角膜新生血管对角膜损伤神经再生影响的研究

目的 探讨角膜新生血管对大鼠角膜损伤神经再生的影响。设计 实验研究。研究对象 SD大鼠。方法 采用随机数字表法将18只SD大鼠分为3组,每组6只。A组行缝线铲针角膜基质层间切开及缝线诱导新生血管术,术后0、3、7天给予结膜下注射贝伐单抗;B组行缝线铲针角膜基质层间切开及缝线诱导新生血管术;C组0、3、7天行结膜下注射贝伐单抗操作。分别在术后1天、1周、2周、4周,采用裂隙灯照相法观察记录角膜新生血管面积;角膜共聚焦显微镜记录神经长度。采用Cochet-Bonnet知觉仪测量缝线区的角膜知觉,采用Schirmer试验泪液线测量右眼的泪液分泌量。术后4周角膜全层铺片免疫荧光染色,记录上皮下神经密度。主要指标 角膜新生血管面积比、神经长度、上皮下神经密度、角膜知觉、泪液分泌量。结果 A、B组术后1、2周有角膜新生血管生长,术后4周消退闭锁,C组无角膜新生血管生长。A组术后1、2周新生血管面积比为（10.86±1.57）%和（1.87±0.69）%,分别小于B组的（25.42±2.65）%和（6.48±1.10）%（P均=0.000）。术后1天A、B组神经长度分别为（151.02±4.74）μm、（149.69±4.32）μm（P=0.306）;术后1、2、4周,A组神经长度均长于B组,分别为（193.84±2.25）μm与（155.73±2.98）μm、（217.15±2.08）μm与（166.21±2.41）μm、（220.70±1.41）μm与（203.76±1.74）μm（P均=0.000）。术后A、B组神经长度均有减少并有恢复趋势,C组无明显变化。术后4周A组损伤区上皮下神经密度（22.60%±2.02%）明显高于B组（9.41%±2.01%）（P=0.000）。A、B组上皮下神经短小稀疏、密度低,C组形态正常。A、B组术后1、2、4周时角膜知觉及泪液分泌量均无统计学差异（P均＞0.05）。A、B组均有下降并恢复趋势,C组无明显变化。结论 角膜新生血管可能抑制角膜损伤神经再生,抑制角膜新生血管有利于神经再生。（眼科, 2017, 26： 106-111）     

碱烧伤对角膜组织中NO及iNOS含量变化的影响

目的 观察一氧化碳（nitric oxide,NO)含量和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达在角膜碱烧伤后的变化，探讨N0在角膜碱烧伤病理过程中的作用。方法 SD大鼠制作角膜碱烧伤模型，将实验动物随机分为2组：正常对照组，角膜碱烧伤组(碱伤组)。于1、4、7、10、13天每组各取6只大鼠采用酶法和免疫组化染色分别检测角膜组织中N0含量以及iNOS的表达变化。结果 碱烧伤后大鼠角膜组织中N0含量在不同时期均升高(P＜0．05)，并于4—7天达最高峰(P＜0．01)；角膜组织中iNOS主要表达于炎症细胞胞浆中，在不同时期表达也同样增强。结论 碱烧伤后角膜组织中N0及iNOS含量增加，提示N0可能参与了碱烧伤后的角膜组织病理损伤过程。     

神经生长因子对兔准分子激光角膜磨镶术后角膜神经再生的作用研究

干眼症是准分子激光角膜磨镶术（laser in situ keratomileusis，LASIK）术后最常见的并发症，其发生原因诸多，主要与术中做角膜瓣时切断了除角膜瓣蒂部以外的所有神经，从而导致角膜感觉降低，影响泪液分泌。因此，促进角膜知觉的恢复，即促进LASIK术后角膜神经纤维的再生与修复是治疗LASIK术后干眼的有效方法。神经生长因子（nerve growth factor，NGF）是神经系统最重要的生物活性分子之一，是参与损伤神经再生和功能修复的重要因素。NGF是通过受体介导而发挥作用，在角膜上皮细胞、内皮细胞及基质细胞都存在NGF受体。本研究旨在探讨外源性NGF对角膜神经损伤再生与修复作用。     

深低温保存角膜穿透性移植术后角膜神经再生的研究

深低温保存角膜穿透性移植术后角膜神经再生的研究鲍连云王传富杨湘娟深低温保存角膜穿透性移植术后角膜神经再生的研究@鲍连云@王传富@杨湘娟...     

