大鼠孤束核内儿茶酚胺能神经元接受面口部深层组织伤害性信息并向臂旁核投射的形态学研究

为了探讨孤束核(NTS)内儿茶酚胺能神经元是否与面口部深层组织的伤害性信息有关并向臂旁核投射,本研究运用荧光金(FG))逆行追踪,福尔马林刺激咬肌和免疫荧光技术相结合的三重标记方法,在荧光显微镜下观察了大鼠NTS内酪氨酸羟化酶(TH)阳性并表达FOS蛋白的神经元向臂旁核的投射。将2％FG注入一侧臂旁外侧核后,向同侧咬肌内注射2％福尔马林溶液,并行TH和FOS免疫荧光组织化学染色,荧光显微镜下在同侧NTS内的连合、内侧、中间内侧和腹侧亚核中可见重叠分布的FG、FOS、TH单标神经元以及FG／TH、FOS／TH、FOS／FG双标和FG／FOS／TH三标神经元。FG／TH和FOS／TH双标神经元分别占同侧NTS内TH阳性神经元总数的28.6％和34.8％;FOS／FG双标神经元占同侧FG逆标神经元总数的26.4％;FG／FOS／TH三标神经元分别占同侧TH阳性神经元和FG逆标神经元总数的23.7％和8.4％。本结果提示大鼠NTS中的部分儿茶酚胺能神经元接受面口部深层组织的伤害性信息并向臂旁外侧核传递。     

小鼠中缝背核至丘脑室旁核参与伤害性信息的形态学研究

目的:观察中缝背核(DR)内5-羟色胺(5-HT)能神经元向丘脑室旁核(PVT)内速激肽-1(TAC1)免疫阳性神经元的投射,并观察该通路在伤害性刺激下的激活情况。方法:将逆行示踪剂荧光金(FG)注入小鼠PVT,观察FG逆标神经元在DR内的分布,同时利用免疫组织荧光染色技术观察DR内5-HT能神经元与FG逆标神经元之间的共存情况;继而选用TAC1-ires-Cre小鼠结合RV逆标病毒,在DR观察向PVT内TAC1阳性神经元发出投射的突触前神经元的分布;最后利用TAC1-ires-Cre与Rosa26:CAG-LSL-tdTomato(Ai9)杂交小鼠制备坐骨神经分支损伤(SNI)模型,观察PVT内被激活的TAC1阳性神经元与5-HT能神经终末之间的关系。结果:(1)将FG注入PVT后,在DR的吻、中、尾段均可见FG逆标神经元,其分布以中段为主,吻、尾段数量相对较少,并且在DR内观察到5-HT和FG的双标神经元。(2)向TAC1-ires-Cre小鼠的PVT内注射RV逆行跨突触三联病毒后,在DR内也可见RV标记的突触前神经元,主要分布于DR中段。(3)SNI模型下TAC1-Cre::Ai...     

大鼠脊髓背角向丘脑和外侧臂旁核的神经降压素能投射

本研究应用荧光金(FG)逆行追踪结合神经降压素(NT)免疫荧光组织化学染色的双标记技术,观察了大鼠脊髓背角向丘脑(TH)和外侧臂旁核(LPb)的NT能投射。将FG注入一侧TH或LPb后,FG逆标神经元主要见于脊髓背角的I层;NT阳性神经元主要分布于脊髓背角的I层、II层外侧部及II层内侧部与III层交界处;脊髓背角I层内可观察到FG逆标记并呈NT阳性的双标记神经元。上述结果表明脊髓背角I层的NT阳性神经元向TH和LPb投射,提示脊髓背角I层内的NT阳性神经元可能向TH和LPb传递伤害性信息。     

大鼠延髓和脊髓背角的PKCγ阳性神经元向丘脑胶状核投射

目的 :观察大鼠延髓和脊髓背角内蛋白激酶Cγ亚单位 (PKCγ)阳性神经元向丘脑胶状核的投射。方法 :荧光金 (FG)逆行追踪与PKCγ免疫荧光组织化学染色相结合的双标记技术。结果 :PKCγ阳性神经元主要分布于大鼠延髓和脊髓背角的II层内侧部及II、III层交界处 :将FG注入丘脑胶状核后 ,在延髓背角的I、III层和脊髓背角的I、III、V层及外侧脊核内可见FG标记神经元 ;延髓和脊髓背角I层的部分FG标记神经元呈PKCγ阳性。结论 :大鼠延髓和脊髓背角的PKCγ阳性神经元向丘脑胶状核投射 ,它们可能参与将伤害性刺激信息向丘脑的传递。     

