长链非编码RNA6030408B16RIK结合微小RNA-326-3p参与腹膜透析超滤衰竭发生的机制

目的 研究长链非编码RNA6030408B16RIK(LncRNA6030408B16RIK)结合微小RNA(miRNA-326-3p)致大鼠尿毒症模型腹膜纤维化的机制,为预防超滤衰竭提供新的依据。方法 将36只造模成功的尿毒症大鼠分为六组,每组6只大鼠,分别为：尿毒症组（不行腹膜透析治疗）,空白组（腹膜透析4周）,NC组（腹膜透析4周+转染空质粒）,inhibitor NC组（腹膜透析4周+转染空质粒抑制剂）,miR-326-3p mimic组（腹膜透析4周+miR-326-3p模拟物）,miR-326-3p inhibitor组（腹膜透析4周+miR-326-3p抑制剂）。构建LncRNA6030408B16RIK原始序列载体及LncRNA6030408B16RIK突变体载体,将miR-326-3p模拟物及模拟物阴性对照（mimic NC）分别与荧光素酶报告载体共同转入HEK-293T细胞中;以双荧光素酶报告实验、RNA pull down实验验证LncRNA6030408B16RIK与miR-326-3p的靶向关系,用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）和蛋白质印迹...     

LncRNA PVT1通过竞争miR-149-5p上调CHI3L1并影响变应性鼻炎进展的研究

目的　探讨长链非编码RNA（LncRNA）PVT1对变应性鼻炎（AR）进展的影响及其相关作用机制。方法　24只BALB/c小鼠，其中6只作为对照组，余18只采用卵白蛋白和氢氧化铝建立AR模型并采用随机数字表法均分为模型组、AR+NC组（尾静脉注射空载体慢病毒）、AR+shPVT1组（尾静脉注射LncRNA PVT1干扰载体慢病毒），每组6只。采用行为学评分评估各组小鼠过敏症状；HE染色观察各组小鼠鼻黏膜组织病理学改变；实时荧光定量PCR检测各组小鼠鼻黏膜组织中LncRNA PVT1、miR-149-5p和几丁质酶-3样蛋白1（CHI3L1）mRNA的表达；Western blot检测CHI3L1蛋白表达；ELISA分析各组小鼠血清IgE、白细胞介素（IL）-5、肿瘤坏死因子（TNF）-α水平。构建LncRNA PVT1和CHI3L1的野生型（WT）和突变型（MT）荧光素酶报告质粒，单独或同时与miR-149-5p mimic共转染293T细胞，采用双荧光素酶实验分析并计算各组细胞荧光素酶相对活性。结果　与模型组相比，AR+shPVT1组小鼠行为学评分降低；血清中IgE、IL-5和TNF-α水平降低；鼻黏膜组织中LncRNA PVT1 mRNA表达水平降低，miR-149-5p mRNA表达水平升高，CHI3L1 mRNA及蛋白水平均降低，鼻黏膜组织炎症反应减轻。双荧光素酶实验证实LncRNA PVT1通过竞争性结合miR-149-5p，上调miR-149-5p靶基因CHI3L1的表达。结论　在AR模型小鼠中异常高表达的LncRNA PVT1通过发挥竞争性内源RNA作用抑制miR-149-5p表达而上调CHI3L1的表达，引发小鼠鼻黏膜组织的炎性症状并促进过敏反应。     

LncRNA MIAT靶向 miR-204对氧糖剥夺 /复氧诱导 PC12细胞损伤的保护作用

目的 探究氧糖剥夺/复氧（OGD/R）诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株PC12细胞损伤的分子调控机制,以期为临床上靶向治疗缺血性卒中提供新的思路。方法 该研究于2021年6—12月进行,购买PC12细胞后对其进行OGD/R诱导,在诱导后的细胞中分别转染长链非编码RNA(LncRNA)心肌梗死相关转录本（MIAT）过表达载体及微RNA-204模拟物（miR-204mimic）,以对应的载体阴性对照（pcDNA3.1-NC）或模拟物阴性对照（mimic-NC）作为阴性对照,以未转染PC12细胞作为空白对照。使用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测LncRNA MIAT与miR-204的表达;CCK-8与流式细胞术分别检测细胞活力与凋亡;Elisa试剂盒检测炎性因子白细胞介素（IL）-6、IL-1β,抗炎性因子IL-10的表达。RNA下拉检测MIAT在miR-204上的富集;通过starbase预测LncRNA MIAT与miR-204的结合位点,随后采取双萤光素酶报告实验验证LncRNA MIAT与miR-204的靶向结合。结果 与空白对照组[1.011±0.113,1.00...     