神经生长因子对兔角膜板层移植术后神经再生的作用

目的 探讨负载神经生长因子（NGF）的重组人Ⅲ型胶原（RHC-Ⅲ）移植入兔眼角膜后,对角膜神经再生的影响.方法 实验研究.16只中国大耳白兔随机分为A组和B组,每组8只,右眼为手术眼.A组兔角膜前板层植入负载5 ng/mg NGF的RHC-Ⅲ,B组植入不含NGF的RHC-Ⅲ.术后2周、1个月、3个月和6个月,每组随机取1只兔眼做角膜神经氯化金染色,光镜下观察角膜神经的修复情况,并对各时间点角膜上皮及浅基质层的神经纤维进行计数.采用独立样本t检验对A、B两组间各时间点的神经纤维数量进行比较.结果 术后2周,两组即可观察到上皮及浅基质层有新生的神经纤维;术后1个月,A组浅基质层已可见到少量新生的神经纤维相互连成网状;术后3个月,两组新生神经纤维数量明显增多,均可见到网络结构以及较多侧枝形成;术后6个月,A组新生神经纤维数量明显多于B组,且结构更为完善,但两组部分神经断端没有神经再生.A组术后2周、1个月、3个月和6个月的新生神经纤维数量分别为（6.80±0.84）、（11.80±1.10）、（25.20±1.30）、（42.40±1.82）根/100倍光镜视野;B组分别为（3.00±0.71）、（5.80±0.84）、（13.20±0.84）、（26.60±1.14）根/100倍光镜视野;A组各时间点新生神经纤维数量明显高于B组,两组差异均有统计学意义（t=7.76、9.73、17.32、16.47,P均＜0.01）.结论 NGF可以明显促进兔角膜板层移植术后的神经修复.     

角膜损伤后神经再生的实验研究

应用神经组织化学技术观察了兔角膜NA能神经及AchE阳性神经在角膜损伤后的再生,证实术后1月,两种神经均有再生轴突进入植片;术后3月可见交界区和植床内神经密度明显增加;同时,对术后两种神经再生的功能意义进行了讨论。     

角膜碱烧伤房水一氧化氮及一氧化氮合酶变化

目的探讨角膜碱烧伤后房水一氧化氮（NO）与炎症反应的关系。方法用健康家兔动态观察对照组、实验组和对侧眼组眼内炎症反应及房水一氧化氮合酶（NOS）和NO2^-／NO3^-的活性。结果角膜碱烧伤后炎症反应与房水NOS和NO活性呈动态变化，实验组明显高于对侧眼组，且两组均高于对照组。结论房水NO的变化与角膜碱烧伤后的眼内炎症反应密切相关。     

实验性穿透角膜移植术后角膜神经再生的组织化学研究

本文应用胆碱酯酶组织化学技术观察了实验性穿透角膜移植术后角膜AchE阳性神经的再生,证实术后一周,神经断端已有再生轴突形成;术后4周,可见单根纤维穿八植片,同时植床内神经呈明显增生反应;新生与再生纤维均向植片方向生长,使植床内及植床与植片交界区神经密度明显增大;术后6～10周,植片周边再生纤维数量逐渐增多,但植片中央至术后3月仍仅有少数细纤维形成。本文讨论了穿透性角膜移植术后角膜神经再生与角膜知觉恢复的关系。     

