37℃α-淀粉酶参考方法的建立及其应用研究

目的 通过建立37℃α-淀粉酶(α-Amy)参考方法,对酶校准物定值,探讨血清α-Amy测定结果的准确性与可比性.方法 依据国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)推荐的参考测量程序建立α-Amy酶催化活性参考方法,测定α-Amy有证参考物(CRM)IRMM-456,验证其准确性,并对其精密度进行评价.同时用参考方法对制备的酶校准物进行准确定值,按照NCCLS EP9-A方案留取40份不同α-Amy浓度范围的人血清,采用A~E五种临床常规检测组合在使用自制酶校准物校准前后测定α-Amy,分别与参考方法进行比较,计算这五种常规方法在使用自制酶校准物校准前后测定结果与参考方法的相对偏倚及相关系数.结果 用参考方法测定IRMM-456结果是547.2 U/L,在其给定的546±18 U/L范围内.所建立的37℃α-Amy参考方法总CV<0.5%.用制备的酶校准物校准前后的五种常规方法和参考方法进行比较,相关性均良好(r2>0.98),校准前后的相对偏倚A方法从30%变为10%以下;B方法从30%变为15%以下;C方法从35%变为10%以下;D方法从20%变为8%以下;E方法从35%变为10%以下.结论 所建立的37℃α-Amy参考方法准确可靠,采用参考方法为酶校准物定值后校准常规方法,可以提高血清α-Amy测定结果的准确度和可比性.     

试剂原料对α-淀粉酶参考方法测定结果影响的临床研究

目的探讨不同品牌、批号的试剂原料对α-淀粉酶参考方法测定结果的影响。方法优选3个品牌(A、D、E)和3个批号(A、B、C)α-葡萄糖苷酶、4个批号(A、I、J、K)4,6-亚乙基-4-硝基苯-α-D-麦芽七糖(EPS),采用2级参考方法和GBW(E)090282分别评价8种不同试剂组合运行2级参考方法结果的正确度,正确度符合要求后的试剂组合同时检测7份α-淀粉酶活性浓度为(26.9~783.4)U/L的冰冻人血清样本组,分别比较其差异性。结果 D和K方法试剂及正确度评估未通过,其余A、B、C、E、I、J方法采用GBW(E)090282检测结果分别为:66.1、66.0、66.3、64.8、66.5、64.7U/L;不同品牌α-葡萄糖苷酶试剂、不同批号α-葡萄糖苷酶试剂、不同批号EPS试剂检测7份冰冻人血清样本组之间比较,差异无统计学意义(P0.05),但J方法检测结果均低于其他5种方法。结论不同品牌、不同批号的试剂原料对α-淀粉酶参考方法的测定结果有一定影响,评估关键试剂的质量,以确保正确运用α-淀粉酶参考方法。     

用IFCC参考方法评价11个常规系统测量血清α-淀粉酶结果的正确性

摘要：目的：评价常规系统测量血清α-淀粉酶（Amy）结果的正确性。 方法：优选4种Amy常规分析试剂,建立4个厂家配套常规系统（A1、B1、C1、D1）和7个实验室自建常规系统（A2、B2、C2、D2、B3、C3、D3）,以IFCC参考方法和11个Amy常规系统同时测量50份Amy浓度为40～750 U/L的冰冻人血清,根据EP9-A2文件评价测量结果的正确性。同时用改良的Bland-Altman图形法评价各常规系统与IFCC参考方法测量结果的一致性,综合判断各常规系统测量结果的正确性。 结果：A1至D3的11个Amy常规系统与IFCC参考方法测量结果的回归方程分别为:Y=0.934X+0.886,Y=1.070X-6.249,Y=0.930X+5.388,Y=0.731X-3.574,Y=0.986X+0.996,Y=0.983X-6.195,Y=0.971X+6.957,Y=1.000X-4.649,Y=0.715X-4.648,Y=0.864X+4.821,Y=0.757X-4.253,其中X和Y分别代表IFCC参考方法和常规系统的测量结果。以IFCC参考方法为比较方法,11个常规系统中B1、A2、C2、D2 4个系统测量结果正确。 结论：血清Amy常规系统测量结果正确性与校准物明显相关;本室研制的准二级标准物做校准物可解决血清Amy常规系统测量结果正确性问题。     