miR-582-5p靶向调控FOXO1对新生大鼠缺血缺氧性脑病神经元损伤的影响

目的 探讨微小RNA-582-5p(miR-582-5p)靶向调控叉头框转录因子1(FOXO1)对新生大鼠缺血缺氧性脑病（HIE）神经元损伤的影响。方法 90只新生大鼠按照随机数字表法均分为对照（NC）组、模型（HIE）组、miRNA对照（LV-miRNA-NC）组、miR-582-5p过表达（LV-miR-582-5p）组、miR-582-5p过表达+mRNA对照（LV-miR-582-5p+LV-NC）组、miR-582-5p过表达+FOXO1过表达（LV-miR-582-5p+LV-FOXO1）组。除NC组外的各组大鼠建立HIE模型,对大鼠进行神经功能缺损评分,TTC染色测定脑梗死体积,Real-time PCR检测miR-582-5p和FOXO1表达,双萤光素酶报告基因实验检测miR-582-5p和FOXO1靶向关系,HE染色观察海马组织病理变化,TUNEL和Neu N荧光双标共定位检测海马组织神经元凋亡,免疫组化染色检测FOXO1、胱天蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达。结果miR-582-5p和FOXO1具有靶向关系,与NC组比较,HIE组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体...     

阿司匹林调节miR-340-5p/HMGB1/TLR4通路对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响

目的 探讨阿司匹林（Asp）通过调节微RNA-340-5p(miR-340-5p)/高迁移率族蛋白1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)通路对大鼠心肌缺血/再灌注（I/R）损伤的影响。方法 将雄性SD大鼠分为假手术（Sham）组（开胸不结扎）、I/R组（构建I/R损伤模型）、Asp预处理（I/R+Asp）组（Asp预处理7 d+造模）、I/R+Asp+in-miR-340-5p组[Asp预处理7 d+提前转染miR-340-5p抑制物+造模]和I/R+Asp+HMGB1组（Asp预处理7 d+提前转染过表达HMGB1+造模）,每组20只。检测各组大鼠心肌损伤指标（乳酸脱氢酶、肌酸激酶同工酶MB、心肌肌钙蛋白Ⅰ）、炎症和氧化应激指标（髓过氧化物酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛）水平,观察其心肌组织病理改变,检测其心肌梗死面积、细胞凋亡情况以及心肌组织中miR-540-5p和HMGB1、TLR4蛋白的表达情况;以大鼠心肌细胞H9C2为对象,考察miR-340-5p与HMGB1的靶向关系。结果 Asp预处理可显著抑制I/R损伤模型大鼠血清心肌损伤指标水平的升高,可减轻炎...     

微RNA-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域3/胱天氨酸蛋白酶-1/白细胞介素-1β信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及机制

目的 探讨微RNA-223-3p(miR-223-3p)调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/胱天氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及其机制。方法 将32只ICR小鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、miR-223-3p模拟物（miR-223-3p agomir）组和阴性对照miRNA模拟物（agomir-NC）组,建立四氯化碳小鼠肝纤维化模型。miR-223-3p agomir组和agomir-NC组于第4周末尾静脉注射miR-223-3p agomir及agomir-NC（给药剂量为每只200 nmol/L）,每周给药3次,连续给药2周。分别比较4组小鼠血清总胆红素（TBIL）、白蛋白（Alb）、血清透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）表达水平,采用苏木精-伊红（HE）染色及马松（Masson）染色检测肝组织病理改变。采用基因本体分析（GO）、KEGG分析对miR-223-3p进行功能分析,采用Targetscan数据库对miR-223-3p的靶基因进行预测,实时荧光定量PCR(qPCR)...     

