日本医蛭抗凝活性研究

目的:研究分析人工养殖条件下日本医蛭活体、干品的抗凝活性,为日本医蛭合理入药提供参考。方法:根据中国药典规定,采用凝血酶滴定法对不同处理的日本医蛭样品进行测试。结果:发现日本医蛭抗凝活性依次为超低温冻干品、鲜品、晒干品。结论:保证日本医蛭最佳抗凝活性的方法为超低温冻干。     

日本医蛭的研究近况

日本医蛭为水蛭的一种,属医蛭科高度特化的环节动物。中国药典（９５年版）收入蚂蝗Ｗｈｉｔｍａｎｉａｐｉｇｒａｗｈｉｔｍａｎ、日本医蛭Ｈｉｒｕｄｏ　ｎｉｐ－ｐｏｎｉｃａｗｈｉｔｍａｎ、柳叶蚂蝗Ｗｈａｃｒａｎｗｌａｔａ三种。水蛭始载于《神农本草经》味碱平,逐恶血、瘀血、破血,利水道。其功能：破血逐瘀,通经消。其主治：血瘀经闭,瘕痞块,跌打损伤。近二十年来国外学者对日本医蛭进行了大量的研究工作。尤其对水蛭素的研究更加深入,包括化学结构、药效学、药代动力学、临床试验及毒副作用等方面。近年来,国内学者对日本…     

日本医蛭的研究进展

日本医蛭是中国药典收载的唯一吸食动物血液的水蛭药材品种,具有极强的抗凝血酶活性和抗血小板聚集作用。现阶段对日本医蛭的研究十分匮乏,不利于日本医蛭资源繁育及开发利用。本研究综合国内外日本医蛭的研究现状进行了分析,并阐述了日本医蛭产业发展存在的问题,旨在为更好地保护利用中药材资源提供数据和参考。     

日本医蛭防逃试验研究

本文研究了人工饲养日本医蛭过程中防止医蛭逃遁,减少死亡率,提高产量的物理和化学方法。结果表明,用尼龙过滤筛网(80—100目)粘结于饲养箱上及香柏油、香茅醛涂抹于水族箱四壁皆可防止医蛭外逃,其中尼龙细筛网粘结于塑料饲养盒四周效果最佳。     

日本医蛭快速生长繁育的研究

提高环境温度以打破日本医蛭的冬眠对医水蛭的取食无影响，对增加其体重有促进作用，但是对其繁殖有明显的抑制作用，因此，应该根据情况采用打破冬眠的办法，加速医蛭的生长。     

日本医蛭适宜饲养密度的研究

通过对不同放养密度的日本医蛭饲养试验表明，日本医蛭适宜的养殖密度区间为80—120头／m^2，饲料系数3．8-4．8。     

日本医蛭微量元素分析

本文对《中国药典》收载品种,含有世界上最强的抗凝血活性物的日本医蛭进行了人工及野生药材微量元素的测定。测定结果表明,人工及野生药材体内所含微量元素一致,均含有人体必需的元素。这些元素对增强血液循环、抗凝血等具有很大的作用。     

野生日本医蛭与人工饲养医蛭氨基酸含量的对比研究

采用日产日立835—50型氨基酸自动分析仪，对野生日本医蛭和人工饲养医蛭的氨基酸测定结果表明，两样品中所含的氨基酸种类相同，氨基酸总量和人体必需要氨基酸含量均为人工饲养医蛭略高于野生医蛭，与别的动物药相比，医蛭体内氨基酸含量明显高于别的动物药。     

土鳖虫与日本医蛭提取物抗凝血酶活性的比较研究

目的研究土鳖虫提取物的抗凝血作用,并与日本医蛭抗凝活性做了比较,为土鳖虫的新药开发提供实验依据。方法采用凝血酶直接滴定法。结果鲜(干)土鳖虫提取物的抗凝血活性均很强,与日本医蛭相当。但土鳖虫和日本医蛭抗凝血酶活性成分对热稳定性有差异。结论土鳖虫中含有直接作用于凝血酶的成分,但不同于日本医蛭的抗凝血酶成分。     

水蛭不同提取物抗凝活性的体外实验研究

目的:研究水蛭不同提取物的抗凝活性,为水蛭的新药开发提供实验依据.方法:Wistar大鼠腹静脉取血,应用血凝仪体外测定凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和活化的部分凝血活酶时间(APTT).结果:水蛭的乙酸乙酯部分能使大鼠的PT、TT、APTT显著延长.正己烷部分、水溶液部分能使大鼠的PT显著延长,正丁醇部分能使大鼠的APTT显著延长.结论:水蛭各提取物均有抗凝活性,水蛭中存在不同于水蛭素的新的抗凝血成分.     

