Adenovirus-mediated siRNA targeting TNF-α and overexpression of bone morphogenetic protein-2 promotes early osteoblast differentiation on a cell model of Ti particle-induced inflammatory response in vitro

Wear particles are phagocytosed by macrophages and other inflammatory cells, resulting in cellular activation and release of proinflammatory factors, which cause periprosthetic osteolysis and subsequent aseptic loosening, the most common causes of total joint arthroplasty failure. During this pathological process, tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) plays an important role in wear-particle-induced osteolysis. In this study, recombination adenovirus (Ad) vectors carrying both target genes [TNF-α small interfering RNA (TNF-α-siRNA) and bone morphogenetic protein 2 (BMP-2)] were synthesized and transfected into RAW264.7 macrophages and pro-osteoblastic MC3T3-E1 cells, respectively. The target gene BMP-2, expressed on pro-osteoblastic MC3T3-E1 cells and silenced by the TNF-α gene on cells, was treated with titanium (Ti) particles that were assessed by real-time PCR and Western blot. We showed that recombinant adenovirus (Ad-siTNFα-BMP-2) can induce osteoblast differentiation when treated with conditioned medium (CM) containing RAW264.7 macrophages challenged with a combination of Ti particles and Ad-siTNFα-BMP-2 (Ti-ad CM) assessed by alkaline phosphatase activity. The receptor activator of nuclear factor-κB ligand was downregulated in pro-osteoblastic MC3T3-E1 cells treated with Ti-ad CM in comparison with conditioned medium of RAW264.7 macrophages challenged with Ti particles (Ti CM). We suggest that Ad-siTNFα-BMP-2 induced osteoblast differentiation and inhibited osteoclastogenesis on a cell model of a Ti particle-induced inflammatory response, which may provide a novel approach for the treatment of periprosthetic osteolysis.     

t(q;13)(p10;q10)一家系二例

病例：先证者：男，22月，因智力低下及不会说话前来就诊。体检：身高80cm，体重12kg，心肺正常，表型正常，智力低下，对外界刺激反应差，只会发少数几个单音。父母非近亲结婚，母孕期无患病、服药及不良因素接触史，分娩顺利。     

46,XX,t(10;13)(p10;p10)伴死胎、畸形儿一例

患者　女,26岁,表型正常,身体健康。婚后孕2胎,第1胎于停经60天,B超提示胎停育,行清宫术。第2胎足月,胎死宫内,娩出后发现胎儿为多发畸形:唇腭裂、手脚畸形、生殖器发育不良等。夫妇非近亲结婚,孕期无有害物质接触史及疾病史。家系调查:其母孕4产4,有2个姐姐,1个弟弟,表型及生育史均正常。细胞遗传学检查:取夫妇外周血常规培养制备染色体,G显带分析,患者核型为46,XX,t(10;13)(10pter→10p10∷作者单位:030001太原,山西医科大学第一医院妇产科医学遗传研究室13p10→13pter;10qter→10q10∷13q10→13qter)。丈夫核型正常。讨论　经家系调查,…     

一例t(5；10)(p10;p10)易位

患者　男 ,35岁。结婚 10年 ,其妻妊娠 4次 ,1次自然流产 ,3次 2 8周孕早产。 1个早产儿存活数小时 ,另外 2个均胎死宫内 ,且 3次娩出的胎儿肤色逐渐变黄。患者智力、表型正常。细胞遗传学检查 :夫妇双方外周血淋巴细胞培养 ,常规制片 ,G显带 ,计数 30个分裂相 ,分析 10个核型 ,患者核型为 46 ,XY,t(5 ;10 ) (5 pter→ 5 p10∷ 10 p10→ 10 pter;5 qter→ 5 q10∷ 10 q10→10 qter) ,血型为 AB型。妻子核型正常 ,血型为 O型。夫妇间ABO血型抗体效价为 1∶ 2 5 6。讨论　患者 5、10号染色体分别在着丝粒处断裂 ,易位后作者单位 :1 1 0 0 …     

t(9;18)(p10;q10)伴流产及畸胎一例

患者 女,25岁.怀孕3次,第1、2胎均于孕2个月发生不明原因阴道出血,保胎无效自然流产;第3胎孕7个月彩超提示胎儿唇裂伴双下肢外旋呈“摇椅足”畸形,行引产术.患者表型及智力均正常,非近亲婚配,孕期无不良因素接触史.细胞遗传学检查患者核型为46,XX,t(9;18 )(9pter→9p10∷18q10 →18qter;18pter→18p10∷9q10→9qter).     

45,XX,der(13;14)(q10;q10)伴早期自然流产

患者 女,29岁,因婚后6年自然流产4次,胚胎停育1次,均在孕2～3个月,故来我院妇科就诊.患者13岁月经初潮,周期正常.孕期无有害物质接触史,无慢性病史,否认家族遗传病史.查体:身高163 cm,体重56 kg,发育良好,眼距略窄,眉毛黑.B超检查示:子宫和卵巢大小、回声均正常.激素水平在正常范围.家系调查:患者父母非近亲结婚,身体健康,外观无异常.有一姐已婚,生育一表型正常女孩,已10岁.患者夫妇非近亲结婚,其丈夫身体健康,表型正常,各项体检结果均正常.     

