BCR-ABL抑制剂STI571对慢性髓系白血病细胞株K562中SARI基因表达影响的研究

为了探讨抑癌基因SARI(suppressor of AP-1 regulated by IFN)在慢性髓系白血病(CML)中表达调控可能的分子机制,收集了46名CML患者和40名健康志愿者外周血样品,使用实时定量PCR技术检测2组人群中SARI基因的相对表达水平.在体外以CML细胞株K562为研究模型,使用BCR-ABL抑制剂STI571(imatinib)处理K562细胞,用实时定量PCR技术检测SARI基因的相对表达水平.结果表明,CML患者外周血中SARI mRNA相对表达量明显低于健康志愿者,2组间具有明显的统计学差异(P<0.001).使用STI571(2.5 μmol/L)处理K562细胞24小时后SARI mRNA相对表达量明显高于未处理K562细胞,两组间差异具有显著性(P<0.001).结论:CML患者外周血SARI mRNA表达水平降低可能与该疾病的发生发展过程相关联,而且SARI基因表达下调与BCR-ABL抑制作用有关.本研究为CML患者基因治疗的研究提供了新线索.     

慢性粒细胞白血病错配修复基因的研究

目的 探讨慢性粒细胞白血病（CML）错配修复（MMR）基因的表达水平及调控机制。方法 用半定量RT-PCR方法检测62例CML患者及K562细胞的5个MMR基因（hMSH2、hMSH3、hMSH6、hMLH1、hPMS2）mRNA的表达；用RT-PCR方法动态检测26例进行异基因外周血造血干细胞移植（allo-PBSCT）及4例使用伊马替尼治疗的CML患者ber-abl及MMR mRNA的表达水平；用伊马替尼体外作用于CML患者的单个核细胞（MNC）及K562细胞后，用Western blot方法检测BCR—ABL融合蛋白的酪氨酸磷酸化水平，RT-PCR方法检测MMR mRNA表达水平。结果 与正常人比较，CML患者及K562细胞的hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA的表达明显降低（P〈0．05）；26例行allo—PBSCT及4例使用伊马替尼治疗的CML患者，其hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA的表达随着bcr—abl mRNA的表达降低而升高；伊马替尼体外作用于CML患者MNC及K562细胞后，其hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA的表达随着BCR—ABL融合蛋白酪氨酸磷酸化水平的降低而升高。结论 CML患者、K562细胞hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA比正常人降低，bcr—abl融合基因抑制hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA的表达。     

慢性髓系白血病DNA依赖蛋白激酶催化亚基基因的研究

本研究旨在探讨髓系粒细胞白血病（CML）的DNA依赖蛋白激酶催化亚基（DNA-PKcs）基因表达水平、调控机制及其在CML急性变中的作用。用半定量RT-PCR、Western blot方法分别检测62例CML患者及K562细胞的DNA-PKcs mRNA和DNA-PKcs蛋白表达,并与23例正常人作对照;对26例接受同种异基因外周血干细胞移植（allo-PBSCT）及4例使用伊马替尼治疗的CML患者用RT-PCR、Western blot方法分别动态检测bcr-abl mRNA和DNA-PKcs蛋白表达水平;用伊马替尼体外作用CML患者的单个核细胞（MNC）及K562细胞后,用RT-PCR、Western blot方法分别检测DNA-PKcs mRNA和DNA-PKcs蛋白表达及bcr-abl融合蛋白的酪氨酸磷酸化水平。结果表明：与正常人比较,CML患者及K562细胞的DNA-PKcs蛋白表达量明显降低（P〈0.05）;26例allo-PBSCT及4例使用伊马替尼治疗的CML患者,DNA-PKcs蛋白表达量随着bcr-abl mRNA表达量的降低而升高;伊马替尼体外作用于CML患者MNC及K562细胞后,DNA-PKcs蛋白表达量随着bcr-abl融合蛋白酪氨酸磷酸化水平的降低而升高。结论：bcr-abl融合基因通过转录后机制下调DNA-PKcs蛋白的表达;DNA-PKcs蛋白表达下降可能是CML急性变的机制之一。     

