血卟啉衍生物对人胃癌不同周期时相细胞光敏损伤效应的电镜观察

应用细胞同步化和电镜技术,研究了人胃低分化粘液腺癌细胞(MGc80-3)经血卟啉衍生物加红光照射后,其光敏损伤部位与周期时相的关系。结果表明,细胞的超微结构损伤,呈现出明显的周期特异性,其中G_1期细胞的质膜损伤较显著,胞质也有一定损伤;S期和G_2期细胞,以线粒体和其他胞质细胞器损伤最为严重,M期细胞则以胞核损伤显著。本文对上述光敏损伤的机制进行了讨论。     

借助电子计算机从细胞光度学的直方图上分析细胞周期的时相

引言众所周知,根据细胞的 DNA 合成过程,细胞周期分为几个时相;G_0,G_1,S,G_2和M 时相。因为包括在每个时相中的细胞百分数随细胞的特性而改变,因此,细胞数的这个比例对于分析细胞的生物学状态是有益的。例如,在 S 和 G_2-M 时相间隔内细胞数的百分比较高,可能显示恶性肿瘤的程度较高,因为这些因数的增加表明瘤细胞的快速增殖率。     

温热合并吐温80对BGC-823人胃癌细胞超微结构和琥珀酸脱氢酶活性的影响

BGC-823人胃癌细胞系经吐温80合并温热(39℃～43℃)作用20～100分钟后,观察即时至96小时细胞超微结构和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的变化,并用正常人胚肺成纤维细胞作为对照。结果显示温热对细胞的作用,主要表现为粗面内质网扩张,线粒体肿胀、嵴减少,脂滴增多,SDH活性下降。43℃作用后,大量线粒体空泡化或髓样变.多聚核糖体减少,核异染色质增多,核仁呈块状或环形,部分细胞崩解坏死。吐温80单独作用与温热相似,与温热合并有明显协同作用,膜结构损害较早并更为严重,与41℃合并作用100分钟,已达到43℃100分钟温热效果,比单独使用温热可降低作用温度2℃左右。提示吐温80通过降低细胞相变温度,而加强温热对肿瘤细胞的杀伤作用。人胚肺成纤维细胞对合并作用反应较轻且易恢复。     

雷公藤总甙在细胞周期多个阶段抑制T细胞增殖

用小剂量 PHA(0.15μg/ml)诱导人 T 细胞从 Go 相进入 G_((?)a)和 G_((?)b)相,但不能进入 S 相和 G_2/M 相,和用人 rIL-2诱导上述活化的 T 细胞进入 S 相和 G_2/M 相作模型,用 AO 和 PI 染色在流式细胞仪上分析了雷公藤总甙 T Ⅱ对 T 细胞增殖反应的影响。结果表明 T Ⅱ在细胞周期 Go→G_(?),G_(?)→G_((?)b),G_(?)→S,和 S→G_2/M 多个关键点上抑制 T 细胞的增殖反应。     

NaDC3过表达对人肾小管细胞能量代谢和活性氧产生的影响

目的:研究三羧酸循环中间代谢产物转运蛋白-高亲和力钠依赖性二羧酸转运蛋白(NaDC3)基因过表达对人肾小管细胞能量代谢与活性氧(ROS)产生的影响。方法:用重组NaDC3逆转录病毒载体感染人肾小管上皮细胞HKC。用Western blotting检测细胞中外源性NaDC3蛋白的表达水平。通过液体闪烁法测定细胞内同位素[3H]标记琥珀酸(NaDC3的转运底物)的浓度。分别用Clark电极法和反相高压液相法测定细胞内氧耗量和ATP含量。分别用荧光探针JC-1和CM-H2DCFDA处理细胞后通过激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位和细胞内ROS含量。结果:Western blotting结果显示导入外源NaDC3基因后可使细胞内NaDC3蛋白的表达水平明显增加。转运实验显示NaDC3病毒感染细胞内的[3H]-琥珀酸水平明显高于未感染和对照载体感染细胞。NaDC3病毒感染细胞中的氧耗量和ATP含量明显高于未感染和对照载体感染细胞。激光共聚焦检测显示,与未感染和对照载体感染细胞相比,NaDC3感染细胞的线粒体膜电位和ROS水平明显增加。结论:NaDC3过表达可通过转运过多的三羧酸循环中间代谢产物进入细胞内而加快肾小管上皮细胞能量代谢的速率、增加细胞内ROS的产生水平。     

