维甲酸抑制雌激素受体阳性乳腺癌细胞生长机制的研究

目的探讨雌激素受体的表达对维甲酸抑制乳腺癌细胞生长的影响和ＲＡＲα表达的变化。方法雌激素受体阴性的乳腺癌细胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞,采用分子生物学质粒转染技术,将ＥＲ阴性的乳腺癌细胞ＭＤＡ－ＭＤ－２３１转染成ＥＲ阳性细胞。结果发现ＥＲ转染后的细胞不仅ＲＡＲα的基础表达升高,而且ＲＡ能明显抑制该细胞的生长。同时还发现,无论是已确立的雌激素受体阳性的乳腺癌细胞株,还是雌激素受体转染后的细胞,雌激素都能明显刺激ＲＡＲα的表达。结论雌激素通过ＥＲ上调ＲＡＲα量的表达,在维甲酸对乳腺癌细胞生长的抑制中起着很重要的作用。     

非编码RNA在雌激素受体阴性乳腺癌诊治中的作用

[摘要] 非编码RNA（ncRNA）是一类不具有编码蛋白功能的RNA转录本,其异常表达参与了肿瘤的发生与发展。ncRNA的组织特异性表达使其具有鉴别肿瘤,甚至具有对肿瘤分型、分期的应用潜能。雌激素受体阴性（ER-）乳腺癌是指不表达ER的乳腺癌,其治疗困难、预后极差、病死率居乳腺癌之首。ncRNA在ER-乳腺癌中存在差异表达,并可通过参与非雌激素激活通路在乳腺癌的发生发展及预后过程中起重要调控作用。本文拟针对ncRNA中的微小RNA（miRNA）、长链非编码RNA（lncRNA）、环状RNA（circRNA）在ER-乳腺癌中的作用展开综述,分析它们在临床中的应用价值,为ER-乳腺癌的早期诊断及预后判断提供新的分子标志物和监测手段。     

破骨细胞生成抑制因子在雌激素受体阳性乳腺癌中的生物学作用

目的:探讨破骨细胞生成抑制因子(osteoprotegerin,OPG)蛋白在人乳腺癌中的生物学作用。方法:利用Kaplan-Meier plotter 数据库分析OPG在人乳腺癌病例中的表达对于病人预后生存的影响。MCF-7去激素培养后,加入17β-雌二醇刺激24 h后,提取总RNA,检测OPG在细胞内的表达情况。利用STRING数据库检索OPG相互作用蛋白。结果:OPG低表达明显减低雌激素受体阳性乳腺癌病人的预后生存时间,而雌激素受体阴性的乳腺癌病人的生存时间不受OPG表达的影响。在17β-雌二醇的刺激下,OPG基因表达水平明显减低。多个因子能够与OPG发生相互作用。结论:OPG可能参与雌激素受体阳性的乳腺癌的转化。     

Ku70去泛素化与乳腺癌转录激活因子2α稳定相关性研究

目的探讨Ku70去泛素化与乳腺癌中转录激活因子2α(activatior protein 2α,AP-2α)蛋白稳定性增高的相关性。方法脉冲追踪技术分析AP-2α稳定性;免疫共沉淀验证AP-2α和Ku70在细胞内的相互作用;蛋白质印迹法检测蛋白酶体抑制剂MG132对乳腺癌和正常乳腺上皮细胞中AP-2α泛素化水平的影响;蛋白质印迹法检测乳腺癌组织标本中AP-2α及其泛素化水平;通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制Ku70的表达,观察乳腺癌细胞中AP-2α泛素化、AP-2α和人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)蛋白水平的变化。结果脉冲追踪结果显示,乳腺癌细胞系中AP-2α的蛋白半衰期32h,而正常乳腺上皮细胞仅2h,说明乳腺癌细胞系中AP-2α的蛋白稳定性增高;免疫共沉淀证实AP-2α和Ku70蛋白细胞内存在相互作用;蛋白质印迹检测显示,MG132提高正常乳腺上皮细胞AP-2α泛素化水平,但对乳腺癌细胞AP-2α的泛素化作用不明显;蛋白质印迹检测乳腺癌组织标本中AP-2α泛素化水平与其蛋白水平成负相关;siRNA抑制Ku70表达可以促进乳腺癌细胞中AP-2α泛素化,Spearman等级相关系数为-0.917,P<0.05;AP-2α及其靶基因HER-2的蛋白水平随处理时间增加而显著下降,Spearman等级相关系数为0.989,P=0.011。结论 Ku70可抑制乳腺癌转录因子AP-2α泛素化降解,稳定性增高的AP-2α在乳腺癌中呈高表达,从而激活癌基因HER-2。     

