刺参酸性黏多糖对宫颈癌HeLa细胞凋亡及Bax、Bcl-2基因表达的影响

目的:研究刺参酸性黏多糖(SJAMP)对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响.方法:体外培养HeLa细胞:采用Hoechst 33258荧光染色检测SJAMP作用前后的细胞凋亡情况;流式细胞仪检测sJAMP作用HeLa细胞后线粒体膜电位(△ψm)的变化,Western Blot检测SJAMP对HeLa细胞作用后凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的表达.结果:荧光显微镜下可观察到细胞凋亡的形态学改变;与对照组比,各SJAMP浓度组均能降低HeLa细胞的线粒体膜电位;随着SJAMP作用浓度的增加,Bcl-2的表达减少,而Bax基因的表达增加.结论:SJAMP在体外可诱导HeLa细胞凋亡,其凋亡分子机制可能是因为对Bax、Bcl-2表达调控,改变线粒体跨膜电位诱导其凋亡.     

碘乙酸钠诱导原代大鼠软骨细胞凋亡

背景:近年碘乙酸钠多用于诱导骨关节炎的发生,病理结果观察到软骨区域凋亡的发生,但有关碘乙酸钠诱导软骨细胞凋亡机制的研究较少。目的:探讨不同剂量碘乙酸钠诱导原代大鼠软骨细胞凋亡的发生机制。方法:使用酶消化法建立大鼠关节软骨细胞培养体系;荧光显微镜和流式细胞仪检测软骨细胞凋亡;激光共聚焦显微镜和荧光分光光度计评估线粒体膜电位的改变;荧光分光光度法测定活性氧水平改变;免疫印迹法检测凋亡调控蛋白细胞色素C和caspase-3的表达。结果与结论:碘乙酸钠剂量依赖性地诱导软骨细胞凋亡,使活性氧水平显著升高(P<0.05),线粒体膜电位水平明显降低(P<0.05),凋亡调控蛋白的表达明显增加。提示碘乙酸钠诱导的原代大鼠软骨细胞凋亡主要与活性氧的产生及线粒体介导的caspase-3活化有关。     

透明质酸钠不同给药途径干预早期骨关节炎兔软骨细胞的凋亡

目的:观察前交叉韧带横断造成兔早期骨关节炎软骨细胞凋亡的变化,以及应用关节内和静脉注射透明质酸钠对软骨细胞凋亡的影响。方法:实验于2006-04/09在华中科技大学同济医学院协和医院骨科实验室完成。共选取36只新西兰兔,随机数字表法分成正常组、骨关节炎组、关节内注射透明质酸钠组、静脉注射透明质酸钠组,每组9只。正常组不做任何处理,作为对照;骨关节炎组仅行前交叉韧带横断术;关节内注射透明质酸钠组行前交叉韧带横断术后给予关节腔内注射透明质酸钠;静脉注射透明质酸钠组行前交叉韧带横断术后给予静脉内注射透明质酸钠。所有实验动物在术后8周处死。应用苏木精-伊红染色观察关节软骨组织的病理学变化,原位末端标记法标记凋亡细胞,在前交叉韧带横断术前、术后6,8周分别进行血液检测。观察各组动物的组织学检查、Mankin评分、凋亡指数和血液检测结果。结果:纳入新西兰兔36只,均进入结果分析。①所有动物的血液检查包括红细胞、白细胞、血小板计数以及血尿素氮、肌酐、电解质,结果均在正常范围内。②应用透明质酸钠干预的关节内注射透明质酸钠组和静脉注射透明质酸钠组与未用透明质酸钠干预的骨关节炎组相比较,前者组织病理学改变明显轻于后者。③骨关节炎组的Mankin评分与其他三组差异有显著性[(8.97±1.02),(0.00±0.00),(5.62±0.86),(6.13±0.64)分,P<0.05]。④各组均发现软骨细胞凋亡,并且骨关节炎组的凋亡指数显著高于其他三组[(27.38±3.46)%,(5.17±1.06)%,(12.47±2.13)%,(14.51±2.87)%,P<0.05],正常组的凋亡指数与其他三组差异有显著性意义(P<0.05)。结论:前交叉韧带横断所致兔早期骨关节炎的软骨细胞凋亡明显增加,关节内和静脉内注射透明质酸钠均能有效抑制其软骨细胞凋亡。     

