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异种移植血管内皮细胞组织特异性表达人CD59转基因小鼠的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立用于异种移植研究血管内皮细胞组织特异性表达人CD59转基因小鼠。方法采用受精卵显微注射技术,将含有人ICAM-2启动子、人CD59基因第1个内含子、人CD59 cDNA、BGH polyA终止信号的外源基因导入小鼠受精卵的原核中。选取注射后仍健康的受精卵移植入假孕母鼠的输卵管中待分娩。聚合酶链反应(PCR)及Southern blot确定外源基因整合阳性转基因小鼠。流式细胞术用于外源基因蛋白质水平表达检测。免疫组织化学方法观察人CD59在转基因小鼠心脏、肝脏、肾脏等器官表达分布情况。结果产仔130只,9只外源基因整合阳性。整合率6%(9/130)。6只获得蛋白质水平表达。蛋白质水平表达强度为人CD59在人白细胞表达强度的80%至95%,转基因效率5%(6/130)。免疫组织化学检测显示人CD59在转基因小鼠心脏、肝脏、肾脏组织有较强表达,且表达限于血管内皮细胞。结论成功地建立了用于异种移植研究血管内皮细胞组织特异性表达人CD59转基因小鼠。 相似文献
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转人CRP基因在异种移植中的研究 总被引:8,自引:0,他引:8
目的:研究转入补体调节蛋白(CRP)DAF、MCP和CD59基因对抑制人补体激活从而克服超急性排斥反应的作用。方法:利用显微注射建立转人衰变加速因子(hDAF)小鼠和猪的模型和转梁hMCP及hCD59真核表达质粒的猪内皮细胞(EC),研究小鼠和猪EC表达抑制人补体激活的人补体调节蛋白(CRP)对异种移植超急性排斥反应的抑制作用。结果(1)转人DAF基因小鼠心脏用新鲜人血连续丛外灌注,转基因组心脏搏动时间(174.6min)比对照组(106.5min)明显延延长。(2)转hDAF基因猪心脏异位移植给猕猴、移植心最长存活90h,受者死亡前移植心仍有功能,移植心病理检查未见超急性排斥反应病理改变。(3)转DAF基因基因猪EC死亡率在不同浓度血清时均明显低于对照组,在转hDAF基因猪EC上再分别转染hMCP及hCD59真核表达质粒,转hDAF hMCP或hDAF hCD59在不同血清浓度时EC死亡率较单纯hDAF组明显下降(P<0.05)。结论,转人DAF及MCP、CD59补体调节蛋白基因能克服人对异种器官或组织的超急性排斥反应。 相似文献
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目的建立一种猪到人异种心脏移植超急性排斥反应实验模型。方法 8只广西巴马猪正中切口锯开胸骨进胸,肝素化,完整剪取猪心脏,用4℃生理盐水反复冲洗各心腔及心脏表面,用改良圣托马斯液经主动脉灌注,冲洗冠状动脉系统后,建立人血液体外灌注猪游离心脏冠状动脉系统,记录各模型心脏搏动的持续时间,1h后对灌注心脏进行免疫组织化学(测定IgG及IgM的沉积)及病理学分析。结果 8个人血液体外灌注猪心脏冠状动脉系统实验模型均成功建立,灌注心脏平均搏动时间为(9.25±1.90)min;心肌间质弥漫性出血、水肿,血管扩张,内皮细胞肿胀、坏死;心肌血管内皮细胞有IgG及IgM沉积。结论通过人血液体外灌注猪心脏冠状动脉系统建立的猪到人异种心脏移植实验模型能模拟超急性排斥反应,操作简单,容易复制。 相似文献
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猪到人异种移植超急性排斥反应的靶抗原 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探索猪到人异种移植超急性排斥反应的靶抗原。方法 对近年来国内、外有关文献进行检索 ,并作综述。结果 α半乳糖基 (α Gal)是目前公认的猪到人异种移植超急性排斥反应的主要抗原 ,其表达受α 1,3半乳糖转移酶 (α 1,3GT)控制。克服α Gal引起的超急性排斥反应的方法有免疫吸附天然抗体、酶消化α Gal、α GT基因敲除及转基因技术等。除α Gal外 ,还存在与人血清中天然抗体相结合的其它抗原 ,如红细胞表面相对分子质量为 40× 10 3 的分子 ,猪胚胎脑细胞上相对分子质量为 2 10× 10 3 、10 5× 10 3 及 5 0× 10 3 的抗原分子等。结论 α Gal是异种移植超急性排斥反应的主要靶抗原 ,除α Gal外还存在有待进一步研究的非α Gal。 相似文献
