下调miR-217 抑制类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞炎症反应的实验研究

目的:探讨下调miR-217表达对类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)炎症反应的影响及作用机制。方法:分离培养RA患者PBMC细胞,脂多糖(LPS)诱导PBMC细胞24 h,ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的表达,qRT-PCR检测miR-217和Sirt1 mRNA表达,Western blot检测Sirt1蛋白表达。分别转染anti-miR-217和pcDNA3.1-Sirt1至PBMC细胞,构建miR-217低表达、Sirt1过表达的PBMC细胞,ELISA法检测PBMC细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的变化。双荧光素酶报告基因验证miR-217与Sirt1的关系。结果:LPS诱导PBMC细胞24 h后,TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高,IL-10水平降低。miR-217在LPS诱导的PBMC细胞中表达上调,Sirt1 mRNA和蛋白表达下调。下调miR-217表达或上调Sirt1表达均可抑制PBMC细胞TNF-α、IL-1β和IL-6表达,促进IL-10表达。miR-217在PBMC细胞中负向调控Sirt1表达,上调miR-217表达抑制了Sirt1过表达对LPS诱导的PBMC细胞中炎症因子表达的影响。结论:下调miR-217可能通过负向调控Sirt1表达抑制RA患者PBMC细胞炎症反应,可作为治疗RA的新靶点。     

lncRNA FGD5-AS1靶向miR-15a-5p调控LPS诱导的脓毒症细胞损伤

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(lncRNA FGD5-AS1)对LPS诱导的脓毒症细胞损伤的影响及分子机制。方法:500 ng/ml脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞损伤。THP-1细胞分为对照组、LPS组、pcDNA组、pcDNA-FGD5-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-15a-5p组、pcDNA-FGD5-AS1+miR-NC组、pcDNA-FGD5-AS1+miR-15a-5p组。RT-qPCR检测lncRNA FGD5-AS1和miR-15a-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测蛋白表达;ELISA检测IL-6、IL-1β、TNF-α水平。双荧光素酶报告实验检测lncRNA FGD5-AS1和miR-15a-5p的靶向关系。结果:与对照组相比,经LPS诱导的THP-1细胞中,lncRNA FGD5-AS1表达降低,miR-15a-5p表达升高(P<0.05)。过表达lncRNA FGD5-AS1和下调miR-15a-5p均能够显著降低细胞凋亡以及炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达(P<...     

lncRNA MALAT1调控miR-487a-3p抑制H_(2)O_(2)诱导的神经细胞凋亡和炎症反应及其机制研究北大核心CSCD

目的:研究lncRNA MALAT1(MALAT1)调控miR-487a-3p对H_(2)O_(2)刺激神经细胞凋亡和炎症反应的影响,并探讨其作用机制。方法:采用qRT-PCR检测H_(2)O_(2)处理PC12细胞后MALAT1和miR-487a-3p相对表达量,流式细胞术测定凋亡率,Western blot测定Bcl-2、Bax蛋白表达水平,ELISA检测TNF-α、IL-6和IL-1β表达水平,在线数据库和双荧光素酶报告实验验证MALAT1和miR-487a-3p靶向关系。结果:H_(2)O_(2)处理PC12细胞后,MALAT1表达水平升高,miR-487a-3p表达水平降低;H_(2)O_(2)处理PC12细胞明显增加细胞凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6和IL-1β表达,降低Bcl-2蛋白表达;抑制MALAT1或过表达miR-487a-3p可抑制PC12神经细胞凋亡水平和炎症反应;在线数据库和双荧光素酶报告实验验证MALAT1可靶向调控miR-487a-3p的表达,抑制miR-487a-3p可逆转抑制MALAT1对抑制H_(2)O_(2)诱导PC12神经细胞的凋亡和炎症反应。结论:MALAT1通过靶向调控miR-487a-3p以减缓H_(2)O_(2)诱导的神经细胞凋亡和炎症反应。     

