婆罗双树样基因2干扰对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究婆罗双树样基因2（sal-like gene 2,SALL2）干扰对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法：设计针对SALL2基因的3条小干扰RNA（siRNA-1、2、3）,并设载体组及未转染对照组,使用脂质体转染HeLa细胞。采用逆转录RT-PCR和Western blot检测转染后HeLa细胞中SALL2 mRNA和蛋白的表达以筛选沉默效果最好的siRNA片段。将最适siRNA片段转染HeLa细胞后,采用CCK-8检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率。结果：对照组HeLa细胞高表达SALL2。载体组和转染siRNA-3组SALL2的mRNA和蛋白表达与对照组相比,差异均无统计学意义（P均>0.05）,而siRNA-1和siRNA-2转染48 h后,HeLa细胞SALL2的mRNA和蛋白表达均降低,差异均有统计学意义（P均<0.05）,其中siRNA-1的沉默效率更好,故后续选择siRNA-1作为干扰组。与对照组相比,转染siRNA-1 48和72 h后细胞的增殖率均升高,差异均有统计学意义（P<0.05）;转染48 h后siRNA-1组处于G0/G1期的细胞比例减少,凋亡率明显降低（P均<0.05）。结论：SALL2基因干扰可明显提高HeLa细胞的增殖率,并降低其凋亡率。提示SALL2基因对宫颈癌HeLa细胞的增殖有抑制作用。     

沙利度胺对人宫颈癌Hela细胞周期的影响及其作用机制

目的:探讨沙利度胺对人宫颈癌Hela细胞周期的影响及其作用机制。方法:沙利度胺（50 μg/ml、100 μg/ml和200 μg/ml）处理人宫颈癌Hela细胞24 h后,运用CCK-8法检测细胞活力;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用蛋白免疫印迹法检测Cyclin E、p53、p-p53和GAPDH蛋白表达水平。结果:沙利度胺(50 μg/ml、100 μg/ml和200 μg/ml)作用Hela细胞24 h后,细胞活力显著降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。50 μg/ml、100 μg/ml和200 μg/ml沙利度胺作用24 h后,Hela细胞G0/G1期细胞数明显增加,S期细胞数显著减少(P<0.05)。此外,沙利度胺作用Hela细胞24 h可明显下调Cyclin E蛋白的表达(P<0.05)。沙利度胺处理Hela细胞24 h后,p-p53/p53比值明显增大(P<0.05)。结论:沙利度胺可能通过促进p53蛋白的活化从而抑制人宫颈癌细胞周期进程。     

BTG1对喉癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

背景与目的：在多种细胞中B细胞易位基因1(B-cell translocation gene 1,BTG1)能够抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,调节细胞周期进程及分化。该研究通过体外实验探讨BTG1高表达对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及其相关作用机制。方法：构建pEGFP-N1-BTG1,培养并转染喉癌Hep-2细胞,分为实验组(转染pEGFP-N1-BTG1的Hep-2细胞)和对照组(转染pEGFP-N1空质粒的Hep-2细胞)。采用蛋白［质］印迹法(Western blot)检测两组细胞中BTG1蛋白的表达水平;应用MTT法检测细胞的增值活性;使用流式细胞术检测细胞周期分布和磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin Ⅴ-FITC/PI)检测细胞凋亡;采用Western blot法检测细胞周期调控蛋白Cyclin D1、凋亡相关蛋白Bcl-2表达情况。结果：成功构建pEGFP-N1-BTG1,Western blot检测结果显示,实验组细胞中BTG1蛋白表达水平明显高于对照组细胞(0.921±0.091 vs 0.308±0.047,P<0.05)。实验组与对照组细胞相比,从第24 h实验组细胞生长速度减慢,细胞增值能力降低,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);实验组细胞中Cyclin D1蛋白表达水平下降(0.436±0.023 vs 0.916±0.092,P<0.05),细胞周期的G₀/G₁期细胞比例升高［(85.1±5.2)% vs (63.8±3.1)%,P<0.05)］;S期细胞比例降低［(8.3±1.1)% vs(23.1±1.5)%,P<0.05］;实验组细胞Annexin Ⅴ增多,细胞早期凋亡率升高［(10.3±1.1)% vs (2.8±0.3)%,P<0.05］,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平降低(0.167±0.009 vs 0.834±0.084,P<0.05)。结论：BTG1高表达能明显抑制喉癌Hep-2细胞的生长增殖、诱导凋亡,其可能的机制与BTG1参与细胞周期调控、诱导细胞凋亡相关。     

