尿路斑块蛋白Ib启动子启动Smac表达的膀胱癌特异性及活性

目的:研究尿路斑块蛋白Ib启动子启动Smac表达的膀胱癌特异性及活性.方法:采用RT-PCR和免疫组化方法分别检测膀胱癌细胞株BIU-87和其他多种非膀胱癌细胞株在转染含尿路斑块蛋白Ib启动子和Smac基因的真核表达质粒pcDNA3-UpIb promoter-Smac前后Smac mRNA和蛋白质的表达变化.结果:BIU-87在转染后Smac mRNA的表达比转染前增强约2.1倍,Smac蛋白表达阳性细胞率也由转染前的约25.6%增加为转染后的约70.5%;非膀胱癌细胞株转染前后SmacmRNA及蛋白的表达没有显著性变化.结论:尿路斑块蛋白Ib启动子启动Smac表达具有膀胱癌靶向性及相当启动活性,为膀胱癌的靶向基因治疗研究奠定了基础.     

重组pcDNA3-UpIb promoter-Smac质粒转染靶向膀胱癌的促凋亡效应

目的：探讨转染新构建的UpIb启动子调控携Smac基因的真核表达质粒pcDNA3-UpIb promoter—Smac对膀胱癌细胞的促凋亡效用一方法：用脂质体将质粒转染到膀胱癌BIU-87细胞系中，2dh后用RT—PCR检测Smac的表达，以低剂量丝裂霉素C诱导凋亡，利用倒置光学显微镜、Wrighs—Gimesa染色、DNA凝胶电泳技术、TUNEL-荧光标记技术、流式细胞术检测凋亡。结果：丝裂霉素C处理的各组在倒置光学显微镜和Wrighs—Gimesa染色油镜下可见到典型的凋亡形态学改变，DNA凝胶电泳呈特征性的梯形条带jTUNEL-荧光标记技术及流式细胞术检测转染pcDNA3-UpIb promoter—Smac组凋亡率显著高于单用丝裂霉素C组。结论：转染pcDNA3-Up Ibpromoter—Smac能够通过提高Smac的表达而有效促进丝裂霉素C诱导的膀胱癌细胞凋亡，提示该质粒配合凋亡诱导药物可能成为膀胱癌新的靶向基因治疗手段．     

转bak基因促膀胱癌多药耐药细胞凋亡的研究

目的 观察转入bak基因对膀胱癌多药耐药(MDR)细胞的杀伤效果,探讨其可能的机制。方法 用脂质体将bak基因导入MDR细胞,通过原位杂交法检测bak mRNA的表达,同时用SABC免疫组化法分析bak和Bcl-2的表达。采用细胞计数法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期的变化。荧光染色观察细胞形态。结果转入bak基因后,MDR细胞的生长明显受抑制(P<0.05)。细胞周期分析可见凋亡峰,凋亡率35％。细胞中可见bak阳性表达(P<0.05),Bcl-2表达显著减少(P<0.05)。凋亡细胞在荧光显微镜下形成凋亡小体。结论 转入bak基因可显著促进MDR细胞的凋亡,其作用机制与下调Bcl-2基因的表达有关。     

线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO及其与肿瘤的关系

Smac/DIABLO即第2个线粒体衍生的半胱天冬蛋白酶激活剂/低pI的IAP直接结合蛋白,是近年发现的一种线粒体促凋亡蛋白,存在于线粒体并通过拮抗凋亡抑制蛋白(IAPs)的作用激活caspase-9和caspase-3而诱导细胞凋亡,并可促进肿瘤坏死因子相关的凋亡促使配体(TRAIL)诱导的凋亡。Smac/DIABLO还可以通过其N-或C-末端促进肿瘤细胞凋亡、增强肿瘤免疫及影响肿瘤细胞周期等机制抗肿瘤,并且增加肿瘤对放化疗的敏感性。本文主要就Smac/DIABLO的结构功能、作用机制及与肿瘤发生和治疗的关系作一综述。     

转bak基因促膀胱癌多药耐药细胞凋亡的研究(英文)

