herg1基因调控慢性髓细胞白血病细胞的增殖和细胞周期

目的:研究herg1基因在慢性髓细胞白血病(CML)细胞的表达及其对CML细胞增殖和细胞周期的调控作用.方法:应用RT-PCR方法测定33例初治慢性髓细胞白血病患者和10例健康志愿者的骨髓细胞herg1基因的表达,检测特异性抑制剂处理后CML细胞株K562增殖凋亡和细胞周期的变化.结果:①在初发CML病例中,herg1 mRNA的表达率是72.7% (24/33),高于正常对照(20%)(P<0.01).CML加速期和急变期的herg1 mRNA的表达率分别为75%和90.9%,高于正常对照(P<0.01),但是herg1的表达与CML的临床分期并无相关性(P>0.05).②E-4031(1 μmol/L)可呈时间依赖性抑制细胞增殖,不诱导明显凋亡.③E-4031阻滞K562细胞周期于G1期.结论:CML细胞herg1基因表达失调,IHERG抑制剂E-4031对K562细胞的增殖和细胞周期具有调控作用,herg1基因可能与CML发病机制相关.     

CRKL基因对K 562细胞的作用研究

目的：通过研究CRKL基因反义寡核苷酸（AODN）对K562细胞增殖及凋亡的作用。探讨CRKL基因对慢性粒细胞性白血病（CML）发病的影响。方法：应用CRKL基因反义寡核苷酸作用于K562细胞，通过^3H-TdR掺入，流式细胞术，Rt-PCR等方法观察K562细胞形态学，细胞周期，细胞动力学及基因表达等变化。结果：CRKL基因ASODN对K562细胞的增殖有抑制作用。并可诱导K562细胞的凋亡。结论：CRKL基因在CML的发病中可能有重要作用。     

PI-103在体外抗急性髓细胞白血病效应的实验研究

目的研究急性髓细胞白血病（AML）细胞P13K-Akt—mTOR信号转导通路各基因的表达及PI-103在体外对AML细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法RT-PCR法检测AML细胞P13K、Akt、mTORmRNA的表达;四甲基偶氮唑蓝法检测PI-103对AML细胞的增殖作用;流式细胞仪检测PI-103对AML细胞的凋亡率和细胞周期的影响。结果①81．25％的AML患者表达P13K基因,87．5％的患者表达mTOR基因,50％的患者同时表达此两种基因。②PI-103能明显提高PI3K—Akt-mTOR信号通路持续活化的AML细胞的增殖抑制率和凋亡率、阻滞细胞于G0／G1期（P均〈0．05）,且与剂量显著相关（P均〈0．05）。结论大部分AML患者存在PI3K-Akt-mTOR信号转导通路的异常活化;PI-103可通过PI3K、mTOR信号通路抑制AML细胞增殖、促进其凋亡。     

三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞周期及Survivin表达的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对慢性髓系白血病细胞(K562)的作用特点及其机制。方法不同浓度As2O3作用于K562细胞后，四唑盐(MTT)比色法分析细胞增殖；流式细胞术检测细胞周期分布、细胞凋亡及Survivin抗原表达；RT-PCR检测Survivin mRNA的表达。结果2—10μmoL／L的As2O3能有效抑制K562细胞增殖，但未能诱导明显的细胞凋亡。周期分析显示，G2／M期细胞比例显著增多；同时G2／M细胞周期依赖性表达的Survivin mRNA和蛋白表达增加。结论As2O3明显抑制K562细胞的生长，其机制是诱导G2／M期细胞周期停滞。Survivin表达上调可能是K562细胞对As2O3诱导凋亡抵抗的机制之一。     

姜黄素抑制k562细胞生长并诱导凋亡机制的研究

目的探讨姜黄素抑制人类红白血病细胞（k562细胞）生长并诱导凋亡的机制及其对细胞凋亡相关基因BCL-XL和BAK表达的影响。方法把不同浓度姜黄素加入k562细胞,流式细胞仪检测其凋亡及其细胞周期的变化,RT-PCR方法检测BCL-XL和BAK mRNA的表达,免疫组化方法检测BCL—XL和BAK蛋白的表达。结果姜黄素可以对k562细胞有较明显的增殖抑制作用,且呈剂量依赖,流式细胞术结果显示姜黄素浓度在100μmol／L时作用24、48h后,凋亡率高于对照组（P〈0．05）;随着姜黄素浓度增加,作用于k562细胞后可以使其倍增时间明显延长,G1期细胞增多,S期细胞减少;RT-PCR结果显示姜黄素能下调k562细胞BCL-XL表达,上调BAK mRNA的表达（P〈0．05）,免疫组化法发现姜黄素可以降低BCL-XL表达,升高BAK的表达（P〈0．05）。结论姜黄素对k562细胞的生长有较明显的抑制作用,且呈一定时间与剂量关系,并促进k562细胞凋亡,可能和下调BCL—XL的表达和上调BAK的表达相关。     