肽生长因子与细胞周期的调控

哺乳细胞生长周期受肽生长因子与经典激素的控制。细胞生长周期可简单地归结为以下几期:G_0期、G_1期,S期、G_2期、有丝分裂期和终端分化期。生长因子和激素通过调节G_0期←→G_2期→S期(主要是G_0期←→G_1期)和G_0期→终端分化期的转换来控制细胞的增殖。这一还原论式的描述源     

胞苷环3′,5′一磷酸对T原淋巴细胞株JM的抑制作用

在从S至G_2/M期和从G_1至S期的过程中,3′,5′-cCMP能抑制用胸腺嘧啶同步化的JM-T原淋巴细胞株细胞的增殖。而5-CMP,5-dCMP和2′,3′-cCMP却能在S期促进细胞生长。对于非同步化生长的JM细胞,3′,5′-cCMP也显示出抑制作用。     

小鼠乳腺癌细胞中三磷酸腺苷酶和琥珀酸脱氢酶活性定位的电镜组织化学研究

本文利用电镜组织化学的分子生物学技术,对 ATPase 和 SDH 活性在小鼠乳腺癌细胞中的分布进行了研究。结果发现,为 Mg~( )激活的 ATP 酶活性,主要分布在线粒体膜和核膜上及核仁中。而为 Ca~( )激活的 ATP 酶活性,主要分布在线粒体嵴部和基质中及核外膜上,并较均匀地显示在染色质中。对照材料的相应部位,只有微弱的活性或无酶活性反应。琥珀酸脱氢酶的活性,主要分布在线粒体嵴部和内膜上。在两层核膜中间,酶的活性呈现出强弱交替的反应。同时,在质外膜和核内膜上,琥珀酸脱氢酶的活性也很高。对照材料的相应部位,酶的显示极弱或完全没有显示。     

应用荧光细胞分选仪研究白血病的细胞周期

本文用荧光细胞分选仪和秋水仙素结合的方法,体外观察小鼠粒单核细胞白血病(MMoL)、粒细胞白血病(L 833-B)细胞的细胞周期和各时相持续时间。体外培养的白血病细胞于指数增殖阶段加入秋水仙素,持续作用12 h,每隔2 h取1组(两瓶)标本,其中1瓶做涂片,计数核分裂细胞数,计算MI;另1瓶用FACS测细胞DNA相对含量,从组方图中计算出每单位时间G_2M期细胞增加率,以及对照组细胞各时相在细胞群中的比例,以便推算细胞Tc及各时相细胞持续时间。用涂片MI方法得到秋水仙素阻断细胞,不同时间核分裂细胞的累积率,其直线回归方程式,MMoL及L 833-B细胞分别为Y=3.10+0.96 X,Y=1.28+0.86 X;Tc分别为104.2和116.3h。Tc太长,可能主要由于涂片时受秋水仙素细胞毒作用后细胞变性,易于破碎,人为降低单位时间MI值。用FACS测定G_2M细胞在秋水仙素作用后其积累率的直线回归方程式,MMoL及L 833 B细胞的分别为Y=26.13+4.01 X,Y=21.04+3.76 X,由此式计算的Tc分别为24.9和26.6 h。这一结果比以往用ARG法所得Tc分别为16和20 h的长些,可能是由于接种的细胞量不同和细胞开始实验时体外培养时间长短不同而引起的,以及秋水仙素对细胞核分裂期除阻断作用外,还有一定杀伤作用和制备标本时对细胞有一定机械性损伤等因素有关。FACS技术用于研究细胞动力学具有快速、简便和避免用放射性核素等优点。     

