lncRNA BCAR4在肝癌细胞系中的表达及对增殖、凋亡和迁移的影响

目的:观察肝癌细胞系中长链非编码RNA BCAR4（lncRNA BCAR4）的表达,及对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并探讨其机制。方法:采用荧光定量PCR技术（qRT-PCR）检测肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721和正常肝细胞系L02中lncRNA BCAR4的表达。将Huh7细胞系分为BCAR4-siRNA组、NC-siRNA组和Blank组,BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组经LipofectamineTM 2000分别转染BCAR4-siRNA序列和NC-siRNA序列,Blank组以PBST为阴性对照。CCK-8法和流式细胞数测定细胞增殖和凋亡,细胞划痕实验测定迁移能力。Western blot测定细胞周期相关蛋白（Cyclin D1）和凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721中lncRNA BCAR4的表达显著高于正常肝细胞系L02(P<0.05)。转染BCAR4-siRNA后,Huh7的lncRNA BCAR4表达下调（P<0.01）。CCK-8示:转染72 h及96 h后,BCAR4-siRNA组 vs NC-siRNA组的OD450 nm值分别为0.71±0.07 vs 0.92±0.10（P<0.05）及0.93±0.08 vs 1.37±0.11（P<0.01）。BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组细胞凋亡率分别为（17.52±3.21）%和（4.69±1.56）%（P<0.01）。BCAR4-siRNA组细胞划痕愈合率为（19.65±2.41）%,显著低于NC-siRNA组的（47.50±5.88)%(P<0.05)。与NC-siRNA组比较,BCAR4-siRNA组Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达下调,分别为0.27±0.03 vs 1.0±0.05(P<0.01)、0.48±0.04 vs 1.0±0.04(P<0.05),Bax蛋白表达上调,为2.83±0.19 vs 1.0±0.03(P<0.01)。结论:lncRNA BCAR4高表达于肝癌细胞系,敲低lncRNA BCAR4的表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移,并促进凋亡,其机制可能与Cyclin D1和Bcl-2蛋白下调表达,Bax蛋白表达上调表达有关。     

大肠癌组织和细胞中KDM3A的表达及其对癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究大肠癌组织和细胞中赖氨酸组蛋白甲基化酶(lysine histone demethylase 3A,KDM3A)的表达及其对大肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过生物信息学检索分析公开数据库中KDM3A在大肠癌组织中的表达及相关临床信息。采用qRT-PCR技术检验KDM3A在4种大肠癌细胞HT-29、SW480、SW620、DLD-1以及正常人结肠上皮细胞NCM460中的表达水平,筛选出KDM3A表达量低的大肠癌细胞系进行过表达并进行CCK-8增殖实验、Transwell实验及Western blot检测KDM3A过表达对细胞增殖、侵袭及迁移的影响。结果:KDM3A在大肠癌组织中表达明显高于癌旁组织,且KDM3A高表达患者生存率更低。过表达KDM3A可以促进大肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论:高表达的KDM3A可以促进大肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

HOXA9基因抑制肝癌细胞HepG2迁移与侵袭能力的实验研究

目的：探讨同源盒基因HOXA9对肝细胞肝癌细胞株HepG2迁移与侵袭能力的影响。方法：采用EndoFectinTM -Max转染试剂将HOXA9基因真核表达载体及其空载体转染至HepG2细胞,并应用脂质体法转染HOXA9 siRNA序列及阴性对照序列,采用实时荧光定量PCR（ Real-time PCR）及Western blot方法检测转染后HOXA9的mRNA和蛋白表达水平。以划痕实验和Transwell方法检测转染后细胞的迁移和侵袭能力。结果：在肝癌细胞HepG2中瞬时转染HOXA9真核表达载体后,其mRNA和蛋白表达明显增加,划痕实验检测发现48h细胞愈合率明显抑制,Transwell实验发现迁移和侵袭至下室的细胞数目明显减少;而转染HOXA9 siRNA序列后,HepG2细胞中HOXA9 mRNA及蛋白表达明显下调,划痕实验显示48h划痕愈合率增加,Tran-swell实验显示迁移和侵袭至下室的细胞数目明显增多。结论：HOXA9基因对肝癌细胞HepG2的迁移和侵袭能力有明显抑制作用,为进一步研究HOXA9在肝细胞肝癌发生和进展中的作用奠定了基础。     