Waldenström macroglobulinemia with a novel der(8;17)(q10;q10)

A Philadelphia chromosome-negative (Ph(-)) clone with trisomy X appeared in the bone marrow cells from a patient with Ph(+) chronic myelocytic leukemia in the chronic phase after hydroxyurea and interferon-alpha treatment.     

45,XX,der(13;14)(q10;q10)伴早期自然流产

患者 女,29岁,因婚后6年自然流产4次,胚胎停育1次,均在孕2～3个月,故来我院妇科就诊.患者13岁月经初潮,周期正常.孕期无有害物质接触史,无慢性病史,否认家族遗传病史.查体:身高163 cm,体重56 kg,发育良好,眼距略窄,眉毛黑.B超检查示:子宫和卵巢大小、回声均正常.激素水平在正常范围.家系调查:患者父母非近亲结婚,身体健康,外观无异常.有一姐已婚,生育一表型正常女孩,已10岁.患者夫妇非近亲结婚,其丈夫身体健康,表型正常,各项体检结果均正常.     

45,XX,der(13;14)(q10;q10)伴早期自然流产

患者 女,29岁,因婚后6年自然流产4次,胚胎停育1次,均在孕2～3个月,故来我院妇科就诊.患者13岁月经初潮,周期正常.孕期无有害物质接触史,无慢性病史,否认家族遗传病史.查体:身高163 cm,体重56 kg,发育良好,眼距略窄,眉毛黑.B超检查示:子宫和卵巢大小、回声均正常.激素水平在正常范围.家系调查:患者父母非近亲结婚,身体健康,外观无异常.有一姐已婚,生育一表型正常女孩,已10岁.患者夫妇非近亲结婚,其丈夫身体健康,表型正常,各项体检结果均正常.     

47,XY,t(7;14)(p10;q10),+21一例

患儿 男,出生15个月,系第1胎,足月顺产.出生时体重3000 g,身长50 cm,会哭.患儿出生时父亲27岁,母亲26岁,父、母表型均正常,非近亲婚配,自述无家族遗传病史.     

6;9易位、1;10易位伴流产、死胎两例

例 1　女 ,2 7岁 ,婚后 3年孕 2胎 ,均于孕 40多天时阴道少量流血 ,经保胎治疗无效行刮宫术。夫妇双方表型、智力均正常 ,非近亲结婚。以往身体健康 ,孕期无患病及用药史 ,无有害物质接触史。妇科查体未发现异常。细胞遗传学检查 :取外周血进行淋巴细胞培养 ,G显带分析 ,记数分析 30个中期分裂相 ,其核型均为 46 ,XX,t(6 ;9) (q2 7;q32 ) (6 pter→ 6 q2 7∷ 9q32→9qter;9pter→ 9q32∷ 6 q2 7→qter)。其丈夫核型正常 ,家族中否认有遗传病史。患者父母拒绝做染色体检查。例 2　男 ,2 6岁 ,结婚 4年 ,因其妻两次死胎就诊。第 1次孕 8个多…     

46,X,t(Y;4)(p10;p10)致男性不育一例

患者男,37岁,身高170 cm。因婚后未避孕6年未育来我院生殖中心就诊。自述身体状况良好,不吸烟,无酗酒史,无有毒物质及放射线接触史,家系中无遗传病,父母非近亲结婚。查体睾丸体积正常,输精管正常,左右精索静脉正常。精液检查:精液量2.4 mL(参考值≥1.5 mL),灰白色,液化时间30 min,酸碱度7.7(参考值7.2~8.0),精子存活率30%(参考值>58%),精子浓度0.1×10⁹/L(参考值≥15×10⁹/L),精子总数0.4×106/次(参考值≥39×10⁶/次),精子总活力0(参考值≥40%),不活动100.0%。生殖激素检测未见异常。     

46,XX,t(3;9)(p10;p10)合并不孕一例

患者女,29岁,婚后3年未孕,否认有毒有害物质及放射线接触史,查体:身高166 cm,体重58 kg,智力正常,第二性征发育正常,输卵管造影未见明显异常。丈夫精液检查未见异常。夫妻系非近亲结婚,否认遗传病家族史。     

