核因子-κB在糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义

目的 观察核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)在大鼠糖尿病早期视网膜中的表达及其在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)发病过程中的作用.方法 清洁级健康成年雄性Wistar大鼠110只,随机分为正常对照组(NC组,24只)和糖尿病造模动物组(DM组,86只).大鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱发糖尿病模型,取成模的72只大鼠随机分为2周、4周、12周和20周组,每组各18只.到上述各时间点后分别取DM组大鼠6只和NC组大鼠2只并处死,免疫印记法观察NF-κB蛋白在不同病程糖尿病大鼠视网膜的表达,采用免疫组织化学法观察NF-κB在不同病程糖尿病大鼠视网膜组织和血管的表达.结果 NC组正常大鼠视网膜中NF-κB p65的蛋白质水平非常低,为17.72±8.57,DM组糖尿病诱导成功后2周NF-κB p65蛋白质表达为38.45±12.37,并随时间的延长其表达增加,4周时的免疫印记反应强度最高为89.41±19.79,各时间点蛋白质表达比NC组明显增强(均为Jp<0.01).DM组大鼠糖尿病诱导成功后2周,视网膜表层血管即散在出现NF-κB阳性染色颗粒,4周时在视网膜内核层及内核层血管均出现NF-κB阳性染色细胞,为胞核染色,并随着病程的延长,12周时在视网膜表面血管、内核层、内核层血管和外丛状层均出现大量阳性染色细胞;NC组大鼠视网膜血管铺片没有NF-κB表达.DM组大鼠糖尿病诱导成功后2周,视网膜血管壁出现散在NF-κB阳性染色颗粒,以后随病程延长,NF-κB阳性细胞逐渐增多,12周时最多,以后保持不变.结论 NF-κB在DR发生发展过程中可能起重要作用.     

罗格列酮对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜NF-κB表达的影响

目的观察过氧化物酶体增生物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)激动剂罗格列酮对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的早期糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜上核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)表达的影响,进而从分子学水平上阐明PPAR-γ激动剂对DR的保护作用,为预防及早期治疗DR提供一种新思路。方法选择90只健康雄性Wistar大鼠(180～200g)随机分为3组:正常对照组(C组)、DR+罗格列酮组和DR组,每组大鼠各30只。进一步将每组大鼠分为给药后4周、8周和12周3个时间点进行观察,每个时间点各10只大鼠。采用一次性腹腔注射50mg·kg-1STZ的方法建立糖尿病(diabetes mellitus,DM)模型。自DM模型成模后第3天起,DR+罗格列酮组大鼠每天给予罗格列酮3mg·kg-1灌胃,C组和DR组每天给予等体积的生理盐水灌胃。于给药后4周、8周和12周处死各组大鼠,处死前测各组大鼠的血糖和体质量,然后摘除眼球,剔除角膜和晶状体制成眼杯,制作石蜡切片,采用免疫组织化学的方法检测视网膜上NF-κBp65蛋白的表达。结果 DR组和DR+罗格列酮组大鼠血糖水平均明显高于C组(均为P<0.01);DR组和DR+罗格列酮组大鼠的体质量均较C组降低(P<0.01或P<0.05)。C组大鼠视网膜上NF-κBp65无表达或弱表达;DR组大鼠视网膜上NF-κBp65表达的积分光密度(integral optical density,IOD)值分别是35.62±2.99、67.59±2.23和85.62±3.55,明显高于C组(均为P<0.01);DR+罗格列酮组大鼠视网膜上NF-κBp65表达的IOD值分别是33.94±2.40、59.58±1.06和73·74±2·32,亦明显高于C组(均为P<0.01);在给药后8周和12周时,DR+罗格列酮组大鼠视网膜上NF-κBp65的表达均较DR组明显降低(均为P<0.01)。结论外源性PPAR-γ激动剂罗格列酮能够降低视网膜上NF-κB的表达从而延缓DR的发生发展,对早期DR大鼠视网膜具有保护作用,因此有望成为DR新的治疗手段。     