RNA干扰抑制HMGB1基因表达对肺癌细胞L9981增殖和侵袭的影响

背景与目的 研究小干扰RNA抑制高迁移族蛋白B1基因表达对肺癌细胞L9981增值和侵袭能力的影响.方法 设计合成靶向HMGB1基因的siRNA,采用阳离子脂质体试剂瞬时转染肺癌细胞株L9981,利用实时荧光定量PCR和Western blot检测RNA干扰后HMGB1基因的沉默效果,评价siRNA设计的合理性及RNA干扰抑制HMGB1表达的有效性;用细胞活力计数仪测定3组细胞活力;分别在RNA干扰后24、48、72和96小时应用MTF实验检测细胞生存状态,计算生长抑制率并绘制生长曲线;应用boyden chamber法检测侵袭能力的差异.结果 靶向HMGB1的stRNA成功抑制肺癌细胞株L9981中HMGB1基因及蛋白表达,细胞活力检测仪测定RNA干扰48小时后,细胞活力显著下降;MTT测定肺癌细胞生长受到明显抑制;boyden chamber小室细胞侵袭实验结果肺癌穿膜细胞数明显减少.结论 应用siRNA技术能有效的抑制HMGB1基因的表达,同时有效抑制L9981细胞的体外增值和侵袭,为肺癌的生物学治疗提供了新思路.     

lncRNA LINC00460在结直肠癌组织中的表达及其对细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00460在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:GEPIA在线数据库和实时荧光定量PCR(qPCR)分析检测lncRNA LINC00460在结直肠癌组织、结直肠癌细胞株(HCT-8、HCT-116、SW480、SW620)及结直肠黏膜上皮细胞NCM460中的表达,进一步分析LINC00460表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系。将LINC00460过表达质粒及阴性对照(pcDNA3.1-LINC00460和pcDNA3.1-NC)转染HCT-8细胞,将LINC00460小干扰RNA及阴性对照(si-LINC00460和si-NC)转染SW620细胞,分别采用CCK-8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测细胞增殖能力和侵袭迁移能力,采用Western blot实验检测cyclin D1、p21、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结果:与癌旁组织和NCM460细胞相比较,LINC00460在结直肠癌组织及结直肠癌细胞株(HCT-8、HCT-116、SW480、S...     

siRNA 靶向沉默 KIF20A 基因对人肝癌 SMMC -7721细胞体外增殖和侵袭迁移的影响

目的：研究 KIF20A 对肝癌 SMMC -7721细胞系增殖和侵袭迁移能力的影响。方法：利用 RNA 干扰技术下调肝癌细胞系 SMCC -7721中 KIF20A 的表达。qRT - PCR 和 Western blot 分别检测细胞 KIF20A 在mRNA 和蛋白水平表达中的变化。CCK -8实验检测增殖能力的改变。Transwell 实验检测迁移、侵袭能力的改变。结果：qRT - PCR 和 Western blot 结果显示 KIF20A - siRNA 能够成功下调 KIF20A 的表达,CCK -8和Transwell 实验分别证实肝癌 SMMC -7721细胞增殖和侵袭迁移能力下降。结论：抑制 KIF20A 的表达能够降低肝癌细胞的增殖和侵袭迁移能力。     

细胞分裂周期7蛋白在肝癌组织的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 检测细胞分裂周期7(CDC7)蛋白在人肝癌组织的表达,探讨CDC7过表达对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 实时定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CDC7 mRNA在肝癌组织和癌旁组织的表达,检测CDC7 mRNA在肝癌细胞系和正常肝脏细胞中的表达。Western blot检测CDC7蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达,检测CDC7蛋白在肝癌细胞系和正常肝脏细胞中的表达水平。利用慢病毒载体构建稳定过表达CDC7的肝癌HCCLM3和SMMC 7721细胞株。细胞克隆实验和CCK-8法检测CDC7过表达对肝癌细胞增殖的影响。Transwell实验和划痕实验检测CDC7过表达对肝癌细胞侵袭迁移的影响。结果 与癌旁组织相比,CDC7 mRNA和蛋白在肝癌组织中表达水平显著升高(P＜0.001);与正常肝细胞相比,肝癌细胞系的CDC7 mRNA和蛋白表达水平显著增高(P＜0.001);CCK-8法、细胞克隆实验说明CDC7过表达会明显增强肝癌细胞的增殖能力;划痕实验、Transwell实验说明CDC7过表达会明显提高肝癌细胞的侵袭能力。结论 CDC7蛋白在人肝癌组织高表达,其过表达促进肝癌细胞的增殖和侵袭能力。     

