多药耐药相关蛋白基因、肺耐药蛋白基因在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的　研究多药耐药相关蛋白基因 (MRP)和肺耐药蛋白基因 (LRP)在肝细胞癌 (HCC)中的表达及其与临床的关系。方法　采用SP免疫组化和PCR技术检测 5 4例HCC和 2 4例癌旁组织及 1 2 例肝炎后肝硬化组织中的两种基因表达。结果　MRP和LRP在 3种组织中均有表达,HCC组织中其基因表达显著高于其他组织 (P< 0. 0 5 )。HCC中两种基因表达呈正相关 (r= 0. 3 1 2, P <0. 0 5; r= 0. 3 2 8, P< 0. 0 5 );其表达与HCC的分化程度有关 (P< 0. 0 5 )。并且其表达阳性组患者化疗后AFP有效率和平均生存期分别高于和长于阴性组 (P< 0. 0 5 ),但LRP与平均生存期无关 (P> 0. 0 5 )。结论　HCC多药耐药 (MDR)与两种基因表达有关,起源于内源性耐药;检测其表达对预测化疗耐药具有指导意义;MRP可能与预后有关。     

多药耐药相关蛋白(MRP)基因表达的检测在原发性肝细胞癌中的临床意义

化疗在原发性肝癌以手术为主的综合治疗中发挥着重要作用 ,而多药耐药的产生可能是其临床化疗失败的原因之一。近来研究提示MRP基因过表达参与了癌细胞多药耐药的发生〔1〕,检测其表达可能具有重要的临床意义。本研究运用RT PCR和免疫组织化学技术 ,检测原发性肝细胞癌组织中MRP的表达 ,结合临床病理资料 ,探讨MRP基因表达在原发性肝细胞癌中的临床意义。1.材料与方法 :(1)标本 :RT PCR检测新鲜标本 2 5例 ,随机选自我院 1999年 9月～ 2 0 0 0年 3月间行手术切除、经病理证实的原发性肝细胞癌 ,并同时取得癌周 2cm处肝组织。免疫组…     

多药耐药基因在人原发性肝细胞癌中的表达

建立一种敏感性高、特异性强的逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，定量检测了３０例原发性肝细胞癌（ＰＨＣ）患者癌组织周组织中多药耐药基因（ｍｄｒ１）表达水平，其中５例患者术前经肝动脉插管化疗。结果显示：ＰＨＣ癌组织中ｍｄｒ１基因表达较癌周组织高；术前行化疗者癌组织中ｍｄｒ１基因过度表达，同时其癌周组织中ｍｄｒ１的表达较未化疗的癌周组织高。我们认为ｍｄｒ１基因过度表达在ＰＨＣ内在性或获得性药物碱     

耐药相关蛋白在肾癌中的表达

为探讨耐药相关蛋白（ＭＲＰ）在肾癌中表达的意义，应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测２０例肾癌组织中ＭＲＰ表达。结果：ＭＲＰ阳性表达率为６０％，在胞浆和胞膜上均见表达，但以胞浆中（粗颗粒状）更显著。晚期肾癌（Ⅲ、Ⅳ期）阳性表达率为８９％，明显高于早期肾癌（Ⅰ、Ⅱ期）的３６％，Ｐ＜００５。结果认为ＭＲＰ与肾癌浸润转移相关，并可能是其内源性耐药的重要机制之一     