乌头碱调控miR-150-5p表达对心力衰竭模型大鼠心功能及心室重构的影响

目的 探究乌头碱对心力衰竭模型大鼠心功能及心室重构的影响及对miR-150-5p的调控作用。方法 将SPF级SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、曲美他嗪组、乌头碱组、乌头碱+antagomir-NC组、乌头碱+miR-150-5p antagomir组,每组15只。除假手术组外,其余组均利用结扎左前降支冠状动脉法建立心力衰竭大鼠模型。测定各组大鼠心功能指标左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室射血分数(LVEF);ELISA检测各组大鼠心肌损伤指标心肌肌钙蛋白I(CTnI)、脑钠肽(BNP)和N末端B型脑钠肽前体(NT-pro BNP)的水平;测定各组大鼠心脏和左心室质量指数;Masson染色观察各组大鼠心肌组织形态;TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡率;RT-qRCR检测各组大鼠心肌组织中miR-150-5p和细胞周期蛋白D2(CCND2)的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与CCND2的靶向关系;Western blotting检测心肌细胞中CCND2蛋白的表达。结果 与模型组相比,乌头碱组大鼠心功能指标LVEDD、LVESD、...     

LncRNA GAS5调控miR-223-5p逆转乳腺癌他莫昔芬耐药性分析

摘要：目的:探究LncRNA GAS5在乳腺癌他莫昔芬耐药性菌株中的表达情况,初步探究其可能的作用机制。方法:体外培养MCF-7、MCF-7/TAM细胞,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测细胞LncRNA GAS5、miR-223-5p表达情况;LncRNA GAS5 mimics、对照序列转染至MCF-7/TAM细胞分为LncRNA GAS5过表达组、阴性对照组（NC组）、空白对照组（Control）;MTT法检测细胞活性及IC50变化;双荧光素酶报告系统检测LncRNA GAS5、miR-223-5p的靶向关系;免疫印迹法对耐药蛋白P糖蛋白（P-gp）（SBPVR1）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路蛋白进行检测。结果:MCF-7/TAM细胞中LncRNA GAS5表达低于MCF-7细胞,miR-223-5p高于MCF-7细胞（P<0.05）。与空白对照组、NC组相比,LncRNA GAS5过表达组LncRNA GAS5表达、细胞增殖抑制率显著升高,IC50值、miR-223-5p表达、蛋白P-gp、MRP1、P-PI3K、P-Akt表达显著降低（P<0.05）。双荧光素酶实验结果表明LncRNA GAS5与miR-223-5p具有靶向关系。结论:过表达LncRNA GAS5可能通过靶向抑制miR-223-5p,抑制PI3K/Akt信号通路,逆转MCF-7细胞的TAM耐药性。     

IRX5促进肝癌细胞的侵袭迁移及其与miR-136-5p靶向关系的验证#br#

摘要：目的 探讨易洛魁族同源盒基因5（IRX5）对肝癌细胞侵袭与迁移的影响,并验证其与miR-136-5p的靶向 关系。方法 取对数生长期肝癌 SMMC7721 细胞,过表达 IRX5 实验设空载质粒（pcDNA3.1）组和过表达 IRX5 （pcDNA3.1-IRX5）组,敲低 IRX5实验设阴性对照（sh-NC）组和敲低 IRX5（sh-IRX5）组。采用 Western blot验证 IRX5 过表达和敲低效率;采用划痕实验和 Transwell 实验检测 IRX5 对肝癌细胞迁移与侵袭的影响;采用 miRanda、 Targetscan生物信息学软件预测 IRX5结合的 miRNA和位点;构建野生型和突变型 IRX5 3'UTR双荧光素酶报告基因 质粒,采用酶切、基因测序方法鉴定重组质粒是否构建成功。取对数生长期 293T 细胞,设野生型质粒+阴性对照 （IRX5-3'UTR-Wt+NC）组和野生型质粒+miR-136-5p（IRX5-3'UTR-Wt+miR-136-5p）组,突变型质粒+阴性对照 （IRX5-3'UTR-Mut+NC）组和突变型质粒+miR-136-5p（IRX5-3'UTR-Mut+miR-136-5p）组,双荧光素酶报告系统检 测各组荧光素酶活性。结果 过表达 IRX5组 IRX5蛋白表达水平、细胞迁移及侵袭数量均高于空载质粒组,敲低 IRX5组IRX5蛋白表达水平、细胞迁移及侵袭数量均低于阴性对照组（均P＜0.05）。成功构建IRX5基因3'UTR野生 型和突变型双荧光素酶报告质粒;双荧光素酶实验结果显示,IRX5-3'UTR-Wt+miR-136-5p组双荧光素酶活性低于 IRX5-3'UTR-Wt+NC 组（P＜0.01）,IRX5-3'UTR-Mut+miR-136-5p 组与 IRX5-3'UTR-Mut+NC 组差异无统计学意 义。结论 IRX5可促进肝癌细胞的侵袭与迁移,IRX5是 miR-136-5p的一个靶基因,miR-136-5p可能通过 IRX5的 3'UTR抑制肝癌细胞的侵袭与迁移。     

