沉默SDC1通过ERK信号通路促进胆囊癌细胞的侵袭和迁移

目的:观察沉默黏结蛋白聚糖1（syndecan-1,SDC1）对胆囊癌细胞侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子机制。方法:采用RNA干扰技术敲低胆囊癌细胞系GBC-SD中SDC1的表达,Western blot和qRT-PCR验证转染效果;Transwell侵袭实验、划痕愈合实验检测细胞侵袭和迁移能力;Western blot分析ERK1/2、p-ERK1/2、Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果:成功构建SDC1低表达的胆囊癌细胞系;转染后各组细胞SDC1 蛋白和mRNA表达水平显著低于shNC组（P＜0.05）;与BC组和NC组相比,shSDC1组细胞侵袭和迁移能力明显提高（P＜0.01）;与BC组和NC组相比,shSDC1组细胞p-ERK1/2、Snail、N-cadherin蛋白表达水平显著上调,而E-cadherin蛋白表达水平显著降低。结论:沉默SDC1可能通过ERK信号通路促进胆囊癌细胞的侵袭和迁移。     

shRNA沉默环指蛋白146基因对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及其相关蛋白表达的影响

目的：shRNA沉默环指蛋白146（RNF146）基因,观察非小细胞肺癌细胞中RNF146沉默对肺癌细胞迁移和侵袭及其相关蛋白表达的影响。方法：逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR）和Western blot方法用于筛选RNF146高表达肺癌细胞系。构建shRNA-RNF146真核表达载体,瞬时转染A549和H1299肺癌细胞,West-ern blot检测转染效率。划痕实验评价肺癌细胞体外迁移能力;Buyden小室实验检测肺癌细胞体外侵袭能力。Western blot检测肺癌细胞中迁移和侵袭相关蛋白的表达。结果：RT-PCR和Western blot方法筛选RNF146高表达肺癌细胞系,显示 A549和 H1299细胞中 RNF146蛋白均高于其它细胞系。shRNA -RNF146转染A549和H1299细胞系后,划痕实验显示转染组细胞24小时迁移率明显低于空载体组和未转染组（ P＜0.01）。Buyden小室实验结果表明转染组比空载体组和未转染组穿膜细胞数目明显减少（ P＜0.05）。West-ern blot检测与细胞迁移和侵袭相关的调控蛋白（ MMP2、MMP7、MMP9、RhoA、RhoB、RhoC、Rock1、TIMP-1等）的表达情况,结果显示干扰 RNF146后 A549细胞中 MMP2和 MMP7表达明显减少,而 MMP9、RhoA、RhoB、RhoC、Rock1、TIMP-1等蛋白的表达变化不明显。结论：RNF146可能通过调控MMP2和MMP7的蛋白水平促进肺癌细胞迁移和侵袭。     

ROR1对人肺癌A549细胞上皮-间质转化的影响

目的 探讨受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1（receptor tyrosine kinase-like orphan receptor,ROR1）诱导人肺癌A549细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的作用及可能机制。方法 构建ROR1慢病毒表达载体,感染A549细胞筛选稳定过表达ROR1的A549细胞,采用划痕实验、Transwell实验检测A549细胞的侵袭和迁移能力; real-time PCR、Western blot分别检测ROR1、EMT相关标志物的表达。结果 过表达ROR1能够促进A549细胞向间质样细胞表型转化,Western blot结果显示Vimentin、N-cadherin表达上调, E-cadherin表达下调;划痕实验、Transwell结果显示细胞侵袭迁移能力显著增强（P=0.0023）;Western blot结果显示过表达ROR1能够上调EMT转录因子Snail的表达,干扰Snail能够逆转ROR1诱导的EMT,即下调Vimentin、N-cadherin表达,上调E-cadherin表达;划痕实验、Transwell结果显示干扰Snail显著降低细胞侵袭迁移能力（P=0.013）;进一步研究发现ROR1通过激活AKT信号而促进Snail的表达。结论 ROR1能够促进人肺癌A549细胞EMT转化,其机制可能与ROR1调控AKT/Snail信号有关。     