三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞周期的影响

目的：探讨三氧化二砷(As2O3)对人类慢性髓系白血病细胞系(K562)细胞周期及其凋亡的影响。方法：将K562细胞与不同浓度的As2O3共同孵育，在不同时间点应用MTT方法检测K562细胞存活率，并用流式细胞仪检测As2O3的致凋亡作用，同时对As2O3作用后的K562细胞进行细胞周期分析及时相性周期蛋白表达检测。结果：As2O3明显抑制K562细胞增殖并表现为时间和剂量依赖性；在2．0--10．0μmol/L梯度浓度As2O3的作用下，细胞于12—24h时段内无明显凋亡现象，但K562细胞明显阻滞于G2／M期时相，同时周期调控蛋白cyclinE表达下调，cyclinB1表达基本不变。结论：As2O3可抑制K562细胞增殖，但其抑制机制不在于通过诱导凋亡，而依靠诱发K562细胞的G2／M期阻滞。     

p38MAPK在慢性髓细胞白血病信号转导中的作用

目的：探讨p38MAPK在慢性髓细胞白血病（CML）信号转导中的作用。方法：用脂质体转染法将bcr3/abl2反义寡核苷酸（ASO）导入K562细胞中,通过细胞凋亡、p38MAPK活性、p38MAPK表达和p38MAPK含量的变化,检测p38MAPK在CML信号转导中的作用。结果：bcr3/abl2ASO作用K562细胞24h后凋亡细胞比率、p38MAPK活性、p38MAPK表达和p38MAPK含量明显增加,分别为对照组的3.6、3.3、2.7和1.8倍,与对照组之间均差异有统计学意义（均P〈0.05）。结论：p38MAPK通过介导凋亡信号而在CML信号转导中起重要作用。     

藤黄酸调控白血病K562细胞GFI-1表达及对细胞增殖和凋亡的影响

目的: 探讨藤黄酸对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法：体外培养K562细胞,采用CCK-8法检测不同浓度藤黄酸(0、0.2、0.4、0.8、1.2、2.0μmol/L)处理24、48、72h后K562细胞增殖率;用流式细胞术检测K562细胞的凋亡和周期;采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR)）和Western blot法检测独立生长因子1(GFI-1) 的mRNA及蛋白表达水平。结果： 藤黄酸可以抑制K562细胞的增殖,并呈剂量、时间依赖性;0.4μmol/L藤黄酸处理24h后的K562细胞凋亡率增加;藤黄酸对GFI-1的mRNA表达无显著影响,藤黄酸可以下调GFI-1蛋白的表达;藤黄酸及蛋白酶体抑制剂（MG132）共处理后的K562细胞GFI-1蛋白水平较藤黄酸组升高;藤黄酸及氯喹（CQ）共处理后的K562细胞GFI-1蛋白水平与藤黄酸组无统计学差异（P>0.05）。结论： 藤黄酸可以有效抑制K562细胞的增殖并诱导细胞凋亡;藤黄酸可以诱导K562细胞G0/G1期及S期阻滞;藤黄酸通过蛋白酶体途径促进GFI-1蛋白降解。     

转录因子GATA—2基因在ANLL、CML和MDS中的表达

目的：了解GATA－2基因在急性非淋巴细胞白血病（ANLL）、慢性粒细胞白血病（CML）和骨髓增生异常综合征（MDS）中的表达情况。方法：利用RT－PCR扩增ANLL、CML和MDS等246例患者外周血单个核细胞中GATA－2基因。结果：GATA－2基因在ANLL、CML和MDS中的表达率分别为88．4％、81．6％和97％,差异与正常人有高度显著性（P＜0．01）,结论：绝大多数髓系白血病和MDS标本表达GATA－2基因,GATA－2可能是白血病细胞的增殖过程中所需要的转录因子之一。     