日本医蛭血餐后消化道生理特性和消化周期的初步研究

目的：研究日本医蛭吸食血液后消化道生理特性和食物消化周期,探讨其长期消化食物机制。方法：测定日本医蛭进食后0 h、12 h、24 h、10 d、30 d、90 d和150 d体重、消化道内容物中无机离子、蛋白质和葡萄糖浓度以及消化酶比活力变化。结果：日本医蛭进食后体重先增加后降低;消化道内容物红细胞进食24 h后出现破裂,10 d后完全消失;无机离子浓度进食后0 h时最高,24 h内降低到稳定水平,蛋白质和葡萄糖浓度缓慢增高,在90 d达到稳定;消化道蛋白酶和淀粉酶比活力先增高后降低,30～90 d达到最高,脂肪酶比活力无明显变化趋势。结论：日本医蛭吸食血液后主要通过降低Na⁺、Cl^-等无机离子浓度来降低渗透压引起溶血,释放营养物质,但由于消化酶活性低,消化周期可达90 d。     

PSB净化日本医蛭养殖水体的研究

采用PSB微生态制剂处理日本医蛭养殖水体的研究结果表明：施用PSB能明显降低日本医蛭养殖水体中的COD、NH4＋－N、底质硫化物、底质有机物,增加水体中的溶氧,净化养殖水体。     

基于三代高通量测序技术的不同养殖环境下日本医蛭微生物多样性研究

目的：研究不同水源养殖的日本医蛭Hirudo nipponica Whitman肌肉、肠道组织样本的细菌群落结构,分析除氯自来水养殖的可行性及日本医蛭相关的重要有益微生物。方法：分别在地下水和除氯自来水的循环养殖系统中进行日本医蛭养殖,采用PacBio三代高通量测序技术对不同水源养殖水蛭的肌肉和肠道组织样品进行菌种初步分类鉴定及微生物群落组成分析。结果：与地下水养殖的水蛭相比,除氯自来水养殖的水蛭样本表现出更简单的微生物群落结构,且黏液菌属(Mucinivorans)、梭杆菌属(Fusobacterium)、拟杆菌属(Bacteroides)等有潜在致病风险的菌属相对丰度明显低于地下水养殖组。结论：采用除氯自来水开展水蛭养殖工作是可行的。与日本医蛭相关的共生菌(Aeromonas和Rikenella)及有益微生物在水蛭的生长发育过程中起着重要的作用,提示可以利用环境或饵料中的有益微生物来提高日本医蛭的产量。     

基于蛋白免疫印迹的水蛭抗凝活性成分研究

目的：建立Native-PAGE结合Western blot检测水蛭活性多肽与凝血酶相互作用产物的方法,探究水蛭有效抗凝成分。方法：本研究分别提取宽体金线蛭、日本医蛭两种水蛭虫体总蛋白及日本医蛭唾液蛋白,用凝血酶滴定法测定其抗凝血酶活性,Western blot检测凝血酶-活性多肽复合体。结果：研究发现两种水蛭Native-PAGE-WB均检测到凝血酶-活性多肽复合体,且SDS-PAGE-WB检测到复合体变性后产生凝血酶条带。结论：建立的Native-PAGE-WB法可有效检出水蛭活性多肽和凝血酶相互作用产物,且发现同水蛭素类似,宽体金线蛭活性抗凝多肽与凝血酶在体外也能形成稳定的蛋白复合体。     