赤芍总苷诱导K562细胞凋亡及对线粒体膜电位和Ca2+的影响

目的:赤芍总苷能诱导鼠HepA和S180细胞凋亡,但赤芍总苷能否抑制K562细胞增殖及其诱导K562细胞凋亡的机制尚不明确.观察赤芍总苷诱导人红白血病细胞株K562细胞凋亡及线粒体膜电位与Ca2 水平的变化,以探讨凋亡机制.方法:实验于2007-03-02/2007-10-20在北京中医药大学细胞生化实验室,国家重点实验完成.①实验材料:赤芍总苷由西安奥晶科技发展有限公司提供,批号:060417,纯度>95%.人红白血病K562细胞株购自上海中科院细胞库.②实验方法:取对数生长期的K562细胞,培养24 h后加入50 mg/L赤芍总苷进行干预,光镜下观察细胞形态.MTT显色法检测25,50,75,100,150,200,400 mg/L赤芍总苷对K562细胞增殖的抑制作用,以仅加入无血清培养基培养的为对照.③实验评估:采用Annexin V/PI双标记法检测凋亡效应,罗丹明123(Rh123)染色流式检测线粒体膜电位和荧光染料Fluo-3AM流式检测K562细胞内游离Ca2 浓度.结果:①50 mg/L 赤芍总苷作用K562细胞24 h后,出现核固缩、核碎裂和凋亡小体等形态学改变.②与对照组相比,不同质量浓度赤芍总苷能明显抑制K562细胞的增殖(P < 0.01),并具有量效关系,呈时间和剂量依赖性.③细胞线粒体经Rh123染色呈现明亮绿,不同质量浓度赤芍总苷干预组荧光强度均较对照组明显减弱,膜电位水平较高.④赤芍总苷可引起细胞线粒体膜电位下降.不同质量浓度赤芍总苷组细胞内游离Ca2 浓度均升高, 线粒体膜电位下降,与对照组比较差异显著(P < 0.01).结论:赤芍总苷诱导K562细胞凋亡的可能机制是通过减低细胞内线粒体膜电位及提高游离Ca2 水平,从而导致细胞凋亡.     

薏苡仁诱导急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡及其机制

本研究探讨薏苡仁油对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖和凋亡效应及其作用机制。分别用0．4．0．8,1．6mg／ml的薏苡仁油作用Jurkat细胞24小时,用CCK法检测细胞增殖,应用Hoechst33258染色、PI及PI／AnnexinV染色后流式细胞仪来检测细胞凋亡,然后采用JC-1染色分析线粒体膜电位。结果表明：0．8和1．6mg／ml的薏苡仁油能显著抑制Jurkat细胞增殖;随着薏苡仁油浓度的增加,凋亡细胞数目增多,线粒体膜电位降低。结论：薏苡仁油对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞有明显的抗增殖和促凋亡作用,而且此效应与线粒体膜电位降低有关,本研究结果为临床应用薏苡仁油治疗白血病提供了实验依据。     