lncRNA CCAT2 对宫颈癌CaSki细胞增殖及周期的影响

目的：研究长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）CCAT2 对宫颈癌细胞增殖、周期的影响。方法：采用qPCR法检测3 种宫颈癌细胞（HeLa、C-33A和CaSki）中CCAT2 的表达水平，选择表达水平最高的细胞进行后续实验。设计合成CCAT2 过表达及干扰载体，转染细胞后，qPCR检测转染效率。细胞分为5 组：对照组、干扰空载（sh-EV）组、过表达空载（overExp-EV）组、CCAT2 干扰（sh-CCAT2）组和CCAT2 过表达（overExp-CCAT2）组，MTT法检测各组细胞增殖活力，流式细胞术检测细胞周期，WB法检测细胞中Ki67、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）和周期蛋白依赖性激酶4（cyclin-dependent kinase 4，CDK4）表达水平。结果：在HeLa、C-33A和CaSki 3 种细胞系中，选择CCAT2 表达水平最高的CaSki 细胞为研究对象。CCAT2 过表达及干扰载体均成功转入细胞，转染效果明显。与对照组比较，sh-CCAT2 组细胞增殖活力显著降低（P<0.01）、G1 期细胞比例显著升高（P<0.01），Ki67、Cyclin D1 及CDK4 表达水平显著降低（均P<0.01）；而overExp-CCAT2 组与之相反，细胞增殖能力增强，且Ki67、Cyclin D1 及CDK4 表达水平显著升高（均P<0.01）。结论：CCAT2 通过调控细胞增殖及周期相关蛋白的表达，进而影响宫颈癌CaSki细胞的增殖和周期。     

沉默BRG1基因对人胶质瘤细胞增殖的影响及其机制北大核心CSCD

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默胶质瘤细胞BRG1基因表达对其增殖的影响及其机制。方法化学合成BRG1 siRNA,脂质体介导转染胶质瘤U251和U87细胞。CCK-8细胞增殖实验检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期变化,Western blot检测BRG1、cyclin家族、CDK抑制剂蛋白表达水平。结果转染BRG1 siRNA可以有效减少胶质瘤U251和U87细胞BRG1表达,细胞增殖下降,G1期细胞增加。BRG1沉默后cyclin D1和cyclin B1表达降低,CDK抑制剂p21和p27没有明显变化。结论沉默胶质瘤细胞BRG1表达影响细胞周期蛋白使细胞停滞在G1期,最终抑制胶质瘤细胞增殖。     

SPOCK2基因表达上调对前列腺癌细胞增殖的影响

目的:探讨SPOCK2基因表达上调对前列腺癌细胞增殖的影响。方法:通过Real-time PCR及Western Blot检测前列腺癌组织及细胞中SPOCK2基因的表达。进一步通过基因重组技术上调前列腺癌细胞系DU145及LNCaP中SPOCK2基因表达,通过CCK8检测细胞增殖情况变化,通过流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况。结果:前列腺癌组织中SPOCK2表达显著低于正常对照组（P<0.05）,应用基因重组片段有效上调SPOCK2基因表达后,转染组细胞增殖率均显著低于阴性对照组及空白对照组,差异有显著统计学意义（P<0.05）。转染组G0/G1期细胞百分比显著高于阴性对照组及空白对照组,差异有显著统计学意义（P<0.05）。转染组S期显著低于阴性对照组及空白对照组,差异有显著统计学意义（P<0.05）。DU145细胞转染组凋亡率显著高于阴性对照组及空白对照组,差异有显著统计学意义（P<0.05）。结论:SPOCK2上调可以抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,使细胞停滞于G0/G1期,表明该基因可能通过影响细胞增殖,作为抑癌基因在前列腺癌的发生发展中发挥重要作用。     

cPLA2抑制剂对EGF和FBS诱导的Hela细胞增殖及cPLA2活性和蛋白表达的影响

目的：研究抑制胞浆型磷脂酶A2（cPLA2）对表皮生长因子（EGF）和胎牛血清（FBS）诱导Hela细胞增殖及cPLA2活性和蛋白表达的影响。方法：采用cPLA2特异性抑制剂AACOCF3、反义寡核苷酸（SK7111）及其上游酶ERK1/2抑制剂U0126,分别作用于Hela细胞,观察在EGF及FBS作用下Hela细胞增殖以及细胞周期的变化;采用cPLA2活性检测盒及Western blot检测cPLA2活性及表达。结果：AACOCF3、SK7111及U0126均能明显抑制cPLA2活性,且呈剂量依赖性地抑制EGF和FBS诱导的Hela细胞增殖,尤以SK7111作用最为明显;流式细胞仪检测细胞周期表明,AACOCF3和U0126可将Hela细胞阻滞在S期。结论：cPLA2选择性抑制剂及其反义寡核苷酸可通过抑制cPLA2活性显著抑制EGF和FBS诱导Hela细胞增殖,同时,ERK1/2在此过程中可能具有调节作用。     