多药耐药相关蛋白基因在原发性肝细胞癌组织中的表达及意义

目的　研究原发性肝细胞癌及其癌周肝组织中多药耐药相关蛋白 (MRP)基因的表达及意义。方法　用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 2 5例新鲜原发性肝细胞癌及其癌周肝组织中MRPmRNA的表达 ,用免疫组织化学技术LSAB法检测 60例肝细胞癌组织中MRP蛋白的表达 ,并结合流式细胞仪对体外化疗药物敏感性的检测结果进行统计学分析。结果　原发性肝细胞癌组织中MRPmRNA与MRP蛋白表达阳性率分别为 44 .0 0 % (11/2 5 )和 45 .0 0 % (2 7/60 ) ,均以中、低表达为主 ,明显高于癌周肝组织中MRPmRNA和MRP蛋白的表达阳性率〔2 8.0 0 % (7/2 5 )、2 6.67% (16/60 )〕 ,P<0 .0 5 ;5例复发性肝癌的MRP蛋白表达阳性率和表达强度呈增高的趋势。在RT PCR检测的 2 5例患者中 ,该两项指标具有良好的一致性 (P<0 .0 5 )。肝细胞癌在体外对化疗药物 5 FU、DDP、ADM、MMC及CTX的敏感性分别为 (15 .80± 7.63 ) %、(18.45± 9.5 9) %、(17.95± 7.99) %、(16.60± 8.69) %和 (17.40± 10 .14 ) %。MRP蛋白表达阳性者对 5 FU、ADM的敏感性低于阴性者 (P<0 .0 5 )。结论　MRP基因在原发性肝细胞癌组织中的表达可能在肝癌内在性和获得性耐药中起重要作用 ,检测MRP基因表达有助于预测化疗反应和选择合理的化疗方案。     

多药耐药相关蛋白在阿霉素诱导人肝癌细胞SMMC—7721耐药性产生中的作用及

目的 动态观察阿霉素（ＡＤＭ）诱导肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１耐药性的产生,了解多药耐药相关蛋白（ＴＲＰ）在其耐药机理中的作用。方法 分别用逐步提高培养基中ＡＤＭ的浓度诱导ＳＭＭＣ－７７２１细胞和用含不用ＡＤＭ浓度的培养基直接短期培养ＳＭＭＣ－７７２１细胞的方法,诱导细胞产生耐药性,绘制剂量反应曲线,确定细胞耐药倍数,ＲＴ－ＰＣＲ法测定细胞ＭＲＰｍＲＮＡ的表达水平,流式细胞仪检测细胞内柔红霉素（ＤＮＲ）的浓度。结果 随着培养基中ＡＤＭ浓度的逐步提高,ＭＲＰｍＲＮＡ的表达也逐渐增强,细胞内ＤＮＲ浓度明显下降,ＳＭＭＣ－７７２１细胞的耐性逐渐增加;用含不同ＡＤＭ浓度的培养基直接培养亲代细胞后,虽然ＭＲＰｍＲＮＡ表达明显升高,但细胞内ＤＮＲ浓度仍维持较高水平,并且绝大部分细胞短期内死亡。结论 ＡＤＭ可以逐步诱导肝癌细胞     

多药耐药基因在人原发性肝细胞癌中的表达

建立一种敏感性高、特异性强的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,定量检测了30例原发性肝细胞癌(PHC)患者癌组织及癌周组织中多药耐药基因(mdrl)表达水平,其中5例患者术前经肝动脉插管化疗。结果显示:PHC癌组织中mdrl基因表达较癌周组织高;术前行化疗者癌组织中mdrl基因过度表达,同时其癌周组织中mdrl的表达较未化疗的癌周组织高。我们认为mdrl基因的过度表达在PHC内在性或获得性药物耐受的产生中起着一定的作用。     

9种耐药相关蛋白在肝癌中的表达及其临床意义

目的探讨肝细胞癌（HCC）及癌旁肝组织中9种多药耐药（MDR）相关蛋白表达的差异，并结合肿瘤的病理学特征进行分析。方法未经化疗的98例肝癌及其癌旁肝组织构建组织芯片，应用免疫组织化学方法检测P-gp、MRP3、LRP、GST-π、Cycfin D1、Cycfin E、p16^INK4a、p21^WAF1和p27^Kip1共9种耐药相关蛋白的表达水平。结果除Cyclin D1外，其余8种耐药相关蛋白在HCC与癌旁肝组织中的表达差异均有统计学意义（P〈0．01）；CyclinD1在伴门静脉癌栓HCC中的表达显著高于不伴癌栓组（P〈0．01）。结论HCC的天然耐药现象具有复杂性和多样性，CycfinD1的高表达可能与HCC的转移和预后有关。     