环孢菌素D衍生物PSC833逆转K562/DOX细胞的凋亡抗性及其机制

 目的:研究环孢菌素D衍生物PSC833对K562/DOX细胞多药耐药的逆转作用。方法:MTT法进行阿霉素（doxorubicin, DOX）和长春新碱（vincristine, VCR）的细胞毒测定;流式细胞术测定细胞周期;Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;活性氧测定以DCFH-DA标记,线粒体跨膜电位测定用JC-1标记,细胞内钙测定用Fluo-3/AM标记,均以流式细胞术检测;Western blotting法测定细胞色素C（Cyt C）、Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达。结果:环孢菌素D衍生物PSC833能显著增强DOX/VCR的细胞毒作用,使细胞阻滞在G2/M期;通过降低线粒体膜电位,升高细胞内活性氧和Ca2+水平,释放Cyt C、下调Bcl-2、上调Bax、激活cleaved caspase-3,增加DOX诱导的耐药细胞凋亡。结论: PSC833与DOX合用后,可阻滞细胞周期于G2 /M期,通过线粒体通路诱导K562/DOX细胞凋亡。     

共转染CDK1、CDK2 siRNA对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响

目的 研究共转染CDK1、CDK2 siRNA同时抑制CDK1、CDK2蛋白表达对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响,探讨细胞周期主要调控分子在肿瘤细胞凋亡中的作用.方法 以人宫颈癌细胞株HeLa细胞为研究对象,用脂质体lipofectamine2000同时转染CDK1 和CDK2 siRNA.在转染后48、60 h收集细胞,用Western印迹检测CDK1、CDK2蛋白的表达,AnnexinV/PI检测转染细胞的凋亡,流式细胞术DNA含量检测分析细胞周期.转染细胞进行瑞氏-姬姆萨染色(Wright-Giemsa)后在显微镜下观察其形态变化.结果 共转染CDK1、CDK2 siRNA后48和60 h,Western 印迹结果显示CDK1和CDK2蛋白的表达都同时降低.共转染CDK1、CDK2 siRNA后,细胞周期S期和G2/M期比例与对照相比有明显增加;共转染细胞经瑞氏-姬姆萨染色后在显微镜下可见双核或多核细胞增多;AnnexinV/PI检测结果显示共转染CDK1、CDK2 siRNA的细胞在48和60 h细胞凋亡率与对照相比有显著的升高.结论 siRNA 干扰导致的CDK1、CDK2表达同时降低不仅导致细胞周期S期和G2/M期的阻滞,也诱导了肿瘤细胞的凋亡.     

肝干细胞的生长和分化与大鼠肝再生的相关性分析

目的在基因转录水平了解肝干细胞在大鼠肝再生中的作用。方法用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得参与肝干细胞生长和分化的基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠部分肝切除(PH)后肝再生中的表达情况,用比较真、假手术中基因表达差异性确定上述基因中的肝再生相关基因。结果初步证实上述基因中50个基因与肝再生相关。肝再生启动(PH后0.5~4h)、G0/G1过渡(PH后4~6h)、细胞增殖(PH后6~66h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72~168h)等4个阶段起始表达的基因数为24、10、21和2;基因总表达次数为242、3、46和26,表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用。它们共表达上调153次、下调123次,分为6种表达方式,表明肝再生中细胞生理生化活动多样和复杂。结论肝再生中肝脏干细胞的生长和分化活动加强,与某些基因表达状态和方式有关。     