lncRNA-TTC39A-AS1通过调控雌激素受体靶基因促进雌激素受体阳性乳腺癌细胞生长增殖

目的:系统筛选受雌激素显著调控且极具临床意义的lncRNA，并探究这些lncRNA如何参与雌激素受体阳性乳腺癌的发生发展。方法:通过全转录组高通量测序（RNA-seq）结合生物信息分析找到受雌激素显著诱导的lncRNA；结合GEPIA数据库找到受雌激素显著调控且在乳腺癌临床样品中特异高表达的lncRNA（TTC39A-AS1）；利用PhyloCSF分析方法分析TTC39A-AS1是否具有编码能力；通过MTS、克隆形成实验及流式细胞术检测TTC39A-AS1对乳腺癌细胞的生长增殖及细胞周期的影响；利用LncAtlas数据库及核质分离结合qRT-PCR检测TTC39A-AS1的细胞内定位情况；在雌激素存在与否情况下，利用qRT-PCR检测敲低TTC39A-AS1后对雌激素靶基因表达的影响情况。结果:TTC39A-AS1被雌激素显著上调且在仅乳腺癌中特异性高表达；TTC39A-AS1不具有编码能力，是典型的长链非编码RNA；TTC39A-AS1促进乳腺癌细胞的生长增殖和克隆形成，当敲低TTC39A-AS1时会使乳腺癌细胞周期显著阻滞在G1期；TTC39A-AS1在细胞核和细胞质中都有分布；TTC39A-AS1被敲降后显著下调了雌激素靶基因的表达。结论:lncRNA-TTC39A-AS1受雌激素显著诱导且通过增强雌激素靶基因的表达促进雌激素受体阳性乳腺癌细胞生长增殖，因其仅在乳腺癌中特异性高表达属性，故可作为非常有前景的潜在的乳腺癌临床治疗靶点。     

飞燕草素抑制大鼠乳腺癌发生的机制探索

目的 课题组前期研究发现飞燕草素能显著抑制甲基亚硝基脲（1-methyl-1-nitrosourea,MNU）诱导的大鼠乳腺癌发生,本研究初步探讨飞燕草素抑制乳腺癌发生的机制。方法 免疫组化染色检测致癌物诱导大鼠乳腺组织雌激素受体-α（estrogen receptor-α,ER-α）水平;Western blot检测飞燕草素对乳腺癌MCF-7细胞ER-α、G蛋白偶联雌激素受体（G protein coupled estrogen receptor,GPER）、Notch-1和10号染色体缺失的磷酸酶（phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome,PTEN）表达情况的影响。结果 飞燕草素干预能明显降低致癌物诱导大鼠乳腺组织ER-α的表达,体外实验发现飞燕草能够抑制MCF-7细胞ER-α、GPER蛋白及Notch-1蛋白表达水平,同时还能够提高PTEN蛋白表达水平。结论 飞燕草素能通过抑制ER-α、GPER蛋白表达及及调节Notch-1/PTEN信号通路发挥抑制乳腺癌的作用。     

GPR30在子宫平滑肌瘤细胞增殖中的作用研究

目的 探讨跨膜G蛋白偶联受体30(G protein-coupled receptor 30,GPR30)在子宫平滑肌瘤细胞中的表达及其对肌瘤中平滑肌细胞的增殖作用.方法 培养子宫平滑肌瘤原代细胞,应用免疫组织化学、免疫荧光及蛋白质印迹法检测GPR30的表达.应用蛋白印迹检测GPR30干扰后,其下游信号通路的变化.应用MTT检测在雌激素刺激下,正常子宫平滑肌细胞及平滑肌瘤细胞的生长活性.结果 子宫平滑肌瘤细胞中有GPR30蛋白的高表达,其主要位于细胞质中,在细胞核上无明显表达.在未处理组平滑肌细胞中,雌激素刺激雌激素信号通路中的ERK1/2表达增强.在GPR30干扰后的平滑肌细胞中,雌激素刺激后ERK1/2表达无显著改变.MTT结果表明在雌激素作用下,未处理组细胞存活和生长率显著增加;干扰组细胞的存活和生长率显著下降.结论 GPR30在子宫肌瘤平滑肌细胞的细胞质中高表达,可能参与子宫平滑肌细胞的增殖.     