miR-133a-3p靶向调控CD2AP基因减轻RSV感染的人支气管上皮细胞系16-HBE损伤

目的探讨miR-133a-3p对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的支气管上皮细胞凋亡、炎性反应的影响及其对CD2相关蛋白(CD2AP)的调控作用。方法收集59例支气管哮喘儿童的支气管黏膜组织标本为AsP组,同时选取59例支气管扩张非哮喘儿童的支气管黏膜组织标本为NC组,用RT-qPCR法检测组织中miR-133a-3p、CD2AP的表达量;RSV感染支气管上皮细胞(16-HBE)建立细胞损伤模型(RSV组),分别将miR-NC、miR-133a-3p mimics、si-NC、si-CD2AP、pcDNA-NC、pcDNA-CD2AP、miR-133a-3p mimics与pcDNA-NC、miR-133a-3p mimics与pcDNA-CD2AP转染至感染RSV的16-HBE细胞;用RT-qPCR法与Western blot法分别检测细胞中miR-133a-3p、CD2AP的表达量;用ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1α的水平;用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测miR-133a-3p与CD2AP的靶向关系;Western blot法检测cleaved-caspase-3蛋白表达量。结果与NC组比较,AsP组支气管黏膜组织中miR-133a-3p的表达水平降低(P0.05),CD2AP mRNA的表达水平升高(P0.05);RSV感染的16-HBE细胞中miR-133a-3p的表达水平降低(P0.05),CD2AP的表达水平及TNF-α、IL-6、IL-1α的水平升高(P0.05),凋亡率及cleaved-caspase-3蛋白水平升高(P0.05);RSV感染的16-HBE细胞中转染miR-133a-3p mimics或转染si-CD2AP可明显降低TNF-α、IL-6、IL-1α的水平、凋亡率及cleaved-caspase-3蛋白水平(P0.05);双荧光素酶报告实验证实CD2AP是miR-133a-3p的靶基因;共转染miR-133a-3p mimics与pcDNA-CD2AP可明显逆转miR-133a-3p mimics对16-HBE细胞凋亡及炎性反应。结论 miR-133a-3p过表达可通过负向调控CD2AP的表达而抑制RSV感染的支气管上皮细胞炎性反应及凋亡,从而减轻细胞损伤。     

新风胶囊含药血清通过抑制VEGFA/SDF-1/CXCR4通路缓解强直性脊柱炎患者血小板活化的机制

目的通过体外实验研究新风胶囊(XFC)对VEGFA/SDF-1/CXCR4通路的影响,探讨其改善强直性脊柱炎(AS)患者血小板活化的的机制。方法分离外周血单核细胞(PBMC),分为正常组(NC)、模型组(MC)、新风胶囊组(XFC)、AMD3100组,MTT法检测XFC最佳浓度,免疫荧光法检测CD62p、CD40L、PDGFA的表达,ELISA法检测TNF-ɑ、IL-1β、IL-4、IL-10、VEGFA及VEGFR的表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测SDF-1、CXCR4、VEGFA mRNA的表达,Western blot法检测SDF-1、CXCR4、VEGFA、VEGFR蛋白的表达。结果中剂量XFC在24 h时对细胞抑制作用最强。与正常组相比,模型组CD62p、CD40L、PDGFA、IL-1β、TNF-α、VEGFA、VEGFR、SDF-1、CXCR4表达均升高,IL-4、IL-10降低(P0.05,P0.01)。与模型组相比,XFC组CD62p、CD40L、PDGFA、IL-1β、TNF-α、VEGFA、VEGFR、SDF-1、CXCR4表达均降低,IL-4、IL-10升高(P0.05,P0.01)。结论 XFC具有类AMD3100样作用,通过抑制VEGFA/SDF-1/CXCR4通路的表达,下调IL-1β、TNF-α,上调IL-4、IL-10,调节免疫炎症反应,从而降低AS患者血小板活化。     