LncRNA Neat1调控miR-128-3p表达对创伤性脑损伤小鼠认知功能和神经炎症的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)Neat1靶向调节微小RNA(miR)-128-3p表达对创伤性脑损伤(TBI)小鼠认知功能和神经炎症的影响。方法 通过自由落体法建立TBI小鼠模型。将建模后的小鼠随机分为模型组、腺病毒空载体组(Ad-NC)组、Neat1过表达腺病毒(Ad-Neat1)组、miR-128-3p抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、miR-128-3p抑制物(miR-128-3p inhibitor)组、Ad-Neat1+miR-128-3p模拟物(Ad-Neat1+miR-128-3p mimic)组、Ad-Neat1+miR-128-3p模拟物阴性对照(Ad-Neat1+mimic NC)组，10只/组，另取10只假手术组小鼠。水迷宫实验检测小鼠认知能力；苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠伤灶周围脑组织病理学变化；实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测Neat1、miR-128-3p表达水平；酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平；双荧光素酶实验验证Neat1、miR-128-3p...     

吡非尼酮通过miRNA-425-5p调控TGF-β/Smad通路对大鼠心肌纤维化的影响

目的 探讨吡非尼酮通过调控miRNA-425-5p及转化生长因子（TGF）-β/Smad通路改善心肌梗死大鼠心肌纤维化程度的作用。方法 将60只雄性SD大鼠分为3组：假手术组（不结扎冠状动脉）、模型组、吡非尼酮组（吡非尼酮0.3 g/kg灌胃）。造模4周后采用心脏多普勒超声评价各组大鼠心脏功能; 酶联免疫吸附试验检测血浆中白细胞介素6（IL-6）、Ⅰ型胶原蛋白α2（COL1α2）、Ⅲ型胶原蛋白α1（COL3α1）的水平;采用Masson染色法评价大鼠心肌纤维化程度,使用Image-Pro Plus 6.0分析各组心肌胶原容积分数;Western blot检测心肌组织中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达水平;实时荧光定量PCR（qPCR）检测心肌组织中TGF-β1和miRNA-425-5p表达水平。同时在体外分离、培养乳鼠心肌成纤维细胞,分为对照组（不加任何物质）、miRNA-425-5p mimic组（加入转染miRNA-425-5p mimic）、吡非尼酮组（加入1.5 g/L的吡非尼酮）。采用qPCR检测各组miRNA-425-5p和TGF-β1 mRNA表达水平。结果 模型组大鼠与假手术组相比心脏左心室舒张末期内径（LVEDd）、左心室收缩末期内径（LVESd）增大,左心室射血分数（LVEF）、左心室短轴缩短率（FS）降低（P<0.05）;Masson染色及定量分析结果显示心肌纤维化加重;炎性因子IL-6、COL3α1、COL1α2水平明显升高（P<0.05）;心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达升高,miRNA-425-5p表达水平降低（均P<0.05）。吡非尼酮组与模型组相比,LVEDd、LVESd缩小,LVEF、FS升高（P<0.05）,Masson染色及定量分析结果示心肌纤维化程度减轻,血浆炎性因子IL-6、COL3α1、COL1α2水平明显降低（P<0.05）;心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达水平降低,miRNA-425-5p表达水平升高（均P<0.05）。体外细胞实验结果表明,miRNA-425-5p mimic组与对照组相比,miRNA-425-5p表达水平升高,TGF-β1 mRNA表达水平降低（P<0.05）。吡非尼酮组与对照组相比,miRNA-425-5p表达水平升高,TGF-β1 mRNA表达水平降低（P<0.05）。结论 吡非尼酮可通过调节miRNA-425-5p表达水平调控TGF-β/Smad信号通路,减轻心肌纤维化,改善心肌梗死后心力衰竭大鼠心脏功能。     