miR-573调控神经导向因子4促进肺癌细胞上皮间质转化

目的:探讨miR-573通过调控神经导向因子4(NTN4)对肺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测人肺癌组织和细胞系中miR-573和NTN4 mRNA水平。采用Lipofectamine 2000转染试剂对肺癌A549细胞进行转染并分组为Control组(不转染)、NC inhibitor组(转染NC inhibitor)、miR-573 inhibitor组(转染miR-573 inhibitor)、miR-573 inhibitor+si-NC组(转染miR-573 inhibitor和si-NC)和miR-573 inhibitor+si-NTN4组(转染miR-573 inhibitor和si-NTN4)。qRT-PCR检测miR-573表达水平;划痕法检测迁移能力;Transwell法检测侵袭、迁移能力;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测NTN4及E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平;双荧光素酶实验验证miR-573和NTN4的靶向关系。结...     

LINC01060对人胃癌BGC-823细胞系生物学行为的作用研究

目的:探索LINC01060对人胃癌BGC-823细胞系生物学行为的作用。方法:生信数据分析LINC01060在胃癌中的表达情况,建立LINC01060过表达和沉默的稳转BGC-823细胞株,Real time PCR验证LINC01060的表达,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin和Snail蛋白的表达。结果:GEO数据库发现,LINC01060在胃癌中低表达（P＜0.05）;Real time PCR结果显示,沉默组LINC01060的表达显著下调（P＜0.05）,过表达组LINC01060的表达显著上调（P＜0.05）;CCK-8显示,过表达组细胞增殖能力显著下降（P＜0.05）;流式细胞术显示,过表达组细胞凋亡比例显著上升（P＜0.05）;Transwell结果显示,过表达组细胞侵袭能力显著下降（P＜0.05）;细胞划痕显示,过表达组细胞迁移能力显著下降（P＜0.05）;Western blot显示,过表达组E-cadherin蛋白表达水平显著上调（P＜0.05）,Vimentin、N-cadherin、Snail蛋白表达水平显著下调（P＜0.05）;以上实验沉默组均相反。结论:LINC01060在人胃癌BGC-823细胞中发挥促进凋亡,抑制增殖、侵袭、迁移和EMT的作用。     

过表达TRAIL的间充质干细胞对肺癌A549细胞系生物学功能的影响

目的:探究过表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）对肺癌A549细胞系生物学功能的影响。方法:通过慢病毒载体携带TRAIL感染小鼠BMSCs,构建过表达TRAIL的小鼠BMSCs,RT-PCR法检测BMSCs中TRAIL基因表达。根据是否感染TRAIL基因,将细胞分为BMSCs组、NC-BMSCs组和TRAIL-BMSCs组,收集各组BMSCs的培养基,作为A549细胞条件培养基。根据条件培养基的不同,将A549细胞分为A549组、A549-BMSCs组、A549-NC-BMSCs组和A549-TRAIL-BMSCs组。MTT、Transwell和平板克隆形成实验检测各组A549细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆能力,Western blot法检测细胞中E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达情况。结果:RT-PCR法检测结果显示,与BMSCs组比较,TRAIL-BMSCs组细胞中TRAIL mRNA的表达水平显著升高,过表达TRAIL小鼠BMSCs构建成功。MTT、Transwell和平板克隆形成实验检测结果显示,与A549组比较,A549-BMSCs组和A549-NC-BMSCs组细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆能力显著增加,而A549-TRAIL-BMSCs组细胞在不同时间点的增殖能力显著降低,发生侵袭、迁移的细胞数量和克隆形成数量均显著降低;Western blot法检测结果显示,A549组、A549-BMSCs组、A549-NC-BMSCs组和A549-TRAIL-BMSCs组A549细胞中E-cadherin的表达水平分别为（0.45±0.03）、（0.23±0.03）、（0.25±0.02）、（0.95±0.09）;N-cadherin的表达水平分别为（0.57±0.07）、（0.97±0.08）、（0.99±0.12）、（0.19±0.03）;Vimentin的表达水平分别为（0.52±0.05）、（1.02±0.09）、（0.99±0.11）、（0.20±0.02）,与A549组比较,A549-BMSCs组和A549-NC-BMSCs组细胞中E-cadherin的表达水平显著降低,N-cadherin和Vimentin的表达水平显著增加,A549-TRAIL-BMSCs组细胞中E-cadherin的表达水平显著增加,N-cadherin和Vimentin的表达水平显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:BMSCs可促进A549细胞的增殖、迁移、侵袭、克隆和EMT转化,BMSCs过表达TRAIL基因则对A549细胞的生物学功能具有明显抑制作用。     