锌转运体1基因在脑胶质瘤组织中的表达及其对U87细胞增殖、迁移和 侵袭能力的影响

目的： 检测锌转运体1(zinc transporter 1,ZnT1)基因在胶质瘤组织中的表达,初步探索ZnT1对U87细胞增殖、迁移和 侵袭能力的影响。 方法： 收集2015年10月至2017年1月中国医科大学附属第一医院神经外科收治的术前未接受过放化疗的 Ⅱ～Ⅲ期胶质瘤患者20例,采用Real-time PCR和Western blotting检测胶质瘤组织与瘤旁组织中ZnT1 mRNA和蛋白的含量。向 胶质瘤细胞系U87中分别转染ZnT1和si-ZnT1质粒,构建ZnT1过表达和低表达细胞系,MTT和Transwell实验分别检测ZnT1对 U87细胞增殖、侵袭和迁移的影响。 结果： ZnT1 mRNA和蛋白在胶质瘤组织中表达显著高于瘤旁组织（均P<0.05）。成功构建 ZnT1过表达和低表达U87细胞系。与空白和空质粒对照组相比,转染12 h后,ZnT1过表达U87细胞的增殖（0.54±0.01 vs 0.45± 0.04、0.43±0.03,P<0.01）、侵袭和迁移能力（均P<0.05）显著升高;而转染12 h后ZnT1低表达U87细胞的增殖（0.37±0.03 vs 0.45±0.01、0.44±0.03,P<0.01）、侵袭和迁移能力（均P<0.05）显著降低。 结论： ZnT1在胶质瘤组织中呈高表达,ZnT1可以促进 胶质瘤U87细胞的增殖、迁移和侵袭。     

LINC01314在甲状腺癌组织和细胞中的表达及其对癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响北大核心

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LINC01314在甲状腺癌(thyroid cancer,TC)组织和细胞中的表达及其对TC细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:在GEPIA数据库对TC组织中LINC01314的表达进行分析。应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测各60例TC组织与邻近正常组织以及人正常甲状腺上皮Nthy-ori 3-1细胞与TC细胞系(TPC-1、CAL-62、8305C、HTh-7)中LINC01314表达水平,并分析其表达水平与TC患者临床特征的相关性。体外培养对数生长期的CAL-62和8305C细胞,采用shRNA质粒(sh-LINC01314#1和sh-LINC01314#2)转染下调CAL-62和8305C细胞中LINC01314表达,CCK-8法和细胞克隆形成实验检测sh-LINC01314#1/2对细胞增殖的影响;划痕愈合实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞Ki-67、Cyclin D1、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9、MMP-2蛋白表达。裸鼠移植瘤实验、免疫组织化学染色探究敲低LINC01314对TC细胞裸鼠体内生长的影响。结果:LINC01314在TC组织和细胞中呈高表达,且高水平的LINC01314与肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移显著相关(P<0.05)。与sh-NC组比较,sh-LINC01314#1和sh-LINC01314#2干扰后,CAL-62和8305C细胞中LINC01314水平均显著降低(P<0.05),其中sh-LINC01314#1的干扰效果优于sh-LINC01314#2(P<0.05);敲低LINC01314表达可抑制CAL-62和8305C细胞的增殖、迁移和侵袭,降低Ki-67、Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白水平(P<0.05)。裸鼠体内研究证实,敲低LINC01314会阻碍TC细胞的异种移植肿瘤生长。结论:LINC01314在TC组织和细胞中呈高表达,其表达水平与TC患者肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移显著相关;敲低LINC01314可抑制TC细胞的增殖、迁移和侵袭及裸鼠移植瘤形成能力。     

结直肠癌组织中NEK2的表达及其对HCT116细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 探讨中心体相关激酶2(NEK2)在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞HCT116增殖、侵袭及迁移的影响.方法 构建针对NEK2的小干扰RNA(si-NEK2),脂质体法转染HCT116细胞.CCK8实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell小室实验检测敲低NEK2表达后细胞增殖、周期分布、侵袭和迁移能力的改...     