2-甲氧基雌二醇对慢性髓系白血病K562细胞Caspase-3及Survivin表达的影响

本研究探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对慢性髓系白血病（CML）K562细胞caspase-3和survivin表达的影响。实验分3组：对照组,培养基中不含2-ME;实验组,分别用1、2、4、8及16μmol／L的2-ME处理K562细胞;阴性对照组,培养液中以不合RNase的灭菌蒸馏水代替K562细胞。应用TUNEL、流式细胞术（FCM）、半定量RT—PCR分别检测K562细胞凋亡率、caspase-3及survivin蛋白及其基因表达水平。结果表明：2-ME在一定的浓度范围内呈剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．01）,且TUNEL和FCM方法检测的K562细胞凋亡率呈正相关（γ=0．845,P=0．034）。随着2-ME浓度增加,caspase-3蛋白表达量逐渐增加,而survivin蛋白表达量逐渐降低,两者与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;且caspase-3与survivin蛋白表达量之间呈负相关（γ=-0．956,P=0．001）。随着2-ME浓度增加,caspase-3基因表达量逐渐增加,而survivin基因表达量逐渐降低,两者与对照组比较差异均有统计学意义（p均〈0．01）,且caspase-3与survivin基因表达量之间呈负相关（γ=0．966,P=0．001）。结论：2-ME能够以剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,显示了其对CML有潜在的治疗价值。     

5-氮杂胞苷可通过降低K562细胞miRNA-17-19b的表达抑制细胞增殖

本研究探讨miRNA-17-19b在不同细胞系的表达差异。用5-氮杂胞苷（5-aza）处理miRNA-17-19b表达水平相对较高的K562细胞系,观察其对miRNA-17-19b表达水平的影响。提取K562细胞系、HL-60细胞系、NB-4细胞系、HeLa细胞系、慢性髓系白血病（CML）病人外周血白细胞及动员后的正常人外周血白细胞总RNA,在多聚腺苷酸（ployA）加尾后进行逆转录,用荧光时实定量PCR的方法检测以上细胞miRNA-17-19b的相对表达水平。分别在24、48、72小时用2.5μmol/L的5-氮杂胞苷处理K562细胞系,在96小时后收集细胞,用荧光时实定量PCR的方法检测处理前后miRNA-17-19b的表达水平变化。抑制miR-19a在K562细胞系的功能,观察其对K562细胞增殖的影响。结果表明：K562细胞系及CML病人外周血白细胞的miRNA-17-19b的表达水平高于动员后的正常人外周血白细胞。对miR-17-19b表达水平相对较高的K562细胞系,5-氮杂胞苷处理可降低其miRNA-17-19b表达水平,通过抑制miR-19a的功能可以抑制K562细胞系的增殖。结论：与正常人外周血白细胞相比较,miRNA-17-19b在K562细胞系及CML病人的外周血白细胞中的表达水平较高,5-氮杂胞苷可抑制miRNA-17-19b在K562细胞系的表达,其中对miR-19a影响尤其显著;体外抑制miRNA-19a的功能可抑制K562细胞系的增殖。     

5-氮杂-2＇-脱氧胞苷对人红白血病K562细胞系生物学活性及DNA结合抑制因子4基因表达的影响

本研究探讨5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人慢性髓系白血病（CML）急红变细胞系K562细胞生物学活性和DNA结合抑制因子4（ID4）基因表达的影响,探寻白血病基因治疗的新靶点。应用甲基化特异性PCR方法检测K562细胞中ID4基因甲基化情况;实时荧光定量PCR检测5-Aza-CdR处理K562细胞后ID4 mRNA的表达水平;流式细胞术分析5-Aza-CdR处理后细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果表明,K562细胞中存在ID4基因的甲基化;5-Aza-CdR处理后K562细胞ID4 mRNA表达增加,并具有浓度依赖性,不同浓度药物处理组之间差异具有统计学意义（p〈0.01）。5-Aza-CdR可使K562细胞凋亡率增加,并且作用呈时间剂量依赖性。且细胞凋亡率与ID4 mRNA的相对表达水平呈高度相关（r=0.95）。5-Aza-CdR处理K562细胞48小时后,随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期。结论：甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR能促使CML急红变细胞系K562细胞中沉默的ID4基因重新表达,可能进而参与K562细胞凋亡和细胞周期阻滞的调控。     

