肾穿标本的超薄切片制备方法改进

光镜下进行肾小球疾病诊断,很难精确地反映其病变的部位和性质.因此,常常需要通过超微病理学等方法才能确诊,送检的电镜标本应是新鲜标本.但有时因种种原因,只将肾穿组织送光镜做临床病理诊断,当发现光镜标本不能确切定位诊断,已为时过晚.为了弥补此缺憾,我们参考其它光镜标本转制技术[1],将已用石蜡包埋、光镜切片后剩余肾穿组织经脱腊,再制备电镜样品.为了准确找到肾小球病变部位,我们应用振荡切片机切取肾组织,用切片包埋方法,在光镜下确认肾小球后,定位切片,取得了较好的效果.现将这种综合方法报告如下:     

大鼠肾移植后移植肾内树突状细胞的早期观察

目的 观察大鼠肾移植后早期移植肾内树突状细胞(DC)的变化规律,藉此探讨排斥反应的防治.方法 受体Wistar大鼠30只,按5只/组随机分为6组,35只SD大鼠作为供体,其中5只供肾作为对照组,不行受体手术.其余均行同种异体原位肾移植术,并分别于开放供肾循环后1、6、12、24、48、72 h切取移植肾,行石蜡包埋切片,抗S-100蛋白免疫组化染色和HE染色.观察移植肾病理学改变及肾小球内DC数量变化.结果 各组切片均未见肾小管肾炎、动脉内膜炎等AR表现.对照组及术后1 h组肾小球内DC数量基本为零;此后逐渐增加;24 h组达到顶峰,其均数与其他各组相比,差异显著(Pmax=0.038);随后DC数量缓慢下降.结论 大鼠肾移植术后72 h内,供肾肾小球DC数量呈单峰曲线变化:受体DC不断迁入、迁出供肾是其变化的主要原因;揭示移植肾内DC变化规律有助于进一步完善免疫抑制剂及抗炎药物的使用方案.     

SD大鼠及beagle犬肾组织形态参数研究

了解SD大鼠及beagle犬肾组织学参数,为肾毒理病理诊断提供组织学判断依据。【方法】以40只成年SD大鼠及20只成年beagle犬为研究对象,雌雄各半,大鼠在12周龄处死,beagle犬在12月龄时处死。以体积分数为10％中性福尔马林固定肾脏,石蜡包埋,5μm切片,苏木素-伊红(HE)染色。以Spot Advanced图像分析软件测量犬和大鼠皮质及近髓肾单位、肾小球长径、短径及平均直径,同时比较种属间及不同性别动物之间的区别。【结果】beagle犬皮质肾单位肾小球长径大约为96μm,短径大约为76μm;近髓肾单位肾小球长径约为120μm,短径约为94μm,雌雄犬无显著性差异,但近髓肾单位长径、短径均大于皮质肾单位长径及短径。SD大鼠皮质肾单位肾小球长径约为87μm,短径约为64μm,近髓肾单位肾小球长径约为88μm,短径约为64μm,雌雄大鼠间无显著性差异,皮质及近髓肾单位肾小球长、短径亦无显著性差异。beagle犬组的皮质和近髓肾单位的长、短径均大于SD大鼠组(P<0．05或P<0．01)。【结论】beagle犬近髓肾单位大于皮质肾单位,而SD大鼠近髓肾单位及皮质肾单位大小无显著性差异;beagle犬肾小球较SD大鼠肾小球稍大,性别对beagle 犬及SD大鼠肾小球大小无影响。     

自体输尿管在远期移植肾输尿管狭窄治疗中的应用

目的探讨自体输尿管在远期移植肾输尿管狭窄治疗中的应用。方法应用自体输尿管治疗远期移植肾输尿管狭窄2例,1例采用自体输尿管与移植肾肾盂吻合术,1例采用自体输尿管与移植肾输尿管吻合术,观察疗效。结果 2例患者治疗后,梗阻均解除,随访14个月和9个月,均未复发。结论自体输尿管是治疗远期移植肾输尿管狭窄一种有效方法。     