目的观察转入 bak 基因对膀胱癌多药耐药(MDR)细胞的杀伤效果,探讨其可能的机制。方法用脂质体将 bak 基因导入 MDR 细胞,通过原位杂交法检测 bak mRNA 的表达,同时用 SABC 免疫组化法分析 bak 和 Bcl-2的表达。采用细胞计数法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期的变化。荧光染色观察细胞形态。结果转入 bak 基因后,MDR 细胞的生长明显受抑制(P<0.05)。细胞周期分析可见凋亡峰,凋亡率35%。细胞中可见 bak 阳性表达(P<0.05),Bck-2表达显著减少(P<0.05)。凋亡细胞在荧光显做镜下形成凋亡小体。结论转入 bak 基因可显著促进 MDR 细胞的凋亡,其作用机制与下调 Bcl-2基因的表达有关。     

Fas抗体诱导的膀胱癌细胞凋亡

背景与目的：Fas是死亡因子,可以诱导细胞的凋亡性死亡,但许多表达Fas的恶性肿瘤细胞却不能进行凋亡性死亡,可能与其表达水平低下有关,为此我们研究了细胞Fas表达水平与抗Fas治疗生物学效应之间的相互关系。方法：分别将低表达Fas的膀胱癌细胞系EJ细胞进行脂质体介导的方法转染Fas基因和肿瘤坏死因子α（TNFα)处理,并用流式细胞直接免疫荧光术检测Fas的表达;单细胞电泳和流式细胞技术检测鼠抗人Fas单克隆抗体DX2 IgG1κ诱导转染Fas基因的、经TNFα处理的和未转染未处理的EJ细胞的细胞DNA损伤和凋亡。结果：流式细胞直接免疫荧光术检测EJ细胞Fas表达阳性率19．18％,经TNFα处理后的EJ细胞Fas表达阳性率28．03％,转染Fas基因后的EJ细胞Fas分子表达阳性率68．69％。鼠抗人Fas单克隆抗体DX2 IgG1κ诱导的EJ细胞组细胞电泳后所产生的拖尾现象轻微;DX2 IgG1κ对TNFα处理组的拖尾现象明显,而对转Fas基因组可引起最强的细胞拖尾现象,经统计学分析后表明,3组细胞的尾长与总长的比值之间差异均有显著统计学意义,P＜0．01;流式细胞技术检测EJ细胞和转Fas基因组EJ细胞中的凋亡细胞分别为7．4％和66．3％。结论：EJ细胞系对Fas抗体触发细胞凋亡的敏感性依赖于细胞表面Fas的表达水平。     

凋亡素体外诱导表达Survivin膀胱癌细胞凋亡效果观察

目的:观察凋亡素对表达Survivin膀胱癌细胞株的作用效果,并结合相应机制探讨其临床意义.方法:利用免疫组织化学法检测膀胱癌细胞株BIU-87中Survivin的表达水平,并计算平均每高倍镜视野中阳性细胞比率.将肿瘤细胞分为单纯细胞组、转染空质粒pCDNA3组及转染pCDNA3/Apoptin组,利用脂质体转染法将真核表达栽体pCDNA3/Apoptin及pCDNA3空质粒转染入膀胱癌细胞中,并于转染后24h通过RT-PCR法检测细胞中Apoptin的表达情况.分别于转染后24、48、72h利用MTT法检测各组细胞存活率,并利用流式细胞仪TUNEL法检测各组细胞的凋亡率.结果:利用免疫组织化学法检测发现膀胱癌细胞株BIU-87中Survivin呈高表达状态,平均每个高倍镜视野中阳性细胞比例约70%,并有较多细胞呈现高表达状态.转染后24h通过RT-PCR法可见Apoptin在膀胱癌细胞中表达.分别于转染后24、48、72h利用MTT法检测各组细胞存活率,发现转染pCDNA3/Apoptin组肿瘤细胞存活率均明显低于对照组,差别有统计学意义(P<0.05);利用流式细胞仪TUNEL法检测各组细胞的凋亡率,发现转染pCDNA3/Apoptin组肿瘤细胞凋亡率均明显高于对照组,差别有统计学意义(P<0.05).结论:凋亡素可在体外诱导高表达Survivin的膀胱癌细胞株BIU-87高效凋亡,结合相关机制表明凋亡素可在一定程度上克服Survivin的抗凋亡作用,因此有可能成为Survivin拮抗的抗肿瘤药物的协同用药选择.     