大鼠延髓和脊髓背角的PKCγ阳性神经元向中脑导水管周围灰质的投射

目的　观察延髓和脊髓背角内蛋白激酶Cγ亚单位 (PKCγ)样阳性神经元向中脑导水管周围灰质(PAG)的投射。　方法　荧光金 (FG)逆行追踪与PKCγ的免疫荧光组织化学染色相结合的双标记技术。　结果　PKCγ样阳性神经元主要分布于延髓和脊髓背角的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ层及脊髓的外侧脊核 ;将FG注入PAG后 ,在延髓和脊髓背角的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ层及脊髓的外侧脊核内可见FG标记神经元 ;部分FG标记神经元呈PKCγ样阳性 ,FG PKCγ双标神经元也主要见于延髓和脊髓背角的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ层及脊髓的外侧脊核。　结论　延髓和脊髓背角的PKCγ阳性神经元可能参与将伤害性刺激信息向PAG的传递。     

大鼠三叉神经脊束间质核内接受内脏伤害性信息的含CB神经元向孤束核的投射

目的 探讨大鼠三叉神经脊束间质核(INV)内接受内脏伤害性信息的含calbindin D-28K(CB)神经元与孤束核(NTS)的投射联系。方法 用福尔马林刺激上消化道，应用荧光金(FG)逆行束路追踪结合Fos和CB的免疫荧光组织化学三重标记法。结果 INV的背侧边缘旁核(PaMd)和三叉旁核(PaV)内可见到大量FG逆标细胞，以注射FG的同侧为主。大部分FG逆标细胞(约71.2％)为CB免疫反应阳性。部分FG和CB双标记神经元(约31．5％)同时呈Fos免疫反应阳性的三重标记。结论 INV内部分接受内脏伤害性刺激的CB神经元可直接投射至NTS，含CB的神经元在内脏伤害性信息经INV向NTS的传导通路中，可能发挥重要作用.     

大鼠延髓背角Ⅲ层深部内GFP基因重组病毒标记神经元的形态学特点

目的　观察大鼠延髓背角 (MDH)Ⅲ层深部内绿色荧光蛋白 (GFP)基因重组病毒标记神经元的形态学特点。　方法　将GFP基因重组病毒注入Ⅲ层深部后感染并标记神经元 ,标记结果用免疫组织化学染色显示 ,重塑后观察神经元形态。　结果　在远离注射区的MDHⅢ层深部可见少量单个GFP标记的神经元。根据GFP标记神经元的形态学特征 ,尤其是其轴突及其分支的特点 ,可将标记神经元分为投射神经元和中间神经元。投射神经元的轴突分支向Ⅲ层浅部、Ⅱ层和 或延髓网状结构延伸。中间神经元的轴突分支较密集且主要集中于Ⅲ层。　结论　根据GFP标记神经元的轴突及其分支特点 ,可将MDHⅢ层深部的神经元分为投射神经元和中间神经元 ;GFP基因重组病毒标记技术是研究神经元形态的有效手段     

大鼠延髓背角内GABA或甘氨酸免疫阳性终末与Fos阳性投射神经元的联系

目的　观察大鼠延髓背角 (MDH)内向丘脑或臂旁核投射的Fos阳性神经元与γ 氨基丁酸 (GABA)或甘氨酸 (Gly)阳性终末的联系。　方法　四甲基罗达明 (TMR)逆行追踪结合TMR、Fos、GABA或Gly的免疫荧光三重染色技术。　结果　GABA或Gly阳性终末主要分布于延髓背角浅层 (Ⅰ、Ⅱ层 ) ;给予面口部痛刺激后 ,Fos阳性神经元也主要分布于浅层 ;TMR注入一侧丘脑或臂旁核 ,逆标神经元分别主要见于对侧或同侧MDH的浅层 ;部分逆标神经元呈Fos阳性 ;GABA或Gly阳性终末与Fos阳性投射神经元形成密切接触。　结论　MDH内感受面口部伤害性刺激信息的部分神经元向丘脑或臂旁核投射 ,GABA或Gly可能对这些伤害性感受神经元发挥抑制作用。     