蛋白酶体抑制剂MG132对NK/T淋巴瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的： 探讨蛋白酶体抑制剂MG132（Z-leu-leu-leu-CHO,三肽基乙醛）对NK/T淋巴瘤细胞的增殖和细胞周期分布的影响,研究蛋白酶体抑制剂MG132治疗NK/T细胞淋巴瘤的潜在应用价值。方法: 用蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞,噻唑蓝［ 3（4,5二甲基噻唑2）2,5二苯基四氮唑溴盐,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide,MTT］法检测细胞增殖抑制率,倒置显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡。结果: 1 μmol/L MG132作用24 h,HANK1细胞增殖抑制率为（57.72±7.44）%,而0.1 μmol/L MG132作用24 h,增殖抑制率仅为（3.98±0.07）%;MG132剂量大,增殖抑制率高;1 μmol/L MG132作用24 h后,HANK1细胞G1和G2期细胞分别为（72.33±3.44）%和（12.86±1.29）%,对照组为（63.63±2.29）%和（7.94±1.91）%,用药组G1和G2期细胞明显高于对照组（P<0.01,P<0.05）; 早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞分别为（33.57±2.10）%和（16.66±0.47）%,而对照组仅为（7.18±0.82）%和（3.81±1.06）%,与对照组相比,凋亡率明显增高 (P<0.01,P<0.01)。结论: MG132抑制NK/T细胞淋巴瘤细胞增殖,使细胞周期G1和G2期阻滞,促进细胞凋亡,并存在剂量和时间依赖关系,蛋白酶体抑制剂MG132很可能成为治疗进展期NK/T细胞淋巴瘤的药物。     

Bostrycin作为肺癌分子靶向药物的体外研究

目的 观察海洋真菌新结构先导化合物Bostrycin对A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 A549细胞完全随机分为实验组和对照组,实验组用不同浓度不同作用时间的Bostrycin进行处理,而对照组未经Bostrycin处理.用MTT法检测A549细胞增殖率的变化;电镜、流式细胞术检测凋亡;实时定量PCR和免疫印迹法探讨其作用机制.结果 Boatrycin浓度≥10μmol/L时对A549细胞增殖有明显的抑制作用,其24、48和72 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为20.20、14.36和9.42μmol/L.Bostrycin干预后,电镜观察到A549细胞典型的凋亡形态;流式细胞术结果显示其G_0/G_1期比例升高、S期和G_2/M期比例下降,凋亡率增加.实时定量PCR检测到微小RNA(miRNA)一638和miRNA.923的表达较对照组上调.免疫印迹结果显示p110α、p-Akt蛋白表达量下降,p27蛋白表达量升高.结论 Bostrycin对A549细胞增殖有显著抑制作用,该作用可能通过miRNA抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(P13K/Akt)通路进行.     

回阳生肌膏提取物对正常皮肤及慢性溃疡创缘成纤维细胞增殖的影响

目的：比较回阳生肌膏提取物对人正常皮肤成纤维细胞（nHFB）及慢性溃疡创缘成纤维细胞（uHFB）增殖的影响。方法:〖HTSS〗组织块法体外培养nHFB及uHFB；采用 Alarmar blue摄入法观察不同浓度回阳生肌膏水提取物、醇提取物对两种细胞增殖的影响；并采用流式细胞仪检测其水提取物、醇提取物对两种细胞细胞周期的影响。结果:回阳生肌膏水提取物、醇提取物分别作用上述两种细胞24 h后，细胞增殖速度均增加。回阳生肌膏醇提物分别在0.027-0.425 mg/L和0.027-0.213 mg/L范围对nHFB和uHFB的增殖有促进作用（P<0.05或P<0.01）；回阳生肌膏水提物分别在0.075-2.400 mg/L和0.150-1.200 mg/L范围对nHFB和uHFB增殖有明显促进（P<0.05或P<0.01）；流式细胞仪检测结果显示，对于nHFB，水提物作用24 h后 S期比例明显上升（Pμ<0.01），G2/M期比例无明显升高，细胞增殖指数（PrI）明显增加（P<0.01），醇提物作用24 h后S期、G2/M期比例均上升（P<0.05），细胞增殖指数（PrI）明显增加（P<0.01）；而对于uHFB，水提物作用24 h后 S期、G2/M比例上升均不显著，但PrI指数有增加（P<0.05），醇提物作用24 h后 S期比例明显上升（P<0.01），G2/M期比例无明显升高，PrI明显增加（P<0.01）。结论：回阳生肌膏无论水提取物、醇提取物皆可不同程度促进nHFB及uHFB的增殖，其醇提物作用更迅速；这种促增殖作用可能是通过调节细胞周期使更多细胞进入S期而实现的。     