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转人α-1,2岩藻糖苷转移酶基因在异种移植中的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究转人α-1,2岩藻糖苷转移酶基因(HT)在克服超急性排斥反应(HAR)中的作用。方法 通过脂质体转染将人HT基因转入猪血管内皮细胞(PIECs)中,利用显微注射建立转HT基因小鼠模型,经流式细胞仪检测转HT基因阳性的PIECs表面抗原及小鼠外周血单核细胞表面抗原的变化。结果 转HT基因的PIECs表面的α-1,3半乳糖(α-Gal)比阴性对照下降了50%~60%,H抗原由无表达到44%~78%表达阳性;转HT基因小鼠白细胞表面的α-Gal比阴性对照下降了63%左右,H抗原阳性表达率为95%以上。结论 HT基因在细胞和小鼠体内均有较好的表达,可减少异种抗原与异种抗体的反应,在克服超急性排斥反应中能发挥一定的作用。 相似文献
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供者血管内皮细胞(EC)是猪到人异种移植时引发超急性排斥反应的靶抗原的主要分布部位。利用转基因技术让猪的内皮细胞表达人补体调节基因(hDAF),可能会增强其血管内皮细胞的防御能力,借以克服超急性排斥反应的发生,联合转染一种以上人补体调节蛋白基因可能效果更好。为此,我们进行了如下实验。 相似文献
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补体系统在异种移植超急性排斥反应中的作用已基本被阐明。通过转基因方法使猪血管内皮细胞表达人补体调节蛋白,可以避免发生异种移植超急性排斥反应。但移植过程中的缺血再灌注损伤却不可避免,补体介导的血管内皮细胞激活可以引起急性血管性排斥反应,并影响移植物的长期存活。本文就补体系统在异种移植领域的研究进展作一综述。 相似文献
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目的探究抑制成纤维细胞生长因子受体2-卷曲螺旋结构域蛋白6(FGFR2-CCDC6)表达在人胆管癌异种移植小鼠的抗肿瘤作用。方法选择购自美国模式培养物集存库(ATCC)的人正常肝内胆管上皮细胞HIBEC和稳定转染FGFR2-CCDC6表达质粒的人肝内胆管癌细胞系Hucct1, 分组为沉默FGFR2-CCDC6阴性对照(si-NC)组和沉默FGFR2-CCDC6(si-FGFR2-CCDC6)组。利用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测融合基因表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测FGFR2、成纤维细胞生长因子2(FGF2)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)蛋白表达。噻唑蓝(MTT)检测抑制FGFR2对细胞增殖的抑制作用。小鼠荷瘤模型探究抑制FGFR2表达对移植瘤体积的抑制作用。应用SPSS 21.0软件进行分析。结果 Hucct1中的FGFR2-CCDC6表达显著高于HIBEC(1.00±0.05比1.92±0.09, t=15.480, P<0.05);FGFR2、FGF2和p-ERK1/2的蛋白表达均明显高于HIBEC(FGFR2:0.54±0.0... 相似文献
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汪泽厚 《国际泌尿系统杂志》1997,(2)
器官移植已成为救治多种器官功能衰竭患者有生命的有效措施之一,而临床上器官来源严重不足。现有研究资料表明,猪因其器官的大小、生理特征等最为适合作为人体异种器官移植的供者,其主要障碍是人体预存的天然抗体与猪器官细胞表面抗原结合,激活补体,引发超急性排斥,克服这种障碍的研究目前主要集中于受者修饰和供者修饰两方面,后者主要是繁殖转基因猪,使得不表达或少量表达与天然抗体结合的抗原,或使转基猪表达人体补体抑制蛋白,抑制补体活化,防止发生超急性排斥。 相似文献
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