mTOR信号通路调控CD133阳性胶质瘤干细胞自我更新的分子机制

背景与目的：mTOR（mammalian target of rapamycin）信号通路异常活化和高级别胶质瘤患者的预后不良相关。本研究探讨mTOR信号通路调控胶质瘤干细胞（GSCs）自我更新相关的分子机制。方法：采用CD133免疫磁珠分选CD133阳性胶质瘤干细胞。Western blot检测mTOR信号通路组分p-S6K、p-S6和干细胞自我更新相关基因Bmi-1的表达水平;Rapamycin（RPA）阻断mTOR信号通路后,用肿瘤球形成实验评价干预mTOR信号通路对胶质瘤干细胞自我更新的影响;统计学处理采用SPSS11.0统计分析软件分析。结果：CD133阳性胶质瘤干细胞表达较高水平的mTOR信号通路组分p-S6K、p-S6和干细胞自我更新相关分子Bmi-1。通过rapamycin阻断mTOR信号通路,可诱导胶质瘤干细胞谱系分化,同时显著降低肿瘤球形成能力（P〈0.05）,而自噬抑制剂3-MA处理不能逆转rapamycin的效应。结论：mTOR信号通路能够调控胶质瘤干细胞自我更新,阻断mTOR通路下调胶质瘤干细胞自我更新潜能。     

单克隆抗体18H12抑制PAMC-82胃癌干细胞的自我更新和侵袭能力

目的：探讨靶向胃癌干细胞的功能性单克隆抗体18H12对胃癌干细胞自我更新和侵袭能力的作用。方法：以胃癌 细胞株PAMC-82为模型,用流式细胞术检测其亲本细胞和通过成球培养富集干细胞后细胞膜表面烯醇化酶1（enolase-1,ENO1） 的表达水平,用流式细胞术分选出ENO1+和ENO1-细胞,并检测其自我更新和侵袭能力。以商业化的ENO1抗原和抗体作为样 品,利用免疫共沉淀实验（co-immunoprecipitation,CoIP）验证靶向ENO1的18H12抗体能够准确识别ENO1。分别用18H12处理 PAMC-82细胞12、24、48 h后, 用甲基纤维素成球实验和Transwell小室法分别检测18H12对PAMC-82细胞自我更新和侵袭能力的影 响。结果：细胞膜表面的ENO1在PAMC-82球体细胞中的表达水平明显高于亲本细胞（P<0.01）,ENO1可作为一个靶向胃癌干细 胞的潜在靶点。分选的ENO1+细胞的自我更新和侵袭能力明显强于ENO1-细胞和亲本细胞（P<0.05或P<0.01）。18H12抗体能够 准确识别ENO1,与商业化抗体识别的条带一致。单抗18H12能显著抑制PAMC-82细胞的自我更新和侵袭能力（均P<0.01）。结 论：单克隆抗体18H12能够显著抑制胃癌干细胞的自我更新和侵袭能力,有望成为靶向胃癌干细胞的候选抗体药物。     

顺铂通过Notch4 信号通路增强口腔鳞癌干细胞的自我更新能力

目的：研究Notch4 信号通路对口腔鳞癌PJ15 和PJ41 细胞的肿瘤干细胞（cancer stem cell,CSC）自我更新能力的影响及其作用机制。方法：利用TCGA数据库分析Notch4 基因在头颈部肿瘤中的表达。2 μmol/L 顺铂处理口腔鳞癌PJ15 和PJ41 细胞48 h,再加入Notch 通路抑制剂DAPT作用24 h,采用流式细胞术检测CSC比例,Western blotting 法和qPCR法检测CSC标志物（Sox2、Bmi-1、Oct4、Nanog）和Notch4 信号通路中的下游基因（JAG1、HEY1、HEY2、HES1、HES2、DLL4 等）的表达。采用siRNA技术敲降Notch4,Western blotting 法和qPCR 法检测si-Notch4 和顺铂对CSC标志物表达水平的影响,干细胞成球实验检测CSC的自我更新能力。结果：头颈部肿瘤组织中Notch4 基因呈高表达（P=0.046）。顺铂处理后,PJ15 和PJ41 细胞中NICD4 和CSC标志物（Sox2、Bmi-1、Oct4、Nanog ）和Notch4 信号通路的下游基因（JAG1、HEY1、HEY2、HES1、HES2、DLL4）的表达水平较对照组均显著增加（均P<0.05）,ALDH1 阳性细胞群体比例显著增加（P<0.05）;再加入Notch 通路抑制剂DAPT 作用24 h 后上述基因表达量均显著下降（P<0.05 或P<0.01）。敲降Notch4 后,与对照组相比,si-Notch4 组PJ15 细胞[ （1.33±0.47）vs（8.00±0.82）个,P<0.01]和PJ41 细胞[ （1.00±0.82）vs（7.67±1.25）个,P<0.01]球体的数量和大小均显著减少;再加入2 μmol/L DDP作用24 h,si-Notch4 组Nanog 和Bmi-1 基因表达量与对照组无显著差异。结论：激活Notch4 信号通路可增加口腔鳞癌PJ15 和PJ41 细胞的干细胞自我更新能力。     