MAP3K9在肺癌组织中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:检测MAP3K9在临床肺癌样本及肺癌细胞系中的表达,研究MAP3K9对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,并结合受试者工作特征曲线（ROC曲线）评估其诊断价值。方法:从云南省肿瘤医院收集2018年09月至2019年12月经病理诊断确诊为肺癌患者的癌组织及其对应的癌旁组织。MAP3K9在肺癌组织及癌旁组织、肺癌细胞系A549和H1299、人正常肺上皮细胞系BEAS-2B中的mRNA表达量采用实时荧光定量PCR技术检测。MAP3K9在细胞系中的蛋白表达量采用蛋白质印迹技术检测。分别用CCK8、划痕和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移、侵袭能力。利用在线生存数据库分析表达MAP3K9患者的生存率。使用SPSS软件绘制ROC曲线。结果:MAP3K9在肺癌组织中的表达量显著高于癌旁组织（P＜0.05）。MAP3K9在A549和H1299中的表达量均高于BEAS-2B（P均<0.05）。体外细胞实验表明敲低MAP3K9能够明显抑制A549、H1299细胞的增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。生存曲线显示高表达MAP3K9的肺癌患者生存率低（P＜0.05）。ROC曲线下面积为0.894（P＜0.05）,诊断临界值为1.36×10-3,诊断敏感度为71.2%,特异度为98.1%。结论:MAP3K9在临床肺癌样本及肺癌细胞系中高表达,该基因高表达能够促进肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,与患者预后不良有关,MAP3K9作为一个致癌基因有潜力成为临床诊断和治疗肺癌的有效靶点。     

肝癌组织和细胞系EGFL8基因表达及其临床意义

目的表皮生长因子样结构域8(epidermal growth factor-like domain 8,EGFL8)在多种癌症中表达失调且与患者的不良预后相关,但关于EGFL8在肝细胞癌组织表达尚不清楚。本研究旨在探讨EGFL8基因在肝癌组织及细胞系中表达水平并分析其临床意义。方法收集2014-02-01-2016-02-01暨南大学附属广州市红十字会医院行手术切除的42例肝癌患者标本及其对应的癌旁肝组织标本(距原发癌边缘>2cm)。培养HCCLM3、SMMC-7721、HepG2及Hep3B等4种具有不同侵袭转移潜能的肝癌细胞系和HL-7702正常肝细胞系,采用荧光实时定量PCR方法检测EGFL8基因在上述组织标本及细胞系中的表达量,并分析EGFL8基因表达与肝癌临床病理特征及侵袭转移潜能之间的相关性。结果 EGFL8基因在肝癌组织中的平均表达量(0.006 5±0.001 8)低于相应的癌旁肝组织(0.020 0±0.005 2),差异有统计学意义,U=425,P=0.015。且EGFL8基因表达下调与肝癌的静脉侵犯(χ~2=7.860,P=0.060)、多结节(χ~2=5.316,P=0.011)及较晚的TNM分期(χ~2=6.035,P=0.014)密切相关。EGFL8基因在肝癌细胞系中的表达量均低于正常肝细胞系(F=155.900,P=0.001),且其在高侵袭转移潜能肝癌细胞系中的表达量(0.000 26±0.000 03)低于低侵袭转移潜能的肝癌细胞系(0.001 36±0.000 12),P<0.001。结论 EGFL8在肝癌组织及细胞系中的表达水平明显下调,且其表达下调与肝癌的侵袭转移潜能、疾病进展及不良预后密切相关,提示EGFL8是一个潜在的肝癌分子标志物。     

microRNA-100对尿路上皮癌细胞株T24细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究microRNA-100(miR-100)对膀胱肿瘤细胞株T24细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法:用miR-100模拟物转染T24细胞株,构建高表达miR-100细胞株;CCK-8方法检测细胞增殖能力;小室迁移实验和小室侵袭实验检测细胞迁移能力和侵袭能力.结果:模拟物转染后,miR-100表达在T24细胞中提高23.4倍,差异有统计学意义(P＜0.05);CCK-8细胞增殖实验提示T24细胞实验组增殖能力弱于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);过表达miR-100后,T24细胞迁移能力和侵袭能力均下降(P＜0.05).结论:过表达miR-100能抑制膀胱肿瘤细胞株T24的增殖、迁移和侵袭.     

