白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列测定与分析

【目的】PCR法扩增与测定白纹伊蚊和致倦库蚊的细胞内共生菌 Wolbachia16SrRNA序列 ,分析其种系发生关系及传播方式。【方法】从单只雌蚊中提取DNA ,PCR法扩增 16SrRNA序列 ,扩增产物进行克隆及测序。【结果】从白纹伊蚊和致倦库蚊分别扩增出Wolbachia 16SrRNA序列 ,并克隆入 pGEM T载体 ,测序证明两序列长度分别为 897bp。【结论】成功克隆了白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16SrRNA序列。测序和同源性分析表明 ,它们之间的同源性为 99 9%,提示Wolbachia在白纹伊蚊和致倦库蚊可能存在水平传播的方式。     

大链壶菌对三属蚊幼虫的比较灭蚊实验

目的：观察并比较大链壶菌对致倦库蚊、白纹伊蚊和中华按蚊幼虫的实验感染和杀灭情况。方法：在相同实验条件下用生物测定的方法分别观察、比较三属蚊幼虫实验组及对照组的死亡率和校正死亡率，同时比较蚊幼虫被大链壶菌感染后6、24、48、72h各时段的死亡率。结果：平均死亡率致倦库蚊和白纹伊蚊幼虫实验组明显高于对照组，而中华按蚊幼虫两组无明显差别。三属蚊幼虫的平均校正死亡率两两有差别。平均死亡率致倦库蚊幼虫以感染后6、24、48h较高，白纹伊蚊幼虫以感染后48h较高。未观察到中华按蚊幼虫被大链壶菌感染的征象。结论：致倦库蚊和白纹伊蚊幼虫对大链壶菌易感染，中华按蚊幼虫不易感染。     

白纹伊蚊及致倦库蚊对蝙蝠乙型脑炎病毒分离株易感性的初步观察

了解蝙蝠乙脑病毒分离株GD1和HN2株对白纹伊蚊和致倦库蚊的易感性。 方法 通过病毒液饲喂法使白纹伊蚊和致倦库蚊经口感染蝙蝠乙脑病毒GD1株和HN2株,采用TaqMan real-time RT-PCR方法,检测GD1株和HN2株感染白纹伊蚊及致倦库蚊后第4、6、8、10、12、14、16、18、20天病毒存在情况与病毒载量的动态变化。 结果 两株蝙蝠乙脑病毒在感染白纹伊蚊、致倦库蚊后4~20 d内均能被检测到。Ct值的动态变化规律显示白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染乙脑病毒GD1株和HN2株,但致倦库蚊的易感性高于白纹伊蚊;两株毒株的毒力可能不同,HN2株毒力大于GD1株。结论 白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染蝙蝠乙脑病毒分离株。     

白纹伊蚊及致倦库蚊对蝙蝠乙型脑炎病毒分离株的易感性分析

目的了解蝙蝠乙脑病毒分离株GD1和HN2株对白纹伊蚊和致倦库蚊的易感性。方法通过病毒液饲喂法使白纹伊蚊和致倦库蚊经口感染蝙蝠乙脑病毒GD1株和HN2株,采用TaqMan real-time RT-PCR方法,检测GD1株和HN2株感染白纹伊蚊及致倦库蚊后第4、6、8、10、12、14、16、18、20天病毒存在情况与病毒载量的动态变化。结果两株蝙蝠乙脑病毒在感染白纹伊蚊、致倦库蚊后4~20 d内均能被检测到。Ct值的动态变化规律显示白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染乙脑病毒GD1株和HN2株,但致倦库蚊的易感性高于白纹伊蚊;两株毒株的毒力可能不同,HN2株毒力大于GD1株。结论白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染蝙蝠乙脑病毒分离株。     

