嵌合抗原受体修饰T细胞治疗实体肿瘤的研究现状

嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T)免疫疗法是当前肿瘤免疫治疗领域最具前景的研究方向之一,初步的临床研究结果证明,其治疗肿瘤有效性非常高。CAR-T对肿瘤细胞的杀伤绕过了抗原递呈阶段并且不依赖于主要组织相容性复合体的限制性,通过抗原抗体结合的原理特异性识别肿瘤抗原,进而实现对肿瘤细胞的特异性杀伤。经过30 a的发展,CAR-T已经历了4代革新,并且在治疗血液系统恶性肿瘤方面取得了重大突破。近年来,CAR-T在实体肿瘤治疗方面取得了突破性进展,为实体肿瘤的治疗提供了新手段。本文主要总结CAR-T免疫疗法在实体肿瘤治疗方面的研究现状,并对其未来的研究趋势进行展望。     

嵌合抗原受体修饰T细胞治疗血液系统恶性肿瘤研究进展

嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T)疗法是近年来新兴的免疫治疗方法,在恶性肿瘤尤其是血液系统恶性肿瘤治疗方面取得了较多突破,对难治复发性血液肿瘤患者,其总缓解率显著高于传统化学治疗,为难治复发性血液肿瘤患者带来了新的希望。但CAR-T治疗后的脱靶效应、肿瘤复发等问题仍有待解决。本文就嵌合抗原受体的结构演变及CAR-T的抗肿瘤作用机制、在血液系统恶性肿瘤中的应用、目前面临的问题和解决方案等作一综述。     

嵌合抗原受体修饰T细胞治疗恶性肿瘤的研究进展

嵌合抗原受体(CAR)是一种重组的抗原受体,同时具有结合抗原及激活T细胞的功能。转入CAR的T细胞肿瘤细胞的杀伤不依赖于主要组织相容性复合体(MHC),并可克服肿瘤局部免疫抑制微环境和打破宿主免疫耐受态,因此CAR-T细胞免疫治疗比传统的T细胞治疗有更多的优势。基于一系列不同肿瘤表面抗原设计重组的CAR-T胞在体内外显示了明显的抗肿瘤效应,尤其是靶向CD19的CAR-T细胞已经在B细胞恶性肿瘤的临床患者中取得了良的疗效。随着CAR技术的不断优化,CAR-T细胞在肿瘤的细胞免疫治疗中必将发挥更重要的作用。     

嵌合抗原受体修饰T细胞治疗肿瘤的最新进展

随着肿瘤免疫学理论和技术的不断发展,人们对肿瘤的认识和治疗也迎来了新纪元。除了传统的手术、放疗和化疗以外,以嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR-T)为代表的过继性细胞免疫治疗已成为肿瘤研究和治疗的热点。该文主要综述了CAR-T的发展历程、在血液系统肿瘤以及实体瘤中的应用以及面临的挑战等,期望能为肿瘤的治疗带来新希望。     

嵌合抗原受体修饰T细胞治疗恶性淋巴瘤研究进展

恶性淋巴瘤(ML)是起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤,现有的常规治疗手段主要为化疗和放疗,但不良反应较大,疗效欠佳.嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T)疗法是近年来治疗恶性肿瘤的一种新模式,在淋巴造血系统肿瘤治疗上显示了良好的抗肿瘤效应,但CAR-T细胞也会杀伤带有CAR相对应抗原的正常细胞,产生细胞因子风暴等副作用.本文从CAR原理及结构及其在ML中的临床应用和不良反应等方面作简要综述.     

嵌合抗原受体T细胞的研究进展

嵌合抗原受体(CAR)-T细胞是肿瘤免疫治疗领域的新兴疗法。CAR-T细胞技术是对T细胞靶向性、杀伤活性、持久性及其表面特异性位点的基因改造,结合其特异性抗原可促使T细胞活化,起抗肿瘤作用。目前,CAR-T细胞在恶性血液肿瘤治疗方面取得瞩目的疗效,但对于实体肿瘤治疗尚存在诸多困难和挑战。脱靶效应、疗效控制、免疫抑制性微环境等不良事件均影响CAR-T细胞在实体肿瘤中的治疗效果。随着对CAR-T细胞的深入探究,其将为实体肿瘤的治疗提供新手段。     

嵌合抗原受体T细胞疗法在胶质母细胞瘤中的应用与展望

胶质母细胞瘤是成人最常见且最致命的肿瘤之一,由于其进展迅速、侵袭性强和血脑屏障的存在,胶质母细胞瘤的治疗有别于其他实体肿瘤,常规治疗预后欠佳.使用免疫疗法治疗胶质母细胞瘤的探索已经持续了几十年,效果也欠佳.但随着胶质母细胞瘤特异性抗原的研究进展、各项相关技术的发展以及早期临床试验的成功,免疫疗法又回到了人们的视线中.嵌...     