严重烫伤大鼠早期胫骨前肌组织中微小RNA表达谱数据的靶基因分析

目的初步确定严重烫伤大鼠早期胫骨前肌组织中差异表达微小RNA(miRNA)的靶基因,从而为进一步机制研究指明方向。 方法采用高通量芯片技术检测严重烫伤大鼠早期胫骨前肌miRNA表达谱数据,筛选部分差异明显且相关性较好的miNRA,包括miR-1-3p、miR-206-3p、miR-133a-3p、miR-22-3p、miR-30a-5p、miR-30d-3p、miR-190b-5p、miR-628和miR-678,利用互联网络检索数据库Mirbase、Miranda和Mirdb,对这些差异miRNA进行靶基因预测。 结果3大数据库预测结果显示差异miRNA主要调控79个靶基因,网络关系图显示了miR-1-3p、miR-206-3p、miR-133a-3p、miR-22-3p、miR-30a-5p、miR-30d-3p、miR-190b-5p、miR-628和miR-678等miRNA及其预测靶基因之间复杂的调控网络关系。 结论根据初步的预测结果,miR-1-3p和miR-206-3p共同调控的靶基因较多,可作为进一步机制研究的理论依据。     

p53/miR-502-5p/TRAF2通路对骨关节炎软骨细胞损伤的影响

目的:探究微小RNA-502-5p(miR-502-5p)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的骨关节炎(OA)软骨细胞损伤的影响。方法:Western blot和RT-q PCR检测骨关节炎患者软骨组织和IL-1β诱导的软骨细胞中p53和miR-502-5p的表达;分离培养软骨,并分组处理细胞,分别用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测炎性因子和细胞外基质(ECM)相关蛋白的表达,另外,萤光素酶报告实验检测miR-502-5p对p53及肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)的调控作用。结果:与正常软骨组织相比,OA患者软骨组织中miR-502-5p的水平显著降低,p53和TRAF2水平则明显升高(P0.05)。IL-1β处理软骨细胞后,细胞活力下降、细胞凋亡率增加、IL-6、IL-8和TNF-α的蛋白表达水平显著上升;Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的蛋白表达显著下调,基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9和MMP-13等的蛋白表达显著上调,miR-502-5p mimic转染反转了IL-1β对软骨细胞的这些作用。此外,p53与miR-502-5p之间存在负反馈调节,同时miR-502-5p能够靶向抑制TRAF2的水平。TRAF2沉默同样反转了IL-1β对软骨细胞增殖、凋亡、炎症反应以及ECM相关蛋白表达的影响。结论:调节p53/miR-502-5p/TRAF2通路能够减轻IL-1β诱导的骨关节软骨细胞损伤。     

强直性脊柱炎患者外周血中miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495表达的分析

目的:为了探讨microRNA在强直性脊柱炎患者发病过程中的作用,我们通过检测强直性脊柱炎患者外周血液中miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495的表达情况,从而为研究microRNA在强直性脊柱炎发病机制中的调控作用和临床诊断价值提供新的思路。方法:收集强直性脊柱炎患者及正常人的外周血液,对外周血液中单个核细胞进行分离,并提取PBMC small RNA,用特异性茎环引物反转录成cDNA,并构建成熟的miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495的T载体,制作标准曲线,利用stem-loop法通过Real-time PCR技术,检测miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495的表达量。结果:本实验共收集临床样本92例,其中AS患者61例,正常人31例。通过Real-time PCR检测发现,与正常人相比,在强直性脊柱炎患者外周血中表达上调的有miR-106(P>0.05)与miR-30(P>0.05);表达下调的有miR-181(P<0.05)、miR-495(P<0.05)和miR-17(P>0.05),其中miR-181和miR-495有统计学意义。结论:与正常人相比在强直性脊柱炎患者外周血中miR-181和miR-495的表达量存在差异,它们可以靶向调控TLR-4,HLA-B,DVL和GSK/3β等基因,这一发现可能为强直性脊柱炎发病机制的研究提供新的思路,成为临床诊断中新的标志物。     