siRNA下调Ets2对肾癌786-0细胞增殖的影响

目的:探讨E26转录因子2(E-twenty six2,Ets2)在肾癌细胞中的表达及其对肾癌细胞786-0增殖的影响及机制.方法:Westem Blot检测各肾癌细胞内Ets2的表达,并合成特异性siRNA下调肾癌细胞系786-0中Ets2的表达,利用MTT、平板克隆形成实验及流式细胞术检测其增殖能力的变化,通过Western Blot检测细胞周期相关分子表达水平变化.结果:Ets2在肾癌细胞内的表达比正常肾小管上皮细胞明显增高,siRNA能有效下调肾癌786-0细胞系中Ets2的表达.下调Ets2后786-0细胞增殖能力及克隆形成能力减弱(P＜0.01);细胞周期阻滞于G0/G1期;Ets2-siRNA介导的Ets2基因沉默下调了786-0细胞内CDK4与CyclinD1的表达,而上调了p21的表达.结论:Ets2可通过调节CDK4、CyclinD1及p21的表达影响肾癌细胞786-0的增殖能力.     

PGRMC1在宫颈癌组织中的表达及对细胞增殖的影响

目的:检测孕激素受体膜成分1（PGRMC1）在宫颈鳞状细胞癌、腺癌、高级别上皮内病变（high-grade squamous intra-epithelial lesions,HSIL）以及对应正常宫颈组织中的表达情况,并分析其对宫颈癌细胞增殖的影响。方法:利用免疫组化法检测PGRMC1在151例宫颈鳞状细胞癌、18例宫颈腺癌、26例HSIL以及对应正常宫颈组织中的表达情况;利用CCK-8法分析PGRMC1对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响。结果:PGRMC1在宫颈鳞状细胞癌中的表达高于癌旁正常鳞状上皮中的表达（P＜0.000 1）,在宫颈腺癌中的表达高于癌旁宫颈腺上皮中的表达（P=0.015 7）,在HSIL中的表达也高于瘤旁宫颈鳞状上皮中的表达（P=0.003 2）。PGRMC1的表达与宫颈鳞状细胞癌患者的年龄、脉管侵犯、肿瘤分化、肿瘤浸润深度、肿瘤直径、淋巴结转移以及FIGO分期均无关（P均>0.05）。CCK-8分析显示干扰PGRMC1可抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖。结论:PGRMC1在宫颈鳞状细胞癌、宫颈腺癌以及HSIL中的表达均高于正常宫颈组织中的表达。干扰PGRMC1可抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖。     

PTENP1对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的 探讨PTENP1对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制.方法 选取107例结直肠癌及对应的癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量PCR法检测结肠癌及癌旁组织中PTENP1表达水平.采用慢病毒在结肠癌HT29细胞建立PTENP1过表达细胞系(PTENP1组)和空载体细胞系(对照组).CCK8试剂盒分析细胞的增殖能力...     

金属硫蛋白对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

 目的 探讨金属硫蛋白（metallothionein，MT）对人宫颈癌细胞HeLa增殖和凋亡的影响并初步分析其机制。方法 以不同浓度的MT（0．001、0．01、0．1和1ng／m1）干预HeLa细胞，MTT法测定其对细胞 增殖的促进作用，流式细胞仪分析凋亡率，免疫细胞化学法和RT-PIER法测定p53和PCNA的表达。结果 （1）MT对HeLa细胞增殖表现出浓度依赖性的促进作用，以1ng／ml时作用最明显（P〈0．05）。（2）MT可抑制细胞凋亡，其浓度为0、0．01和1ng／ml时，凋亡指数（AJ）分别为（6．35±1．08）％、（4．45±0．95）％和（2．15±0．77）％。（3）MT作用后细胞p53表达显著减弱，PCNA表达显著增强，两者均呈浓度依赖性。结论 MT对人宫颈癌HeLa细胞具有显著地促进增殖和抑制凋亡作用，其机制可能与抑制p53基因表达有关。     