雌激素受体β1对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的观察雌激素受体β1（ERβ1）被阻断后对Bax和Bcl-2表达的影响,探讨ERβ1在乳腺癌中的生物学作用机制。方法应用脂质体法,将针对人ERβl基因的siRNA转染人类乳腺癌细胞株MDA—MB-231。分别用Real time-PCR、Western Blot检测ERβ1被干扰前后细胞中ERβ1、Bcl-2、Bax等基因mRNA和蛋白表达水平的变化;通过细胞增殖曲线观察ERβ1基因被干扰后细胞增殖活性的变化;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率的改变。计量资料的比较采用t检验或单因素方差分析。结果RNA干扰技术阻断乳腺癌MDA—MB-231细胞ERβ1基因的表达后,ERβ1 mRNA和蛋白水平显著下降（P〈0．05）,生长曲线显示细胞增殖能力明显增强（P〈0．05）;pSilencer—ERβ1转染组细胞的Bax基因mRNA及蛋白水平显著下降（P〈0．01）,Bcl-2基因的表达未发生变化,Bcl-2／Bax比值明显上升;pSilencer-ERβ1转染组细胞凋亡率较未转染组明显减少（t=6．22,P=0．00）。结论ERβ1可通过调控细胞凋亡相关基因Bax而促进细胞的凋亡,是ERβ1抑制细胞增殖的原因之一。     

乳腺癌组织缺氧与雌激素受体-α的关系

目的:缺氧是乳腺癌常见的现象,并可能诱导肿瘤的进展。雌激素受体(ER)-α状态是乳腺癌预后和内分泌治疗疗效的重要预测指标。本研究旨在揭示乳腺癌中缺氧与ER-α表达的关系。方法:51例患者经配体结合法证实为ER阳性的乳腺癌。采用免疫组织化学染色的方法观察ER-α的异质性表达与多种缺氧标志的关系。结果:免疫组织化学染色发现本组有49例乳腺癌为ER-α阳性。无论乳腺导管内癌(n=29)还是浸润性癌(n=20),ER-α蛋白在邻近坏死灶的区域都出现了下降(P分别≤0.0001);ER-α的区域性下调还与缺氧诱导基因CA-Ⅸ和Glut-1的表达有关(P<0.0001)。结论:乳腺癌中ER-α区域性的表达下降与缺氧有关。因此缺氧可能促使乳腺癌在进展过程中向ER-α阴性的表型演变。     

靶向PRMT2基因的micro RNA对雌激素介导的乳腺癌MCF7细胞增殖的影响

目的:构建靶向人蛋白质精氨酸甲基转移酶 2 (protein arginine methyltransferase2,PRMT2)基因的microRNA真核表达载体,鉴定其稳定转染乳腺癌细胞株MCF7后对细胞增殖的影响。方法:根据PRMT2mRNA序列设计合成pre-microRNA片段,定向克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体,并稳定转染入MCF7细胞。采用间接免疫荧光法和蛋白质印迹法检测重组体对PRMT2表达的干扰效果以确定其生物活性。采用结晶紫实验和平板克隆形成实验检测重组体转染对MCF7细胞体外增殖和细胞克隆形成能力的影响。FCM法检测重组体转染对MCF7细胞周期的影响。结果:构建的重组体插入片段的碱基序列完全正确,并且重组体稳定转染MCF7细胞后可成功干扰PRMT2基因的表达。在无处理因子的情况下,重组体转染对细胞的生长速度无明显影响;与转染空载体的MCF7细胞相比,稳定转染重组体的MCF7细胞对雌激素的敏感性增强,但其对雌激素拮抗剂4-OHT处理的敏感性无明显差异。平板克隆形成实验表明,重组体能够增强雌激素介导的MCF7细胞的克隆形成能力。FCM法检测表明,转染重组体的MCF7细胞中G2期细胞比例明显升高(P<0.05)。结论:成功构建靶向PRMT2基因的pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体,且在稳定转染MCF7细胞后具有生物学活性。抑制内源性PRMT2基因的表达能够提高雌激素介导的MCF7细胞的增殖和克隆形成能力,上调雌激素受体α目标基因cyclinD1和c-myc的表达,促进细胞周期进程。     