MGMT基因导入对真核细胞保护作用的实验研究

目的克隆六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（MGMT）基因并构建表达载体，导入真核细胞表达，研究MGMT对真核细胞保护作用。方法利用RT—PCR克隆人肝细胞MGMT基因并重组构建真核表达载体。脂质体法导入K562细胞及人外周血单个核细胞（PBMNC），用实时定量PCR法检测目的基因的表达。MTT法检测转基因细胞对烷化剂耐药性的改变。结果成功克隆人MGMT基因，转染K562细胞和PBMNC后，转基因组MGMTmRNA表达水平分别是转染空载体组的13．4倍（P〈0．01）和4倍（P〈0．01）。Western blot结果显示MGMT蛋白表达在转基因组中明显高于转空载体组及对照组。耐药性实验结果显示目的基因导入后，K562稳定转染细胞和PBMNC瞬时转染细胞对烷化剂的半数抑制浓度分别提高到原来的7倍和2倍。结论MGMT基因导入可使真核细胞对烷化剂的耐药性得到不同程度的增强，从而对细胞起到保护作用。     

酪氨酸激酶抑制剂STI571与P21WAF基因克隆治疗慢性粒细胞白血病的实验研究

本研究探讨酪氨酸激酶抑制剂ST1571和P21^WAF基因克隆对慢性粒细胞白血病急变K562细胞株的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的治疗作用。RT—PCR扩增P21^WAF基因，胶纯化回收后连接到T载体测序，序列正确后构建P21—pcDNA3．1栽体，将P21—pcDNA3．1与空载体分别以脂质体转染入P21蛋白表达缺如的K562细胞，经筛选得到G418抗性的K562细胞株，Westernblot证实转染后有P21蛋白表达，MTT法检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果表明：表达外源性P21蛋白的P21—pcDNA3．1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株，流式细胞仪显示G0／G1期细胞增多，MTT法显示P21—pcDNA3．1-K562细胞与ST1571联合应用后，与单用ST1571作用的K562细胞相比，凋亡细胞比例轻度减少，细胞存活率下降较慢。结论：表达外源P21蛋白能抑制K562细胞增殖，同时对ST1571的促凋亡作用有轻度抑制，并降低K562细胞对ST1571的敏感性。     

肿瘤相关基因fgfr3mRNA在白血病细胞中的表达及其临床意义

本研究旨在了解白血病细胞中fgfr3基因的表达水平及其和临床的关系。应用RT—PCR法检测4个白血病细胞系及96例白血病患者和14例对照者骨髓样本中fgfr3mRNA的表达，并分析了其与临床指标及染色体异常的相关性。96例白血病患者包括36例AML，29例ALL和31例CML。结果表明：fgfr3基因在K562和U937细胞中有表达，而在HL-60和SHI-1细胞中无表达。AL组和CML组fgfr3基因的阳性率（分别为46．15％和51．61％）与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。AML组和ALL组fgfr3基因的阳性率（分别为44．44％和48．28％）均高于对照水平，差异有统计学意义（p〈0．05）。fgfr3基因的阳性表达与外周血高白细胞计数（≥20×10^9／L）呈显著性正相关（P〈0．05）。ALL患者中fgfr3基因的表达与bcr／abl融合基因的异常呈显著正相关（r=0．151，P〈0．05）。而AL患者fgfr3基因的阳性表达与染色体预后分组无显著相关性。结论：AL和CML患者均存在fgfr3基因的过表达，提示fgfr3基因可能参与了AL和CML的发病。     

汉防己甲素联合柔红霉素对K562／A02细胞株P21蛋白和P糖蛋白表达的影响

本研究旨在探讨汉防己甲素（TET）对人慢性髓系白血病（CML）急性红白血病细胞株K562／A02多药耐药的逆转作用,及其逆转耐药与细胞周期依赖性激酶抑制因子（p21）、P糖蛋白（P—gp）及其基因的关系,为TET的临床应用提供新的理论基础。K562／A02细胞实验分组为：①单用柔红霉素（DNR）对照组;②DNR＋TET0．5mg／L组;⑧DNR＋TET1．0mg/L组;④DNR＋TET2．0m8／／L组。采用Western blot法检测实验各组K562／A02细胞P21的表达。采用流式细胞仪（FCM）检测实验各组细胞P—gp的表达,采用半定量PCR（RT—PCR）测定细胞MDR1基因mRNA表达水平。结果表明：K562／A02细胞中P21蛋白的表达随着TET浓度的增加而增强,P—gp蛋白的表达随着TET浓度的增加而减低。K562细胞中mdr1基因几乎无表达,K562／A02细胞中mdrl基因高表达,随着TET浓度的增加K562／A02细胞mdrl基因表达不断降低。结论：TET对K562／A02耐药具有逆转作用且呈浓度依赖性,其逆转耐药可能与其上调P21蛋白的表达、下调mdrl及P—gp的表达有关,     