抑制miR-33表达对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺纤维化的影响及机制研究

目的 探讨抑制miR-33表达对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺纤维化的影响及其机制。方法 将60只SD大鼠按随机数字表法分成假手术组(Sham组)、ARDS模型组(Model组)、antagomir阴性对照组(antagomir-NC组)和miR-33 antagomir组(antagomir组),每组15只。除Sham组外,其他各组大鼠均通过颈部气管滴注脂多糖(LPS)建立ARDS模型。造模成功后给予miR-33 antagomir或antagomir-NC尾静脉注射。测定动脉血氧分压[p(O₂)]及氧合指数(OI);HE和Masson染色观察肺组织病理学变化;碱性水解法检测肺组织中羟脯氨酸(Hyp)含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺泡灌洗液中炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;实时荧光定量PCR检测肺组织中miR-33表达水平及转化生长因子β1(TGF-β1)、胶原蛋白(Collagen)Ⅰ和CollagenⅢmRNA表达水平;Western blot检测肺组织中TGF-β1、Smad2、p-Smad2、S...     

LncRNA OIP5-AS1调节miR-25-3p/SOX4轴对高糖诱导的人肾小管上皮细胞生物学过程的影响

目的 探讨长链非编码RNA Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(lncRNA OIP5-AS1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞增殖、凋亡和氧化应激损伤的影响及分子机制。方法 体外培养人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2,分为正常葡萄糖组（NG组）、高糖组（HG组）、HG+si-NC组、HG+si-OIP5-AS1组、HG+miR-NC组、HG+miR-25-3p组、HG+si-OIP5-AS1+inhibitor-NC组、HG+si-OIP5-AS1+miR-25-3p inhibitor组。转染48 h后,实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中lncRNA OIP5-AS1、miR-25-3p和性别决定区Y框蛋白4(SOX4)m RNA水平;CCK-8法检测细胞活力;检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性;流式细胞术分析细胞凋亡情况;检测细胞中丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）的产生;Western blot实验检测细胞中SOX4、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）...     

外源性硫化氢通过上调SIRT1延缓心肌早衰抑制尿毒症大鼠心肌纤维化

目的 探讨外源性硫化氢(H₂S)对尿毒症心肌病(UCM)大鼠心肌早衰和心肌纤维化的影响。方法 雄性SD大鼠48只按随机数字表法分成假手术组(Sham组)、模型组(UCM组)、H₂S治疗组(UCM+H₂S组)以及H₂S对照组(H₂S组)。其中UCM组、UCM+H₂S组用经典5/6肾切除法造模,而Sham组及H₂S组仅游离双肾。建模后UCM+H₂S组和H₂S组大鼠每日注射硫氢化钠(NaHS,50μmol/kg),Sham组和UCM组注射同剂量生理盐水。干预8周,心脏超声检测大鼠左心室的短轴缩短率(LVFS);Masson染色法评估心肌纤维化情况,计算胶原容积分数(CVF);免疫组化染色检测心肌Ⅲ型胶原表达;β-半乳糖苷酶染色检测衰老心肌细胞;蛋白免疫印迹法检测心肌中沉默信息调节因子-1(SIRT1)、NOD样受体家族3(NLRP3)、白细胞介素(IL)-1β、P21、P19、P53蛋白表达。结果...     

2型糖尿病肾病患者血清miR-27b-3p、miR-342-3p表达特点及临床意义

目的 探讨2型糖尿病肾病（DN）患者血清miR-27b-3p、miR-342-3p表达特点及其对DN的诊断价值。方法 将157例2型糖尿病患者根据尿白蛋白与肌酐比率（UACR）分为正常白蛋白尿（NA）组49例、微量白蛋白尿（MA）组41例、大量白蛋白尿（DN）组67例。收集临床资料,采用实时定量聚合酶链反应检测血清miR-27b-3p、miR-342-3p表达,全自动生化分析仪检测血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）,双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测尿液Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原肽（PCⅢ）。分析DN发病的影响因素以及miR-27b-3p、miR-342-3p对DN的诊断价值。结果 与NA组比较,DN组和MA组HbA1c、UACR、尿Ⅳ-C、尿LN、尿PCⅢ水平均增加,而miR-27b-3p、miR-342-3p表达均降低（P<0.05）,DN组BUN、Scr水平增加、估算肾小球滤过率（eGFR）水平降低（P<0.05）。较高水平的尿PCⅢ是DN的危险因素,而较高水平的miR-27b-3p、miR-342-3p、eGFR是DN保护因素（P<0.0...     