肾移植术后输尿管梗阻的临床处理

目的探讨肾移植术后输尿管梗阻的诊断及处理对策。方法回顾总结2003-2006年该院收治的9例移植。后出现输尿管梗阻的患者。其中移植肾输尿管结石3例，采用经皮肾镜下气压弹道碎石术；输尿管膀胱吻合口狭窄2例，经皮移植肾穿刺高压气囊扩张后放置D—J管，效果不满意，后1例采用钬激光行内切开，另1例改开放手术；移植肾肾盂输尿管连接部狭窄梗阻2例，输尿管末段坏死2例，均采用移植肾近端存活输尿管与自体输尿管端侧或端端吻合。结果9例肾移植术后出现输尿管梗阻的患者经手术均成功挽救移植肾功能。再次手术后随访0．5-3．0年，肾功能均正常，B超未见移植肾扩张积水。结论输尿管梗阻是肾移植术后常见亦是较为棘手的外科并发症，处理宜根据引起梗阻的原因采用相应的术式。     

移植肾输尿管狭窄4例报告

移植肾输尿管狭窄是肾移植术后较常见的并发症之一,如诊治不及时,可导致移植肾功能丧失,我院2004年1月至2006年3月共施行同种异体尸体肾移植术58例,其中发生输尿管狭窄4例,报告如下. 1 临床资料 1.1 一般资料 4例患者均接受尸体肾移植,其中男3例,女1例;年龄18～63,平均39.5岁.原发病为慢性肾小球肾炎.肾移植手术方法 均为供肾动静脉与受者髂外动静脉行连续端侧吻合,供肾输尿管与受者膀胱行膀胱外抗返流吻合,术后均以环孢素A 骁悉 强的松三联抗排斥治疗.     

磁共振活体监测大鼠间充质干细胞移植治疗急性肾功能衰竭

目的 磁共振活体监测移植入急性肾功能衰竭(ARF)大鼠腹主动脉的磁标记间充质干细胞(MSCs)并检测大鼠.肾功能及肾脏病理改变.方法 磁性纳米粒子体外标记大鼠骨髓MSCs.ARF大鼠分为3组,插导管至腹主动脉,分别移植入标记细胞(10只);移植入未标记细胞(10只);灌注等量生理盐水(10只).移植后0.5 h及第1、2、5天应用MRI对移植细胞进行活体示踪,并与肾脏普鲁士蓝染色及CD68抗体染色对照.监测大鼠肾功能恢复及肾脏病理变化情况.结果 Fe2O3-PLL可有效标记大鼠MSCs.标记细胞移植后ARF大鼠.肾脏皮质区T2*WI信号强度明显下降,持续到移植后第5天.组织学分析见标记细胞分布于肾皮质肾小球内.细胞移植组肾功能优于对照组,肾损伤程度明显轻于对照组.结论 临床应用型1.5 T磁共振仪可活体监测移植入ARF大鼠腹主动脉的MSCs,移植后早期细胞分布于肾皮质肾小球内;MSCs移植后早期可促进ARF恢复.     

在肾移植中应用单J管45例

1　临床资料　1 998 0 1 / 2 0 0 3 1 2我院同种异体肾移植采用移植肾输尿管内单J管放置4 5 (男2 6 ,女1 9)例,年龄1 8～5 9岁,均为尿毒症.术后应用环孢素A、硫唑嘌呤、泼尼松等药物治疗,所有患者均证实无膀胱尿道疾患.术中采用移植肾输尿管内单J管放置,采用美国强生公司生产的7号进口硅胶管.供者与受者交叉配血试验相合,淋巴毒试验死细胞数少于1 0 % ,心脏彩超、胸片、胃镜检查证实患者无手术禁忌证,检查移植肾输尿管无畸形、结石、供血障碍等疾病.术中尿路重建采用供肾输尿管与受者膀胱吻合.根据移植肾与膀胱距离,剪去多余输尿管,将单J…     