miR-203抑制bcl-w表达促进膀胱癌细胞凋亡

摘 要：［目的］ 研究miR-203在膀胱癌组织中的表达,探讨其表达对膀胱癌细胞T24凋亡的影响。［方法］ 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测23例膀胱癌组织和癌旁正常组织中miR-203表达情况,免疫印迹法检测bcl-w蛋白的表达情况,Pearson法分析miR-203表达与bcl-w蛋白表达相关性;转入miR-203-mimic建立高表达miR-203的T24细胞,流式细胞仪检测miR-203表达对T24细胞凋亡的影响。［结果］ miR-203在膀胱癌组织中的相对表达量为1.40±0.47,显著低于其在癌旁正常组织中的表达量（2.99±0.59）（P=0.0001）;miR-203在膀胱癌组织中的表达与bcl-w蛋白表达呈负相关（r=-0.952,P<0.001）;miR-203靶向抑制T24细胞中bcl-w蛋白的表达,转入miR-203-mimic 24h和72h后,T24细胞凋亡率分别为8.33%±0.58%和17.07%±0.76%,均显著高于对照组T24细胞的3.63%±0.32%和4.16%±0.28%（P=0.012,P<0.001）。［结论］ miR-203在膀胱癌组织中低表达,其可以通过靶向抑制bcl-w的表达促进膀胱癌细胞T24的凋亡。     

重组人TRAIL促卵巢癌细胞凋亡作用的研究

目的:分析重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)分子诱导卵巢癌细胞的凋亡。方法:观察重组人可溶性TRAIL对卵巢癌细胞直接细胞毒作用,MTT法分析不同浓度TRAIL对卵巢癌细胞3AO、HO-8910的生长抑制率,采用流式细胞技术观察TRAIL作用于3AO后的凋亡率的变化。结果:重组人可溶性TRAIL蛋白可抑制卵巢癌细胞生长,诱导卵巢癌细胞发生凋亡;倒置显微镜下观察细胞呈现圆形固缩形态,细胞凋亡之后存活细胞减少。结论:重组人可溶性TRAIL具有明显诱导卵巢癌细胞凋亡的活性,并具有量效性及时效性。其抑制卵巢癌细胞机制可能与其促凋亡作用有关。     

人端粒酶逆转录酶启动子调控腺病毒介导胸苷激酶基因治疗人膀胱癌的动物实验研究

目的：探讨带有人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子驱动单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶（HSV—tk）基因的重组腺病毒Ad—hTERT—HSV—tk结合无毒的环氧鸟苷（GCV）对人膀胱癌的治疗作用．方法：建立人膀胱癌细胞株253JBALB／C裸小鼠移植痛模型．采用Ad—hTERT—HSV—tk裸鼠尾静脉注射，腹腔注射GCV治疗并观察结果通过常规病理切片观察肿瘤破坏情况及安全性；通过TUNEL染色进一步观察肿瘤的凋亡情况，免疫组化法测定增值细胞核抗原（PCNA），结果：Ad-hTERT—HSV—tk／GCV治疗组，显示出明显的肿瘤抑制作用，其肿瘤体积、重量显著低于各对照组（P〈0．05）．抑瘤率明显，Ad—hTERT—HSV—tk／GCV治疗组凋亡指数高于其它各组，而增殖指数却明显低于其它各组。结论：Ad—hTERT—HSV—tk／GCV系统对裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用，可以靶向性转入人膀胱癌细胞，治疗效果显著．     