miR-101通过靶向FGF2抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭

目的：探究microRNA-101 (miR-101)通过靶向成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor 2,FGF2）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞迁移和侵袭的分子机制。方法：采用qPCR法检测人正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞系A549、H661和SK-MES-1,以及转染后A549细胞miR-101和FGF2的表达水平。分别将miR-NC、miR-101 mimics、miR-IN-NC、miR-101 inhibitor或pcDNA-3.1空质粒、pcDNA-FGF2转染至A549细胞,运用划痕愈合实验和Transwell小室实验,检测A549细胞中过表达miR-101和FGF2对NSCLC细胞迁移和侵袭能力的影响,采用Western blotting（WB）法检测各组A549细胞中FGF2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ERK1/2和p-ERK1/2的表达水平。结果：miR-101在NSCLC细胞系中的表达水平明显低于正常肺上皮细胞（均P<0.05）,而以A549细胞中表达水平为最低。过表达miR-101可明显抑制A549细胞的迁移（P<0.05）和侵袭（P<0.01）,且使细胞中E-cadherin的表达增多（P<0.05）而Vimentin（P<0.05）、N-cadherin（P<0.01）和p-ERK1/2（P<0.05）的表达水平降低。抑制miR-101表达后,可以显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.05）,引起细胞中E-cadherin表达明显降低而 Vimentin、N-cadherin 和 p-ERK1/2 表达水平增高（均 P<0.05）。采用 WB 法和双荧光素酶报告基因实验验证了 FGF2 是miR-101的直接靶基因,且过表达FGF2后显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.01）,以及减少细胞中E-cadherin的表达（P<0.01）而增加Vimentin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）和p-ERK1/2（P<0.05）表达水平。与单独过表达FGF2组相比,共同过表达miR-101和FGF2组A549细胞迁移和侵袭能力明显减弱（均P<0.01）,其E-cadherin的表达增多（P<0.01）而Vimentin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）和p-ERK1/2表达水平下降（P<0.01）。结论：miR-101通过调控靶基因FGF2抑制NSCLC A549细胞的上皮间质转化（EMT）过程及ERK信号通路,进而抑制NSCLC细胞的迁移和侵袭。     

姜黄素通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制TGF-β1诱导的肺癌细胞上皮间质转化

摘 要：［目的］ 探讨姜黄素对TGF-β诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化、侵袭转移的影响及其可能的机制。［方法］ 通过转化生长因子TGF-β1诱导肺癌细胞株A549发生上皮间质转化;利用不同浓度姜黄素干预由TGF-β1诱导的肺癌 A549细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,细胞划痕实验、Transwell 侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力变化,Western blot法检测上皮表型标记蛋白E-cadherin和间质表型标记蛋白N-cadherin、Vimentin的表达及PI3K/AKT/mTOR信号通路中AKT、mTOR磷酸化的情况,并利用PI3K抑制剂LY290004、mTOR抑制剂Rapamycin通过上述方法对姜黄素的作用进行印证。［结果］ 与对照组相比,姜黄素显著增加A549细胞E-cadherin的表达,抑制N-cadherin和Vimentin蛋白及TGF-β1刺激p-AKT和p-mTOR的表达,且呈明显的剂量—时间依赖关系;同时抑制TGF-β诱导的侵袭迁移。［结论］ 姜黄素可通过PI3K/AKT/mTOR通路明显抑制TGF-β1诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化,降低其侵袭迁移能力。     