三地理株白纹伊蚊与致倦库蚊贵州株蛋白质分析

目的：比较海南、北京、贵州三地理株白纹伊蚊和贵州株致倦库蚊蛋白质含量的差异。方法：用凯氏定氮法测定羽化后第5天白纹伊蚊和致倦库蚊（雌蚊）蛋白质含量，并比较地理株和种间的差异。结果：海南株蛋白质分别与北京株及贵州株蛋白质有显著差异（P＜0．01），但北京株与贵州株之间无显著差异（P＞0．05）；贵州株和北京株白纹伊蚊与贵州株致倦库蚊之间无显著差异（P＞0．05）；海南株白纹伊蚊与贵州株致倦库蚊之间有显著差异（P＞0．01）。结论：不同地理株白纹伊蚊蛋白质含量可有差异，同一地区的不同蚊种之间蛋白质可无差异。     

实验室内白纹伊蚊和致倦库蚊养殖方法

通过对实验室内蚊虫饲养器具的设计和饲养条件、方法的优化组合,在室内成功饲养白纹伊蚊和致倦库蚊,根据文献报道方法和平时饲养心得总结形成了一套较为高效、经济和实用的白纹伊蚊和致倦库蚊养殖方法。     

三种植物挥发油的驱蚊效果研究

目的:了解八角茴香、樟树叶、花椒3种不同植物挥发油对白纹伊蚊、致倦库蚊的驱避效果.方法:水蒸气蒸馏法提取的3种植物挥发油稀释为2％、5％及10％3种浓度,分别喷洒小鼠全身,记录3h内白纹伊蚊、致倦库蚊在小鼠身上的停留数量,观察不同浓度和不同植物油的驱蚊效果;选取3种驱蚊效果最佳浓度挥发油两两复方混配(2∶1、1∶2),观察混配复方植物挥发油的驱蚊效果.结果:对白蚊伊蚊及致倦库蚊有效驱避率的3种植物挥发油的浓度依次为10％＞5％＞2％,两两比较差异有统计学意义(P＜0.05),在10％浓度对两种蚊虫驱避效果最佳的是樟树叶和花椒;不同混配复方对白纹伊蚊和致倦库蚊均有明显的有效驱避效果,不同混配复方驱避效果相当(P＞0.05),但白纹伊蚊驱蚊和致倦库蚊驱避作用最佳的混配复方植物挥发油是1∶2的樟树叶与八角茴香复方,有效驱避率高于单方.结论:复方混配植物挥发油对白纹伊蚊及致倦库蚊的驱避效果好.     

白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因cDNA片段的克隆与鉴定

目的 获得白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株ＣＹＰ６基因家族中的一个ｃＤＮＡ片段。方法 根据家蝇ＣＹＰ６Ａ１、ＣＹＰ６Ｄ１以及致倦库蚊ＣＹＰ６Ｅ同源区氨基酸序列,设计１对简并引物,进行反转录ＰＣＲ,获得一大小与设计的细胞色素Ｐ４５０基因片段相符合的ｃＤＮＡ片段。将该片断与ｐＵＣ１９质粒重组,并克隆至ＪＭ１０９大肠杆菌中,经筛选后测序;将推导的氨基酸序列进行同源性分析,并用ＰＣ／ＧＥＮＥ软件绘制系统树。结果：获     

白纹伊蚊防御素基因的体外扩增及鉴定

目的 克隆白纹伊蚊的防御素基因并对其进行序列分析。方法 提取白纹伊蚊基因组DNA，根据埃及伊蚊防御素基因序列设计合成引物，PCR产物克隆到T载体中进行测序和分析。结果 从白纹伊蚊基因组DNA中扩增出了约375bP的片段，PCR产物经测序后与已发表的埃及伊蚊防御素基因比较，具有很高的同源性。结论 克隆了白纹伊蚊的防御素基因，为下一步蚊虫防御素蛋白的研究莫定了基础。     