单核细胞趋化蛋白-1在实验性糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义

目的 研究单核细胞趋化蛋白（monocyte chemoattractant protem-1,MCP-1）在不同病程实验性糖尿病大鼠视网膜的表达及探讨MCP-1与糖尿病视网膜病变发生发展的关系.方法 Wistar大鼠64只随机分为正常对照组（NC组）16只和糖尿病造模组（DM组）48只,DM组腹腔注射链尿佐菌素诱发糖尿病,将造模成功DM组糖尿病大鼠随机分为2周、4周、12周和20周组,每组各12只.到各时间点后处死,采用Western Blotting和免疫组织化学法,分析MCP-1在不同病程糖尿病造模大鼠视网膜中的表达,对免疫印迹结果采用计算机图像分析系统处理.结果 免疫印迹结果显示：正常大鼠视网膜中MCP-1的表达非常微弱,糖尿病诱导成功后2周MCP-1蛋白表达比正常组明显增加（P＜0.05）,并随时间的延长表达逐渐增加,到12周时达最高.免疫组织化学结果显示：正常大鼠视网膜各层均无MCP-1表达,大鼠糖尿病诱导成功后2周,视网膜表面血管即有MCP-1阳性细胞表达,以后随病程延长而表达增多.结论 MCP-1在视网膜的表达与糖尿病视网膜病变的发生密切相关.     

单核细胞趋化蛋白-1在早期糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义

目的　探讨单核细胞趋化蛋白 1 (MCP 1 )在早期糖尿病大鼠视网膜中的表达及其与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。 方法　Wistar大鼠随机分为正常对照组 (NC组 )和糖尿病模型组 (DM组 ),每组 12只。大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病模型。8周时全部处死,采用Western免疫印迹法和免疫组织化学法,分析MCP 1在早期DM大鼠视网膜中的表达,对免疫印迹结果采用计算机图像分析系统处理。 结果　8周时,免疫印迹结果显示视网膜中MCP 1的表达DM组明显高于NC组(P<0 01),免疫组织化学法显示 8周时DM大鼠视网膜表面血管、内核层均可见MCP 1阳性着染细胞。 结论　MCP 1在视网膜组织中的表达与DR的发生有密切关系。     

高迁移率蛋白1的小干扰RNA对高糖环境下视网膜血管内皮细胞凋亡的影响

目的探讨高迁移率蛋白1(high-mobility group box-1,HMGB1)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对视网膜血管内皮细胞的影响。方法采用siRNA对HMGB1的表达进行抑制,采用CCK8检测试剂盒、Hochest33342染色、流式细胞仪检测,观察高糖环境下HMGB1 siRNA对视网膜血管内皮细胞的影响,同时通过Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果 HMGB1转染后,siRNA组的蛋白表达与正常对照组相比减少了73%(P<0.05),siRNA组的蛋白表达与非特异性siRNA(scr-siRNA)组相比减少了75%(P<0.05),而正常对照组和scr-siRNA组之间差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪检测结果显示,正常对照组、高糖组、scr-siRNA组和siRNA组细胞的总凋亡率分别为(0.40±0.03)%、(49.80±3.50)%、(47.60±1.98)%和(23.60±2.40)%。与正常对照组相比,高糖组、scr-siRNA组、siRNA组的细胞凋亡率均明显升高(均为P<0.05);与scr-siRNA组相比,siRNA组的细胞凋亡率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);而scr-siRNA组和高糖组的细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组相比,高糖组和scr-siRNA组的cleaved-caspase 3蛋白(半胱天冬酶3)表达分别增加了(233±10)%、(266±22)%(均为P<0.05);与scr-siRNA组相比,siRNA组的cleaved-caspase 3蛋白表达减少了(43±3)%(P<0.05);而高糖组和scr-siRNA组的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组相比,高糖组和scr-siRNA组的B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达分别减少了(32±2)%、(29±3)%(均为P<0.05);与scr-siRNA组相比,siRNA组的Bcl-2蛋白表达增加了(42±2)%(P<0.05);而高糖组和scr-siRNA组的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HMGB1 siRNA可以通过抑制cleaved-caspase 3的活化和增加Bcl-2蛋白的表达减轻高糖环境下视网膜血管内皮细胞的凋亡。     