HER-2通过影响EMT增强胃癌细胞的侵袭、迁移及黏附能力

目的:研究HER-2表达对胃癌细胞侵袭、迁移及黏附的影响,并探讨HER-2表达与EMT相关蛋白的关系。方法:利用小干扰RNA技术,在MKN-45胃癌细胞中沉默HER-2表达;采用实时荧光定量PCR法及Western blot法验证HER-2沉默效果,并将实验分为空白对照组、阴性对照组和HER-2沉默组;采用实时荧光定量PCR法及Western blot法检测各组细胞EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Snail的mRNA和蛋白表达情况。采用Transwell小室技术检测细胞侵袭及迁移能力;MTT实验检测细胞黏附能力。结果:沉默MKN-45胃癌细胞株中HER-2表达后,HER-2沉默组Vimentin、Snail表达水平以及侵袭、迁移及黏附能力明显低于空白对照组和阴性对照组;HER-2沉默组E-cadherin表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:在胃癌细胞中,HER-2可能通过影响EMT相关蛋白表达从而增强胃癌细胞的侵袭、迁移及黏附能力。     

MYB基因沉默抑制子宫颈癌细胞侵袭、迁移及其作用机制探讨

目的:探究沉默转录因子MYB对子宫颈癌细胞侵袭、迁移的影响以及可能的作用机制。方法:将携带MYB目的片段的siRNA转染入人子宫颈癌HeLa细胞中。实验分为对照组、阴性对照组和siRNA-MYB组。采用荧光定量PCR（qPCR）和蛋白质印迹法（Western Blot）检测转染效果。细胞划痕实验和Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力。Western Blot检测各组细胞中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、钙黏蛋白E（E-cadherin）、钙黏蛋白N（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）水平。结果:与对照组相比,阴性对照组细胞中MYB的表达量、细胞侵袭、迁移均无显著变化,差异不具有统计学意义;siRNA-MYB组细胞中MYB的表达量显著降低（P<0.05）,沉默MYB显著抑制子宫颈癌细胞的侵袭、迁移（P<0.05）,并下调细胞中MMP-2、N-cadherin、Vimentin蛋白的表达量（P<0.05）,上调E-cadherin蛋白的表达量（P<0.05）。结论:沉默宫颈癌细胞中MYB的表达量可通过抑制EMT、下调MMP-2蛋白水平,从而降低细胞的侵袭、迁移能力。     

LSD1抑制剂抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化

目的:探究赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（lysine-specific demethylase 1,LSD1）抑制剂对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将体外培养的人非小细胞肺癌A549细胞分为对照组和LSD1抑制剂组,在细胞进入对数生长期时,向实验组细胞中分别加入不同浓度的LSD1抑制剂,培养24 h。CCK-8法用于细胞增殖检测,划痕实验用于细胞迁移检测,Transwell小室法用于细胞侵袭检测,裂解细胞提取总蛋白后通过蛋白质免疫印迹技术（Western blot,WB）检测A549细胞中上皮细胞标志物E型钙黏蛋白（E-cadherin）、间充质细胞标志物N型钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达水平。结果:与对照组相比,LSD1抑制剂组细胞增殖率、穿膜细胞数和划痕愈合率显著降低（P＜0.05）;LSD1抑制剂组相较于对照组,E-cadherin表达量升高,N-cadherin和Vimentin的表达量均降低（P＜0.05）。结论:LSD1抑制剂可抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化。     