神经生长因子滴眼液对兔眼LASIK术后角膜神经修复的影响

目的探讨神经生长因子（NGF）对兔眼准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）后角膜神经损伤再生修复的影响。方法实验研究。将15只（30眼）薄瓣LASIK术后新西兰大白兔随机分为NGF组（NGF治疗）、阳性对照组（人工泪液玻璃酸钠滴眼液治疗）与阴性对照组（0.9%氯化钠溶液滴眼）,每组各5只（10眼）。利用共聚焦显微镜分别测量术前,术后1周、1个月、3个月中央角膜上皮下神经密度（SND）、上皮下神经数量及浅基质神经密度、浅基质神经数量,并进行比较。采用重复测量方差分析比较不同时间点及3组之间各神经参数的差异。结果术前阴性对照组、阳性对照组、NGF治疗组SND分别为（10 801±3 331）µm/mm2、（11 619±3 932）µm/mm2、（12 299±2 622）µm/mm2,上皮下神经纤维数量分别为12.2±3.4、11.6±2.7、13.1±2.7,浅基质神经密度分别为（7 258±1 242）µm/mm2、（8 148±2 462）µm/mm2、（8 984±1 526）µm/mm2,浅基质神经数量分别为8.5±1.4、8.9±2.6、10.1±2.1。与术前相比,3组所有的神经参数在术后1周均明显减少（P＜0.01）。与术后1周相比,NGF治疗组SND、浅基质神经密度在术后1个月均上升,而阴性对照组和阳性对照组的SND、浅基质神经密度在术后3个月才开始上升,差异有统计学意义（P＜0.01）;3组上皮下神经数量在术后3个月开始上升（P＜0.05）;NGF组和阳性对照组的浅基质神经数量在术后1个月上升（NGF组P＜0.01,阳性对照组P＜0.05）,并且NGF组的浅基质神经数量在术后1个月恢复到术前水平。结论NGF滴眼液对LASIK术后角膜神经的损伤再修复有明显促进作用。     

神经生长因子滴眼液对LASIK术后角膜瓣神经修复的影响

目的观察准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）术后不同时期中央角膜神经的再生情况及神经生长因子（NGF）滴眼液对神经再生的影响。方法采用随机双盲前瞻性对照研究,将35例（70眼）行LASIK的青壮年近视患者随机分为NGF组和对照组,分别检查术前、术后10d、1、3、6个月角膜知觉、泪膜破裂时间（BUT）、泪液分泌量及中央角膜神经密度并进行比较。结果术后10d、1、3、6个月角膜知觉、BUT、泪液分泌量2组间差异均无统计学意义（P〉0.05）。术后3个月内角膜神经密度2组间差异无统计学意义（P〉0.05）,术后6个月NGF组神经密度高于对照组,2组间差异有统计学意义（P〈0.05）。结论NGF滴眼液对LAISK术后角膜神经修复有促进作用。     

神经生长因子滴眼液对兔眼准分子激光原位角膜磨镶术后角膜神经修复的影响

目的观察神经生长因子（nerve growth factor，NGF）滴眼液时兔眼准分子激光原位角膜磨镶术（laser in situ keratomileusis，LASIK）后角膜神经修复的影响。方法35只中华大耳白兔双眼接受近视性LASIK术．术后左眼用配置的100μg／ml NGF滴眼液．右眼滴平衡液（balanced salt solution，BSS）作为对照，1滴，次，3次，d。分别于术后第1天、第3天、第1周、第2周、第1个月、第3个月、第6个月各取5只兔，在观察双眼前后节反应后处死兔，摘除双侧角膜．进行角膜神经氯化金染色。光镜下观察LASIK术后角膜神经修复过程，分别比较角膜上皮、浅基质层，深基质层NGF组与BSS组LASIK术后不同时期角膜神经的数量。结果LASIK术后角膜深基质层、角膜瓣连接处的上皮下和浅基质层神经未受损，瓣切削处上皮下和浅基质层神经消失。术后不同部位的角膜神经再生程度不同．术后第6个月周边部角膜神经形态已接近正常，角膜中央仍无神经分布。NGF组与BSS组术后各时间点角膜上皮、浅基质层神经数量比较．NGF组大于BSS组，差异有显著性（P〈0．05）；两组术后深基质层神经数量比较，NGF组大于BSS组，差异也有显著性（P〈0．05）。结论NGF滴眼液对LASIK术后不同部位、不同时期角膜神经的修复有明显促进作用。     

Efficacy of rhNGF-loaded amniotic membrane transplantation for rabbit corneal epithelial and nerve regeneration

AIM: To evaluate the efficacy of recombinant human nerve growth factor-loaded amniotic membrane (rhNGF-AM) on corneal epithelial and nerve regeneration in rabbit model. METHODS: Freshly prepared human amniotic membrane (AM) were immersed into PBS buffer containing 100 or 500 μg/mL rhNGF for 15, 30, and 60min at 4℃. The in vitro release kinetics of rhNGF was measured with ELISA. For in vivo evaluation, the AM were immersed with 500 μg/mL rhNGF for 30min. Fifty-seven rabbits were selected to establish corneal epithelial defect model. In addition to the 19 rabbits in control group, 38 rabbits received AM transplantation with or without rhNGF after the removal of central epithelium. Corneal epithelial defect area, sub-epithelial nerve fiber density, corneal sensitivity, rhNGF contents in resident AM and corneas were measured after the surgery. RESULTS: rhNGF was sustained release from the AM within 14d in vitro, with the positive correlation with initial immersion concentration. The immersion of AM in 500 μg/mL rhNGF for 30min achieved the most stable release within 14d. After transplantation in rabbit cornea, a high concentration of rhNGF in resident rhNGF-AM and cornea was maintained within 8d. Corneal epithelial healing, nerve fiber regeneration and the recovery of corneal sensitivity were significantly accelerated after the rhNGF-AM transplantation when compared to simple AM transplantation (all P<0.05). CONCLUSION: Simple immersion of AM achieves the sustained release of rhNGF, and promotes corneal epithelial wound healing and nerve regeneration, as well as the recovery of corneal sensitivity in rabbit.     