肾小球诊断样品由光镜的冰冻切片补做电镜制样的方法

现代肾脏病学已普遍将光镜、电镜诊断作为肾小球疾病诊断的常规 ,尤其电镜检查配合临床以明确诊断十分重要。然而 ,有时因为各种原因在电镜制备的肾组织穿刺 (肾穿 )标本中找不到肾小球 ,但临床又非常需要电镜的观察结果。目前普遍采用光镜常规石蜡包埋的肾小球组织经脱蜡后改做电镜制样进行补救 ,但标本因固定和脱蜡等因素 ,效果并不太理想。我们通过摸索和比较几种补救措施 ,现介绍一种用冰冻切片的肾小球经光镜检测后再进行电镜制样的方法。1　材料和方法标本取自临床肾穿活体组织。先取一块干净纱布 ,用0 .9%生理盐水浸湿 ,穿刺的肾脏样…     

肾移植术后近期输尿管梗阻的病因分析和治疗

目的:分析肾移植术后近期内移植肾输尿管梗阻发生的原因和治疗手段.方法:总结我科1993年2月～2007年8月共250例.肾移植患者,术后1～12周内发生输尿管梗阻导致移植肾积水共8例,占3.2%,其中2例血肿压迫;2例输尿管膀胱吻合口狭窄;1例输尿管过长扭转;1例移植肾旋转致输尿管扭转;1例吻合口漏;1例精索水肿压迫.结果:除1例吻合口漏患者保守治疗外,其余7例均再次手术解除梗阻,术后病情改善,移植肾功能恢复.结论:肾移植术后近期移植肾输尿管梗阻的原因多与外科因素有关;对手术各个环节加以注意,可以减少输尿管梗阻的发生.外科手术是解除术后输尿管梗阻的主要手段.     

静脉注射三乙醇胺对Beagle犬的病理性损伤作用

目的 观察静脉注射三乙醇胺后Beagle犬的组织病理学改变及其可逆性。方法 Beagle犬12只，分为对照组和150 mg/kg剂量组，连续给药30 d和恢复4周后，分别进行大体解剖和组织病理学检查。结果 连续给药30 d，Beagle犬出现肝细胞变性、坏死，及肝窦扩张，网状纤维蛋白样物质沉积；肾脏髓质和皮髓交界处肾小管上皮细胞变性；脾脏、淋巴结和肠黏膜相关淋巴组织内淋巴滤泡数量增多，生发中心增大，脾小体帽区局灶性坏死，其中雌性动物肝脏、脾脏病变程度较雄性严重。经过4周恢复，肝脏、脾脏、肾脏、淋巴结、肠黏膜相关淋巴组织病变恢复不明显。结论 静脉注射一定剂量的三乙醇胺，可能对肝脏、肾脏、脾脏、淋巴结以及肠黏膜相关淋巴组织有一定的损伤作用。     

静脉注射三乙醇胺对Beagle犬的病理性损伤作用

目的 观察静脉注射三乙醇胺后Beagle犬的组织病理学改变及其可逆性。方法 Beagle犬12只,分为对照组和150 mg/kg剂量组,连续给药30 d和恢复4周后,分别进行大体解剖和组织病理学检查。结果 连续给药30 d,Beagle犬出现肝细胞变性、坏死,及肝窦扩张,网状纤维蛋白样物质沉积;肾脏髓质和皮髓交界处肾小管上皮细胞变性;脾脏、淋巴结和肠黏膜相关淋巴组织内淋巴滤泡数量增多,生发中心增大,脾小体帽区局灶性坏死,其中雌性动物肝脏、脾脏病变程度较雄性严重。经过4周恢复,肝脏、脾脏、肾脏、淋巴结、肠黏膜相关淋巴组织病变恢复不明显。结论 静脉注射一定剂量的三乙醇胺,可能对肝脏、肾脏、脾脏、淋巴结以及肠黏膜相关淋巴组织有一定的损伤作用。     