嵌合抗原受体T细胞疗法在类风湿关节炎中的 研究进展

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种由多因素导致的以对称性多关节炎为主要特点的慢性自身免疫性疾病,致残率高,严重影响患者的生活质量。目前,虽然糖皮质激素、可改善病情的抗风湿药物能够通过改善患者体内的炎症环境而发挥治疗作用,但因药物不良反应、药物耐受等因素的存在,寻找新的治疗方法仍是现阶段的研究热点之一。随着基因工程技术的发展,嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）-T细胞疗法在自身免疫性疾病的诊治中展现出一定的应用前景。本文对CAR-T细胞的结构和功能、CAR-T细胞疗法在RA中的研究进展、应用局限性及对策进行综述。     

表达靶向癌胚抗原的嵌合受体的慢病毒载体构建及初步应用

目的构建表达靶向癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)的慢病毒载体LV-EF1 α-CEA-2A-GFP-WPRE,研究该载体感染T淋巴细胞后嵌合抗原受体的表达以及对CEA阳性肿瘤细胞系的杀伤作用.方法 利用常规分子克隆技术从含靶向CEA的单链化抗体的载体上得到抗CEA抗体的编码序列,通过测序鉴定,采用酶切将基因片段插入慢病毒载体中.慢病毒载体感染T淋巴细胞后,通过非变性非还原Western blot、流式细胞术检测CEA-CAR在T淋巴细胞中的表达,体外杀伤实验检测对CEA阳性肿瘤细胞系的杀伤效果.结果 测序结果显示CEA-CAR的序列正确,酶切结果显示慢病毒载体LV-EF1α-CEA-2A-GFP-WPRE构建正确;感染T淋巴细胞后CEA-CAR阳性表达率为62.8％;可有效杀伤CEA阳性肿瘤细胞系(P＜0.01).结论成功构建了表达靶向CEA的嵌合抗原受体LV-EF1 α-CEA-2A-GFP-WPRE的慢病毒载体,该嵌合抗原受体可在T细胞中正确表达,并有效杀伤CEA阳性肿瘤细胞.     

靶向黏蛋白1嵌合抗原受体修饰的Jurkat T细胞特异杀伤肝癌细胞

目的探讨靶向黏蛋白1(mucin 1,MUC1)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的T细胞株(CAR-T)对MUC1高表达肝癌细胞的特异杀伤能力。方法分别构建第1代与第3代靶向MUC1的CAR基因表达框(MUC1-CAR与G3MUC1-CAR),并将其装入慢病毒载体,利用获得的重组慢病毒感染Jurkat细胞,通过CCK-8法、ELISA法、乳酸脱氢酶释放实验,分别检测在MUC1抗原存在条件下,CAR-T细胞的增殖、IL-2分泌量、杀伤作用。结果成功构建2种靶向MUC1嵌合抗原受体表达框的重组慢病毒Jurkat CAR-T细胞株。两种Jurkat CAR-T细胞均能特异识别MUC1分子,杀伤MUC1高表达的肝癌细胞QGY-7701,而对MUC1低表达的正常肝细胞基本不杀伤;第3代CAR修饰的Jurkat T细胞接触MUC1分子后,其增殖速度、IL-2分泌量和杀伤效率均优于第1代MUC1修饰细胞(P<0.05或P<0.01)。结论靶向MUC1的Jurkat CAR-T细胞能特异杀伤MUC1高表达的肝癌细胞。     

CAR-T细胞免疫治疗实体瘤的研究进展

近年来过继性细胞免疫疗法因效果显著而得到广泛认可,尤其是CD19特异嵌合抗原受体（CAR）的自体T细胞治疗恶性血液瘤取得成功。本文总结实体肿瘤存在肿瘤免疫微环境、靶点不均一以及免疫抑制性受体等原因导致CAR-T无法有效治疗,提出改进CAR-T细胞以提高T细胞浸润、共表达细胞因子与酶以及修饰相关受体等方式提高CAR-T抗实体肿瘤活性,为后续CAR-T细胞治疗实体肿瘤研究奠定理论基础。     

