染色分别检测细胞增殖、凋亡情况;依照试剂盒测量大鼠房水中及HRMEC炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-...     

高良姜素对青光眼大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的 研究高良姜素对青光眼大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用。方法 取48只SD大鼠随机分为对照组、对照+高良姜素组、高眼压组和高眼压+高良姜素组,每组12只(12眼)。对照+高良姜素组和高眼压+高良姜素组大鼠接受高良姜素滴眼液治疗,对照组和高眼压组大鼠则接受相同剂量二甲基亚砜溶剂滴眼。于造模后第0～28天监测大鼠眼压,并于造模后第28天处死大鼠,收集各组大鼠右眼球,并采用HE染色观察大鼠视网膜形态变化,采用免疫组织化学染色分析各组大鼠视网膜中GFAP、Toll样受体4(TLR4)和NOD样受体3(NLRP3)表达。从4只4 d龄大鼠视网膜中分离RGC,分为空白组、光气组和CoCl₂+高良姜素组。光气组和光气+高良姜素组RGC与200μmol·L^-1 CoCl₂一起孵育48 h,光气+高良姜素组RGC中加入20μmol·L^-1高良姜素干预48 h。收集各组细胞,采用流式细胞术和Western blot检测RGC的凋亡率及相关蛋白的相对表达情况,并采用ELISA检测空白组、光气组和光气+高良姜素...     

姜黄素对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响及机制

目的：探讨姜黄素对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的影响及机制。

方法：将21只SD大鼠随机分为3组,每组7只,高眼压模型组和姜黄素治疗组大鼠通过烧灼巩膜上静脉法建立慢性高眼压模型,假手术组大鼠仅剪开球结膜,不烧灼巩膜上静脉; 姜黄素治疗组给予4mL/kg姜黄素灌胃,假手术组和高眼压模型组给予4mL/kg纯水灌胃,连续3wk。造模后3wk,采用HE染色观察各组大鼠视网膜组织形态病理变化、RGCs数量及神经节细胞层(GCL)厚度; 采用TUNEL染色观察各组大鼠RGCs和视网膜细胞凋亡情况; 采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学染色和Western blot法检测各组大鼠视网膜谷氨酰半胱氨酸连接酶调节亚基(GCLM)与血红素加氧酶-1(HO-1)的表达水平。

结果：与假手术组相比,高眼压模型组和姜黄素治疗组大鼠视网膜组织形态紊乱,RGCs数量减少,GCL变薄,RGCs和视网膜细胞凋亡率均升高,GCLM和HO-1表达量均升高; 与高眼压模型组相比,姜黄素治疗组大鼠视网膜组织形态基本正常,RGCs数量增多,GCL增厚,RGCs和视网膜细胞凋亡率均降低,GCLM和HO-1表达量均升高。

结论：姜黄素在慢性高眼压大鼠模型中可通过上调抗氧化基因GCLM与HO-1的表达抑制RGCs凋亡。