二硫化二砷联合伊马替尼诱导慢性髓细胞白血病细胞凋亡机制探讨

目的：观察二硫化二砷（As2S2）和伊马替尼（STI571）联合用药对慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）细胞株的作用机制。方法：应用MTT增殖抑制实验、锥虫蓝拒染细胞计数、瑞氏染色细胞形态观察、Annexin V流式细胞仪检测凋亡细胞,RT-PCR检测bcr-abl mRNA的表达及蛋白印迹（Western blot）分析BCR-ABL的表达、细胞色素C（cytoC）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（caspase）蛋白表达,观察As2S2、STI571联合或单独作用于STI571敏感细胞株K562S及耐药细胞株K562R的情况。结果：2.5μmol/LAs2S2＋0.25μmol/LSTI571或4μmol/LAs2S2＋8μmol/LSTI571联合用药对K562S或K562R有明显生长抑制协同作用和促凋亡协同作用;联合用药对K562S或K562R的bcr-abl mRNA的表达无明显影响,但K562S细胞BCR-ABL表达明显减少,K562R细胞BCR-ABL表达略有减少。且联合用药可促进凋亡诱导蛋白cytoC释放增多及caspase9和caspase3前体下调。结论：STI571与As2S2联合用药对K562S和K562R细胞有明显的生长抑制和促凋亡的协同作用,这一作用可能通过减少BCR-ABL表达及凋亡相关蛋白cytoC释放,并下调caspase9和caspase3前体的表达以促进细胞凋亡。     

STI571联合三氧化二砷对K562细胞增殖、凋亡及Caspase-3、Bcl-xL表达的影响

本研究旨在探讨STI571单独应用及与三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)联合应用对K562细胞增殖、凋亡及凋亡相关因子caspase-3、bcl-xL mRNA表达的影响。用MTT法检测各组K562细胞在药物作用各时间点(24、48、72小时)的OD值,以评估药物对细胞增殖的作用;AnnexinV/PI荧光标记法检测K562细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR检测K562细胞caspase-3、bcl-xL mRNA的表达。结果表明:STI571单独应用及与As2O3联用均可抑制K562细胞的增殖。各实验组的OD值随着实验时间的延长而降低,各时间点之间的差异具有显著性(p0.05),且各实验组均在72小时时OD值降低最明显。在同一时间点,与对照组相比较,各实验组的OD值均逐渐降低(p0.05),其中实验5组下降最明显。流式细胞仪检测发现,对照组的凋亡率随着时间的延长无明显变化;各实验组的凋亡率随着时间的延长逐渐上升,各时间点之间的差异具有显著性(p0.05),以72小时时上升最为明显;在同一时间点,与对照组相比较,各实验组的凋亡率均逐渐上升(p0.05),其中以实验5组的凋亡率上升最明显。实时荧光定量PCR检测发现,与对照组相比,各实验组bcl-xL mRNA的表达减弱,出现了2-ΔΔCT值的减小,且减小程度实验3组大于实验2组(p0.05);与对照组相比,各实验组caspase-3 mRNA的表达增强,出现了2-ΔΔCT值的增大,且增大的程度实验3组大于实验2组(p0.05)。结论:STI571单独应用时能够抑制K562细胞增殖,加速其凋亡。STI571联合As2O3对K562细胞抑制增殖及加速凋亡的作用加强。两药联合后Caspase-3 mRNA的表达较STI571单独应用时增强而bcl-xL mRNA的表达减弱。影响凋亡相关因子caspase-3、bcl-xL mRNA的表达,可能是As2O3与STI571联合抗白血病细胞产生协同作用的分子机制之一。     