miR-449a通过下调HDAC1表达抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移北大核心

目的:分析miR-449a对人非小细胞肺癌细胞株A549增殖、侵袭和迁移的影响。方法:通过Real-time PCR检测人肺成纤维细胞MRC-5、人非小细胞肺癌细胞株A549和HCC827中miR-449a和组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的表达水平。利用CCK-8法和Transwell法分析miR-449a对A549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。使用生物信息软件分析miR-449a的靶向集合位点,并构建荧光素酶报告基因质粒,通过荧光素酶报告基因法分析miR-449a对HDAC1的靶向调控作用。通过Western blot分析miR-449a和HDAC1表达水平对A549细胞增殖及EMT相关分子表达水平的影响。建立裸鼠皮下瘤模型分析miR-449a和HDAC1对A549细胞体内增殖的影响。结果:miR-449a在MRC-5细胞中表达水平显著高于A549(P<0.0001)和HCC827(P<0.01);HDAC1在MRC-5细胞中表达水平显著低于A549(P<0.0001)和HCC827(P<0.01)。CCK-8法检测显示在A549细胞中转染miR-449a能够显著抑制其增殖。Transwell法检测显示在A549细胞中转染miR-449a能够显著抑制其侵袭和迁移(P<0.0001)。生物信息学预测显示miR-449a能够靶向结合HDAC1的3'-UTR;双荧光素酶报告基因分析显示,miR-449a能够靶向作用于HDAC1的3'-UTR抑制萤光素酶表达,Real-time PCR的结果表明过表达miR-449a能够显著抑制HDAC1的表达。在A549细胞中转染miR-449a或针对HDAC1小干扰RNA(siRNA)均能够下调HDAC1的表达,抑制细胞体内、外增殖;同时E-cadherin和ZO-1的表达水平下降,而N-cadherin、Fibronectin和Vimentin的表达水平增加。结论:miR-449a通过靶向抑制HDAC1的表达,抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

lncRNA PVT1沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及STAT3通路的影响

目的:研究沉默变异性浆细胞瘤异位1（plasmacytoma heterotopic 1,PVT1）基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、信号转导及转录活化因子（STATs）3通路的影响。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞株,设计PVT1 siRNA序列,转染细胞,分为siRNA组、阴性对照组（NC）、空白对照组（BC）,利用qRT-PCR检测各组细胞PVT1相对表达量,利用MTT法检测细胞增殖情况,利用划痕实验检测细胞迁移能力,利用Transwell实验检测细胞侵袭能力,利用WB法检测STAT3通路相关蛋白表达情况。结果:转染后,siRNA3组细胞中PVT1表达水平较BC组与NC组显著降低（P＜0.05）;转染后,与BC组与NC组比较,siRNA3组细胞增殖率较BC组与NC组显著降低（P＜0.05）,迁移、侵袭细胞数显著降低（P＜0.05）,p-STAT3蛋白,MMP2、MMP9、CD44、PCNA蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:沉默PVT1可能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭,其具体机制可能与STAT3信号通路有关。     

下调RAB3C减低上皮间质转化抑制非小细胞肺癌细胞的侵袭和转移

目的:探讨RAB3C表达对非小细胞肺癌细胞A549及NCI-H1299细胞侵袭转移的影响及其机制。方法:构建siR-RAB3C慢病毒载体转染A549及NCI-H1299细胞,使用qRT-PCR及Western blotting法验证每种细胞中RAB3C的mRNA及蛋白表达情况。应用Transwell实验及细胞划痕试验检测下调RAB3C后细胞侵袭情况的变化。Western blotting法比较对照组及siR-RAB3C组细胞中E-cadherin、N-cadherin及Vimentin的表达水平。结果:siR-RAB3C转染组细胞RAB3C的mRNA及蛋白表达量均下调。划痕试验结果显示,与对照组细胞相比,siR-RAB3C组细胞迁移率显著减少。Western blotting实验结果显示,下调RAB3C表达促进E-cadherin,抑制N-cadherin及Vimentin蛋白的表达。结论:调控RAB3C表达通过抑制上皮间质转化抑制非小细胞肺癌A549及H1299细胞侵袭转移。     

circKDM4C对肺癌细胞增殖和迁移侵袭影响

目的 本研究探讨circKDM4C在肺癌中的表达及生物学功能.方法 通过qRT-PCR检测circKDM4C在肺癌细胞系A549、H1299、H1650、H1975及肺正常上皮细胞BEAS-2B中的表达.siRNA转染A549和H1975,沉默circKDM4C,获得4组细胞系,分别为A549 si-circKDM4C...