四种血清α-淀粉酶厂家系统测量结果的正确性评价

目的 寻找满足IS0 15189要求、测量结果正确的血清α-淀粉酶(AMY)常规检测方法.方法 收集2008年3至12月AMY活性为(40.0～ 750.0)U/L的50份不同浓度的人血清组成患者冷冻血清样本组,优选瑞士Roche公司、日本和光公司、深圳迈瑞公司、四川迈克公司4种AMY厂家系统,分别采用国际临床化学和实验室医学联和会( IFCC)参考方法和基于7170全自动生化分析仪的4种AMY厂家系统同时测量浓度为(70.1 ±3.7) U/L和(418.3 ±22.1)U/L的具有标准物质特性的冷冻血清和患者冷冻血清样本组.用Excel软件进行各厂家系统与IFCC参考方法测量结果的直线回归分析.采用MVS1.380软件的EP9-A2文件方法、Bland-Altman图形分析法和改良Bland-Altman图形分析法分别进行各厂家系统与IFCC参考方法测量结果的等价性判定、一致性评价和各厂家系统测量结果的正确性评定.结果 以IFCC参考方法测量结果做评价标准,Roche、和光、迈瑞、迈克公司厂家系统测量结果存在明显差异:(1)浓度为(70.1±3.7) U/L和(418.3±22.1)U/L的具有标准物质特性的冷冻血清各厂家系统测量结果分别为66.4、70.6、69.4、49.2 U/L和394.0、456.4、406.7、302.4 U/L.迈瑞公司系统结果与IFCC参考方法一致.(2)患者冷冻血清样本组的各厂家系统与IFCC参考方法测量结果的直线回归方程斜率分别为:0.934、1.070、0.930和0.731,截距分别为:0.886、6.249、5.388和3.574.按EP9 -A2文件方法评价,罗氏和光、迈瑞公司系统测量结果与IFCC参考方法等价.按Bland-Altman图形分析法评价,Roche和迈瑞公司系统测量结果与IFCC参考方法测量结果一致.各厂家系统平均偏倚分别为-6.11％(“平均偏倚±2s”分别为-2.81％和9.40％)、1.99％(“平均偏倚±2s”分别为10.35％和-6.36％)、-2.70％(“平均偏倚±2s”分别为2.37％和-7.77％)和- 34.72％(“平均偏倚±2s”分别为- 24.20％和- 45.24％).按改良Bland-Altman图形分析法评价迈瑞公司系统测量结果正确.各厂家系统平均偏倚分别为- 5.92％(“平均偏倚±2s”分别为-2.81％和- 9.03％)、2 10％(“平均偏倚±2s”分别为10.74％和- 6.53％)、- 2.64％(“平均偏倚±2s”分别为2.24％和-7.51％)和-29.51％(“平均偏倚±2s”分别为- 21.82％和-37.21％).结论 (1)不同厂家系统测量结果不一定都具有正确性,尽管各厂家系统测量结果都已声称具有溯源性.(2)当采用不同方法评价测量系统正确性时,同一厂家系统测量结果评价结论可能不一致.实验室应选择并建立常规方法测量结果正确性评价方法,选择并使用符合IS0 15189正确性要求的常规方法.     