KLF4对肿瘤干细胞自我更新和增殖潜能的影响

目的:分析Kr櫣ppel样因子4(Krppel-like factor4,KLF4)对肿瘤干细胞T3A-A3自我更新和增殖能力的影响。方法:构建靶向干扰KLF4的慢病毒载体pLVTHM-shKLF4,利用前期实验分离与鉴定的肿瘤干细胞T3A-A3,应用RT-PCR和Western blotting分别检测pLVTHM-shKLF4感染后T3A-A3细胞中KLF4mRNA和蛋白的表达。细胞球形成实验检测pLVTHM-shKLF4感染对T3A-A3细胞自我更新的影响,平板集落形成实验检测T3A-A3细胞的克隆形成能力,流式细胞术检测T3A-A3细胞周期变化。裸鼠皮下移植瘤实验观察pLVTHM-shKLF4干扰KLF4表达后对T3A-A3细胞移植瘤生长的影响。结果:与肝癌细胞BEL-7402、HepG2相比,肿瘤干细胞T3A-A3表达更高水平的KLF4;pLVTHM-shKLF4感染能够在mRNA和蛋白水平下调T3A-A3细胞中KLF4的表达。pLVTHM-shKLF4感染的T3A-A3细胞形成细胞球的直径明显小于对照病毒的pLVTHM-shNC感染的T3A-A3细胞[(104.33±16.28)vs(186.67±28.15)μm,P<0.01],pLVTHM-shKLF4感染细胞形成的细胞克隆数目明显少于对照细胞[(83.5±7.78)vs(125±9.19)个,P<0.01),pLVTHM-shKLF4感染的T3A-A3细胞G1期比例明显升高[(39.65±4.03)%vs(29.35±1.00)%,P<0.01]。pLVTHM-shKLF4感染的T3A-A3细胞的移植瘤生长速度较对照细胞移植瘤明显减慢[细胞接种33 d,(46.14±12.94)vs(228.12±94.86)mm3,P<0.01]。结论:干扰KLF4的表达可抑制肿瘤干细胞T3A-A3的自我更新及其在体内外的增殖潜能。     

FUNDC1调控肺癌A549细胞及其干细胞的生长、自噬、凋亡和细胞干性的研究

目的:本实验旨在阐明线粒体自噬受体蛋白FUNDC1(FUN 14 domain containing 1)在肺癌病理进程中对肿瘤细胞生长死亡以及细胞干性的调控作用.方法:使用RT-qPCR分析FUNDC1在肺癌组织和细胞中的表达情况.siRNAs和过表达载体转染A549细胞以及诱导形成的A549干细胞团(A549/CS...     

癌基因Bmi-1与干细胞及肿瘤发生

 引言 干细胞具有自我更新、多向分化和无限增殖能力。恶性肿瘤从根本来说是一类干细胞疾病，少量的干细胞成为细胞恶性转化、肿瘤复发和转移的根源。癌基因Bmi-1可以决定干细胞归宿：自我更新或衰老，同时在多种肿瘤的发生中起重要作用。本文就癌基因Bmi-1近年来的研究进展作一综述。     

慢病毒介导Stathmin-1基因沉默对宫颈Hela细胞p53蛋白的影响

[目的]研究宫颈癌Hela细胞中Stathmin-1表达对p53蛋白的影响及对细胞增殖的作用。[方法]构建Stathmin-1 siRNA慢病毒载体,包装重组慢病毒,感染宫颈癌Hela细胞株,沉默Stathmin-1表达为干扰组,采用导入阴性片段的慢病毒感染Hela细胞作为对照组。MTT法检测细胞增殖,蛋白印迹法(Western-blot)检测细胞p53蛋白的表达。[结果 ]感染重组慢病毒及阴性病毒后,Stathmin-1基因干扰组Hela细胞增殖24h后较对照组抑制明显(P<0.05)。与对照组相比,干扰组中p53蛋白表达明显减少(P<0.05)。[结论]宫颈癌Hela细胞中Stathmin-1影响p53蛋白表达,沉默Stathmin-1可抑制细胞增殖。     