lncRNA OIP5-AS1调节miR-942-5p/CHEK1轴对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)OPA相互作用蛋白5反义转录本1(OIP5-AS1)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响机制。方法 收集33例胶质瘤患者（低级别胶质瘤14例、高级别胶质瘤19例）和33例颅脑损伤患者的组织标本。实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织和细胞中OIP5-AS1、微小RNA-942-5p(miR-942-5p)和检查点激酶1(CHEK1)mRNA表达,分析胶质瘤组织中OIP5-AS1、miR-942-5p和CHEK1 mRNA表达水平的相关性。体外培养人脑胶质瘤细胞系U87、SHG-44、U251、H4和正常人星形胶质细胞NHA,Western blot检测细胞中CHEK1蛋白表达。将U87细胞分为对照（NC）组、siRNA阴性对照（si-NC）组、OIP5-AS1 siRNA(si-OIP5-AS1)组、siOIP5-AS1+inhibitor阴性对照（si-OIP5-AS1+anti-NC）组、si-OIP5-AS1+miR-942-5p抑制剂（si-OIP5-AS1+anti-miR-942-5p）组,采用Lipofectamine 30...     

miR-149-3p在先天性心脏病胎鼠心脏组织中的表达及其对P19细胞分化的影响

目的 探讨miR-149-3p在先天性心脏病（CHD）胎鼠心脏组织中的表达及其对小鼠畸胎瘤P19细胞分化的影响。方法 建立CHD室间隔缺损胎鼠模型,于妊娠第19天,HE染色观察心脏组织病理学变化,实时荧光定量PCR(qPCR)检测心脏组织中miR-149-3p和热休克蛋白蛋白家族B成员6(HSPB6)mRNA表达水平。二甲基亚砜（DMSO）诱导P19细胞向心肌细胞分化,并收集分化第0、5、10天的细胞,qPCR检测诱导分化过程中心肌分化标志物GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心房利钠尿多肽（ANP）的mRNA表达水平以及HSPB6 mRNA和miR-149-3p表达水平。miR-149-3p过表达慢病毒和空载慢病毒感染P19细胞,DMSO诱导分化第10天,免疫荧光染色检测细胞中cTnI蛋白表达情况,qPCR检测心肌分化相关标志物mRNA表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-149-3p与HSPB6之间的靶向关系。结果 与正常组比较,CHD组胎鼠出现心脏室间隔缺损,心脏组织中miR-149-3p高表达,而HSPB6低表达（P<0.01）。P19细胞...     

miR-101-3p靶向E2F2调控黑色素瘤细胞增殖的分子机制探讨

目的 探讨miR-101-3p靶向E2F转录因子2(E2F2)调控黑色素瘤细胞增殖的作用机制。方法 使用GEPIA、OSskcm等数据库联合分析E2F2在黑色素瘤中的表达,并评估转录因子E2F2在黑色素瘤预后中的价值;利用短发夹RNA(shRNA)抑制黑色素瘤细胞MV3中E2F2表达后,分别采用PI染色和流式细胞术检测细胞周期的改变;Westernblot实验检测细胞周期蛋白E(CyclinE)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的表达水平;免疫荧光实验检测细胞中自噬相关蛋白LC3B的表达水平;裸鼠荷瘤实验观察黑色素瘤在体内生长的变化。经miR-101-3pmimics处理后,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测MV3细胞中miR-101-3p的表达水平,同时利用qPCR和Westernblot实验检测E2F2的表达水平;通过MTT、BrdU法检测MV3细胞增殖水平。结果E2F2表达升高的患者预后更差（P<0.05）;与shGFP组相比,shE2F2组中处于G0/G1期的细胞比例显著增多（P<0.05）,CyclinE和CDK2的表达水平显著降低,自噬相关蛋白LC3B荧...     