ALT和AST参考方法的建立与性能评价

目的建立测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的参考方法,并评价其主要分析性能。方法按照国际临床化学与检验医学联合会（IFCC）有关ALT和AST活性测定的要求建立参考方法,并优化其实验条件;根据美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）系列文件（EP5-A2、EP15-A、EP6-A）对建立的参考方法的精密度、准确度、线性范围等性能进行评价。结果紫外分光光度计、分析天平、pH计、电子温度计、移液器和容量瓶均检定合格,不确定度符合方法要求。温控器显示为37.2℃时,比色杯内溶液温度最接近37℃;比色杯内溶液180 s后可达到设定温度;移液器加样模式实验显示吸一档打两档,打时靠壁为精密度最佳的加样模式。ALT和AST参考方法的批内不精密度均〈1%,总不精密度均〈2%,符合精密度性能要求;日本临床化学会酶参考品及国际参考实验室外部质量评价计划样本检测结果的相对偏倚均符合设定目标;ALT和AST参考方法分析测量范围上限分别为335.8、363.6 U/L,均高于IFCC文献报道。结论ALT和AST参考方法已基本建立,精密度、准确度及线性范围等性能指标均符合方法要求,可应用于临床研究。     

血清α-淀粉酶常规系统校准品的筛选与评价

目的选择α-淀粉酶(Amy)常规测量系统的校准品。方法 IFCC Amy参考方法作为参考系统,用世纪沃德公司Amy试剂盒和Randox多项校准品分别做成常规系统A(用Roche PNPG7定标)、B(用Randox Liquid stable PNPG7定标),分别检测40份新鲜冰冻血清样本,验证常规系统的检测结果是否可接受。结果 IFCC Amy参考系统,与常规系统A和常规系统B相关方程分别为:Y=0.964X+0.376、Y=1.095X+3.131,其中X和Y分别代表IFCC参考方法和常规系统的测量结果。以IFCC参考方法为比较方法,常规系统A测量结果可接受。结论通过IFCC Amy参考方法,国内生化试剂选择合适校准品定标,可解决测量结果检测结果是否可接受问题。     

α-淀粉酶连续监测法的建立

[目的]建立以亚乙基封闭的4-硝基酚-1，4-α-D-麦芽七糖苷（EPS-G7）为底物的一种新的α-淀粉酶的测定方法。[方法]在SPS-100全自动分析仪上，研究连续监测法，建立实验参数。[结果]本法测定α-Amy的Km=0．179mmol／L；4-硝基酚（4-NP）在405nm时的摩尔吸光系数1200．9mol／L选取HEPES缓冲液为缓冲体系；延迟时间2min，测量时间2min；线性反应期11min，线性范围0-1400U／L；最适温度37℃；最适pH7．15；精密度实验，批内CVs为1．4％～2．6％，批间CVs为1．9％-2．8％；平均回收率为96．3％；与Boehringer方法比较，相关系数为0．994；血红蛋白、胆红素、葡萄糖、蛋白质对测定结果无影响；本法参考值范围血33．9-96．2U／L，尿65．4～187．6U／L。[结论]此方法重复性好，线性范围广，准确度好，灵敏度高，干扰因素少，适用于常规自动化分析。     

α-淀粉酶及门冬氨酸氨基转移酶参考品赋值方法的初步研究

目的　初步研究α 淀粉酶和门冬氨酸转移酶参考品活性浓度的赋值方法。方法　两种酶的活性浓度用IFCC推荐的方法测定 ,由南京市内的 8个实验室协助完成 ,在测定前进行生化分析仪实际K值的检测。结果　瓶间变异CV小于 1 1%。实验室间变异大于实验室日内或实验室日间变异。α 淀粉酶和门冬氨酸氨基转移酶的催化浓度以 95 %可信限赋值 ,复溶的冻干参考品分别为 (10 48± 42 )U/L和 (182± 5 )U/L ;同样的液体参考品分别为 (1198± 43)U/L和 (172± 3)U/L。将复溶型和液体型淀粉酶参考品用蒸馏水等量稀释 ,其值为 (5 37± 2 0 )U/L和 (5 98± 2 2 )U/L。结论　此初步赋值对本品的试用和认证是有价值的。     