高迁移率族B1(HMGB-1)蛋白在鼠视网膜新生血管形成中的调控作用

目的　探讨高迁移率族Ｂ１（ｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘ-１,ＨＭＧＢ-１）蛋白在鼠视网膜新生血管形成中的调控作用。方法　将基质胶（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）和ＨＭＧＢ-１混合物注入鼠龄为７ｄ（Ｐ７）的Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ健康小鼠左眼视网膜下,基质胶与ＰＢＳ混合物注入右眼球作为对照组。注入１０ｄ后对获得的视网膜组织切片进行ＨＥ染色,计数突破视网膜前膜的血管内皮细胞核数。选用Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ健康新生鼠建立氧诱导视网膜病变（ｏｘｙｇｅｎ-ｉｎｄｕｃｅｄｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＯＩＲ）动物模型,出生后第７天（Ｐ７）放入高氧环境中连续饲养５ｄ,然后置入正常空气中继续饲养;正常空气对照组小鼠则在空气中饲养。在Ｐ１７采用ＤｉＩ荧光造影视网膜铺片观察ＯＩＲ模型组和正常空气对照组小鼠视网膜血管形态变化;同时采用Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔ检测模型组和对照组小鼠玻璃体中ＨＭＧＢ-１蛋白的表达水平。结果　ＨＭＧＢ-１基质胶模型组与ＰＢＳ基质胶对照组基质胶区域突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数分别为（４２．１９±１．７６）个、（３１．２４±１．２５）个,经过ＨＭＧＢ-１与基质胶混合物处理的眼球中新生血管水平显著高于对照组（ｔ＝－４２．４２,Ｐ＝０. ０００）。ＤｉＩ荧光造影视网膜铺片结果显示,ＯＩＲ模型组鼠视网膜自视盘向中周部出现大片无灌注区,无灌注区周围出现新生血管丛;Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔ分析显示,与正常空气对照组相比,ＯＩＲ模型组鼠玻璃体中ＨＭＧＢ-１蛋白表达增加了７８％ ±７％,出现了显著上调（ｔ＝－４７．９０,Ｐ＝０．０００）。结论　ＨＭＧＢ-１在视网膜新生血管形成中起重要的调控作用。     

脑红蛋白在糖尿病大鼠视网膜中的表达

目的探讨脑红蛋白(NGB)在糖尿病大鼠视网膜中的表达与分布。方法将SD大鼠随机分为对照组和糖尿病组。糖尿病组大鼠采用链脲佐菌素一次性腹腔内注射建立糖尿病模型。定期处死大鼠,应用免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜组织中NGB的表达变化。结果糖尿病大鼠视网膜中的NGB分布逐渐增加后趋于稳定。结论 NGB在糖尿病大鼠视网膜表达较对照组明显增加,提示NGB可能在糖尿病状态下为视网膜神经细胞供氧,减轻糖尿病视网膜缺氧造成的损害。     

自噬与HMGB1在糖尿病视网膜微血管病变和神经退行性变中的研究进展

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是由糖尿病所导致的最典型的微血管并发症之一。以往DR发病机制和治疗的研究主要集中在微血管;近年来,许多学者认为DR不仅仅是一种微血管病变,而且还伴有视网膜神经退行性变。近期研究表明,自噬与高迁移率族蛋白B1(high mobility group box protein 1,HMGB1)通过多条通路参与到糖尿病视网膜微血管病变和神经退行性变中,通过调控自噬或HMGB1可能为DR治疗提供一种新的思路。本文就自噬与HMGB1在糖尿病视网膜微血管病变和神经退行性变发病中的研究进展进行综述。     

血小板反应蛋白-1在糖尿病大鼠早期视网膜中的表达及意义

目的 检测血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)在正常及糖尿病大鼠视网膜组织中的表达并探讨其在早期糖尿病视网膜病变中的作用.方法 36只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组6只,实验组30只.实验组大鼠采用链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病模型,其中3只于造模后1个月血糖恢复正常作为血糖恢复组,余27只随机分成3组:糖尿病1月组(D1组)、糖尿病2月组(D2组)和糖尿病3月组(D3组),每组各9只大鼠,HE染色观察各组视网膜病理变化,免疫组织化学方法检测TSP-1蛋白在各组大鼠视网膜中的表达.结果HE染色可见血糖恢复组、D1组和D2组视网膜各层排列与正常对照组无明显差异,而D3组表现为视网膜内血管不均匀并膨胀,视网膜神经节细胞肿胀,排列紊乱,内界膜增厚,内丛状层有肿胀.各观察时间点血糖恢复组大鼠视网膜TSP-1蛋白阳性着色的积分光密度值与正常对照组差异均无统计学意义(均为P＞0.05);DI组、D2组和D3组大鼠视网膜TSP-1蛋白阳性着色的积分光密度值分别为21.50 3.02、19.58±2.70和15.93±2.41,均较正常对照组1个月、2个月和3个月时的26.34±3.40、25.38±3.20和25.91 ±3.31低,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 TSP-1蛋白在实验性糖尿病大鼠视网膜中的表达明显降低并与病程有关,提示TSP-1表达不足可能是糖尿病视网膜病变的原因之一.     