水提取法和仿生提取法研究菲牛蛭不同炮制品的体外抗凝活性

目的:采取不同的提取方法研究菲牛蛭炮制前后抗凝活性变化。方法:分别采用水提取法及模拟胃肠道环境的仿生提取法提取菲牛蛭活体冻干品、清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的活性成分,测定活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性4个凝血指标,并采用Lorry法测定其蛋白含量,综合评价2种提取方法下的菲牛蛭及其炮制品的抗凝活性。结果:无论是水提取法,还是仿生提取法,APTT、PT、TT均显示炮制后抗凝活性降低,抗凝活性顺序为活体冻干品>清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品,此结果与抗凝血酶活性及蛋白含量顺序一致。结论:高温炮制方法会降低菲牛蛭的抗凝活性。     

生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性测定的研究

 目的 将生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性的测定,探讨反映水蛭生物活性的质量控制方法。方法 采用肝素钠作为对照品,选择活化部分凝血酶时间值作为抗凝活性评价依据,对宽体金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭、棒纹牛蛭的抗凝活性进行测定,测定结果分别用标准曲线法和生物检定统计法计算。结果 4种水蛭活性部分凝血酶时间法的量效关系曲线与肝素的量效关系曲线类似,突跃范围呈平行关系,上述特点符合生物检定的要求,以肝素钠作为标准品,采用生物检定技术活性部分凝血酶时间法测定水蛭等的抗凝活性是可行的。结论 活化部分凝血酶时间值可以全面反映水蛭的抗凝血作用,测定结果对临床使用更具指导意义。生物检定技术应用于中药质量评价,是对现有中药质量标准控制方法良好的补充。     

宽体金线蛭不同炮制品抗炎作用及使用方法的药理研究

比较了宽体金线蛭3种炮制品,对小鼠急性炎症模型的抗炎作用、免疫吞噬能力。以体内、外抗凝及体内抗栓作用为指标,比较了供试品不同使用方法的活血作用,为全面认识宽体金线蛭的药理作用及合理使用方法,提供了初步实验依据。     

血蛭康胶囊提取工艺优化及其体外抗凝、溶栓活性研究

目的 优化血蛭康胶囊提取工艺,并评价其体外抗凝、溶栓活性。方法 在单因素试验基础上,以渗漉体积流量、乙醇体积分数、浸泡时间、乙醇用量为影响因素,阿魏酸提取率、干膏得率的综合评分为评价指标,正交试验优化提取工艺。采用凝血酶滴定法考察体外抗凝活性,血凝块溶解法考察体外溶栓活性。结果 最佳条件为4倍量70%乙醇浸泡24 h,渗漉体积流量2 mL/min,综合评分为108.49分。胶囊体外抗凝活性值为240 U/g。与阴性组比较,血蛭康胶囊中、高剂量组小鼠血凝块溶解率升高(P<0.05,P<0.01)。结论 该方法稳定可行,可用于提取体外抗凝、溶栓活性良好的血蛭康胶囊。     

蜈蚣不同部位抗凝活性的研究

目的:比较蜈蚣不同部位提取方法抗凝活性的强弱。方法:用凝血酶时间为指标测定冷浸法和水提醇沉法对蜈蚣不同部位的抗凝血活性。结果:水提醇沉法蜈蚣凝血酶时间长于冷浸法,两种提取方法中,各部位的凝血时间比较,顺序是蜈蚣身>蜈蚣全体>蜈蚣尾。结论:蜈蚣抗凝活性成分提取方法中水提醇沉优于冷浸法,抗凝活性成分主要集中于蜈蚣身。     

新疆紫草不同极性萃取部位体外抗氧化活性研究

目的:研究新疆紫草不同极性萃取部位体外抗氧化活性。方法:采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH·)自由基清除法、超氧阴离子(O2-·)自由基清除法、羟基(·OH)自由基清除法,测定新疆紫草不同极性萃取物的体外抗氧化活性,并与阳性对照进行比较与评价。结果:不同极性萃取部位对DPPH·、羟基(·OH)自由基及超氧阴离子(O2-·)自由基均有消除能力并呈明显的量效关系,其中乙酸乙酯层、水层、正丁醇层具有较好的抗氧化活性。乙酸乙酯层浓度为1.2 mg/m L以上时,对DPPH·的清除能力超过对照品维生素C。结论:新疆紫草提取物不同极性萃取部位均具有一定的抗氧化活性。其中极性溶剂层抗氧化能力显著。本研究为筛选新疆紫草抗氧化作用部位提供了理论依据。