血小板生成素通过PI3K/AKT通路防止CoCl_2诱导内皮细胞凋亡

目的:研究血小板生成素(TPO)对化学性缺氧模拟剂氯化钴(CoCl_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的作用及其机制。方法:实验分为4组,体外培养的未经处理的HUVEC为对照组,CoCl_2与HUVEC共培养的为CoCl_2组,在加入CoCl_2前用TPO预处理HUVEC为TPO+CoCl_2组,TPO单独处理HUVEC为TPO组。使用CCK-8法检测各组细胞的细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率、凋亡蛋白酶Caspase-3的表达以及线粒体膜电位的变化。Western blot检测TPO对AKT通路磷酸化水平表达的影响。结果:CoCl_2可以明显抑制HUVEC的生长,细胞存活率随着CoCl_2的浓度的升高逐渐下降(r=-0.997);与对照组相比较,CoCl_2组的细胞凋亡率明显升高(P0.001),而TPO+CoCl_2组的细胞凋亡率较前者明显下降(P0.001),提示TPO对HUVEC有保护作用。TPO还能减少细胞凋亡蛋白酶Caspase-3的表达和抑制细胞线粒体膜电位的降低,以及刺激HUVEC PI3K/AKT通路的活化。结论:TPO具有防止化学性缺氧所致的细胞凋亡作用,其机制可能是通过活化PI3K/AKT通路,从而减少细胞凋亡蛋白酶Caspase-3的活化表达和稳定线粒体膜电位来发挥细胞保护作用。     

威灵仙提取物干预膝骨关节炎软骨细胞的生长活力

背景:近年来研究显示关节软骨细胞过度凋亡是骨性关节炎开始和进展的关键因素,利用药物抑制软骨细胞凋亡来控制骨性关节炎的进展是现在的研究热点。而威灵仙在国内临床治疗骨关节炎时取得了较确切的疗效,但是其具体的作用机制是否通过抑制软骨细胞凋亡来实现尚未见相关报道。目的:观察中药威灵仙提取物对膝骨关节炎软骨细胞生长活力的影响。方法:取骨关节炎晚期行膝关节置换的关节软骨,剪碎后,采用酶消化法消化细胞,将处于对数生长期第3代细胞随机分组,实验组分别加入0.01,0.05,0.1,0.5,1.0g/L威灵仙提取物培养基,对照组仅加入普通培养基进行培养。Live/Dead染色法测定人软骨细胞活力指数,TUNEL染色法测定人软骨细胞凋亡指数。结果与结论:0.05,0.1g/L威灵仙提取物能明显提高软骨细胞活力,而0.5,1.0g/L威灵仙提取物反而降低了软骨细胞活力,其活力指数与对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05);0.01,0.05,0.1g/L威灵仙提取物能有效抑制软骨细胞凋亡,1.0g/L威灵仙提取物反而促进了软骨细胞凋亡,其凋亡指数与对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。结果可见威灵仙提取物在合适的质量浓度时能有效提高人软骨细胞活力,抑制人软骨细胞凋亡,尤以0.1g/L时效果最佳。     

MK基因特异性siRNA对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰技术抑制Midkine对人乳腺癌癌细胞株MCF-7细胞凋亡的影响。方法人工合成抑制Midkine基因的siRNA片段,通过脂质体转染到MCF-7细胞内,应用RT-PCR检测bcl-2mRNA表达,流式细胞术检测细胞线粒体膜电位变化,通过测定光密度值检测Caspase-3活性。结果转染siRNA后的MCF-7细胞,bcl-2mRNA表达显著下降、细胞线粒体膜电位明显下降和Caspase-3酶活性升高。结论MK-siRNA通过下调hcl-2基因,而改变细胞线粒体膜电位使Caspase-3酶活性升高诱导细胞的凋亡。     

碘乙酸钠诱导原代大鼠软骨细胞凋亡

背景：近年碘乙酸钠多用于诱导骨关节炎的发生,病理结果观察到软骨区域凋亡的发生,但有关碘乙酸钠诱导软骨细胞凋亡机制的研究较少。目的：探讨不同剂量碘乙酸钠诱导原代大鼠软骨细胞凋亡的发生机制。方法：使用酶消化法建立大鼠关节软骨细胞培养体系;荧光显微镜和流式细胞仪检测软骨细胞凋亡;激光共聚焦显微镜和荧光分光光度计评估线粒体膜电位的改变;荧光分光光度法测定活性氧水平改变;免疫印迹法检测凋亡调控蛋白细胞色素C和caspase-3的表达。结果与结论：碘乙酸钠剂量依赖性地诱导软骨细胞凋亡,使活性氧水平显著升高（P〈0.05）,线粒体膜电位水平明显降低（P〈0.05）,凋亡调控蛋白的表达明显增加。提示碘乙酸钠诱导的原代大鼠软骨细胞凋亡主要与活性氧的产生及线粒体介导的caspase-3活化有关。     