从白纹伊蚊与致倦库蚊分离和鉴定可结合登革Ⅱ病毒的蛋白分子

目的筛选登革Ⅱ病毒（DENV-2）识别白纹伊蚊、致倦库蚊的连接分子。方法提取不同发育时期白纹伊蚊、致倦库蚊的总
蛋白,用SDS-12% PAGE进行分析,用病毒覆盖蛋白结合试验（VOPBA）筛选不同发育时期白纹伊蚊、致倦库蚊表达连接
DENV-2分子。结果VOPBA检测不同发育时期白纹伊蚊显示：幼虫样品的泳道可见到25 000、35 000、50 000的DEN-2结合分
子,蛹样品的泳道可见到35 000、50 000分子,雄蚊样品可见到50 000分子,雌蚊样品中可见到35 000、50 000分子。DEN-2结
合蚊35 000分子在白纹伊蚊幼虫、蛹及成蚊的雌蚊的三个阶段均存在,而雄蚊的成蚊则缺少这一分子。VOPBA检测不同发育
时期致倦库蚊：幼虫样品可见100 000分子,蛹样品可见40、100 000分子,另外在50 000位置上下亦可见48 000、60 000左右的
多个条带,雄蚊与雌蚊样品均见40 000、100 000分子。结论35 000大小的蛋白分子分布与白纹伊蚊感染组织向性相关。
     

致倦库蚊Cecropin基因克隆及序列分析

目的:克隆致倦库蚊Cecropins基因序列,并进行生物信息学分析.方法:选取致倦库蚊成虫,提取其DNA并以此为模板,设计一对引物,采用PCR技术扩增出Cecropins基因,应用相关生物信息学软件分析其序列.结果:克隆出致倦库蚊Cecropins基因,并测定其扩增产物序列,经同源对比确认,进行了相关序列分析.结论:获得致倦库蚊Cecropins基因序列,基因长度为259 bp,与尖音库蚊一致性为97%.     

白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 CYP6 cDNA片段克隆、鉴定

根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E1的保守区氨基酸序列设计一组简并引物,采用RT-PCR的方法,从白纹伊蚊四龄期活体幼虫总RNA中扩增出与设计相符的基因片段。利用T-A克隆法,将获得的基因片段克隆人pGEM-T easy载体。经限制性内切酶酶切和PCR鉴定证明重组成功。将筛选的阳性克隆经序列测定及同源性分析,表明共获得CYP6家族中9个的新cDNA序列。为进一步研究细胞色素P450的多样性及其与抗药性形成的分子机制打下基础。     

白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6N3基因分子进化机制初探

为了初步探讨白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6家族新基因分子进化机理,根据已获得的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株一新的细胞色素P450CYP6基因cDNA片段,设计反向引物,进行5’-cDNA末端快速扩增（rapid　amplification　of　cDNA　ends,RACE）;以正向引物进行3’-RACE。然后分别进行克隆、测序和鉴定。根据获得白纹伊蚊CYP6家族新成员全长cDNA序列,运用PC/GENE软件分析其5’-UTP区DNA序列相似性及编码区氨基酸残基相似性、构建系谱树。结果获得的3个全长序列中5’-UTP区DNA序列完全相同;编码区氨基酸残基相似性为3/497或4/497个氨基酸差异,而且此种差异均位于蛋白质功能非保守的基因区域;构建的系谱树显示CYP6N3基因与冈比亚按蚊CYP6N1-2亲缘关系最近,而与致倦库蚊的CYP6E1、CYP6F1亲缘关系较远。说明白纹伊蚊CYP6N3基因较致倦库蚊的CYP6E1、CYP6F1基因更为古老;白纹伊蚊CYP6N3各等位基因变异体是通过整个CYP6N3基因座的新近复制而产生。     

蚊防御素基因的克隆及序列分析

目的：克隆是我国重要蚊媒的防御素基因并对其序列进行分析。方法：分别提取埃及伊蚊、白纹伊蚊、致乏库蚊、中华按蚊的基因组DNA和总RNA。根据国外已发表的防御素基因序列设计、合成引物，进行PCR 和RT－PCR。结果：分别从埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊基因组DNA中扩增出预期片段，将片段切胶纯化后进行序列分析并与已发表的防御素基因比较，显示埃及伊蚊和白纹伊纹的扩增片段与已发表的防御素基因序列有很高的同源性，而中华按蚊的拉增片段则与已发表的防御素基因序列的同源性较低，且不具备特征性的6个半胱氨酸序列。结论：克隆出运行及伊蚊和白纹伊蚊的防御素基因，蚊虫防御素基因的同源性高低与其遗传分类距离有一定的平行关系。     