γ射线诱导HL—60和K562细胞凋亡和G2期阻滞的关系

应用形态学、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等方法观察γ射线诱导辐射敏感细胞ＨＬ－６０和辐射耐受细胞Ｋ５６２细胞凋亡和细胞周期改变的关系。结果：ＨＬ－６０细胞受照后出现Ｇ２期阻滞,１２ｈ达高峰,凋亡细胞比例随作用时间和照射剂量的增加而增加,凋亡特有的梯状图谱１、５、１０Ｇｙ照后７２、２４、１２ｈ出现。Ｋ５６２细胞受照后出现Ｇ２期阻滞、５、１０、２０Ｇｙ组分别在２４、４８、７２ｈ达高峰,末观察到细胞凋亡的     

染色体数目异常自然流产胚胎有丝分裂关卡蛋白基因的研究

目的探讨染色体数目异常自然流产胚胎中有丝分裂关卡蛋白(hsMAD2)基因的功能。方法分别用定量PCR和Western blotting在mRNA和蛋白水平检测染色体数目异常(实验组)和正常(对照组)的自然流产胚胎组织中目的基因的表达;构建针对hsMAD2基因的shRNA表达载体,抑制胚胎细胞内源性hsMAD2基因的表达,用Western blotting和定量PCR方法评价shRNA的干扰效果;用MTT法测定细胞增殖率;流式细胞术检测细胞周期。结果hsMAD2蛋白在实验组中的表达显著低于对照组。shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hsMAD2基因的表达。胚胎细胞转染有效干扰质粒48 h后,细胞增殖抑制率达58%。有效干扰质粒引起G0/G1期和S期细胞的明显降低,G2/M期细胞增多。结论hsMAD2基因表达下调可能在染色体数目异常的自然流产胚胎发生中起着很重要的作用,为寻找可靠的临床检测指标奠定了基础。     

肝细胞生长和分化相关基因在大鼠肝再生中的表达方式及作用分析

目的在基因转录水平了解肝再生中肝细胞的生长和分化情况。方法用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得参与肝细胞生长和分化基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠肝再生(LR)中的表达情况,通过比较手术组和假手术组中基因表达差异性以确定上述基因中的肝再生相关基因。结果初步证实上述基因中110个基因与肝再生相关。肝再生启动(PH后0.5~4h)、G0/G1过渡(PH后4~6h)、细胞增殖(PH后6~66h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72~168h)等4个阶段起始表达的基因数为63、11、43和3,基因总表达的次数为63、43、101和80,表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用。它们共表达上调488次,下调248次,分为6种表达方式,表明肝再生中细胞生理生化活动的多样性和复杂性。结论肝细胞生长和分化贯穿于整个肝再生中。     

Pulmonary lesions induced by 3-methylindole in mice.

The morphogenesis of pulmonary lesions and associated edema induced by the pulmonary toxicant 3-methylindole (3-MI) was studied by combined light and transmission electron microscopy. Weanling male CD-1 mice received 3-MI dissolved in corn oil by intraperitoneal injection and were studied at intervals from 2 to 360 hours after treatment. Interstitial edema was observed as early as 2 hours and was associated with focal cytoplasmic swelling and membrane alterations in both capillary endothelial cells and Type I alveolar epithelial cells and with sequestration of neutrophils. Cell swelling, cytoplasmic fragmentation, and necrosis of Type I epithelial cells was most severe at 24-48 hours after treatment. Multifocal hypertrophy and hyperplasia of Type II alveolar epithelial cells was observed at 24-96 hours after treatment. Platelet aggregation and aggregates of fibrin were frequently observed in capillaries and small arteries and veins as early as 4 hours and as late as 48 hours after treatment. In airways, the nonciliated bronchiolar epithelial (Clara) cell was the predominant cell affected. Initial lesions in nonciliated cells consisted of loss of microvilli and secretory granules followed by marked swelling of the endoplasmic reticulum and mitochondria. Necrosis of cells lining airways was most pronounced at 24-48 hours after treatment. By 144 hours after administration, pulmonary repair was complete. It is concluded that the mouse is a useful model of 3-MI-induced pulmonary injury and that damage to both Type I alveolar epithelial cells and capillary endothelial cells is important in the pathogenesis of 3-MI-induced pulmonary edema.