百草枯经P53介导的线粒体凋亡途径诱导人肺Ⅱ型上皮样细胞A549凋亡

目的:探讨百草枯(PQ)诱导人肺Ⅱ型上皮样A549细胞凋亡过程中P53的作用及其作用机制。方法:实验分为对照组、PFT-α预处理组、PQ处理组和PFT-α预处理+PQ组。各组细胞培养24h、48h后,检测细胞凋亡、线粒体膜电位、Caspase-3/-9活性以及P53、Bax、Bcl-2蛋白表达的改变。使用P53依赖的转录抑制剂PFT-α来评价P53的作用。通过Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率以及Rh-123染色法检测线粒体膜电位;采用检测试剂盒测定Caspase-3和-9的活化程度;Western Blot检测P53、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:与PQ处理组比较,PFT-α预处理+PQ组显著减弱了PQ诱导的细胞凋亡,抑制了线粒体膜电位的降低,降低了Caspase-3和-9的活化程度、P53蛋白的表达以及Bax/Bcl-2相对蛋白水平比例。对照组与PFT-α预处理组各方面比较差异无统计学意义。结论:PQ可通过P53介导的线粒体凋亡途径诱导A549细胞凋亡。     

Advanced glycation end products‐induced chondrocyte apoptosis through mitochondrial dysfunction in cultured rabbit chondrocyte

Advanced glycation end products (AGEs) are an important mediator in osteoarthritis (OA) and cause apoptosis in articular chondrocytes. Mitochondrial function is involved in modulating apoptosis of articular chondrocytes. This study was performed to investigate the mechanism of AGEs‐induced chondrocyte apoptosis. The ratio of apoptotic cell and cell viability was surveyed by TUNEL, MTT,LDH release assay. The reactive oxygen species was determined by the fluorescent probe 2’, 7’‐dichlorofluorescein diacetate. The expression of caspase‐3 and cytochrome c was detected by Western blot. The mitochondrial membrane potential (?Ψm) was evaluated by rhodamine‐123 fluorescence. We found that AGEs induced apoptosis in primary rabbit chondrocytes, upregulation of ROS production, cytochrome c, and caspase‐3 levels. Simultaneously, AGEs decreases the levels of ?Ψm and ATP production; however, the antibody of AGEs (sRAGE) and antioxidant‐N‐acetylcys‐teine (NAC) significantly reversed AGEs‐induced the above damage thus to protect the cells from apoptosis. These observations suggested that the mechanism of AGEs‐induced chondrocyte apoptosis was primarily via ROS production and mitochondria‐mediated caspase‐3 activation.     

骨关节炎兔软骨细胞凋亡与八味柔肝散的抑制效应

背景：传统中药对骨关节炎具有镇痛等治疗作用,但对关节软骨是否有保护作用及其通过何种机制起作用少有报道。目的：观察八味柔肝散对兔骨关节炎软骨细胞凋亡的影响。方法：将新西兰大白兔随机分为正常组、模型组和治疗组,模型组和治疗组行Hurth法骨关节炎造模。建模后1周,正常组和模型组每天生理盐水灌胃,治疗组行八味柔肝散水提液灌胃。建模后8周行组织学观察Mankin＇s评分,硝酸还原酶法测定关节液一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶活性,原位末端转移酶标记技术检测软骨细胞的凋亡指数。结果与结论：结果显示,治疗组关节软骨Mankin＇s评分,关节液一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶活性,关节软骨细胞凋亡指数均低于模型组（P〈0.05）。证实八味柔肝散对兔骨关节炎软骨细胞凋亡有抑制作用。     