McAb免疫抑制法检测α-淀粉酶同工酶及其临床意义

目的使用免疫抑制法检测α-淀粉酶同工酶胰腺淀粉酶（P-AMY），以评价其诊断急性胰腺炎的临床价值。方法对55例急性胰腺炎，81例急性胆囊炎的血清和尿液α-AMY总活性及P-AMY活性和P／α比值进行了对比研究。结果血清和尿液P-AMY的参考范围为6-46U／L和58-398U／L，急性胰腺炎组血清α.P-AMY.P／α及尿液α.P-AMY均较急性胆囊炎组病人有高度显著性差异（P＜0.01），但两组病人尿液P／α比值无显著性差异（P＞0.05）。急性胆囊炎病人血清α.P-AMY，P／α及尿液α.P-AMY校正常健康人无显著性差异（P＞0.05），但两组病人尿液P／α比值有显著性差异（P＜0.05）。在136例病人中，急性胰腺炎病人血清P-AMY的诊断特异性效率最高，分别为92.6％和89％。结论该方法检测P-AMY准确，特异，快速，可作为急性胰腺炎的诊断和鉴别诊断的重要依据。     

两种试剂测定血清α-淀粉酶的方法比对和偏倚评估

目的 对两种试剂测定血清α-淀粉酶(AMY)进行方法比对和偏倚评估.方法 按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A2文件,以安徽信灵试剂测定血清AMY为比较方法(X),以上海科华试剂为实验方法(Y),检测 40份患者新鲜血清,对结果进行方法比对及偏倚评估.结果 两种试剂测定血清AMY回归方程Y=0.960X-3.535,相关系数(r)=0.999 8,医学决定水平处(Xc)的预期偏倚(Bc)为 7.5 U/L,相对偏倚 7.5%.结论 两种试剂测定血清AMY具有良好的相关性,科华试剂存在负偏倚,但偏倚在临床可接受范围内.     

8个临床检测系统检测α-淀粉酶与参考测量程序的比对分析

目的观察不同临床检测系统与参考测量程序测定α-淀粉酶(Amy)的可比性。方法根据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP9-A2文件,用8个临床检测系统与参考测量程序分别测定患者血清、国际和国内实验室间比对样本、商用校准品及质控品的Amy活性水平,并进行比对。以卫生部临床检验中心室间质评Amy允许总误差的1/2为标准,评价临床检测系统检测血清Amy结果的临床可接受性。结果 8个临床检测系统(依次编号为Y1～Y8)与参考测量程序(X)测定血清样本的相关性方程分别为Y1=0.934 7X-2.375 0、Y2=0.801 6X+13.901 4、Y3=1.139 7X+13.979 5、Y4=0.829 3X+0.702 4、Y5=0.830 6X+5.826 9、Y6=0.791 0X+12.195 8、Y7=0.728 4X-0.826 5、Y8=0.721 9X+44.318 0。其中,Y1、Y2、Y5、Y6系统检测患者血清Amy结果为临床可接受,而Y4、Y7系统经参考测量程序赋值新鲜血清校准后检测结果为临床可接受。结论用参考测量程序赋值的新鲜血清对临床检测系统进行校准可提高不同检测系统间检测Amy的可比性;建立参考测量程序是保证不同检测系统间Amy检测结果可比性的关键。     