TBL1XR1介导上皮-间质转化和干细胞特性调控头颈部鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭

摘 要：［目的］ 阐明转导素β1X连锁受体蛋白1（transducin β-like 1 X-linked receptor 1,TBL1XR1）可介导上皮-间质转化和干细胞特性,从而调控头颈鳞癌细胞的迁移、侵袭。［方法］ 利用UALCAN数据库网站搜索TBL1XR1在头颈鳞癌组织及癌旁组织中的表达情况,应用Cbioprotal 在线分析平台分析癌症基因组图集（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库中523例头颈鳞癌RNA-SEQ 数据。将慢病毒介导的TBL1XR1过表达载体、沉默载体和对应空白载体分别转染头颈鳞癌细胞Tu686。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验评价Tu686细胞的迁移、侵袭能力;Western blot、qRT-PCR检测上皮-间质转化标志物表达;肿瘤球形成实验、qRT-PCR检测干细胞特性;抑制Wnt/β-catenin信号通路后检测TBL1XR1过表达引起的细胞迁移、侵袭、上皮-间质转化和干细胞特性。［结果］ TBL1XR1 mRNA 在头颈鳞癌组织中的表达明显高于相应癌旁组织（P<0.001）。过表达TBL1XR1的Tu686细胞划痕愈合能力（90%±4% vs 53%±6%）、Transwell迁移（0.68±0.04 vs 0.32±0.03）、侵袭能力（0.59±0.04 vs 0.26±0.04）较对照组显著性增强（P 均<0.05）。TBL1XR1表达被抑制时,细胞划痕愈合能力（70%±4% vs 96%±5%）、Transwell迁移（0.32±0.06 vs 0.63±0.08）、侵袭能力（0.24±0.04 vs 0.52±0.05）较对照组显著性降低（P均<0.05）。TBL1XR1过表达后,Tu686细胞的间质细胞标志物Vimentin、N-cadherin表达升高,上皮细胞标志物E-cadherin表达降低;肿瘤球形成数较对照组明显增多（41±9 vs 13±4,P<0.05）,肿瘤干细胞标志物ALDH1、CD44、CD133表达上调。抑制Wnt/β-catenin信号通路可部分逆转TBL1XR1过表达引起的迁移、侵袭、上皮-间质转化及干细胞特性改变。［结论］ TBL1XR1可在体外介导上皮-间质转化和干细胞特性,进而促进头颈鳞癌细胞迁移、侵袭,其调控机制可能与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

FoxO1蛋白在原发性肝癌(PHC)组织中的表达及与对预后的影响

目的 探讨原发性肝癌(PHC)组织中叉头转录因子O家族1(FoxO1)蛋白的表达变化及其临床意义.方法 选取90例术后PHC癌组织标本为PHC组,癌旁组织标本为癌旁组,采用免疫组化染色检测两组标本中的FoxO1蛋白阳性率,分析不同肿瘤病灶大小、肿瘤数量、甲胎蛋白(AFP)水平、TNM分期、脉管癌栓、是否发生肝硬化的PH...     

YAP 与肿瘤干细胞相关性研究进展*

YAP 是一种多功能蛋白,可以与不同的转录因子相互作用激活基因的表达。YAP 作为活化Hippo途径的关键转录调节蛋白在调节器官大小、细胞自我更新、干细胞和组织特异性祖细胞扩增等方面发挥重要作用,在Hippo途径中MST 1/ 2 激酶和其结合蛋白SAV 共同磷酸化激酶LATS1/ 2,激活的LATS1/ 2 磷酸化YAP 从而抑制YAP 蛋白的活性。近年来,大量的研究已经在胚胎干细胞、神经干细胞、造血干细胞中发现YAP 的高表达能够维持干细胞干性并且已经成为维持干性的标志物,随后的研究发现信号通路可能与肿瘤干细胞（CSC）分化密切相关。本文主要讨论YAP 在维持干细胞及肿瘤干细胞干性方面的作用。     

Implications of Stem Cells and Cancer Stem Cells for Understanding Fomation and Therapy of Cancer

Most cancers are heterogeneous with respect to proliferation and differentiation. There is increasing evidence suggesting that only a minority of cancer cells, tumorigenic or tumor initiating cells, possess the capacity to proliferate extensively and form new hematopoietic cancer or solid tumors. Tumor initiating cells share characteristics required for normal stem cells. The dysregulation of self-renewal and proliferation of stem cells is a likely requirement for cancer development. This review formulates a model for the origin of cancer stem cells and regulating self-renewal which influences the way we study and treat cancer.     