Snail转录因子与ER-α36介导的雌激素信号在胃癌肿瘤细胞成球作用中的研究

目的 探讨Snail转录因子与ER-α36介导的雌激素信号在胃癌肿瘤细胞中的成球作用.方法 应用无血清的培养液DMEM/F12悬浮培养胃癌细胞系SGC7901及SGC7901/ER-α36重组细胞系High36和Low36.测定肿瘤细胞球体中Snail+细胞的含量,运用Western blot检测技术鉴定Snail和相关蛋白在肿瘤细胞球体中的表达.给予不同浓度的雌激素刺激,观察不同浓度雌激素对肿瘤细胞球体的影响,检测雌激素处理后Snail蛋白的表达等.结果 超低吸附培养皿无血清悬浮培养肿瘤微球体的效果优于普通培养皿,大约培养1周可形成肿瘤细胞球体,且形成的数量最多,这些肿瘤细胞球体中的细胞可以稳定传代继续形成新的微球体,同时,Snail+细胞含量升高,并且其蛋白在肿瘤细胞球体中的表达增高.ER-α36高表达的High36细胞系经无血清悬浮培养1周后形成的肿瘤微球体数增加.0.1 μmol浓度的ER刺激胃癌细胞株细胞,可以诱导Snail、ER-α36表达上调,而1 μmol浓度的ER刺激却作用相反(P﹤0.05).结论 低浓度的ER可以诱导胃癌细胞株细胞Snail转录因子与ER-α36高表达,Snail转录因子与ER-α36高表达与肿瘤细胞的成球作用关系密切.     

AT1-R siRNA对雌激素诱导的Ishikawa细胞生物学行为的影响

  目的   通过转染小干扰RNA（siRNA）沉默血管紧张素受体1（angiotensin receptor 1,AT1R）的表达来研究其对雌激素诱导的Ishikawa细胞增殖和细胞周期及凋亡的影响。   方法   免疫荧光检测AT1R在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达,转染AT1-R siRNA,Western blot检测转染前后Ishikawa细胞中AT1R蛋白的表达。MTT检测雌激素诱导Ishikawa细胞的增殖及雌激素诱导的雌激素受体抑制剂作用下转染前后Ishikawa细胞的增殖,Western blot检测细胞外调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2）表达。   结果   免疫荧光检测AT1R表达于Ishikawa细胞,转染AT1-R siRNA 72 h后AT1R蛋白表达降低最显著,降低82.40%（P < 0.05）,为此检测转染72h后细胞增殖周期及凋亡,MTT结果显示,雌激素能诱导Ishikawa细胞增殖,封闭雌激素受体后雌激素诱导的Ishikawa细胞增殖受到抑制,封闭雌激素受体后雌激素诱导的转染组细胞增殖较未转染组受到明显抑制;流式细胞周期结果显示,雌激素受体封闭后雌激素诱导的转染组细胞较未转染组S期减少,凋亡增多（P < 0.05）,其ERK1/2表达较未转染组明显降低（P < 0.05）。   结论   AT1R可促进雌激素诱导的Ishikawa细胞增殖,其机制可能与ERK1/2表达下降有关。      

雌激素调节人乳腺癌细胞CD147表达的研究

目的：探究雌激素对人乳腺癌细胞系中CD147表达的调节作用。方法：用雌激素处理人乳腺癌细胞系,RT-PCR及Real-time PCR定量检测用药前后细胞中CD147 mRNA表达水平变化,Western blot检测用药前后细胞中CD147蛋白表达水平变化。结果：经雌激素处理后的ER阳性人乳腺癌细胞系中CD147 mRNA及蛋白的表达均呈上升趋势,而ER阴性人乳腺癌细胞系则无明显变化。结论：雌激素通过ER激活CD147的表达,在乳腺癌的发生发展过程中发挥了重要的作用。     