分泌粒蛋白Ⅲ(Scg3)抗体对角膜新生血管的抑制作用

目的 分析分泌粒蛋白III (Scg3)抗体对兔角膜新生血管(CNV)的干预作用。方法 选取健康新西兰白兔45只,未做碱烧伤的5只作为对照组,剩余40只白兔用碱烧伤法构建CNV模型,随机分为模型组(20只)和干预组(20只),自碱烧伤之日起每隔2 d结膜下分别注射0.1 mL 1×PBS溶液或0.5 mg·L^-1的Scg3抗体工作液。碱烧伤后14 d, Western blot检测对照组与模型组兔角膜组织中Scg3的蛋白表达。分别在碱烧伤后1 d、7 d、14 d应用眼前段分析仪测量CNV的面积和长度,应用角膜共聚焦显微镜观察眼表变化,利用蛋白芯片法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)等炎症相关细胞因子的表达。结果 角膜碱烧伤后14 d,模型组兔烧伤区域出现大量CNV,而干预组兔角膜无明显CNV生长。Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组兔角膜中Scg3蛋白表达显著升高(P<0.05)。角膜共聚焦显微镜下观察可见,模型组兔的角膜缘内出现大量活动性CNV。角膜碱烧伤后7 ...     

大鼠角膜重度碱烧伤后视网膜一氧化氮合酶变化与细胞凋亡的研究

目的研究大鼠角膜重度碱烧伤后视网膜诱导型一氧化氮合酶(iNOS)变化与细胞凋亡的关系。方法制作SD大鼠角膜重度碱烧伤模型76只(152眼)。在烧伤后不同时间点以免疫组化检测iNOS在视网膜的表达,以酶法检测视网膜组织中iNOS含量的变化,并以末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测视网膜凋亡细胞,并与正常大鼠相对照。结果正常组视网膜中未测到iNOS的表达和含量,重度碱烧伤后大鼠视网膜中iNOS的表达和含量从伤后1d开始升高,于7d达最高,30d恢复正常,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。伤后3d、7d、15d在视网膜神经节细胞可见不同程度的TUNEL阳性细胞,7d组凋亡阳性表达最强,与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论角膜重度碱烧伤后视网膜组织细胞存在凋亡,凋亡可能与iNOS表达有关。     

屈光手术对角膜神经的影响

准分子激光矫正屈光不正主要是在角膜上进行,在制作角膜瓣和进行激光切削的过程中不可避免会造成角膜神经的损伤,手术方式、切削深度和角膜瓣的厚度不同对角膜神经造成的影响也有差异。神经损伤后角膜感觉下降或消失,影响创口愈合和手术质量。我们主要就当前主流屈光手术方式对角膜神经损伤的机制以及屈光手术后促进角膜神经再生的因素做一综述,为进一步提高手术质量提供依据。     

神经生长因子对兔角膜内皮细胞增殖的影响

目的 探讨神经生长因子（NGF）对角膜内皮细胞增殖的影响。方法 在培养兔角膜内皮细胞的培养液中分别添加5U／ml,50U／ml和500u/ml的NGF,加药后第3,7天采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法,在酶标仪上测定570nm波长处的吸光度值来观测细胞增殖情况。结果 与对照组比较,加药后第3,7天,3组的NGF对培养的兔角膜内皮细胞增殖均促进作用（P＜0．01）,且呈剂量依赖性。其中50U／ml组及500U／ml组作用强于5U／ml（P＜0．05）,而50U／ml组和500U／ml组比较作用无差异（P＞0．05）。结论 外源性NGF对培养的兔角膜内皮细胞增殖有明显的促进作用。