槲皮素对糖尿病大鼠视网膜单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 探讨槲皮素干预糖尿病大鼠视网膜病变的机制.方法 清洁雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组和糖尿病动物组,将成模大鼠随机分为糖尿病组,导升明组,槲皮素组.治疗20周.观察糖尿病大鼠一般情况变化,视网膜血管铺片观察毛细血管内皮细胞数(E)和周细胞数(P),并计算E/P比值,免疫组织化学法观察MCP-1在视网膜的表达,ELISA法检测玻璃体内MCP-1浓度.结果 20周时,与糖尿病阴性对照组相比,槲皮素治疗组体重明显增加,周细胞数明显增多,E/P值明显降低.与导升明阳性对照组相比,槲皮素治疗组体重、周细胞数和E/P值无明显差异.20周时,正常对照组视网膜血管未见MCP-1阳性细胞表达糖尿病组走形迂曲的视网膜毛细血管壁上有大量MCP-1阳性细胞表达,而槲皮素和导升明组视煳膜血管铺片MCP-1表达情况与糖尿病组相比,无明显差别.20周时,正常大鼠玻璃体内存在少量MCP-1,糖尿病组、导升明组和槲皮素组大鼠玻璃体内含有大量MCP-1,相互之间无明显差异.结论 槲皮素对实验性大鼠视网膜病变有一定的治疗作用,但其作用不是通过抑制炎症介质MCP-1表达实现的.     

高迁移率族蛋白B1对高糖诱导的晶状体上皮细胞凋亡和自噬的影响

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对高糖诱导的晶状体上皮细胞(LEC)凋亡和自噬的影响。方法 本研究以糖尿病性白内障患者和年龄相关性白内障(ARC)患者晶状体前囊膜以及高糖和正常糖条件下培养的人晶状体上皮细胞株(SRA01/04)为研究对象。选取2021年10月至2022年3月在南通大学第二附属医院眼科确诊为白内障的患者20例,依据白内障类型分为糖尿病性白内障组(DC组)和ARC组,每组各10例,取患者晶状体前囊膜进行实验。将细胞分为正常糖组和高糖组,正常糖组培养基含5.5 mmol·L^-1葡萄糖,高糖组培养基含25.0 mmol·L^-1葡萄糖,处理24 h后进行实验。采用Western blot检测各组HMGB1蛋白的表达水平。利用siRNA技术对HMGB1进行敲降,将细胞分为正常对照组、scr-siRNA组和si-HMGB1组。正常对照组：不作任何处理;scr-siRNA组：加入等量的Lipofectamine 3000和scr-siRNA;si-HMGB1组：加入等量的Lipofectamine 3000和si-HMGB1。三组...     

糖尿病大鼠视网膜组织突触核蛋白家族的表达

目的观察突触核蛋白(synuclein)家族三种同源蛋白基因α-synuclein、β-synucle-in和γ-synuclein在8周糖尿病大鼠视网膜组织中的表达情况,初步探讨其在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)中的作用。方法采用限制性片段差异显示聚合酶链反应技术,建立正常和8周糖尿病大鼠视网膜基因表达谱,经生物信息学分析两者差异,初步确定α-synuclein、β-synuclein和γ-synuclein为DR相关基因,并以实时定量PCR和Western blot-ting方法分别从mRNA和蛋白水平上对三个基因的表达进行验证。结果限制性片段差异显示聚合酶链反应结果显示,糖尿病大鼠α-synuclein、β-synuclein和γ-synuclein表达明显强于正常大鼠;实时定量PCR结果显示,α-synuclein、β-synuclein和γ-synuclein在糖尿病大鼠(1.41±0.14、1.30±0.18、1.47±0.15)的表达(相对Ct比值)高于正常大鼠(1.67±0.12、1.62±0.20、1.86±0.26),差异均有显著统计学意义(均为P<0.01);Western blotting显示,糖尿病大鼠三种蛋白的表达(相对A值比值)分别为0.31±0.06、0.60±0.11、0.39±0.09,显著高于正常大鼠(0.19±0.07、0.44±0.09、0.29±0.08),差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。结论α-synuclein、β-synuclein和γ-sy-nuclein在糖尿病大鼠视网膜组织中表达显著升高,α-synuclein的表达升高可能在DR中起到神经毒性作用,而β-synuclein和γ-synuclein的高表达则可能对神经细胞起到保护作用。     