腹侧呼吸组吻端μ型阿片受体阳性神经元向颈髓投射的形态学研究

目的:观察大鼠腹侧呼吸组吻端(rostral ventral respiratory group,rVRG)μ型阿片受体(MOR)的表达及MOR阳性神经元向颈髓的投射。方法:采用荧光金(FG)逆行追踪结合免疫组织化学染色的方法观察MOR在rVRG的分布,以及rVRG内MOR阳性神经元向颈髓的投射。结果:rVRG内存在中等密度的MOR阳性神经元;经大鼠颈髓第5节段前角注入FG后,可在rVRG内观察到逆标神经元。统计结果显示,rVRG内大多数逆标神经元呈MOR阳性。结论:rVRG内存在MOR阳性神经元,部分MOR阳性神经元可发出下行投射纤维至颈5前角,表明MOR阳性神经元可能在对呼吸节律的调控中发挥重要作用。     

双荧光逆向追踪法研究大鼠视网膜节细胞的中枢投射

目的：观察向上丘投射的大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)在视网膜内的分布、密度及细胞类型上的差异。方法：将 DiI 与荧光金(FG)注射入 SD 大鼠的同侧和(或)对侧上丘,不同时相荧光显微镜下观察两种荧光标记 RGCs 的分布情况。结果：视网膜与视神经内均可见荧光标记;视网膜内标记 RGCs 的数目随时间延长略有增加。DiI 与 FG 的标记效率无明显差异;RGCs 大多数为对侧投射;视网膜颞背侧区域可见双侧投射细胞;视网膜颞腹侧周边区集中存在同侧投射细胞,多数胞体较大;视网膜其它区域可见零星同侧投射细胞。结论：DiI 与 FG 可高效率逆行标记 RGCs 及部分突起;SD 大鼠视网膜内并存着向对侧、双侧及同侧脑区投射的 RGCs,后二者数量较少,分布局限;同侧投射以大胞体细胞为多。     

大鼠下丘脑内神经激肽B受体阳性神经元向孤束核的直接投射

为了研究神经激可能的升压途径，用免疫荧光组织化学方法结合荧光金逆行追踪技术 下丘脑内神经激肽Ｂ受体阳性神经元向孤束核的投射。     

卵圆核内CRF和NT免疫反应阳性神经元向中央杏仁核投射——荧光金逆行追踪结合免疫荧光双标记法研究

用雄性Sp:ague-Dawley大鼠14只,分两组。第一组6只,将荧光金(FG)注入杏仁复合体,检查终纹床核群范围内逆行标记细胞的分布。结果发现,只有在FG注射到中央杏仁核(Ce)的动物,卵圆核(Ov)内才出现较多的标记细胞。第二组8只,选FG注入Ce且Ov有较多标记细胞的切片,分别用抗促皮质激素释放因子(Anti—CRF)和抗神经降压素(Anti—NT)兔血清孵育,冉用FITC—IgG(羊抗兔)血清温育,结果发现,Ov内的FG标记细胞中,部分亦呈现CRF或NT免疫反应阳性。结果提示,Ov内有CRF和NT能神经元投射到Ce。     

Peptide 19-containing neurons in the medullary dorsal horn, subnuclei interpolaris and oralis, and nucleus principalis of the rat