凋亡抑制蛋白XIAP和促凋亡因子Smac在胰腺癌化疗抵抗中的调控作用

Objective： To investigate the relation of X-linked inhibitor of apoptosis （XIAP） and second mitochondria-derived activator of caspase （Smac） signaling pathway to chemoresistance in human pancreatic cancer Panc-1 and BXPC-3 cells. Methods： Apoptosis and the changes of XIAP expression in permeabilized cells induced by cisplatin and 5-fluorouracil （FU） were measured by flow cytometry. The cytosolic expression of XIAP, Smac and caspase-3 was detected by Western blot. A recombinant plasmid vector pEGFP-N1/Smac was constructed and transfected into of Pancol cells. The effect of cytosolic overexpression of Smac on apoptosis of Panc-1 cells was evaluated by flow cytometry. Results： Panc-1 was more resistant to cisplatin or 5-FU induced apoptosis than BXPC-3. Western blot revealed that chemoresistant Panc-1 highly expressed XIAP, and increased cytosolic expression of Smac might be responsible for the marked down-regulation of XIAP in chemo-sensitive BXPC-3 cells after exposure to cisplatin or 5-FU. Furthermore, cytosolic overexpression of Smac could significantly down-regulate the levels of XIAP and promote the activity of caspase-3, as well as sensitize Panc-1 cells to anticancer drug-induced apoptosis. Conclusion： Anticancer drug-induced apoptosis requires mitochondrial release of Smac and downregulation of XIAP, which may be an important determinant of chemo-sensitivity in pancreatic cancer cells. Up-regulation of cytosolic expression of Smac may act as an effective modifying signal to overcome apoptosis resistance to chemotherapy in pancreatic cancer cells.     

凋亡抑制蛋白XIAP和促凋亡因子Smac在胰腺癌化疗抵抗中的调控作用

目的探讨凋亡抑制蛋白XIAP和促凋亡因子Smac在胰腺癌细胞化疗抵抗中的作用及其分子机制。方法应用流式细胞术检测顺铂、5-FU介导的Panc-1、BXPC-3的凋亡率及胞浆染色分析细胞XIAP表达变化,Western-blot分析XIAP、Smac、Caspase-3表达水平；构建pEGFP-N1／Smac真核表达载体并转染胰腺癌Panc-1细胞,流式细胞术检测转染胞浆表达型 Smac基因对Panc-1细胞凋亡敏感性的作用。结果与BXPC-3细胞相比,Panc-1对顺铂或5-FU介导的凋亡具有较强抵抗性,Western blot分析显示Panc-1细胞高表达XIAP,在化疗药物作用下化疗敏感细胞BXPC-3胞浆内XIAP水平下降明显多于Panc-1细胞,而且凋亡的BXPC-3细胞释放入胞浆内的成熟 Smac蛋白水平明显高于Panc-1细胞。转染胞浆表达型Smac基因至化疗抵抗Panc-1细胞,可明显下调其XIAP表达水平,促进效应 Caspase-3分子活化,显著提高顺铂、5-FU诱导的细胞凋亡率。结论在化疗药物诱导的凋亡中,线粒体释放Smac下调XIAP是胰腺癌化疗敏感性的重要决定因素,而上调Smac活性蛋白的胞浆表达作为一种有效调节信号,通过拮抗XIAP的凋亡抑制作用协同化疗药物促进胰腺癌细胞凋亡。     

过表达Numb基因对人膀胱癌5637细胞周期和增殖的影响

目的：：探讨 Numb 基因对人膀胱癌细胞周期和增殖能力的影响及相关机制。方法：选取人膀胱癌细胞5637为研究对象,采用 Numb-ORF 表达质粒转染细胞为实验组,设置阴性对照和空白对照组。采用荧光定量聚合酶链式反应和蛋白质印迹技术检测各组中 Numb 基因和细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）的表达;采用流式细胞技术检测各组的细胞周期;采用酶标仪检测细胞在490nm 的吸光度值,评价各组细胞的增殖活力。结果：实验组 Numb的△CT 值为1.58±0.41,阴性对照组为5.66±0.53,空白对照组为5.81±0.47,差异有统计学意义（F ＝77.39, P ＝0.00）;实验组 Cyclin D1的△CT 值为4.92±0.73,阴性对照组为2.59±0.33,空白对照组为2.45±0.26,差异有统计学意义（F ＝11.70,P ＝0.01）。实验组中 G0／G1期细胞的比例（％）为49.76±7.07,明显高于阴性对照组的36.52±3.32和空白对照组的38.21±2.06,差异有统计学意义（F ＝7.17,P ＝0.03）。增殖实验中,实验组24 h 的吸光度值为0.35±0.08,明显低于阴性对照组0.52±0.06和空白对照组0.55±0.04（F ＝9.03,P ＝0.02）。结论：Numb 基因可以提高 G0／G1期细胞比例,抑制膀胱癌细胞增殖,其机制可能是通过抑制 Cyclin D1表达实现。     