酪氨酸激酶抑制剂STI571治疗慢性粒细胞白血病的研究

目的:研究特异性酪氨酸激酶抑制剂STI571对慢性粒细胞白血病(简称慢粒)细胞增殖、凋亡、周期调控及bcr-abl融合基因表达的影响,为慢粒的基因治疗提供理论依据。方法:细胞培养慢粒急变细胞系K562细胞株,通过MTT检测STI571作用下细胞存活率,流式细胞仪检测周期变化,电镜及DNA电泳检测细胞凋亡,半定量RT-PCR检测STI571对bcr-abl融合基因表达的影响。结果:STI571作用后K562细胞中G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少。流式细胞图中的二倍体峰前可见一明显亚二倍体峰———凋亡峰(apoptosispeak),提示STI571能明显诱导K562细胞凋亡。电镜发现STI571作用于K562细胞12～72h后,诱导出各期凋亡细胞及凋亡小体。半定量PCR灰度扫描结果显示bcr-abl基因的mRNA表达下降,电泳检测扩增产物,荧光亮度减弱。结论:STI571能明显抑制白血病细胞增殖,细胞阻滞于G0/G1期,且具有明显的诱导凋亡作用,反馈抑制bcr-abl融合基因的表达。     

ST1571诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡信号通路的研究

本研究应用基因芯片探讨酪氨酸激酶抑制剂（STI571）对K562细胞生长、增殖的影响，研究STI571诱导细胞凋亡过程中基因表达的变化及STI571诱导K562细胞凋亡的机制。用RD—PCR技术制备基因芯片探针，然后制成飚62细胞表达谱芯片；用相差显微镜观察K562细胞在STI571处理前后的形态变化；用MIT法检测K562细胞的凋亡，用制备的K562细胞表达谱芯片分析基因表达水平。结果表明，在体外培养条件下用1．0μmol／L的STI571处理K562细胞达到一定时间（24小时）后，K562细胞生长明显变缓，出现凋亡细胞的特征。用自制的l（562细胞基因表达谱芯片检测显示，STI571诱导K562细胞凋亡前后的基因表达有差异。杂交检测后发现，经STI571诱导后基因表达下调的基因有9个，表达上调的基因有4个。这些表达变化的基因主要包括细胞周期相关基因、细胞代谢通路相关基因、信号转导和转录调节相关基因及抗凋亡基因。结论：STI571能有效抑制K562细胞生长，诱导K562细胞凋亡；筛选获得的靶基因在K562细胞恶性转化过程中发挥了重要作用，这为药物靶基因的筛选提供了理论基础。     

酪氨酸激酶抑制剂通过下调Mcl-1和Bcl-xl诱导K562细胞凋亡

本研究观察酪氨酸激酶抑制剂STl571对CML细胞增殖和凋亡以及抗凋亡蛋白Mcl—l表达的影响，探讨Mcl一1在BCR／ABL抗凋亡信号传导中的作用。应用STl571处理慢性髓系白血病K562细胞株，采用台盼蓝拒染法和MTT法检测STl571对K562细胞增殖的影响，用AnnexinV和碘化丙锭双染法及流式细胞术检测K562细胞凋亡情况，蛋白印迹法检测STl571对细胞内蛋白酪氨酸磷酸化水平和凋亡相关蛋白表达的影响。结果发现：STl57l可有效地抑制K562细胞增殖并诱导K562细胞凋亡，这种作用呈剂量和时间依赖性，同时降低细胞内蛋白酪氨酸磷酸化水平和下调抗凋亡蛋白Mcl—l和Bcl-xl的表达。STl571抑制K562细胞增殖和诱导凋亡与抗凋亡蛋白Mcl—l和Bcl—xl的表达下调一致。结论：STl571通过阻断CML细胞内信号传导途径，下调Mcl—l和Bcl—xl的表达，抑制K562细胞增殖并诱导凋亡，表明Mcl—l和Bcl—xl一起在CML抗凋亡过程中发挥重要作用.     