靶向Trop-2 CAR-T细胞的制备及其体外对卵巢癌细胞杀伤作用的研究

目的：制备靶向人滋养层细胞表面抗原2（human trophoblast cell surface antigen 2 , Trop-2)的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell , CAR-T）,观察Trop-2 CAR-T细胞在体外对卵巢癌细胞增殖的影响。方法：运用分子克隆及基因重组技术构建Trop-2 CAR;采用Western blot检测Trop-2 CAR在293T细胞中的表达;CCK-8法检测Trop-2 CAR-T细胞对卵巢癌细胞增殖的影响;ELISA检测细胞因子分泌的变化。结果：酶切鉴定及测序分析结果表明,Trop-2 CAR各基因片段连接正确;Western blot检测结果显示,该质粒能够在293T细胞中有效表达;CCK-8结果显示,制备的Trop-2 CAR-T细胞在体外能明显抑制表达Trop-2的卵巢癌细胞的增殖（P＜0.05）;ELISA检测结果表明Trop-2 CAR-T细胞与表达Trop-2的卵巢癌细胞共培养后,干扰素（interferon-γ,IFN-γ)、白介素（interleukin-2,IL-2)细胞因子分泌增加（P＜0.01）。结论：该研究成功制备了Trop-2 CAR-T细胞,可有效抑制Trop-2表达阳性的卵巢癌细胞的增殖。     

嵌合抗原受体G250-CD8-28BBZ的构建及表达

目的 构建嵌合抗原受体G250-CD8-28BBZ的慢病毒表达质粒,并研究该嵌合抗原受体在T细胞中的表达.方法 利用常规分子克隆技术将编码Igκ信号肽、抗G250单链抗体及信号结构CD8-28BBZ的编码序列拼接起来,并将得到的融合基因片段插入慢病毒表达载体pLVX-IRES-ZsGreen中,采用酶切及测序鉴定.慢病毒感染T细胞后,通过荧光显微镜、Western blot、流式细胞术检测G250-CD8-28BBZ在T细胞中的表达.结果 双酶切及测序结果显示重组质粒pLVX-G250-CD8-28BBZ构建正确;慢病毒感染后的T细胞能发出绿色荧光;T细胞表达的G250-CD8-28BBZ分子大小正确;慢病毒感染2周后,G250-CD8-28BBZ在T细胞中的阳性表达率为45.2%.结论 成功构建了嵌合抗原受体G250-CD8-28BBZ的慢病毒表达质粒,该嵌合抗原受体能够在T细胞内高效稳定表达.     

症状群信息化管理平台的建立及其在接受嵌合抗原受体T细胞免疫治疗淋巴瘤患者中的应用效果

目的　建立症状群信息化管理平台并探讨其在接受嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫治疗淋巴瘤患者中的应用效果。方法　采用便利抽样法选择2019年8月至2020年10月郑州大学第一附属医院河南省淋巴瘤诊疗中心收治的78例淋巴瘤患者为对照组,2020年11月至2021年12月收治的72例淋巴瘤患者为观察组。对照组患者给予常规护理干预。观察组患者在常规护理基础上使用症状群信息化管理平台。症状群信息化管理平台包括2个平台、4个端口、7个模块。分别于CAR-T输注前1 d及CAR-T输注后第1、3周,采用症状评估量表评估淋巴瘤患者症状严重程度。于患者出院当天,采用淋巴瘤患者生命质量测定量表评估患者的生命质量,使用郑州大学第一附属医院标准的护理满意度调查表调查患者对护理工作的满意度。结果　2组患者症状评估量表评分比较差异有统计学意义（F_组间=10.820,P<0.05）;2组患者不同时间点的症状评分量表评分比较差异有统计学意义（F_时间=201.627,P<0.05）;不同护理方法和时间对2组患者的症状评估量表评分存在交互作用（F_交互=44.293,P<0.05）;CAR-T输注前1 d,2组患者的症状评估量表评分比较差异无统计学意义（P>0.05）;CAR-T输注后第1、3周,观察组患者的症状评估量表评分显著低于对照组（P<0.05）。观察组患者的生命质量测定量表评分及护理满意度评分显著高于对照组（P<0.001）。结论　症状群信息化管理平台可有效改善接受CAR-T免疫治疗淋巴瘤患者相关症状严重程度,提高生命质量及护理满意度。     