溴隐亭逆转临床肝癌患者多药耐药性研究

目的利用溴隐亭逆转人肝癌化疗耐药性。方法78例未经任何治疗的原发性肝癌患者先后行2次^99m Tc-甲氧基异丁基异腈(MIBI)单光子发射计算机断层显像(SPECT)检测，经外周静脉注射20mCi ^99m Tc—MIBI后15和120min行平面显像半定量分析肿物部位的摄取比值(UR)第1次SPECT检测后口服溴隐亭2．5mg／次，3次／d，连续3d后进行第2次SPECT检测，两次检测结果进行对照比较。结果68例肝癌患者^99m Tc—MIBI SPECT肿瘤无MIBI摄取。10例患者^99m Tc—MIBI SPECT肿瘤部位有MIBI摄取。经溴隐亭治疗后所有肿瘤MIBI排空者均出现99^m Tc—MIBI浓聚。结论溴隐亭作为一种新型逆转剂可有效逆转临床肝癌患者的多药耐药性。     

乙肝病毒X蛋白对肝癌细胞多药耐药的影响

目的观察乙肝病毒（HBV）X蛋白对肝癌多耐药性产生的影响，探讨肝癌多药耐药的形成与乙肝病毒感染的关系。方法应用脂质体介导技术稳定转染peDNA3／HBX质粒至HepG2人肝癌细胞株，噻唑蓝（MTr）法检测阿霉素及丝裂霉素作用下转染前后细胞的存活率，An—nexin／PI法流式细胞分析术检测转染前后细胞在受到5-氟尿嘧啶（5-Fu）作用后的凋亡指数（AJ），逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术分别检测转染前后HepG2内多药耐药相关基因在mRNA和蛋白水平的表达。结果MTr法显示阿霉素和丝裂霉素作用下，转染了peDNA3／HBX质粒的HepG2细胞的IC50明显高于对照组（P〈0．05）。5-Fu作用后转染组和对照组的AJ分别是（9．83±1．50）％VS（17．79±1．70）％，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。整合了HBX基因的HepG2细胞内多药耐药相关基因在mRNA和蛋白水平的表达也均高于未转染细胞，转染前后比较在mRNA水平mdrl、MRPl、LRP基因的表达分别提高了190％、68％、95％；而在蛋白水平p—gp、MRPl、LRP的表达分别提高了64．3％、87．5％和90．8％。结论乙肝病毒X蛋白可上调HepG2细胞内多药耐药相关基因的表达，从而促进肝癌多药耐药性的产生。     

p73蛋白在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的　探讨p73蛋白在肝细胞性肝癌中的表达及其临床病理意义。方法　采用免疫组 织化学SABC法检测p73蛋白在肝癌和癌旁组织中的表达水平,并分析其与肝癌临床病理特征的关 系。结果　38例肝癌组织中有22例p73蛋白呈阳性表达,阳性表达率为57.9%,而癌旁组织无1例 呈阳性表达,低分化、有转移的肝癌组织中p73蛋白水平明显高于高分化、无转移的肝癌组织。结论 p73蛋白在肝癌组织中表达上调,可能在肝癌的发生、发展过程中起着重要的作用。     

原发性肝癌多药耐药基因的表达及其意义

目的 探讨５种多药耐药（ＭＤＲ）基因肝癌组织中的表达,建立ＭＤＲ的基因诊断标准。方法 用逆转录－聚合酶链（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,流式细胞术检测肝癌组织中５种ＭＤＲ基因ｍＲＮＡ和蛋白质的表达,用四氮唑蓝快速比色（ＭＴＴ）法检测抗癌药物对肝癌原代细胞的ＩＣ５０值。结果 肝癌耐药涉及ｍｄｒ１,ＭＲＰ,ＬＲＰ,ＧＳＴｐ１和ＴｏｐｏⅡα基因,ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ≥０．５、ＭＲＰｍＲＮＡ≥０．６、ＬＲＰ ｍｒｎＡ     