内毒素性休克早期猕猴肾脏超微结构的改变及酶细胞化学观察

目的：探讨内毒素休克早期猕猴肾脏的损伤.方法：11只猕猴随机分成2组：对照组5只,静脉注射生理盐水;内毒素组6只,静脉注射LPS,剂量为2.8 mg/kg.内毒素攻击后120 min,处死动物,取肾脏标本采用光镜、电镜铅离子捕获法做超微结构碱性磷酸酶（ALPase）及酸性磷酸酶（ACPase）细胞化学检查.结果：组织学观察显示肾髓质、皮质结构完整,肾小球结构完好;透射电镜可见模型组肾小球血管内皮和足突细胞损伤、血液成分渗出;肾小管上皮细胞损伤.肾实质细胞内溶酶体破坏;电镜酶细胞化学可见：模型组酸性磷酸酶活性增强,溶酶体颗粒增多.肾小管上皮细胞碱性磷酸酶活性急剧增强,在细胞器内弥散分布.对照组无明显病变.结论：在猕猴内毒素性休克早期,溶酶体增多和损伤引起了肾小球和肾小管损伤.在此同时,肾脏实质细胞内中和内毒素的作用也增强.     

5/6肾切除大鼠早期模型中p38MAPK的动态变化

目的：研究5/6肾切除大鼠模型中p38MAPK磷酸化的动态表达情况。方法：82只雄性SD大鼠分为两组：5/6肾切除模型组72只,假手术对照组10只。模型组造模完成后,分别于肾切除早期（术后1/2h、1h、3h、6h、12h、1d、2d、4d）相应时间点处死,每组9只,假手术组于术后12h处死,称量各组体重及残余肾重,计算肥大指数;下腔静脉取血留取血清测定血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）;以Western blotting免疫印迹法检测肾皮质磷酸化p38MAPK活性的表达情况;以病理光镜和电镜观察肾小球、肾小管及肾间质组织形态学及超微结构的变化。结果：模型组与对照组相比,肾脏呈代偿性肥大,肥大指数增高（P〈0.05）,Scr和BUN升高（P均〈0.01）。免疫印迹法显示5/6肾切除术后1/2h、1h、3h、6h、12h磷酸化p38信号呈递增趋势,尤以12h信号最强,之后信号减弱,2d时几乎不可见,4d有较弱的信号,假手术组未见明显信号。光镜下,发现肾小球有轻度系膜细胞增生,基质增宽不明显,肾小管偶有轻度变性,间质偶有炎性细胞浸润。电镜下,偶见足突局灶融合。结论：5/6肾切除大鼠在造模完成后12h时磷酸化p38MAPK表达最强。     

微球栓塞剂对Beagle犬肾动脉栓塞的病理学观察

目的采用微球栓塞剂建立犬肾动脉栓塞模型,评价对犬单侧肾动脉栓塞效果及局部组织观察。方法实验动物为8条beagle犬,试验分为栓塞后即刻、4周、12周、26周四组,每组2只,选择自身对照,分别为微球栓塞组和正常对照组。首先利用微球栓塞剂全部进行左肾动脉栓塞,分别于栓塞后即刻、4周、12周、26周肾动脉造影与DSA复查肾脏栓塞后变化,随后处死实验动物,对肾脏进行病理组织学观察。结果肉眼大体病理观察:被栓塞肾脏的大小与对侧肾脏相比较,栓塞后4周、12周、26周的肾脏逐渐变小,随着被栓塞时间的延长,变小的程度越明显;被栓塞肾脏的颜色变浅、不均匀;被栓塞肾脏的表面逐渐不光滑、凹凸不平,肾被膜不易分离。光镜观察表现:栓塞后4周、12周、26周;弓状动脉小分支内仍可见微球充填,动脉壁呈玻璃样变,动脉周围纤维化;随着被栓塞时间的延长,早期肾组织可见多种退行性变化如萎缩、变性、陈旧性肾梗死表现;后期可见肾组织的多种进行性变化如肾小管再生、肉芽组织形成及改建等病理变化。但是,栓塞侧肾脏仍可见近乎正常的肾小球、肾小管结构。结论微球栓塞剂对犬单侧肾动脉具有明确的栓塞效果。     