硒化壳聚糖对K562/ADM细胞生物学行为的影响

目的观察硒化壳聚糖对体外培养慢性粒细胞多药耐药白血病细胞株K562/阿霉素(ADM)细胞生物学行为的影响。方法硒化壳聚糖作用于体外培养的K562/ADM细胞12、24 h,应用流式细胞法检测细胞凋亡,软件拟合计算细胞周期;应用免疫印迹法检测P-糖蛋白(P-gp)的表达;应用RT-PCR法检测MDR-1 mRNA水平。结果硒化壳聚糖能够明显增强ADM对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,阻滞细胞周期于G1期(P<0.05,P<0.01),下调P-gp表达和MDR-1 mRNA水平(P<0.05,P<0.01),硒化壳聚糖浓度越高,作用效果越显著。结论硒化壳聚糖能够通过下调MDR-1基因和P-gp表达,阻滞细胞周期于G1期来诱导细胞凋亡,进而对体外培养的K562/ADM细胞耐药生物学行为产生逆转。     

白藜芦醇对白血病K562细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的 探讨白藜芦醇对白血病K562细胞生长的影响及相关作用机制.方法 用不同浓度白藜芦醇作用于K562细胞,CCK-8法观察白藜芦醇对K562细胞生长增殖的影响,AnnexinV-FITC/PI双染法观察白藜芦醇对K562细胞凋亡的影响,PI染色法观察白藜芦醇对K562细胞周期的影响,Western blot法检测K562细胞中的Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Cyclin D1蛋白.结果 白藜芦醇作用后的K562细胞的增殖被抑制并且凋亡增加,呈时间-剂量依赖性;同时,凋亡相关分子Bcl-2、Bcl-xl表达下调,Bax表达上调;白藜芦醇作用K562细胞后,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞周期调节蛋白Cyclin D1表达下降.结论 白藜芦醇可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调细胞内Bcl-2、Bcl-xl、Cyclin D1表达并上调Bax的表达有关.     

反义bcr—abl寡核苷酸对K562细胞的体外作用

目的 研究b3a2型反义bcr-abl寡核苷酸（ASO）体外对慢性髓细胞性白血病（CML）细胞株K562的抑制作用,为反义技术用于CML患者体内基因治疗和体外骨髓净化提供依据。方法 采用体外细胞培养技术及四唑盐（MTT）比色法、免疫组织化学染色法观察b3a2-ASO体外对K562细胞的生长、克隆形成及P210 bcr-abl蛋白表达的影响。结果 经b3a2-ASO(110μm/ml)作用40h后,K562细胞生长抑制率达66．12％,集落抑制率为65．44％;作用15h后P210bcr-abl蛋白合成抑制率可达60％。而无义寡核苷酸（NSO）对前述三个指标均无显著影响;b3a2-ASO及NSO对bcr-abl阴性细胞株HL60的细胞生长和存活率亦无显著影响。结论 b3a2-ASO对K562细胞有序列特异性抑制作用,提示其可以作为CML反义基因治疗,尤其是骨髓净化的有力措施之一。     

YAP抑制剂对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究YAP抑制剂维替泊芬对慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞增殖凋亡的影响.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法计算YAP抑制剂维替泊芬对K562细胞增殖的影响;采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测维替泊芬作用后细胞凋亡变化;Western印迹检测维替泊芬作用后K562细胞Bax、Bcl-2基因...     

香芹芥酚诱导人白血病K562细胞凋亡的研究

目的探讨香芹芥酚对人白血病K562细胞凋亡作用的影响。方法采用不同浓度的香芹芥酚处理体外培养的K562细胞,MTT比色法观察细胞存活率;Hoechst染色法观察细胞凋亡形态学变化,Annexin-V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率;Western-blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达水平的改变。结果人白血病K562细胞存活率随着香芹芥酚作用时间延长和浓度增高而降低（P〈0.05）。香芹芥酚处理K562细胞48 h后出现较典型的细胞凋亡特征形态学改变,Annexin-V/PI双染法显示随着香芹芥酚作用浓度增大,凋亡细胞比例增大。West-ern-blot结果表明,香芹芥酚可以浓度依赖性降低凋亡相关基因Bcl-2的表达和增加Bax基因的表达。结论香芹芥酚具有诱导人白血病K562细胞凋亡的作用,其分子机制可能通过调控Bcl-2、Bax的基因及蛋白水平而诱导凋亡。     

Smad7在人慢性髓细胞白血病细胞株K562中的表达

目的：观察人慢性髓细胞白血病细胞株K562中Smad7基因和蛋白的表达；探讨转化生长因子(TGF—β1）mad7的诱导作用。方法：采用逆转录-聚合酶链反应、蛋白印迹法方法检测K562细胞与TGF-1共育前后Smad7 mRNA蛋白表达水平。结果：K562细胞中具有Smad7的表达，且可由外源性TGF-β1短暂诱导，Smad7的表达及变化在转录及翻译水平上基本保持一致。结论：Smad7参与K562细胞TGF-β信号的传导，Smad7与TGF-β1之间存在自身调节负反馈通路。     