Peptide 19 (PEP 19) is a 7.6 kDa polypeptide which can bind to calmodulin and inhibit calcium-calmodulin signaling. In this study, PEP 19-immunoreactivity (ir) was examined in the rat trigeminal sensory nuclei. Numerous PEP 19-immunoreactive (ir) neurons were detected in the medullary dorsal horn (MDH) and rostral parts of the trigeminal sensory nuclei (subnuclei interpolaris and oralis, and nucleus principalis). The mean numbers ± S.D. per section of PEP 19-ir neurons were 104.2 ± 30.4 in the MDH, 137.8 ± 39.5 in the subnucleus interpolaris, 129.2 ± 46.9 in the subnucleus oralis and 157.2 ± 34.1 in the nucleus principalis. In the MDH, small to medium-sized PEP 19-ir neurons were abundant within superficial laminae. PEP 19-ir neurons with various cell body sizes were also distributed in the rostral parts of the trigeminal sensory nuclei. A double immunofluorescence analysis also demonstrated that many PEP 19-ir neurons co-expressed parvalbumin (PV)-ir in the MDH (9.0%), subnucleus oralis (7.7%) and nucleus principalis (19.7%). In the subnucleus interpolaris, such neurons were relatively rare (1.7%). PEP 19-ir neurons were mostly devoid of calbindin D-28k. In addition, a retrograde tracing method revealed that a substantial number of PEP 19-ir neurons projected to the thalamus. PV-ir was common in thalamus-projecting PEP 19-ir neurons. These findings suggest that PEP 19-ir neurons in the MDH may have a function in modulation of nociceptive and thermo-receptive signaling. It is also likely that PEP 19-ir neurons in rostral parts of the trigeminal sensory nuclei are related to transduction of mechano-receptive information from facial regions to the thalamus.     

5-羟色胺在大鼠腰骶髓后连合核和中间带外侧核参与盆腔内脏炎性痛调控的形态学研究

本研究运用荧光金(FG)逆行束路追踪与5-HT1A受体免疫荧光组织化学染色技术相结合,观察了大鼠腰骶髓后连合核(DCN)和中间带外侧核(IML)内感受盆腔内脏伤害性信息并向外侧臂旁核(LPB)发出投射的神经元呈5-HT1A受体免疫反应阳性。将FG注入一侧LPB后,可在腰骶节段(L6-S2)观察到大量的FG逆标神经元,这些FG逆标神经元主要集中于DCN和IML内,以同侧为主;5%福尔马林注入大鼠结肠后,Fos蛋白阳性神经元主要分布于腰骶髓DCN和IML,以同侧为主,在同侧脊髓背角I层、II层和深层也有少量的分布。另外,在腰骶髓DCN和IML内,还可观察到大量5-HT1A受体阳性的神经元胞体、纤维和终末,同时有部分Fos蛋白阳性的FG逆标神经元呈5-HT1A受体阳性。上述结果提示,大鼠腰骶髓DCN和IML内的5-HT能终末可能对盆腔内脏伤害性信息的传递发挥调控作用。     

与坐骨神经和盆神经对应的后根节中CGRP、SP、NOS样阳性神经元分布特点分析——荧光金逆标和荧光免疫组化结合的研究

为了探索大鼠坐骨神经（躯体性）和盆神经（内脏性）内与传递痛信号有关的初级传入神经元在后根节内的分布特点,本研究采用荧光金逆行追踪与免疫荧光组化技术相结合的方法,对ＣＧＲＰ能、ＳＰ 能和ＮＯＳ样神经元在相应的后根节内（坐骨神经,Ｌ４～Ｌ６ ;盆神经,Ｌ６～Ｓ１）的分布状况进行了分析。结果表明：（１）坐骨神经和盆神经初级传入神经元中有相当数量的ＣＧＲＰ和ＳＰ样阳性细胞,与这二者相比,ＮＯＳ样细胞数量稀少;（２）盆神经初级传入神经元中ＣＧＲＰ／ＦＧ、ＳＰ／ＦＧ、ＮＯＳ／ＦＧ 双标细胞的比率高于坐骨神经,而其前两种双标细胞与各该活性物质单标细胞的比率则低于坐骨神经;（３）三种物质与ＦＧ 的双标神经元以小型为主,少有中型细胞。因为既往的研究证明,分布有大量的ＣＧＲＰ、ＳＰ、ＮＯＳ样终末的骶髓后连合核（ＳＤＣＮ）接受盆腔脏器伤害性信息传入,并且ＣＧＲＰ、ＳＰ都以外周来源为主。故本文结果进一步核实了ＳＤＣＮ 区接受来自外周的ＣＧＲＰ、ＳＰ投射,且确为经盆神经传入的细纤维。     