α-淀粉酶同工酶的分离测定方法研究进展

本文对目前分离测定α-淀粉酶同工酶的新方法进行了综述,主要介绍了单克隆抗体法及酶动力学分析法测定α-淀粉酶同工酶的原理,并对它们的优、缺点及应用前景进行了评价。     

谷丙转氨酶37℃参考方法的建立及其应用研究

目的通过建立37℃谷丙转氨酶（ALT）参考方法，对酶校准品定值，探讨血清ALT测定结果的准确性与可比性。方法依据国际临床化学与检验医学联合会（IFCC）推荐的参考测量程序建立ALT酶催化活性参考方法，用参考方法测定ERM-AD 454 ALT参考品，验证参考方法的准确度，并对其精密度、线性范围和干扰因素进行方法学评价，同时用参考方法对制备的酶校准品进行准确定值，按照NCCLS EP9-A方案比较40份人血清用酶校准品校正的常规方法和参考方法ALT结果。结果用参考方法测定ERM-AD454 ALT参考品结果186．4U／L，在其给定的186&#177;4U／L范围内。初步建立的37℃ALT参考方法总CV0．89％～1．12％，线性范围1．3～300U／L。ALT测定结果在32U／L左右偏差超过5％的干扰物浓度分另4为游离胆红素205．2μmol／L、结合胆红素136．8μmol／L；ALT在123U／L左右测定结果偏差超过5％的干扰物浓度分别为游离胆红素256．5μmol／L、结合胆红素273．6μmol／L。血红蛋白在2g／L和三酰甘油在10mmol／L以下时对两种浓度的ALT干扰分别均大于5％和仍然小于5％。用制备的酶校准品校准的常规方法和参考方法进行比较，相关良好（r^2=0．9992）。前者结果与后者相对偏倚在&#177;10％之内。结论ALT参考方法基本建立，采用参考方法为酶校准品定值，可以提高血清ALT测定结果的准确度和可比性。     

尿液中α-淀粉酶的提纯及性质研究

为了制备淀粉酶测定的参考品，从正常人尿液中提取了α－淀粉酶（Ａｍｙ）并对其特性进行了研究。该提制品淀粉酶的经活性达８４．３ｋＵ／ｇ蛋白，几乎不含其它杂酶（测不到ＡＬＴ、ＳＡＴ、ＬＤ、ＣＫ、ＧＧＴ、ＣｈＥ、ＡＬＰ活性浓度）。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电脉显示一条Ａｍｙ区带。其催化特性和人血清Ａｍｙ非常相似，用亚乙基封闭的Ｇ７－ＰＮＰ（ＥＰＳ）作底物，偶联多功能α－葡萄糖苷酶测定其米氏常数为０．１８９ｍｍ     

γ-谷氨酰基转移酶参考方法的建立与性能评估

目的建立γ-谷氨酰基转移酶（GGT）参考方法,对其性能进行评价,为临床常规检测GGT提供可比性和溯源性。方法根据国际临床化学联合会（IFCC）颁布的GGT一级参考测量程序（37℃）要求,建立GGT一级参考方法（其中包括所需仪器、试剂、样本的准备与校准等实验条件的试验）,并对其进行精密度、准确性和最大线性范围检测。结果 GGT参考方法的精密度评价A、B 2个水平样本变异系数（CV）总均〈1%,符合精密度性能要求。有证参考物质（ERM-AD452/IFCC）均值为113.27 U/L,均值与靶值的偏倚为-0.64%,在允许范围内。GGT的最大线性范围为413.81 U/L,高于IFCC公布的GGT参考方法的最大线性范围（276.40 U/L）。结论 GGT参考方法已基本建立,精密度、准确度及线性范围等性能指标均符合方法要求,为我国参考实验室网络的建立提供了基础,临床应用将更加广泛。     

全血免疫抑制剂ID-LC-MS/MS候选参考方法的建立和性能评价

目的 建立同位素稀释液相色谱串联质谱（ID-LC-MS/MS）检测全血免疫抑制剂（他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A）的候选参考方法,并评价其性能。方法 采用蛋白沉淀法（PPT）对全血样本进行前处理,采用ID-LC-MS/MS定量检测他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A。对建立的候选参考方法的分析性能（线性、定量限、基质效应、精密度和正确度等）进行评估。结果 ID-LC-MS/MS检测他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A的总检测时间为4.5 min;环孢素A的线性范围为10～500 ng/mL,定量限为10 ng/mL;他克莫司、西罗莫司和依维莫司的线性范围均为1～50 ng/mL,定量限均为1 ng/mL。4种免疫抑制剂的相对基质效应范围均≤8.64%,批内、批间变异系数（CV）均≤5%,加标回收率为98.84%～100.99%。他克莫司的扩展测量不确定度≤7.91%(k=2)、西罗莫司≤7.97%(k=2),依维莫司≤7.14%(k=2),环孢素A≤7.91%(k=2)。结论 成功建立了ID-LC-MS/MS检测全血他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A的候选参考方法,可用...     