两种用药方式对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 比较去甲斑蝥素(noreantharidin,NCTD)单独用药和联合ABT-737 2种用药方式对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,检测NCTD单药或联合ABT-737 2种用药方式对宫颈癌细胞株HeLa和SiHa增殖的影响;应用流式细胞术分析NCTD联合ABT-737对宫颈癌细胞凋亡的影响.结果 NCTD单独用药能够显著抑制宫颈癌细胞株HeLa和SiHa的增殖(P＜0.05),且抑制作用呈剂量依赖性,而且NCTD与ABT-737联用后对宫颈癌细胞增殖的抑制作用明显增强.NCTD和ABT-737联合用药的促凋亡作用比单独用药效果显著增强(P＜0.05).结论 体外单独使用NCTD对宫颈癌细胞HeLa和SiHa的增殖具有明显抑制作用,联合使用ABT-737后对其增殖抑制以及促凋亡作用更明显.     

RASSF1A Suppresses Proliferation of Cervical Cancer Cells

Background: This study aimed to explore the effects of ras association domain family 1 A (RASSF1A) onproliferation and apoptosis of human cervical cancer cell line Hela cells. Materials and Methods: RASSF1Awas cloned into the pcDNA3.1(+) vector to generate pcDNA3.1(+)-RASSF1A plasmid for transfection into Helacells. Changes in the proliferation and apoptosis of cultured Hela cells were examined by the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium chloride assay and flow cytometry. A protein array was used to analyzethe expression of apoptotic factors. Results: Plasmid pcDNA3.1(+)-RASSF1A was generated and transfectedinto Hela cells to stably express RASSF1A in Hela cells. RASSF1A transfection was effective in inhibiting theproliferation of Hela cells up to 52.4%, as compared to cells transfected with an empty plasmid. RASSF1Aexpression also successfully induced apoptosis in human cervical cells with an apoptosis rate of 20.5%. Moreimportantly, protein array results showed that RASSF1 A transfection induced overexpression of p21 and caspase8, while decreasing the expression of survivin in Hela cells. Conclusions: RASSF1A expression was effective insuppressing the proliferation and increasing apoptosis of Hela cells, and may be a potential therapy for cervicalcancer in clinic.     

NTSR1基因对胃腺癌细胞增殖和侵袭的影响及机制

目的 探讨NTSR1基因在胃癌细胞增殖侵袭中的作用及其可能的机制。方法 应用免疫组织化学Envision二步法检测分析233例胃癌组织中NTSR1蛋白表达与EGFR及HER2的关系。检测胃癌细胞株NTSR1 mRNA表达,选取表达丰度较高的细胞株作为实验对象。构建干扰效率最高的shNTSR1 MKN-45细胞稳定株。采用MTT及细胞侵袭实验检测NTSR1基因沉默对胃癌细胞增殖及侵袭能力的影响。检测shNTSR1对Cancer Phenotype信号通路中19种相关基因表达的影响。结果 （1）233例胃癌NTSR1阳性表达与EGFR及HER2表达均存在显著正相关性（P<0.05）,同时EGFR与HER2两者表达亦存在显著正相关性（P<0.05）。（2）NTSR1在MKN-45中的表达丰度较高。（3）成功构建NTSR1 shRNA表达载体。（4）经NTSR1 shRNA干扰,MKN-45的细胞增殖倍数明显下调（P<0.05）。（5）经NTSR1 shRNA干扰,MKN-45的侵袭转移率显著减少（P<0.05）。（6）经shRNA干扰NTSR1表达后, MKN-45细胞的Cancer Phenotype信号通路相关基因中的p27Kip1蛋白的表达水平显著上调,同时,EGFR、HER2、EpCAM及Met也呈现较明显的下调趋势。结论 NTSR1在胃癌的发生发展中起重要作用,其可能通过多维度调控EGFR/HER2信号及p27Kip1、EpCAM、Met等Cancer Phenotype信号通路相关基因来促进胃癌细胞的增殖、侵袭及转移。     

miR-20 b对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究

目的：探讨miR-20b对大肠癌（ CRC）细胞增殖凋亡的影响及机制。方法将miR-20b模拟物转染CRC细胞株HCT-116,qRT-PCR检测转染后miR-20b的表达,分别应用CCK-8实验及流式细胞仪检测转染后细胞增殖和凋亡情况。 qRT-PCR和western blot检测转染后Bcl-w mRNA和蛋白的表达情况。结果转染miR-20b模拟物后,HCT-116细胞中miR-20b表达水平明显上调,HCT-116细胞增殖减弱（P＜0．05）,凋亡增强（P＜0．05）。 miR-20b可作用于Bcl-w mRNA的3′-UTR,使海肾荧光素酶活性显著降低。转染后Bcl-w mRNA及蛋白表达水平明显下调,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论上调HCT-116细胞中miR-20b表达水平,可抑制其靶基因Bcl-w的表达,发挥抑制细胞增殖、增加凋亡的作用。     