蚊虫细胞色素P450基因系列研究

报告中山医科大学寄生虫学教研室医学昆虫学室近5年来有关蚊虫细胞色素P450基因(CYP450)系列研究结果,包括①通过简并引物PCR分别从致倦库蚊、白纹伊蚊及中华按蚊中获得3个、2个、2个CYP4家族成员基因片段;通过简并引物PCR及RT-PCR从白纹伊蚊中获得16个CYP6家族成员基因片段;②利用cDNA末端快速扩增(RACE)法获得了白纹伊蚊CYP6家族3个新的全长cDNA序列及7个超过其全长一半以上的cDNA序列.GenBankaccessionnumber分别为AF283836-AF283838(全长cDNA序列)和AF284782-AF284783(非全长cDNA序列),被国际P450命名委员会正式命名为CYP6N3v1-v3(全长cDNA序列)和CYP 6N3v4、CYP6N4v1-v6,并证实这些新基因同时存在于白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株及敏感株中;③运用基因步移方法从白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株中扩增出CYP6N3上游3 076 bp调控序列;④对白纹伊蚊CYP 6N3、CYP6N4非翻译区序列功能分析显示昆虫CYP450与其它真核mRNA翻译起始及终止机制相似,但具有多态性的特点;⑤对白纹伊蚊CYP6N3上游启动子区序列特征与功能分析显示蚊虫中CYP450转录起始存在着复杂性;⑥证实蚊虫中CYP6存在多样性,并分析讨论了此种多样性形成的可能机制;⑦分析讨论了蚊虫细胞色素P450 CYP6家族分子进化机制;⑧阐明了下一步研究的目标.     

白纹伊蚊及致倦库蚊对蝙蝠乙型脑炎病毒分离株的易感性分析

摘要：目的了解蝙蝠乙脑病毒分离株GD1和HN2株对白纹伊蚊和致倦库蚊的易感性。方法通过病毒液饲喂法使白纹伊蚊和
致倦库蚊经口感染蝙蝠乙脑病毒GD1株和HN2株,采用TaqMan real-time RT-PCR方法,检测GD1株和HN2株感染白纹伊蚊及
致倦库蚊后第4、6、8、10、12、14、16、18、20天病毒存在情况与病毒载量的动态变化。结果两株蝙蝠乙脑病毒在感染白纹伊蚊、
致倦库蚊后4~20 d内均能被检测到。Ct值的动态变化规律显示白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染乙脑病毒GD1株和HN2株,但致
倦库蚊的易感性高于白纹伊蚊;两株毒株的毒力可能不同,HN2株毒力大于GD1株。结论白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染蝙蝠
乙脑病毒分离株。
     

白纹伊蚊、致倦库蚊、中华按蚊与五指库蚊扫描电镜观察

目的：了解白纹伊蚊、致倦库蚊、中华按蚊和五指库蚊生活史各期超微结构。方法：野外采集这4种蚊虫并行扫描电镜（SEM）观察。结果：4种蚊虫的幼虫栉齿、成蚊小盾板、蛹呼吸管和外壁纹饰和卵的超微结构上存在较大差异。结论：4种蚊虫生活史各期SEM观察均发现新的形态特征,这些特征有望应用于蚊虫分类学研究。     