RNA干扰CXCR7基因对结肠癌SW1116细胞增殖及迁移的影响

目的:探讨趋化因子受体7(chemokine receptor 7,CXCR7)基因沉默对结肠癌细胞株SW1116增殖和迁移能力的影响。方法:采用脂质体转染的方法将CXCR7基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转入人结肠癌SW1116细胞中,随后采用RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测CXCR7mRNA和蛋白在SW1116细胞中的表达水平;采用CCK-8法检测对细胞增殖抑制率的影响;Transwell小室法检测干扰前后对细胞迁移能力的影响。结果:CXCR7-siRNA转染SW1116细胞24h后,CXCR7-siRNA干扰组SW1116细胞中CXCR7mRNA相对表达量为0.275±0.018,与空白对照组的0.635±0.024相比,mRNA表达抑制率为(56.6±3.8);转染48h后,CXCR7-siRNA干扰组的SW1116细胞中CXCR7蛋白的表达水平明显低于Negative-siRNA组和空白对照组(P<0.05);CXCR7-siRNA组的SW1116细胞增殖力在转染48、72、96和120h后明显低于阴性转染对照组和空白对照组(P<0.05);CXCR7-siRNA干扰组SW1116细胞穿过聚碳酸酯膜的细胞数为(22.73±2.01)个,明显少于阴性转染对照组的(49.20±3.82)个和空白对照组的(54.80±4.85)个(P<0.05)。结论:siRNA干扰下调CXCR7基因表达能抑制结肠癌细胞SW1116的增殖和迁移能力。     

人源FOXG1基因真核表达载体的构建、表达及其对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:构建人源FOXG1真核表达载体,瞬时转染HeLa细胞实现FOXG1过表达,观察FOXG1对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,为后续研究人源FOXG1基因在肿瘤中的作用机制奠定理论基础。方法:利用One Step Cloning法构建重组质粒pEGFP-C1-FOXG1,并通过酶切、测序对重组质粒进行鉴定;采用脂质体介导的转染法将pEGFP-C1-FOXG1瞬时转染至HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测HeLa细胞中EGFP-FOXG1融合蛋白的表达;进一步,分别通过CCK8、伤口愈合和Transwell实验检测FOXG1对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:酶切鉴定和测序表明重组质粒pEGFP-C1-FOXG1构建成功;瞬时转染HeLa细胞24小时后,能够在荧光显微镜观察到绿色荧光,48小时后转染效率达到90%;Western blot显示EGFP-FOXG1融合蛋白正确表达;CCK8实验表明过表达FOXG1能够促进HeLa细胞的增殖;伤口愈合和Transwell实验表明FOXG1过表达可以促进HeLa细胞的迁移和侵袭。结论:成功构建了pEGFP-C1-FOXG1重组质粒,并在HeLa细胞中正确表达;功能实验表明FOXG1能够促进HeLa细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-369-5p抑制肝细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨miR-369-5p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况、临床意义,观察miR-369-5 p对HCC细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制.方法:实时定量PCR检测miR-369-5p在HCC组织与相应癌旁组织、正常肝细胞(L02)与HCC细胞系中的表达情况;C...     

索拉非尼对Hela细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:本实验研究索拉非尼对Hela细胞相关活性的影响,为该药物的临床应用提供理论依据.方法:我们通过MTT实验和Edu增殖实验研究索拉非尼对Hela细胞增殖能力的影响,分别通过划痕实验以及Transwell小室侵袭实验研究索拉非尼作用后Hela细胞迁移能力和侵袭能力的变化.结果:在MTT实验中5、10和20 μmol/L索拉非尼刺激48小时后Hela细胞的OD值均显著小于对照组(P<0.05).10 μmol/L药物刺激后Hela细胞的Edu阳性数量和比例均显著小于对照组(P<0.05).在细胞划痕实验中,药物组细胞的迁移能力显著减弱,空白划痕两侧的距离显著大于对照组(P<0.05).在Transwell小室侵袭实验中,药物组单个视野内的细胞数量显著少于对照组(P<0.01).结论:索拉非尼可以抑制Hela细胞增殖、迁移和侵袭能力,是一种对抗宫颈癌细胞活性的潜在药物.