骨关节炎兔软骨细胞凋亡与八味柔肝散的抑制效应

背景:传统中药对骨关节炎具有镇痛等治疗作用,但对关节软骨是否有保护作用及其通过何种机制起作用少有报道.目的:观察八味柔肝散对兔骨关节炎软骨细胞凋亡的影响.方法:将新西兰大白兔随机分为正常组、模型组和治疗组,模型组和治疗组行Hurth法骨关节炎造模.建模后1周,正常组和模型组每天生理盐水灌胃,治疗组行八味柔肝散水提液灌胃.建模后8周行组织学观察Mankin's评分,硝酸还原酶法测定关节液一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶活性,原位末端转移酶标记技术检测软骨细胞的凋亡指数.结果与结论:结果显示,治疗组关节软骨Mankin's评分,关节液一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶活性,关节软骨细胞凋亡指数均低于模型组(P < 0.05).证实八味柔肝散对兔骨关节炎软骨细胞凋亡有抑制作用.     

透明质酸对人骨关节炎软骨细胞骨桥蛋白和CD44表达的影响

背景：软骨进行性破坏为晚期骨关节炎的特征性病变,骨关节炎相关因子透明质酸、骨桥蛋白、CD44在骨关节炎软骨中表达增加。目的：通过透明质酸干预体外培养的人膝骨关节炎软骨细胞,探讨透明质酸对人膝骨关节炎软骨细胞CD44与骨桥蛋白表达的影响。方法：将软骨标本进行体外培养获取纯化的软骨细胞,分为3组：空白对照组、透明质酸干预组（100 mg/L）和透明质酸酶干预组（200 mg/L）。培养48 h后,采用Real-time Q PCR检测软骨细胞骨桥蛋白mRNA,CD44mRNA表达水平。用SPSS 17.0统计软件包分析骨桥蛋白mRNA和CD44 mRNA经透明质酸干预前后表达的差异。结果与结论：透明质酸组的骨桥蛋白mRNA表达水平较空白组高,透明质酸酶组的骨桥蛋白mRNA表达水平较空白组低;透明质酸组及透明质酸酶组的CD44 mRNA表达水平均较空白组低。结果提示透明质酸可以上调骨关节炎软骨细胞骨桥蛋白的表达;透明质酸在骨关节炎软骨细胞内对CD44表达的影响具有双相性,其影响结果可能与透明质酸的相对分子质量有关。     

威灵仙提取物干预膝骨关节炎软骨细胞的生长活力

背景：近年来研究显示关节软骨细胞过度凋亡是骨性关节炎开始和进展的关键因素,利用药物抑制软骨细胞凋亡来控制骨性关节炎的进展是现在的研究热点。而威灵仙在国内临床治疗骨关节炎时取得了较确切的疗效,但是其具体的作用机制是否通过抑制软骨细胞凋亡来实现尚未见相关报道。目的：观察中药威灵仙提取物对膝骨关节炎软骨细胞生长活力的影响。方法：取骨关节炎晚期行膝关节置换的关节软骨,剪碎后,采用酶消化法消化细胞,将处于对数生长期第3代细胞随机分组,实验组分别加入0.01,0.05,0.1,0.5,1.0g/L威灵仙提取物培养基,对照组仅加入普通培养基进行培养。Live/Dead染色法测定人软骨细胞活力指数,TUNEL染色法测定人软骨细胞凋亡指数。结果与结论：0.05,0.1g/L威灵仙提取物能明显提高软骨细胞活力,而0.5,1.0g/L威灵仙提取物反而降低了软骨细胞活力,其活力指数与对照组比较差异均有显著性意义（P〈0.05）;0.01,0.05,0.1g/L威灵仙提取物能有效抑制软骨细胞凋亡,1.0g/L威灵仙提取物反而促进了软骨细胞凋亡,其凋亡指数与对照组比较差异均有显著性意义（P〈0.05）。结果可见威灵仙提取物在合适的质量浓度时能有效提高人软骨细胞活力,抑制人软骨细胞凋亡,尤以0.1g/L时效果最佳。     