miR-34a基于AKT/mTOR通路对骨关节炎大鼠的影响及作用机制研究

目的　探究微小核糖核酸-34a（microRNA-34A,miR-34a）基于蛋白激酶B（AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路对骨关节炎大鼠的影响及作用机制。方法　研究时间为2020年2月至2021年5月,选取43只6～9周龄健康雄性SD大鼠作前瞻性研究,其中随机选取10只分为空白组,剩余33只建立骨关节炎模型。成功建模30只,随机分为模型组、上调miR-34a组、沉默miR-34a组,各10只。观察病理组织,实时荧光定量PCR（real-time PCR,RT-PCR）法检测miR-34a表达,酶联免疫吸附实验法检测白细胞介素（interleukin,IL）-1β、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、IL-4、IL-10,蛋白免疫印迹法检测磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B,pAKT）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（phosphorylated mammalian target of rapamycin,pmTOR）表达。其中多组间比较行F检验,两组间比较行独立样本t检验。结果　空白组、模型组、上调miR-34a组、沉默miR-34a组的miR-34a表达分别为（0.94±0.08）、（2.39±0.26）、（2.12±0.23）、（1.54±0.17）,Makin评分分别为（0.35±0.05）、（4.13±0.19）、（3.02±0.16）、（1.15±0.09）分,IL-1β分别为（3.68±0.37）、（7.51±1.23）、（5.72±0.95）、（4.63±0.72）ng/L,TNF-α分别为（37.45±4.85）、（62.05±7.49）、（56.26±6.25）、（43.85±5.10）ng/L,IL-4分别为（115.75±16.81）、（50.43±9.42）、（75.82±11.94）、（93.85±13.86）pg/ml,IL-10分别为（106.49±17.51）、（60.85±10.23）、（76.81±13.07）、（91.05±15.02）pg/ml,pAKT分别为（1.00±0.01）、（1.95±0.29）、（1.71±0.26）、（1.71±0.26）,pmTOR分别为（1.00±0.01）、（1.89±0.24）、（1.56±0.25）、（1.25±0.15）。与空白组相比,模型组、上调miR-34a组、沉默miR-34a组的miR-34a表达、Makin评分、IL-1β、TNF-α、pAKT、pmTOR较高,IL-4、IL-10较低,差异均有统计学意义（F/P值分别为25.290/0.001、91.260/0.001、14.144/0.001、13.077/0.001、15.525/0.001、17.580/0.001、16.080/0.001、10.676/0.001）;与模型组相比,上调miR-34a组、沉默miR-34a组miR-34a表达、Makin评分、IL-1β、TNF-α、pAKT、pmTOR较低,IL-4、IL-10较高,差异均有统计学意义（均P<0.05）;沉默miR-34a组与上调miR-34a组相比,沉默miR-34a组miR-34a表达、Makin评分、IL-1β、TNF-α、pAKT、pmTOR较低,IL-4、IL-10较高,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论　沉默miR-34a对骨关节炎大鼠有干预作用,减少大鼠出现炎性反应,降低Makin评分,其作用机制与AKT/mTOR信号通路有关。     

甘草酸对慢性肾脏病大鼠心肌HMGB1/TLR4/NF-κB/HIF-1α信号通路的影响

目的 探讨应用甘草酸（Gly）治疗时对慢性肾脏病（CKD）大鼠心室肌高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4/核因子κB/缺氧诱导因子1α(HMGB1/TLR4/NF-κB/HIF-1α)信号通路的影响。方法 将38只Wistar大鼠按随机数字表法分为4组：假手术（Sham）组、Sham+Gly组、CKD组、CKD+Gly组，5/6肾切除制备CKD模型，Gly腹腔注射给药（80 mg/kg）。4周后行血流动力学及心脏彩超观察各组大鼠心脏功能；心室取血检测生化指标；心肌组织取材检测HMGB1、TLR4、NF-κB、HIF-1α蛋白表达的变化。结果 与Sham组相比，CKD组肌酐、尿酸、尿素氮和血清镁水平增高（P<0.05），血压升高，舒张期室间隔厚度、收缩期左心室内径增加，左心室射血分数降低，E/A比值降低，肺动脉血流加速时间延长（P<0.05）;HE染色可见心肌细胞肥大，Masson染色见心肌纤维化程度增加（P<0.05），心肌组织HMGB1、NF-κB、HIF-1α蛋白表达水平上调（P<0.05）。与CKD组相比，CKD+Gly组收缩期室间隔厚度增加，左心室射血分...