白血病人的gfi-1表达及慢病毒介导的gfi-1基因沉默对K562细胞增殖的影响

本研究旨在检测独立生长因子(Gfi-1)在白血病患者的表达水平并探讨慢病毒介导的gfi-1基因沉默对人白血病细胞株K562增殖的影响。采用荧光实时定量PCR及Westernblot方法检测初治白血病患者gfi-1的表达水平,分析其在各型白血病中的表达情况。设计、合成一对针对gfi-1 mRNA的shRNA序列,退火后连接到pLVTHM干扰载体上,与psPAX2、PDM2G共转HEK293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染K562细胞,建立稳定株。应用实时定量PCR和Western blot方法检测K562细胞gfi-1及baxmRNA和蛋白的表达,并与对照组进行比较.结果表明:慢病毒介导的shgfi-1能明显降低gfi-1的mRNA及蛋白水平,而bax的mRNA及蛋白水平则都上调。CCK-8检测发现,与对照组相比,shgfi-1能明显抑制K562细胞的增殖。结论:gfi-1在初治白血病患者中的高表达可能参与白血病的发生发展。gfi-1特异的shRNA干扰可以有效地下调K562细胞gfi-1基因的表达,抑制K562细胞的增殖,gfi-1基因可能是白血病基因治疗的一个有效靶点。     

IL-23单独或联合IL-2诱导人外周血单个核细胞对K562细胞杀伤效应的实验研究

本研究旨在探讨IL-23单独或联合IL-2诱导的人外周血单个核细胞（PBMNC）对白血病细胞的杀伤效应及作用机制.IL-23（50 ng/ml）单独或联合IL-2（100 U/ml）体外诱导正常人PBMNC 72 h,并与白血病细胞株K562共同培养.采用CCK-8法测定不同时间诱导后的PBMNC对K562细胞的杀伤效应;采用ELISA方法检测杀伤活性最大时细胞培养液中IFN-γ的水平;应用RQ-PCR法检测诱导后PBMNC的穿孔素、颗粒酶B的表达水平.结果表明,IL-23单独或联合IL-2作用后的PBMNC均对K562细胞有杀伤活性,随着时间延长,杀伤率明显增加,各个时间点比较,有显著性差异（P＜0.05）;各细胞因子组培养液中分泌IFN-γ水平均显著高于空白对照组（P＜0.05）,其中以IL-23联合IL-2组诱导PBMNC表达IFN-γ的水平最高,与其它两组比较,差异显著（P＜0.05）.各细胞因子组PBMNC的穿孔素、颗粒酶B mRNA的表达量均较对照组明显增加（P＜0.05）,且IL-23联合IL-2组的穿孔素、颗粒酶B mRNA表达量显著高于其他组（P＜0.05）.结论：IL-23能促进PBMNC对K562细胞的杀伤活性,与IL-2联合具有协同增强作用,并呈时间依赖性.IL-23作用于PBMNC后IFN-γ、穿孔素、颗粒酶B的表达均明显增加,且与IL-2具有协同作用.推测IL-23可能通过诱导PBMNC表达IFN-γ、穿孔素、颗粒酶B发挥抗白血病细胞作用.     

shRNA干扰CIAPIN1基因表达促进K562细胞粒系分化

目的探讨靶向干扰CIAPIN1基因表达对慢性粒细胞白血病（CML）细胞系K562粒系分化的影响。方法针对CIAPIN1基因设计并构建短发卡RNA（shRNA）真核表达载体,转染K562细胞并作为干扰组,以无关序列shRNA处理的K562细胞作为对照组。采用Real-time PCR及Western blot技术鉴定干扰效率;采用瑞氏染色和电镜分别观测K562细胞形态学和超微结构的改变;采用Real-time PCR方法检测粒系分化标志基因中性粒细胞胞浆因子1（NCF1）、血清黏蛋白1（ORM1）以及粒系分化转录因子CCAAT/增强子结合蛋白（C/EBPα）、低氧诱导因子1α（HIF1α）mRNA水平的改变;流式细胞术检测K562细胞表面分化抗原CD11b表达的改变;Western blot技术检测ERK1/2、JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平的改变。结果与对照组相比,干扰组的CIAPIN1基因表达被有效抑制（P〈0.05）;K562细胞的形态和超微结构趋向成熟粒细胞阶段;NCF1、ORM1、C/EBPα及HIF1αmRNA表达水平升高（P〈0.05）;CD11b表达升高（P〈0.01）;ERK1/2磷酸化水平升高（P〈0.05）,而JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平未见明显改变。结论抑制CIAPIN1基因表达能促进K562细胞向成熟的粒细胞阶段分化,ERK1/2磷酸化水平的升高可能参与了该分化过程。