维布妥昔单抗及靶向CD30的嵌合抗原受体T细胞在淋巴瘤治疗中的研究进展

CD30是一种细胞表面抗原,在正常活化的淋巴细胞上低表达,但是在多种淋巴瘤细胞上高表达,因此成为淋巴瘤治疗的靶抗原之一。抗体结合药物维布妥昔单抗（brentuximab vedotin, BV）与CD30结合后能快速内化进入肿瘤细胞内部诱导凋亡,在临床应用中疗效显著。此外,靶向CD30 嵌合抗原受体T细胞治疗(chimeric antigen receptor-modified T cell, CAR-T)在临床研究中安全、有效、耐受性好,为复发/难治淋巴瘤患者带来希望。本文就维布妥昔单抗及靶向CD30 CAR-T细胞在淋巴瘤治疗中的研究进展进行综述。     

CAR-T新型联用策略治疗实体瘤研究进展

近年来,嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T）疗法在血液肿瘤的治疗中取得了突破性进展,但是在实体瘤的治疗中仍然存在着诸多问题,例如CAR-T细胞渗透性差,易发生T细胞耗竭现象、脱靶效应等,故实体瘤的CAR-T疗法需要提出新的治疗策略来提升治疗效果。与单一CAR-T治疗方式相比,CAR-T联合其他肿瘤治疗手段已经在临床前及临床研究中展现出优异疗效。本篇综述总结了CAR-T联用不同肿瘤治疗方法：抗体药物、溶瘤病毒、肿瘤疫苗、纳米药物应对实体瘤治疗的研究进展,以期为开发新的CAR-T联用策略治疗实体瘤提供理论依据和新思路。     

钠碘转运体报告基因共表达对嵌合型受体T细胞体外增殖及杀伤能力的影响

目的 探讨钠碘转运体（NIS）报告基因的共表达对嵌合型受体T（CAR-T）细胞体外增殖和杀伤活性的影响。方法 慢病毒感染法制备CAR-T细胞（仅表达CD19 CAR的T细胞）、NIS-T细胞(仅表达NIS报告基因的T细胞)和NIS-CAR-T细胞（共表达NIS和CD19 CAR的T细胞）,然后按T细胞蛋白表达情况分为4组∶T细胞组（未转染的T细胞）、CAR-T组、NIS-T组、NIS-CART组。流式细胞术检测各组NIS和CAR转染率。各组细胞常规培养24、48、72 h,CCK-8法检测增殖能力。各组T细胞为效应细胞,Nalm6肿瘤细胞为靶细胞,按效靶比0.5∶1、1∶1、2∶1、4∶1共培养24、48、72 h,乳酸脱氢酶细胞毒性检测法（LDH）检测各组细胞对肿瘤细胞的杀伤率,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测共培养上清液中各组细胞因子人干扰素-γ（IFN-γ）和人肿瘤坏死因子-β（TNF-β）释放水平。摄碘实验检测表达NIS蛋白各组细胞的NIS功能。结果 CAR-T细胞、NIS-CAR-T细胞的CAR转染率分别为91.91%、99.41%,NIS-T细胞、NIS-CAR-T细胞的NIS转染率分别为47.83%、50.24%。常规培养24、48、72 h CAR-T细胞与NIS-CAR-T细胞增殖率差异无统计学意义（P>0.05）。0.5∶1、1∶1、2∶1和4∶1效靶比作用24 h时CAR-T细胞杀伤率（%）均高于NIS-CAR-T细胞（P<0.05）,作用48 h和72 h时两组杀伤率差异均无统计学意义（P>0.05）。CAR-T细胞与NIS-CAR-T细胞均存在IFN-γ和TNF-β释放现象,释放水平均高于对照组（P<0.05）。NIS-T细胞与NIS-CAR-T细胞均具有特异性摄碘能力,二者间摄碘能力差异无统计学意义（P>0.05）,但均高于对照组T细胞（P<0.05）。结论 NIS报告基因的共表达不影响CAR-T细胞中CAR转染率,对细胞增殖和杀伤活性无抑制现象。