紫杉醇诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡及与Bcl-2基因表达的关系

目的探讨紫杉醇对人膀胱癌EJ细胞凋亡的作用及其机制。方法体外培养人膀胱癌EJ细胞,以不同浓度紫杉醇处理12～72 h后,应用流式细胞仪检测凋亡率,测定细胞周期;原位杂交法检测紫杉醇作用后Bcl-2基因表达的变化。结果流式细胞仪检测结果发现紫杉醇诱导后的膀胱癌EJ细胞周期阻滞于G2/M期,高浓度紫杉醇（100、1 000 nmol/L）更明显,出现凋亡峰,细胞凋亡率随紫杉醇浓度的增加而增高;紫杉醇作用后Bcl-2基因表达发生明显变化,随紫杉醇浓度的增加而降低。结论紫杉醇能够诱导EJ细胞凋亡,细胞凋亡率随紫杉醇浓度的增加而增高;紫杉醇通过抑制Bcl-2基因表达而诱导细胞凋亡,为其诱导凋亡的作用机制之一。     

IL-12基因联合吡柔比星治疗裸鼠膀胱癌移植瘤的实验

目的 探讨联合应用白细胞介素12(IL-12)质粒和吡柔比星（THP）对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法 将人EJ膀胱癌细胞株裸鼠腋下接种,成瘤后设4组（每组6只）：联合组于骨骼肌注射IL-12真核表达质粒pcAGGS-mIL-12和腹腔注射THP;IL-12组骨骼肌注射pcAGGS-mIL-12;THP组腹腔注射THP;对照组肌肉及腹腔注射0.9%氯化钠溶液,以上注射每周2次,共4次。观察各组裸鼠肿瘤大小变化。4周后处死荷瘤鼠。免疫组织化学法检测肿瘤内VEGF 表达。ELISA法测定血液及肿瘤组织中IL-12和γ-干扰素(IFN-γ)的表达。结果 联合组肿瘤生长明显抑制,瘤重及体积明显小于其他组。ELISA法表明IL-12组和联合组 IL-12和IFN-γ都高表达。免疫组织化学法表明联合组VEGF基因表达量明显低于其他组（P<0.05）。结论 联合应用IL-12真核表达质粒pCAGGS-mIL-12和THP,对人膀胱癌裸鼠移植瘤的抑制作用明显强于单独应用IL-12和THP。     

p16基因在膀胱肿瘤细胞凋亡中的作用

 目的　探讨p16基因与膀胱肿瘤细胞凋亡的关系。方法　应用SABC免疫组织化学法检测了51例膀胱移行细胞癌p16基因的表达,同时用流式细胞仪检测其细胞凋亡情况。结果　p16阳性表达率为47.1%(24/51),平均凋亡肿瘤细胞百分比为1.5%,p16阳性表达的肿瘤组织凋亡细胞百分比>1.5%的发生率为62.5%,p16阴性表达的肿瘤组织凋亡细胞百分比>1.5%的发生率为25.9%,两者比较有显著性差异(P<0.01)。结论　p16基因的表达与膀胱肿瘤细胞凋亡有关,p16基因可能参与膀胱肿瘤细胞凋亡的正向调节作用。     

膀胱癌细胞凋亡及p53基因表达的意义

目的探讨膀胱癌细胞凋亡及p53基因表达的意义。方法采用免疫组织化学方法及TUNEL法,检测11例正常膀胱黏膜和83例膀胱移行细胞癌中p53基因的表达及细胞凋亡指数。结果83例膀胱移行细胞癌中p53阳性50.6%,凋亡指数(AI)=1.4335±0.3863。p53阳性表达与膀胱癌病理分级及临床分期呈正相关(γ=0.492,P<0.01;γ=0.341,P<0.01);凋亡指数(AI)与膀胱癌病理分级及临床分期呈正相关(γ=0.642,P=0.000<0.01;γ=0.455,P=0.000<0.01);AI与p53表达无相关性。AI、p53表达与患者5年生存率有关。结论临床联合运用临床分期及病理分级并检测p53可用于判断膀胱移行细胞癌的预后。