硒诱导红白血病K562细胞凋亡机制的探讨

目的 探讨微量元素硒对人红白血病细胞株（K562细胞株）诱导凋亡的机制。方法 采用免疫光技术检测加硒培养组（实验组）K562细胞的凋亡细胞核变化和凋亡小体的数量，同时还应用化学检测与细胞凋亡有关的酶。结果 实验组凋亡细胞明显增多，且呈剂量依赖性，实验组细胞内谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px)的活性及环磷酸苷（cAMP)的含量也明显高于对照（P＜0．01）。结论 硒能够诱导K562细胞凋亡，可提高该细胞内GSH－Px的活性及cAMP的含量。     

RT-PCR检测SALL4基因在白血病中的表达

目的：检测SALL4基因在白血病细胞中的表达情况。方法：运用RT-PCR技术对35例白血患者及10例正常对照的单个核细胞进行SALL4mRNA表达测定。结果：急性非淋巴细胞白血病（ANLL）患者中,SALL4mRNA表达率为83.3（15/18）;慢性髓细胞白血病（CML）患者SALL4mRNA表达率为100（7/7）;B-ALL患者中,SALL4mRNA表达率为100（6/6）,T-ALL的SALL4mRNA表达率为0（0/4）。对照组10例的SALL4mRNA表达为阴性。ANLL、CML、B-ALL之间SALL4mRNA的表达率比较差异无统计学意义（P〉0.05）,前3组与T-ALL、对照组间SALL4mRNA的表达差异有统计学意义（P〈0.01）。BCR-ABL融合基因与SALL4在ALL、CML组中的表达呈正相关性。结论：ANLL、CML、B-ALL的单个核细胞SALL4mRNA表达阳性,提示SALL4基因可能与白血病的发生相关;B-ALL与T-ALL间的SALL4基因表达差异有统计学意义,提示2者的发病机制可能不同。     

半夏水提取液诱导人白血病K562细胞凋亡的初步研究

目的:观察半夏水提取液对K562细胞增殖及凋亡的影响,初步探讨半夏对白血病的抗肿瘤作用机制。方法:采用CCK-8法,检测半夏水提取液不同浓度梯度范围内(35、350、700、1 000μg/ml)及不同作用时间(24、48、72h)对K562细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测K562细胞48h凋亡及周期变化。结果:半夏水提取液对人白血病K562细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性;流式细胞仪分析结果显示半夏水提取液作用K562细胞48h后细胞凋亡百分率随半夏水提取液浓度增加而增加,且半夏水提取液可以诱导K562细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:半夏水提取液在一定浓度范围内对人白血病细胞K562的增殖有抑制作用,且呈一定的量效时效关系;其对K562细胞的抑制作用可能与其诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞有关。     

反义寡核苷酸封闭癌基因MDM2提高白血病细胞化疗敏感性的研究

目的通过MDM2反义寡核苷酸（MDM2-AS）阻滞白血病K562细胞MDM2的表达，研究非p53通路下MDM2抑制的化疗增敏作用。方法细胞分为对照组、AS组、顺铂组和联合组，以RT—PCR和Western blot检测MDM表达，流式细胞仪检测处理后各组细胞的凋亡率。结果AS组细胞MDM2表达明显受抑制（P〈0．05），联合组K562细胞凋亡率明显增加（P〈0．01）。结论在p53缺失情况下，以MDM2-AS反义封闭抑制MDM2表达，可增加白血病细胞的化疗敏感性，为白血病的临床治疗提供参考。     

miR-29b通过PI3K/AKT信号通路抑制白血病细胞的增殖

目的探讨miR-29b对K562白血病细胞增殖与凋亡的影响及相关机制。方法利用Lipofectamine~(TM)2000脂质体将miR-29b mimics,miR-29b NC转入白血病细胞K562中,实时荧光定量PCR法检测miR-29b表达,MTT法检测细胞活力,EdU染色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,Western印迹检测细胞中B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax),髓样细胞白血病(MCL)-1,细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4,CDK6蛋白表达及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)激活情况。结果与miR-29b NC组比较,miR-29b mimics组miR-29b表达上调(P<0.01),细胞活力及细胞增殖率降低(P<0.01),细胞周期阻滞在G1期(P<0.01),Bcl-2,MCL-1,CDK4,CDK6,PI3K及p-AKT表达量均明显下调(P<0.01),Bax表达量明显上调(P<0.01)。结论 miR-29b mimics能显著抑制白血病细胞K562增殖、诱导细胞凋亡,可能与阻断PI3K/AKT信号通路有关。