HMGB1和TOLL样受体9在糖尿病大鼠视网膜组织中的表达

目的 探讨HMGB1和TOLL样受体(Toll-like receptors,TLR)9在糖尿病大鼠视网膜中的表达.方法 采用链脲佐菌素腹腔注射的方法制作糖尿病大鼠模型,于注药后4周、8周、12周处死大鼠,取视网膜进行HE染色和免疫组织化学染色检测,并与正常对照组大鼠作对比.结果 HMGB1和TLR9在正常对照组和糖尿病4周、8周、12周时的光密度值分别为0.103 7±0.001 1、0.132 3±0.0005、0.145 0±0.002 0、0.155 7±0.001 5和0.084 3±0.0047、0.1164±0.0094、0.132 1±0.000 1、0.139 0±0.0042,在糖尿病大鼠视网膜中的表达呈时间依赖性增加,主要表达在神经节细胞层、内核层和外核层,与正常对照组相比差异均有统计学意义(均为P＜0.01).结论 HMGB1和TLR9在糖尿病大鼠视网膜中表达增加,HMGB1-TLR9信号通路可能参与了糖尿病视网膜病变的发生发展.     

Effect on proliferation and apoptosis of retinoblastoma cell by RNA inhibiting high mobility group protein box-1 expression

AIM: To investigate the effect of high mobility group protein box-1 (HMGB1) siRNA on proliferation and apoptosis of retinoblastoma (Rb) cells. METHODS: The expression of HMGB1 in Rb cells were detected by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot. Chemically synthesized HMGB1 siRNA was transfected into Y79 cells. The inhibitory rate was also examined by RT-PCR and Western blot. After HMGB1 siRNA transfection, the cell proliferation was analyzed by MTT, and cell apoptosis was detected by Caspase-3 active detection kit. Cell cycle distribution and apoptosis were detected by flow cytometry. RESULTS: The expression of HMGB1 significantly elevated in Rb cells (P<0.01). After transfected by siRNA, the HMGB1 protein level of Y79 cells was significantly reduced (P<0.01). After siRNA interference HMGB1, the proportion of proliferating cells reduced, and the proportion of quiescent cells increased (P<0.05). In addition, apoptosis rate of Y79 cells increased from 2.03% to 9.10% after interfering with HMGB1 siRNA (P<0.05). CONCLUSION: Specific HMGB1 siRNA can inhibit the expression of HMGB1. The effect may be attributed to inhibit the proliferation and promote cell apoptosis.     

HMGB-1在DR患者房水及血浆中水平变化分析

目的:观察糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)患者房水和血浆中高迁移率族蛋白-1(high-mobility groupbox-1,HMGB-1)的变化及其临床意义。方法:以西安交通大学第一附属医院眼科2010-08/12住院糖尿病(diabets mellitus,DM)患者为研究对象,按有无DR分为糖尿病无视网膜病变(non-diabetic retinopathy,NDR)组及DR组。DR组按病程分为单纯性糖尿病性视网膜病变(background diabetic retinopathy,BDR)组及增殖性糖尿病性视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)组。设正常对照组,对研究对象分别收集房水和血浆标本,共收集房水28例,血浆40例,均采用双抗体夹心ABC-ELISA法进行人HMGB-1定量ELISA测定。结果:DM患者房水中的HMGB-1浓度明显高于对照组(P<0.05),DM患者按DR病程分组时,HMGB-1浓度未见明显差异(P>0.05)。DM患者血浆中HMGB-1浓度与对照组比较未见明显差异(P>0.05)。结论:HMGB-1在DR的发生中可能起到重要作用,但与DR的病理进程无明显关系。