大鼠脑干5-羟色胺能和儿茶酚胺能神经元向孤束核的投射——荧光金标记结合免疫荧光技术研究

应用荧光金逆行追踪和免疫荧光技术相结合的方法,对投射至大鼠孤束核的５－羟色胺能和儿茶酚胺能神经纤维的脑干来源进行了研究。结果证明,将荧光金注入一侧孤束核的中尾段,逆标神经元分布于脑干下行抑制系统的大部分核团。结合５－羟色胺和酪氨酸羟化酶免疫荧光组织化学技术研究发现：荧光金／５－ＨＴ 双重反应阳性神经元分布于中脑导水管周围灰质的腹外侧区、中缝背核、脑桥被盖网状核、脑桥尾侧网状核、中缝桥核、中缝正中核、中缝大核、巨细胞网状核α部、中缝隐核和中缝苍白核等核团,其中中央灰质腹外侧区、中缝大核、巨细胞网状核α部、中缝隐核、中缝苍白核等处的荧光金／５－ＨＴ 双重反应阳性神经元数量占脑干向孤束核投射的５－ＨＴ 阳性神经元总数的近７０％ （６９．９１％ ）;荧光金／酪氨酸羟化酶双重反应阳性神经元主要分布于脑干中脑中央灰质腹外侧区、Ａ７、蓝斑及蓝斑下核（Ａ６）、Ａ５、巨细胞网状核α部和Ａ１ 等核团,其中中央灰质腹外侧区、Ａ５、巨细胞网状核α部和Ａ１ 内的荧光金／酪氨酸羟化酶神经元数量占脑干向孤束核投射的酪氨酸羟化酶阳性神经元总数的８８．１７％ 。本研究提示,大鼠脑干下行抑制系统形成了至ＮＴＳ中尾段的以中脑中央灰质腹外侧区及中缝大核、?     

大鼠中央杏仁核-卵圆核投射神经元的免疫细胞化学特征——荧光金逆行追踪结合免疫荧光双标记法研究

本实验用雄性Sprague-Dawley大鼠,全身麻醉下将荧光金水溶液注入一侧终纹床核群卵圆核区域,在同侧中央杏仁核看到大量逆行标记细胞。将此切片分别用促肾上腺皮质激素释放因子、神经降压素、甲-脑啡肽和胆囊收缩素抗血清孵育,再用FITC结合的羊抗兔IgG温育,结果在中央杏仁核范围内,看到数量不等的荧光金逆行标记细胞,分别被上述4种神经肽免疫血清标记。本组实验结果表明,中央杏仁核有上述4种肽能神经元投射到终纹床核群的卵圆核区域。     

大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核和脊髓向丘脑和臂旁核的强啡肽能和一氧化氮能投射

本文用荧光金逆行追踪与免疫荧光组化染色相结合的方法，对大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核和颈髓背角浅层向丘脑腹基底复合体和臂旁核的强啡肽能和NO能投射进行了研究．强啡肽原前体样阳性胞体主要位于尾侧亚核和颈髓背角的Ⅰ层和Ⅱ层外侧部；NOS样阳性胞体主要位于尾侧亚核和颈够背角Ⅱ层，Ⅰ层较少。将荧光金注入丘脑腹基底复合体后，荧光金逆标神经元主要见于对侧尾侧亚核、颈髓背角的Ⅰ层和外侧网状核，Ⅱ层偶见；将荧光金注入臂旁核后，逆标神经元主要见于同侧尾侧亚核和颈髓背角的Ⅰ、Ⅱ层，少量位于外侧网状核。尾侧亚核向丘脑瓜基底复合体投射神经元的16．6％，向臂旁核投射神经元的24．8％呈强啡肽原前体样阳性；颈髓背角浅层向丘脑腹基底复合体投射神经元的19．2％，向臂旁核投射神经元的272％呈强啡肽原前体样阳性。向丘脑腹基底复合体和臂旁核投射的强啡肽原前体／荧光金双标神经元分别占尾侧亚核浅层内强啡肽原前体样阳性神经元总数的7％和18％，分别占颈髓背角浅层内强啡肽原前体样阳性神经元总数的8．1％和21．9％。这些双标神经元多呈大梭形及中等大圆形和梨形。由昆侧亚核向丘脑腹基底复合体投射神经元的5．1％呈NOS阳性，向臂旁核投射神经元的11．8％呈NOS阳性。由颈髓背角浅层向丘脑版?