P16基因蛋白在原发性肝癌及癌旁组织中的表达及其临床意义

目的 探讨抑癌基因ｐ１６在肝癌及癌旁组织中的表达及临床意义。方法 应用免疫组织化学方法对５０例肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）及癌旁肝硬化组织（４４例）手术切除石蜡包埋标本进行Ｐ１６基因蛋白表达的测定,并结合临床病理指标进行分析。结果 ｐ１６基因在ＨＣＣ中表达的阳性率为４８％,癌旁９１％。     

凋亡抑制蛋白FLIP在肝癌组织中的表达和意义

目的检测凋亡抑制蛋白FLIP在人肝癌不同分化组织中的表达并揭示其在肝癌发生发展中的意义。方法采用免疫组织化学技术，分析86例肝癌标本（采用经典的Edmondson四级分级法，Ⅰ级18例，Ⅱ级25例，Ⅲ级21例，Ⅳ级22例），肝癌Hepg2细胞系1株细胞爬片的10样本中FLIP蛋白的表达并进行统计学分析比较。结果凋亡抑制蛋白FLIP在86例肝癌标本中有72例阳性表达（83．72％），Ⅰ级13／18（72．22％），Ⅱ级20／25（80．00％），Ⅲ级18／21（85．71％），Ⅳ级21／22（95．45％）（P〈0．05）；在肝癌Hepg2细胞系细胞爬片10个样本中全部阳性表达（100％），（P〈0．01）。结论凋亡抑制蛋白FLIP在肝癌组织中呈阳性表达；不同分化的肝癌组织其表达阳性率不同，分化越差其阳性表达率越高；这可能为揭示肝脏恶性肿瘤的发生、发展提供新的理论依据，并为肝癌的有效治疗提供新的思路。     

多药耐药相关蛋白基因、肺耐药蛋白基因与原发性肝细胞癌化疗敏感性研究

目的研究多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated-protein,MRP)基因、肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)基因在肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)中的表达水平与HCC病人化疗疗效及甲胎蛋白(a-fetoprotein,AFP)的关系.方法采用S-P免疫组织化学方法和原位PCR技术对54例术前未化疗的未能切除的HCC,24例肝癌旁及12例肝炎后肝硬化存档石蜡包埋切片组织中的MRP、LRP基因编码的MRP、mRNA MRP和LRP、mRNA LRP的表达进行检测.术后所有病人常规化疗,分析MRP、LRP基因表达与HCC化疗疗效关系.并对其术后2周AFP阳性的38例HCC病人化疗,分析MRP、LRP基因表达与AFP变化的关系.结果 MRP、mRNA MRP和LRP、mRNA LRP在三种组织中的阳性表达率分别为61.1%,25.0%,16.7%;77.8%,37.5%,41.7%和64.8%,33.3%,25.0%;75.9%,33.3%,25.0%.HCC组织中MRP、LRP基因表达显著高于其他组织中的基因表达(P<0.05,0.05).HCC组织中MRP、LRP基因表达与LRP基因表达呈正相关(r=0.287,P<0.05;r=0.324,P<0.05).MRP、LRP基因表达阴性组HCC病人化疗有效率显著高于阳性组病人(P<0.05,0.05).MRP、LRP基因表达阴性组病人,AFP有效率高于阳性组(P<0.05).结论 HCC多药耐药和MRP、LRP基因表达有关,HCC耐药起源于内源性多药耐药;其耐药机制是多种因素作用的结果.检测MRP、LRP基因表达对肝癌的化疗耐药具有重要的指导意义;MRP、LRP基因表达可作为预测HCC化疗敏感性的参考指标.     

Cyclin D1在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨Cyclin D1在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测50例HCC组织、20例正常肝组织中Cyclin D1蛋白的表达情况。结果Cyclin D1蛋白在肝癌组织中的阳性率为44．0％,极显著高于正常肝组织（均为阴性表达）（P〈0．01）;阳性表达与肝癌的肝内转移和肝癌的分化程度有关（P〈0．05,P〈0．05）。Cyclin D1的过表达均与病人术后〈3年生存期有关（P〈0．05）。结论Cyclin D1在HCC的发生、发展过程中起着不同程度的作用,检测Cyclin D1对判定HCC预后可提供一定的依据。