线粒体DNA与骨髓增生异常综合征

线粒体是生物氧化和能量转换的主要场所。线粒体DNA编码线粒体内的呼吸链复合物．mtDNA突变可引起多种人类疾病。在骨髓增生异常综合征（MDS）中发现的mtDNA突变可能从铁代谢障碍、基因不稳定以及造血干细胞凋亡等方面参与MDS的发病过程。本文就线粒体DNA的结构特点、线粒体DNA突变和线粒体突变在MDS发病中的可能机制作一综述。     

Glutathione depletion-induced neutrophil apoptosis is caspase 3 dependent

Resolving inflammation is a vital step in preventing the persistence of inflammatory disorders. Neutrophils play a major role in tissue damage associated with an inflammatory response. Their death by apoptosis is central to the final resolution of this response. Thiol depletion with diethylmaleate (DEM) or diamide represent important triggers for neutrophil apoptosis. The mechanism by which this process occurs remains unknown. The apoptotic cascade is associated with a number of cellular changes, including caspase activation and mitochondrial permeability. The aims of this study were to determine the role of mitochondrial permeability and the caspase cascade in thiol depletion-induced neutrophil apoptosis. Total cellular glutathione was reduced by DEM and diamide. This reduction was associated with neutrophil apoptosis and an increase in caspase 3 activity. The effects of DEM were blocked by the caspase 3 inhibitor, Z-DEVD-FMK. Mitochondrial permeability that occurred was also increased during this induction of apoptosis. Bongkrekic acid, a mitochondrial membrane stabilizer, inhibited DEM-induced apoptosis. The inhibitors' effects of LPS or GM-CSF on spontaneous neutrophil apoptosis was reversed by DEM, which was mediated by an increase in caspase 3 activity and independent of mitochondrial disruption. Caspase activation is an important step in glutathione depletion-induced apoptosis in resting and inflammatory neutrophils. Regulation of caspase activity may represent a possible target to trigger apoptosis and resolve inflammatory disorders.     

线粒体膜电位在高三尖杉酯碱诱导T-淋巴细胞白血病细胞Molt-3凋亡中的作用

目的 研究线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP)改变在高三尖杉酯碱（HHT）诱导的细胞凋亡中的作用。方法 用膜联蛋白V染色,流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜等手段观察Bax、 细胞色素C等在HHT诱导T－淋巴细胞白血病细胞（Molt-3）凋亡过程中与线粒体膜电位的关系。结果 发现HHT诱导细胞早期凋亡的同时,Bax从胞浆易位至线粒体,线粒体膜电位下降,同时细胞色素C从线粒体膜释放到胞浆。结论 线粒体膜电位下降是HHT诱导T－淋巴细胞凋亡的重要环节。     

吡罗昔康声动力效应对乳腺癌细胞生物学作用及其机制的实验研究

目的 探讨吡罗昔康介导的声动力效应对乳腺癌细胞的急性细胞毒作用及其作用机制。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法检测吡罗昔康声动力效应对乳腺癌细胞的急性杀伤作用和活性氧清除剂对声动力作用的影响，用透射电镜观察细胞超微结构，用吖啶橙／溴化乙啶（AO／EB）双染法和流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡、线粒体跨膜电位（MMP）及活性氧（ROS）水平。结果 单纯应用超声有杀伤细胞和诱导细胞凋亡的作用，而吡罗昔康存在时，这一作用更为显著，声动力组细胞凋亡率和ROS水平亦明显高于单纯超声组，而MMP却显著低于后者。且组氨酸能够显著抑制吡罗昔康声动力效应，而甘露醇对其无明显影响。结论吡罗昔康介导的声动力作用对乳腺癌细胞具有显著的杀伤效应和诱导凋亡作用，这可能与声动力作用后MDA—M昏231细胞内ROS增加所致MMP下降有关。