雌激素受体阳性乳腺癌组织中Efp和Plk3的表达及其临床意义

目的:探讨雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性的乳腺癌患者癌组织中Efp和Plk3的表达及其临床意义和可能的作用机制.方法:采用免疫组织化学法检测于2010年1月至6月在河北医科大学第四医院乳腺科住院的86例ER阳性患者乳腺癌组织中Efp和Hk3的蛋白表达,并分析两者表达的相关性及与临床病理指标的关系.采用qRT-PCR法检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中ER、Efp mRNA的表达情况,采用RT-PCR及Western blotting法检测雌激素刺激后ER阳性乳腺癌细胞MCF-7中Efp、Pkk3基因的表达变化,采用Western blotting法检测雌激素及蛋白酶抑制剂MG132处理后MCF-7细胞中Efp、Plk3的表达变化.结果:86例ER阳性的乳腺癌组织中,55例Efp表达阳性(64.0％),28例Plk3表达阳性(32.6％).Efp表达阳性组织中Plk3表达阳性为23.6％,Efp表达阴性组织中Plk3表达阳性为48.4％,Efp和Plk3蛋白表达存在明显的负相关(P＜0.05),Efp蛋白表达与乳腺患者的淋巴结转移状况呈明显正相关(P＜0.05),Plk3蛋白表达与乳腺癌患者的淋巴结转移状况呈明显负相关(P＜0.05).MCF-7细胞ER mRNA高表达,而MDA-MB-231细胞的ER mRNA低表达.MDA-MB-231细胞经雌激素刺激后,Efp mRNA的表达未见明显改变.MCF-7经雌激素刺激后Efp mRNA及蛋白的表达显著增加(P＜0.05),而Hk3 mRNA的表达未见明显改变,未检测到Plk3蛋白的表达.MG132处理后MCF-7细胞中Plk3的蛋白表达明显上调,MCF-7经雌激素刺激后,再用MG132处理,Efp的蛋白表达显著增加(P＜0.05),而Plk3蛋白表达明显下降(P＜0.05).结论:ER阳性乳腺癌中Efp和Plk3蛋白表达存在明显的负相关,Efp可促进Plk3的蛋白降解,并可能参与了ER阳性乳腺癌患者内分泌治疗的耐药过程.     

曲格列酮对人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞株增殖影响的研究

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂曲格列酮(TRG)对体外培养雌激素受体(ER)阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞及ER+乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。方法:以不同浓度的TRG(0～50μmol/mL)分别处理体外培养的MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞48h,MTT法检测细胞存活率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布;蛋白质印迹法检测PPARγ和ER-α的表达。结果:MTT结果示TRG浓度≥5μmol/mL时MDA-MB-231细胞(P值分别为0.006、0.006、0.000和0.000)和MCF-7细胞(P值分别为0.007、0.006、0.004和0.001)的存活率降低。FCM检测结果表明,经TRG作用后肿瘤细胞主要集中在G1期。以上2种检测结果显示,MDA-MB-231细胞对TRG的敏感程度较MCF-7细胞高;蛋白质印迹法检测结果表明,TRG处理后的MDA-MB-231细胞中PPARγ蛋白的表达水平随药物浓度增加逐渐升高(相对强度分别为2.045、2.600和3.038),MCF-7细胞的ER-α表达水平则随药物浓度增加逐渐降低(相对强度分别为1.164、1.130和0.680)。结论:TRG对ER+和ER-乳腺癌细胞均有抑制作用,且ER-乳腺癌细胞对TRG更敏感。     

三氧化二砷体外诱导雌激素受体α表达的初步研究

目的本文拟探讨三氧化二砷（arsenic trioxide，As2O3）诱导因高甲基化失活的雌激素受体重新表达的可能性。方法以雌激素受体高甲基化失活的人乳腺细胞系MDA-MB-231细胞系为研究对象，经不同浓度As203处理后，采用RT-PCR技术检测ER-α基因mRNA表达。结果经1．0μmol／L、2．0μmol／L和4．0μmol／L．As2O3处理的MDA-MB-231细胞均能扩增出ER-α基因。结论一定浓度的As2O3可通过去甲基化作用诱导MDA—MB-231细胞系重新表达ER-α。     

他莫昔芬对转染ERβ1基因的MCF-7细胞生长特性的影响

目的研究在不同处理因子作用下,外源基因ERβ1的表达对MCF-7乳腺癌细胞系生长特性的影响。方法利用脂质体转染方法将ERβ1真核表达载体pcDNA3.1-EGFPERβ1导入MCF-7乳腺癌细胞系。采用Western blot方法检测转染细胞中ERβ1的蛋白表达水平,筛选阳性克隆。以亲本细胞MCF-7为对照,分别在雌激素和雌激素受体拮抗剂他莫昔芬作用下观察细胞的生长特点。结果在转染ERβ1基因的MCF-7细胞系中,Western blot检测证实ERβ1的蛋白表达水平显著增高。在无处理因子的情况下,外源基因ERβ1在MCF-7细胞系中的表达能抑制细胞生长。与亲本细胞MCF-7细胞相比,转染ERβ1的MCF-7细胞对雌激素的敏感性下降,但对他莫昔芬的敏感性无明显变化。结论外源性ERβ1基因在MCF-7乳腺癌细胞中的稳定表达不增加对他莫昔芬的耐药性,但使之对雌激素的敏感性下降。     