45,XX,t(8;18)(q13;p11.2),der(13;14)(q10;q10)一例

患者女,31岁,因胚胎停育2次就诊。夫妇双方表型正常,系非近亲结婚,孕期无患病及用药史,无有毒、有害物质及放射线接触史。细胞遗传学检查:在签署知情同意书后,抽取外周血3 mL,常规制备淋巴细胞染色体,G显带分析,计数20个分裂相,分析5个,患者外周血染色体核型为:45,XX,t(8;18)(q13;p11.2)(8pter→q13∷18p11.2→pter;8qter→q13∷18p11.2→qter),der(13;14)(q10;q10)(14qter→q10∷13q10→qter)(图1);丈夫染色体核型为46,XY。     

t(6;10)一家系两例

先证者　男,32岁,结婚3年余。其妻妊娠两次,均于孕50余天时自然流产。曾做妇科及染色体检查均正常,妊娠期间无服药史,无有害物质接触史。患者表型及智力正常,夫妇非近亲结婚。细胞遗传学检查:外周血淋巴细胞培养、常规制片,G显带镜下计数30个中期分裂相,分析5个,先证者性染色体核型为46,XY,q ,Y>18号,常染色体核型为46,XY,t(6;10)(6pter→6q24∷10q21→10qter;10pter→10q21∷6q24→6qter)。家系调查:先证者父母非近亲婚配,父亲因脑溢血病故,其母76岁,表型正常,生育5男2女,无流产史,染色体检查,G带核型为46,XX,t(6;10)(6pter→6q24∷10q…     

46,XY,t(5;13)(p10;q10)伴生育畸形儿一例

患者　男,2 7岁。其妻曾分娩一个“摇椅足”男孩,该孩子出生后哭声微弱,仅存活8小时。患者父母非近亲婚配,他们共有图1　患者染色体核型　箭头示t(5;1 3)4个子女,其中一子一女为“摇椅足”儿,出生后不久即死亡。分别取患者及其父母、姐姐、外甥外周血进行常规培养、制片显带,每例计数10 0个细胞,分析6个核型。患者核型为4 6 ,XY,t( 5 ;13) ( 5 pter→5 p10∷13q10→13qter;13pter→13p10∷5 q10→5 qter) ,其母核型为4 6 ,XX,t( 5 p13q;5 q13p) ,其他家系成员核型正常。　　讨论　表型正常的平衡易位携带者,婚后生育正常或表型正常的平衡…     

Overexpression of Salmonella enterica serovar Typhi recA gene confers fluoroquinolone resistance in Escherichia coli DH5α

A spontaneous fluoroquinolone-resistant mutant (STM1) was isolated from its parent Salmonella enterica serovar Typhi (S. Typhi) clinical isolate. Unlike its parent isolate, this mutant has selective resistance to fluoroquinolones without any change in its sensitivity to various other antibiotics. DNA gyrase assays revealed that the fluoroquinolone resistance phenotype of the STM1 mutant did not result from alteration of the fluoroquinolone sensitivity of the DNA gyrase isolated from it. To study the mechanism of fluoroquinolone resistance, a genomic library from the STM1 mutant was constructed in Escherichia coli DH5α and two recombinant plasmids were obtained. Only one of these plasmids (STM1-A) conferred the selective fluoroquinolone resistance phenotype to E. coli DH5α. The chromosomal insert from STM1-A, digested with EcoRI and HindIII restriction endonucleases, produced two DNA fragments and these were cloned separately into pUC19 thereby generating two new plasmids, STM1-A1 and STM1-A2. Only STM1-A1 conferred the selective fluoroquinolone resistance phenotype to E. coli DH5α. Sequence and subcloning analyses of STM1-A1 showed the presence of an intact RecA open reading frame. Unlike that of the wild-type E. coli DH5α, protein analysis of a crude STM1-A1 extract showed overexpression of a 40 kDa protein. Western blotting confirmed the 40 kDa protein band to be RecA. When a RecA PCR product was cloned into pGEM-T and introduced into E. coli DH5α, the STM1-A11 subclone retained fluoroquinolone resistance. These results suggest that overexpression of RecA causes selective fluoroquinolone resistance in E. coli DH5α.     

46,XX,t(9;19)(p10;q10)伴胚胎停止发育一例

患者　女 ,2 6岁。孕 2个月不明原因阴道出血 ,保胎治疗不见好转。B超显示胚胎停止发育。细胞遗传学检查 :分别取患者及其丈夫外周血进行常规培养、制片、显带、每例计数 10 0个细胞 ,分析 6个核型。患者核型为 4 6 ,XX,t(9;19) (9pter→ 9p10∷19q10→ 19qter;19pter→ 19p10∷ 9q10→ 9qter) ,丈夫核型正常。　　讨论　平衡易位携带者婚后出生正常或表型正常的平衡易位携带者的机率为 1/ 18,而 16 / 18的合子为不平衡的部分单体或部分三体 ,可致死胎、流产或出生畸形儿。患者胚胎停止发育是其染色体平衡易位的结果。由于患者父母未做染…     

染色体47,XY,t(2;21)(p10;q10)+21唐氏综合征一例

病例:患儿为一男婴,6个月,因生长发育迟缓而就诊。患儿系第一胎第一产,足月顺产分娩,出生体重3500kg。母亲27岁,体健,妊娠经过顺利,未患病未接触有毒物质,父母非近亲婚配。查体:身长:56cm,体重4000g,头围:38cm,反应低下,前囟1.5cm×1.0cm,平坦,眼裂较小且明显斜向外