离子色谱法测定血清锂离子候选参考方法的建立及性能评估

目的：以离子色谱法为基础,建立血清总锂离子测定的候选参考方法并评价其性能。方法采用一种简单的样本前处理方法,用新鲜患者血清样本、IFCC-RELA 样本等对方法的精密度进行评估;用加标回收实验评价方法的准确性。结果锂离子标准曲线线性方程为：Y ＝0．8171X -0．0013,r^2＝0．99995,方法的检出限为6μg/L;测量血清样本的不精密度（CV）小于1．0％;样本的加标回收率在99％～101％之间。结论成功建立了血清锂候选参考方法,可用于血清锂离子项目的量值溯源和标准化,为血清锂常规检测系统向参考方法/参考物质溯源提供了有效途径。     

血清孕酮同位素稀释液相色谱串联质谱候选参考方法的性能评价及临床应用

目的:建立本实验室血清孕酮同位素稀释液相色谱串联质谱（ID-LC-MS/MS）候选参考方法,并将其用于5种临床常规检测系统的性能评价,探讨不同检测系统检测血清孕酮的可比性。方法:采用液液萃取的方法进行样本前处理,在正离子质谱模式下的反相液相分离检测人血清中孕酮,通过梯度洗脱,使单个样本检测时间控制在5 min内。为提高...     

血清尿酸紫外分光光度参考方法的建立及性能评价

目的以尿酸酶紫外光度法为基础,建立血清中尿酸测定的参考方法并评价其性能.方法 用新鲜患者血清样本、迈瑞常规复合校准品等对方法的精密度进行评估;用有证参考物质SRM909bⅠ和Ⅱ、IFCC参考实验室质评样本Rela A/B对方法的准确度进行初步评价,同时测定新鲜人血清并与同位素稀释质谱法进行方法学对比,验证方法准确度.结果 方法对新鲜患者血清、厂家复合校准品等不同类型样本批内不精密度CVintra小于1%,总不精密度CVt小于2%;有证参考物质SRM909bⅠ/Ⅱ测定结果均在参考值范围内,对UA参考实验室能力验证样本Rela A/B测定结果与中心值结果相对偏差小于0.5%;血清样本测定结果与同位素稀释液相质谱法可比,线性回归斜率1.005,相关系数0.999,医学决定水平处引入的相对误差小于3.25%.结论 血清尿酸紫外分光光度法已基本建立,精密度和准确度符合要求,测量结果和同位素稀释液相色谱/质谱法可比,可为常规系统尿酸溯源体系的建立和性能评估提供便捷有效的方法.     

血清总蛋白参考方法建立及不确定度评估

目的 建立血清总蛋白(TP)参考方法,评价其性能,并评估其测量结果不确定度.方法 根据国际医学检验溯源联合委员会(JCTLM)相关文件要求建立血清TP参考方法,对仪器、试剂、加样、温度等主要试验条件进行确认和优化,对方法灵敏度、精密度、线性、准确度进行评价,测量结果不确定度根据ISO不确定度评估指南进行评估.结果 参考方法使用的仪器设备及试剂性能满足方法要求;反应条件为37 ℃孵育10 min;方法灵敏度为0.005 82,室内测量不精密度小于0.7%,0～120 g/L线性范围良好;室间比对结果无统计学差异(P>0.05);参加TP国际参考实验室质量比对计划,样本测定结果在等效范围内,相对标准不确定度1.8%.结论 成功建立血清TP参考方法,性能指标满足要求,初步评估了测量结果不确定度,可用于TP测定的量值溯源和标准化.