常染色体显性多囊肾病Han:SPRD大鼠肾脏病理观察及其意义

目的:观察常染色体显性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease, ADPKD)的Han:SPRD大鼠模型的肾脏病理变化,为揭示ADPKD发病机制提供证据与线索.方法:选取雄性2周龄Han:SPRD纯合大鼠(cy/cy)和3个月龄杂合大鼠(cy/ ),取其肾组织进行H-E染色、PAS染色、Masson染色以及透射电镜观察.结果:光镜下发现Han:SPRD大鼠肾脏体积增大;囊肿衬里上皮细胞增殖显著;小管基膜增厚,可见灶性小管萎缩和较多蛋白管型;肾小球数目减少、体积缩小,渐趋废弃,呈明显缺血样改变,血管壁增厚.透射电镜可见肾小球毛细血管腔阻塞,基底膜薄厚不均,部分断裂;小管上皮细胞胞质脱落,微绒毛紊乱、部分缺如;细胞外间质成分稀少;囊肿衬里上皮细胞内可见大量线粒体,高尔基体、核糖体丰富.结论:Han:SPRD大鼠肾脏组织学和超微结构的改变可解释多囊肾病的部分临床表现;并观察到Han:SPRD大鼠肾小管上皮细胞微绒毛异常,为揭示疾病的发病机制提供了线索.     

Caspase-3在缺氧和内毒素致肾小管损伤的肾组织表达

目的 为了建立缺氧和内毒素致肾小管损伤模型,观察Caspase-3在肾组织的表达,以探讨其肾小管的损伤机制.方法 以SD大鼠为实验动物,予麻醉及机械通气,同时予阴茎静脉注射伤寒杆菌脂多糖,吸入氧浓度从21%降至5%的氧,通气至180rain结束.取肾组织作HE染色病理切片检查及用Caspase-3免疫组化S-P法染色观察模型肾组织的病理改变及肾组织中Caspase-3的表达.结果 (1)病理组织学所见:大部分肾小球充血,内皮及系膜细胞轻度肿胀,肾近曲小管上皮明显肿胀,呈浊样改变;大部分远曲小管镜下未见明显改变,部分上皮细胞肿胀,浊样变性在;整个肾间质呈充血现象.无炎性细胞浸润,(2)免疫组化结果:Caspase-3染色位于胞浆,大部分远曲小管上皮呈Caspase-3阳性反应,以外髓远曲小管为明显;近曲小管偶见Caspase-3阳性细胞,肾小球Caspase-3染色阴性.结论 (1)缺氧及内毒素可致肾小管损伤,且以近曲小管为著,远曲小管及内髓部损伤相对较轻,(2)Caspase-3在远曲小管明显表达,提示在缺氧及内毒素致肾小管损伤中,同时存在细胞变性坏死及细胞凋亡,近曲小管以细胞变性坏死为著,而远曲小管细胞凋亡明显.

Abstract：

Objectives To observe the expression of caspase-3 in the kidney of a rat model of renal tubular damage induced by endotoxin and hypoxia and explore the mechanism of renal tubular damage. Methods Ten rats were anesthetized with artificial ventilation and received 2 mg/kg lipopolysaccharide (LPS) injection through the penile vein. The FiO_2 was reduced 90 min later from 21% to 5%, and the ventilation was withdrawn after another 90 min. Immediately after ventilation withdrawal, the kidney of the rats were obtained for immunocytochemistry and HE staining. Results HE staining showed obvious hyperemia in most of the glomeruli, mild swelling of the endothelial and mesangial cells, severe swelling and turbidity in the proximal tubular epithelial cells without obvious changes in most of the distal proximal tubules. A small portion of the interstitial epithelial cells showed swelling and turbidity, and the entire renal interstitium appeared hyperemic but without inflammatory cell infiltration. Immunocytochemistry detected the presence of caspase-3 in the cytoplasm, and most of the distal renal tubule cells were positive for caspase-3, while only occasional cells showed caspase-3 positivity in the proximal tubular epithelial cells. Most of the proximal tubular epithelial and glomerulus cells were negative for caspase-3. Conclusions Endotoxin and hyoxia can induce renal damage, particularly in the proximal renal tubule cells, and the distal tubular epithelial cells sustain relatively light damage. Caspase-3 is strongly expressed in the distal renal tubular cells, suggesting that in renal tubular damage induced by endotoxin and hypoxia, cell degeneration, necrosis and apoptosis coexist in the tubular epithelial cells; degeneration and necrosis occur primarily in the proximal tubular epithelial cells, while apoptosis is obvious in the distal renal cells.     