蚊虫细胞色素P450基因系列研究

报告中山医科大学寄生虫学教研室医学昆虫学室近5年来有关蚊虫细胞色素P450基因（CYP450）系列研究结果,包括：①通过简并引物PCR分别从卷库蚊、白纹伊纹及中华按蚊中获得3个、2个、2个CPY4家族成员基因片段;通过简并引物PCR及RT－PCR从白纹伊蚊中获得16个CYP6家族成员基因片段;②利用cDNA末端快速扩增（RACE）法获得了白纹伊蚊CYP3个新的全长cDNA序列及7个超过其全长一半以上的cDNA序列。GenBank accession number分别为AF283836－AF283838（全长cDNA序列）和AF284782－AF2847830（非全长cDNA序列）,被国际P450命名委员会正式命名为CYP 6N3vl-v3（全长cDNA序列）和CYP 6N3v4、CYP6N4vl-v6,并证实这些新基因同时存在于白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株及敏感株中;③运用基因步移方法从白蚊伊蚊溴氰菊酯抗性株中扩增出CYP6N3上游3076bp调控序列;④对白纹伊蚊CYP6N3、CYP6N4非翻译区序列功能分析显示：昆虫CYP450与其它真核mRNA翻译起始及终止机制相似,但具有多态性的特点;⑤对白纹伊蚊CPY6N3上游启动子区序列特征与功能分析显示：蚊虫中CYP450转录起始存在着复杂性;⑥证实蚊虫中CYP6存在多样性并分析讨论了此种多样性形成的可能机制;⑦分析讨论了蚊虫细胞色素P450 CYP6家族分子进化机制;⑧阐明了下一步研究的目标。     

四川省自贡市主要媒介蚊虫密度及其对杀虫剂抗药性监测

目的 了解自贡市媒介蚊虫的种群构成、密度及季节变化规律,并对自贡市致倦库蚊和白纹伊蚊对常见杀虫剂的抗药性测定,为科学选择和使用杀虫剂,防控蚊媒传染病提供科学依据。方法 在全市范围内采集致倦库蚊和白纹伊蚊,经实验室饲养后,采用成蚊接触筒法分别测定试虫对几种常用杀虫剂的抗药性,利用Excel 2010软件对2018—2020年自贡市媒介蚊虫监测数据进行统计分析。结果 2018—2020年自贡市监测点年均蚊密度分别为1.11、10.71、4.81只/（灯·h）,2018—2020年自贡市全年蚊密度季节消长趋势均呈现单峰型,7月最高,不同生境间蚊密度差异明显,牲畜棚蚊密度最高。白纹伊蚊和致倦库蚊对高效氯氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、氯菊酯、马拉硫磷、杀螟硫磷、毒死蜱、残杀威、噁虫威24 h致死率分别为70.71%和3.85%、26.53%和1.68%、19.79%和1.94%、40.80%和0.81%、97.98%和3.85%、100.00%和7.52%、100.00%和66.34%、96.15%和33.60%、100.00%和71.43%。白纹伊蚊对高效氯氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、氯菊酯产生抗药性,对马拉硫磷、残杀威产生可疑抗性,对毒死蜱、杀螟硫磷、噁虫威敏感;致倦库蚊对所有杀虫剂均产生不同程度的抗药性。结论 白纹伊蚊、致倦库蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂均产生较高抗药性。应加强爱国卫生运动,减少拟除虫菊酯类杀虫剂的使用,轮换使用不同类型的杀虫剂,以延缓抗药性的产生,提高蚊密度控制效果。     

蚊防御素基因的克隆及序列分析

目的克隆我国重要蚊媒的防御素基因并对其序列进行分析。方法分别提取埃及伊蚊、白纹伊蚊、致乏库蚊、中华按蚊的基因组DNA和总RNA。根据国外已发表的防御素基因序列设计、合成引物,进行PCR和RT-PCR。结果分别从埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊基因组DNA中扩增出预期片段,将片段切胶纯化后进行序列分析并与已发表的防御素基因比较,显示埃及伊蚊和白纹伊蚊的扩增片段与已发表的防御素基因序列有很高的同源性,而中华按蚊的扩增片段则与已发表的防御素基因序列的同源性较低,且不具备特征性的6 个半胱氨酸序列。结论克隆出埃及伊蚊和白纹伊蚊的防御素基因,蚊虫防御素基因的同源性高低与其遗传分类距离有一定的平行关系。