肝癌干细胞表面标记物及靶向治疗的研究进展

肝癌是一种常常致命的恶性肿瘤,具有较高的复发率和化疗耐药性。 癌症的主要恶性表现包括复发、转移和化疗耐药性,且都与肿瘤干细胞（cancer stem cells,CSCs）的存在有关。 在过去的几十年中,CSCs已经在包括肝癌在内的许多肿瘤中被鉴定和确定。 越来越多的证据揭示了许多肝癌干细胞（liver cancer stem cells,LCSCs）的生物学行为及其调控的机制。 基于这些研究结果,LCSCs的根除是靶向治疗的目标之一。 本综述重点介绍LCSCs表面标记物最新进展及其靶向治疗策略的发展。     

Ras activation contributes to the maintenance and expansion of Sca-1 cells in a mouse model of breast cancer

The cancer stem cell (CSC) hypothesis proposes that CSCs are the root of cancer and cause cancer metastasis and recurrence. In this study, we examined whether Ras signaling is associated with stemness of the CSCs population characterized by the stem cell antigen (Sca-1) phenotype in a 4T1 syngeneic mouse model of breast cancer. The Sca-1^pos putative CSCs had high levels of activated Ras and phosphorylated MEK (p-MEK), compared with counterparts. The Ras farnesylation inhibitor (FTI-277) suppressed the maintenance and expansion of CSCs. Therefore, selective inhibition of Ras activation may be useful for stem-specific cancer therapy.     

非编码RNA调控乳腺癌干细胞干性的研究进展

随着高通量技术的发展和表观遗传学的深入研究,人们发现基因组大量的非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA)转录本,其能从基因组上转录而来但并不翻译成蛋白,在多水平、多途径的调节基因表达,参于生物各个层面的重要生物学行为,与肿瘤发生发展关系密切,是肿瘤研究领域热点。乳腺癌干细胞在乳腺癌的发生发展中起着非常重要的作用。目前研究已经证实了一些ncRNA与乳腺癌动态干性相关,ncRNA被发现作为影响干性的崭新靶点。本文就ncRNA在调控乳腺癌干细胞干性的的相关研究进展作一综述。     

Ovarian cancer stem cells: Working towards the root of stemness

Despite medical advances made over the past decade, ovarian cancer remains one of the more lethal gynecologic cancers in the United States. While current therapeutic strategies are relatively effective, there is a high incidence of recurrent chemoresistant disease. This has been attributed, in part, to a regenerative tumor cell sub-population that has acquired stem cell properties which allows these cells to escape standard chemotherapeutics and drive recurrent disease. To date, a number of laboratories have identified these cancer stem cell (CSC) sub-populations in ovarian cancer cell lines, tumors or ascites and the collective findings suggest ovarian CSCs are likely to be as heterogeneous as the disease itself. Moreover, the multiple ovarian histophenotypes and possible sites of disease origin together with the potential for differential hierarchal contributions of multiple CSCs populations represent significant challenges to the identification, functional characterization and therapeutic targeting of ovarian CSC. This review will highlight the markers and methodology currently used to identify and isolate these cells. We will discuss some of the underlying ovarian CSC biology, the signaling pathways implicated in their survival, replication and differentiation and potential therapeutic targeting strategies.     

MicroRNA在肿瘤干细胞中的调控作用研究进展

肿瘤干细胞（CSCs）是导致肿瘤复发、转移和耐药的根源之一。microRNA（miRNAs）是一类小分子非编码RNA,可与靶mRNA的3＇UTR区域结合而导致该mRNA分子的翻译受到抑制,参与多种生物功能的调节。最近的研究发现,miRNAs参与CSCs的分化、自我更新等生物学特性的调控。miRNAs可以作为CSCs研究的一个新的切入点。本文就近年来该方面的研究进展做简要综述。     

MicroRNA在肿瘤干细胞中的调控作用研究进展

肿瘤干细胞(CSCs)是导致肿瘤复发、转移和耐药的根源之一。microRNA(miRNAs)是一类小分子非编码RNA,可与靶mRNA的3’UTR区域结合而导致该mRNA分子的翻译受到抑制,参与多种生物功能的调节。最近的研究发现,miRNAs参与CSCs的分化、自我更新等生物学特性的调控。miRNAs可以作为CSCs研究的一个新的切入点。本文就近年来该方面的研究进展做简要综述。