抑制雌激素调控的靶基因LRP 16表达能削弱ERα介导的转录激活活性

目的探讨抑制雌激素(E2)调控的靶基因LRP16表达对雌激素受体α(ERα)介导转录激活活性的影响.方法将针对LRP16合成的小干扰RNA,与ERα表达载体、雌激素反应性元件荧光素酶报道载体(pGL-3-S10或3×ERE-Luc)共转染乳腺癌细胞MCF-7,双荧光素酶检测方法测定pGL-3-S10或3×ERE-Luc报道子的相对荧光素酶活性;E2刺激培养已建立的稳定抑制LRP16表达的MCF-7细胞,Northern bl0t方法检测比较具有不同LRP16表达水平的MCF-7细胞中ERα下游靶基因对E2的反应性变化.结果抑制LRP16表达降低了ERα对其反应性报道子(pGL-3-S10和3×ERE-Luc)的激活活性;同时也降低了ERα下游靶基因对E2的反应性上调效应,其中包括E2F1、维甲酸受体α(RARα)、c-fos、cyclin D1和MTA3,但对cathepsin D的表达无影响.结论抑制ERα靶基因LRP16的表达可以下调ERα介导的转录激活活性,表明LRP16对ERα信号转导通路具有反馈增强效应,提示LRP16在ERα阳性的乳腺癌发生与进展中应有重要作用.     

雌激素受体亚型对乳腺癌MCF-7细胞生长及微环境中Th平衡的影响

目的:研究雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型对人乳腺癌细胞MCF-7的生长及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响。方法:采用RNA干扰技术沉默MCF-7细胞中ERα或ERβ的表达,获得ERα/ERβ不同表达状态的MCF-7细胞。应用MTT法、流式细胞术、RT-PCR法分别检测MCF-7细胞的增殖、细胞周期和凋亡抑制基因的表达,ELISA法检测细胞上清中IFN-γ和IL-4的分泌水平。结果:经RNA干扰后MCF-7细胞的ERα或ERβ蛋白表达水平分别下降了(77.7±3.3)%和(68.3±2.1)%。与对照组相比,ERα基因沉默后,MCF-7细胞生长减慢(P<0.05),受阻于G0～G1期,凋亡抑制基因XIAP的表达水平降低为对照组的(43.0±2.0)%,IFN-γ分泌水平增加至对照组的(1.89±0.34)倍;ERβ基因沉默促进MCF-7细胞的生长(P<0.05),S期细胞比例增加,凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xl、XIAP的表达水平分别升高至对照组的(1.28±0.21)、(1.61±0.32)和(1.65±0.29)倍,IFN-γ分泌水平降低为对照组的(28.0±4.0)%。结论:ER亚型的表达状态可影响MCF-7细胞的生长,并通过调节IFN-γ的自分泌水平诱导微环境发生Th偏移。     

人乳腺癌细胞雌激素受体基因的去甲基化及其表达

目的探讨人乳腺癌雌激素受体（ER）基因启动子的去甲基化和ER蛋白表达功能恢复的关系。方法用甲基化特异性PCR（MSP）和亚硫酸氢盐基因组测序方法检测乳腺癌细胞ER基因启动子的甲基化状态;用RT-PCR方法从mRNA水平检测ER和孕激素受体（PR）基因的表达;用Western blot方法从蛋白水平探测ER基因的表达;MTT方法检测重新表达ER蛋白的功能。结果在ER阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,ER基因启动子甲基化的水平较高,而ERmRNA和ER蛋白均不表达。MDA-MB-231细胞用去甲基化剂5-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶（5-AZA-2＇-deoxyC）处理,可以恢复该细胞系ERmRNA和ER蛋白的表达,同时伴有ER基因启动子甲基化水平的降低以及PR基因的表达。MDA-MB-231细胞经去甲基化逆转ER表达后,应用三苯氧胺治疗,乳腺癌细胞增殖受到明显抑制（P〈0．05）。结论人乳腺癌ER基因的失活与其基因启动子高甲基化关系密切。去甲基化剂5-AZA-2＇-deoxyC能较好地降低MDA-MB-231细胞DNA甲基化,并有效激活功能性ER基因的再表达,为ER基因阴性的乳腺癌患者接受内分泌治疗提供了新的途径和理论基础。