利用皮肤干细胞的横向分化重建角膜上皮的初步研究

目的 观察皮肤干细胞在角膜基质上的分化发育情况,探讨皮肤干细胞重建角膜上皮的可能性。方法 将体外分离培养的1～4代人和兔皮肤干细胞种植在兔角膜基质上,在体外和体内观察皮肤干细胞的分化发育情况。实验标本作HE染色及用人上皮细胞角蛋白K19单克隆抗体和角膜上皮细胞特异性标志蛋白K3／K12抗体AE5进行免疫组织化学鉴定。结果 皮肤干细胞在角膜基质的调控下可以横向分化发育成表达角膜上皮细胞特异性标志蛋白K3／K12的细胞,呈现AE5抗体阳性;并可形成类似角膜上皮外观透明的多层细胞结构。结论 利用皮肤干细胞有可能重建角膜上皮,进行自体生物角膜的构建。     

雷公藤甲素亚慢性中毒对昆明种小鼠肾脏及睾丸的影响

为了观察雷公藤甲素肾脏及睾丸的毒性影响,80只昆明小鼠随机分成3个实验组和1个对照组。60d内3个实验组的小鼠每48h腹腔注射雷公藤甲素一次（A组0.025mg/kg,B组0.05mg/kg,C组0.1mg/kg）。结果显示肾脏病变除肾小管上皮细胞变性、坏死外,肾小管管腔内出现蛋白管型,最后处死的所有实验组动物的90％以上肾小球囊壁壁层上皮不同程度地增生,BUN检测结果表明,B组和C组均显著性升高（P<0.05）,提示有发展成肾功能衰竭的趋势。说明甲素对小鼠的肾损害可能是亚慢性中毒者的主要死亡原因之一。睾丸病变明显,表现为睾丸萎缩,脏器系数降低,各级生精细胞变性、坏死,数量减少,其中以精子、精子细胞和次级精母细胞最敏感,实验结果还表明甲素对睾丸具有蓄积毒性。提示雷公藤在抗生育作用中,甲素起着非常重要的作用。     

犬慢性颈脊髓压迫症减压术后的高压氧治疗

目的：探讨高压氧对犬慢性颈脊髓压迫症减压术后的治疗作用。方法：应用神经功能评分、电生理测定、微血管密度测量和组织病理学方法,观察模型动物经减压和高压氧治疗前后相关指标的变化。结果：高压氧治疗组（治疗组）神经功能评分比减压前有显提高（P＜0．05）,单纯减压组（对照组）与减压前及治疗组相比均无显差异;两组皮质体感诱发电位（CSEP）潜伏期比减压前均有明显恢复,但治疗组显优于对照组（P＜0．05）;光镜和电镜表现,压迫节段主要表现为神经元缺失和变性,轴索和髓鞘变性在重度压迫时明显,经高压氧治疗后,细胞、细胞器、髓鞘等结构异常程度明显减轻;压迫节段微血管密度治疗组显高于对照组（P＜0．05J）;压迫平面上下节段,两组未见明显差异。结论：高压氧治疗可缓解犬慢性颈脊髓压迫症减压术后神经症状和体征,促进脊髓传导功能恢复和伤部微血管增生,挽救濒死细胞,阻止病理损害进程。