胃癌中MPZL1的表达及其对胃癌细胞增殖能力的影响

目的 探讨MPZL1在胃癌中的表达及其与胃癌患者预后的关系和对胃癌细胞增殖、克隆形成能力的影响。方法 利用GEPIA、UALCAN在线数据库分析MPZL1在多种恶性肿瘤中的表达情况，进一步运用KM Plotter和UALCAN数据库分析MPZL1对胃癌患者总生存时间的影响；采用Western blot检测胃癌细胞中MPZL1蛋白表达情况以及凋亡信号通路蛋白的变化；运用CCK-8和平板克隆实验分别检测MPZL1的表达变化对细胞增殖和克隆形成能力的影响。结果 在线数据库GEPIA发现MPZL1在多种恶性肿瘤中呈高表达趋势。UALCAN和KM Plotter数据库分析结果显示MPZL1在胃癌组织中高表达，可能与胃癌患者的总生存时间呈负相关；CCK-8和平板克隆形成实验结果显示，过表达MPZL1促进胃癌细胞的增殖和克隆形成能力（P<0.05）；Western blot结果显示，促凋亡蛋白Bad、Caspase-7表达水平在过表达组较对照组明显减少，在敲减组的表达水平高于对照组。结论 MPZL1在胃癌组织中高表达，且促进胃癌细胞的增殖、克隆形成能力，可能与抑制凋亡信号通路有关。     

survivin基因沉默对宫颈癌XB1702细胞增殖和对吉非替尼敏感度的影响

目的研究survivin基因沉默对人宫颈癌XB1702细胞增殖和对化疗药物吉非替尼敏感度的影响。方法 设计合成survivin的siRNA序列,LipofectamineTM2000 转染入XB1702细胞。采用RT-PCR和Western blot检测survivin在干扰后mRNA和蛋白的表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期。通过MTT法和细胞克隆形成试验法观察survivin基因沉默后XB1702细胞对吉非替尼的敏感度。结果 Survivin基因沉默48 h后,XB1702细胞的survivin基因和蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞周期被阻滞在G₀/G₁期,S期细胞数减少;差异有统计学意义(P<0.05)。survivin基因沉默组细胞对吉非替尼的敏感度显著增强。结论 survivin特异性siRNA能显著沉默XB1702细胞survivin基因,抑制细胞增殖,并增强XB1702细胞对吉非替尼的敏感度。     

Expressions of Cell Cycle Regulators in Human Colorectal Cancer Cell Lines

To study the altered mechanisms of cell cycle regulation in colorectal cancer, the expressions of cyclins, cyclin-dependent kinases (CDKs), CDK inhibitors, p53 and retinoblastoma (Rb) protein were analyzed by western blotting in a series of human colorectal cancer cell lines. The colorectal cancer cell lines exhibited various expression patterns of cell cycle regulators, which may reflect differences in the biological characteristics of cancer cells and in the genetic backgrounds of carcinogenesis. A correlation was found between p53 gene alteration and p21 expression, suggesting that p53 gene mutation usually suppresses p21 expression, though p21 expression could be induced via both ap53 -dependent and a p53 -independent pathway in colorectal cancer. None of the cell lines studied expressed p16 protein, suggesting that inactivation of p16 may be a common alteration in colorectal cancer. Moreover, all the D-type cyclins, especially D2 and D3, were expressed at a high level in most of the cell lines. Loss of p16 expression and increased expression of D-type cyclins promote CDK-mediated Rb phosphorylation. All of the colorectal cancer cell lines studied herein expressed Rb protein, but the growth-suppressive properties of Rb may be inactivated by the loss of p16 expression and increased expressions of D-type cyclins. In view of the pivotal role of Rb in cell cycle regulation, loss of p16 expression and overexpression of D-type cyclins may be critical alterations in colorectal cancer.     

结直肠癌组织中NEK2的表达及其对HCT116细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 探讨中心体相关激酶2(NEK2)在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞HCT116增殖、侵袭及迁移的影响.方法 构建针对NEK2的小干扰RNA(si-NEK2),脂质体法转染HCT116细胞.CCK8实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell小室实验检测敲低NEK2表达后细胞增殖、周期分布、侵袭和迁移能力的改...