Circ_0032131靶向miR-502-5p/TLR4调控IL-1β诱导的软骨细胞损伤北大核心CSCD

目的探讨circ_0032131对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的人软骨细胞增殖、凋亡和炎症的影响及其潜在分子机制。方法使用10 ng/ml的IL-1β诱导人软骨细胞C28/I2,模拟骨关节炎的炎症环境;细胞转染建立基因敲低和过表达细胞模型;qRT-PCR检测circ_0032131、miR-502-5p和TLR4 m RNA的表达,Western blot检测TLR4蛋白表达。采用CCK8实验检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,酶联免疫吸附实验测定白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。双荧光素酶实验验证circ_0032131、miR-502-5p和TLR4基因之间的靶向关系。结果IL-1β诱导人软骨细胞中circ_0032131表达升高,miR-502-5p表达降低。IL-1β诱导人软骨细胞增殖活性降低、凋亡增加和炎症,诱导细胞损伤,而敲低circ_0032131能够减轻IL-1β诱导的人软骨细胞损伤。miR-502-5p是circ_0032131的靶向miRNA,敲低circ_0032131明显上调miR-502-5p的表达。功能补救实验表明,抑制miR-502-5p能够逆转circ_0032131敲低对软骨细胞损伤的保护作用。TLR4是miR-502-5p的下游靶基因,miR-502-5p能够负调控TLR4基因表达。过表达miR-502-5p能够减轻IL-1β诱导的人软骨细胞损伤,而过表达TLR4则能逆转miR-502-5p过表达对软骨细胞的保护作用。结论circ_0032131在IL-1β诱导的人软骨细胞中高表达,敲低circ_0032131可能通过靶向调控miR-502-5p/TLR4表达,减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤。     

TNF-α通过miR-125a-5p/JAK2/STAT3通路参与亚急性甲状腺炎发病的机制研究

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对甲状腺滤泡细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法 选择50例亚急性甲状腺炎患者（观察组），其中男性23例，女性27例；年龄29～57岁，平均年龄46.02岁。50例健康体检人群（正常对照组），其中男性24例，女性26例；年龄28～56岁，平均年龄45.86岁。用质量浓度10、50、100 ng/mL TNF-α处理甲状腺滤泡上皮FRTL-5细胞。FRTL-5细胞分别转染miR-125a-5p mimcs(miR-125a-5p组)、阴性对照miR-NC(miR-NC组)，无任何处理的细胞作为Contol组。四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测细胞增殖能力，流式细胞术、TUNEL染色检测细胞凋亡，酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测血清TNF-α、细胞上清液白细胞介素6(IL-6)含量，实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测细胞miR-125a-5p、IL-6水平，Western blot检测细胞JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平。结果观察组患者外周血TNF-α、IL-6、miR-125a-5p含量高于正常对照组，差异有...     

circFADS2靶向miR-125a-5p调控MPP+诱导的SK-N-SH细胞损伤的机制

目的：探究circFADS2靶向miR-125a-5p调控帕金森病（PD）细胞炎症反应和凋亡的机制。方法：100μmol/L MPP+诱导SK-N-SH细胞建立PD模型，分为Con组、PD组、PD+pcDNA组、PD+pcDNA-circFADS2组、PD+anti-miR-NC组、PD+anti-miR-125a-5p组、PD+pcDNA-circFADS2+miR-NC组、PD+pcDNA-circFADS2+miR-125a-5p组。qRT-PCR检测circFADS2和miR-125a-5p表达；ELISA检测IL-1β、TNF-α含量；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot检测cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达；双荧光素酶报告实验检测circFADS2与miR-125a-5p的靶向关系。结果：与Con组相比，PD组circFADS2表达降低，miR-125a-5p表达、凋亡率、IL-1β、TNF-α含量、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达升高（P<0.05）。circFADS2过表...     

慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺泡巨噬细胞促进气道上皮细胞增殖及黏蛋白和炎症因子分泌的机制

目的 通过慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型探讨肺泡巨噬细胞对气道上皮细胞增殖和分泌的影响及其相关机制。方法 支气管肺泡灌洗术收集烟熏和脂多糖诱导造模的COPD大鼠肺泡巨噬细胞与16HBE气道上皮细胞共培养。使用外泌体分离试剂盒提取大鼠肺泡巨噬细胞外泌体，PCR检测外泌体差异表达的微小RNA(miRNA)。采用miR-380模拟物(miR-380 mimic)过表达miR-380,小干扰RNA(siRNA)敲低16HBE细胞囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)。CCK-8法检测细胞增殖，Transwell^TM迁移实验检测16HBE细胞迁移；Western blot法检测黏蛋白5AC(MUC5AC)、 MUC5B、 MUC2、 CFTR的表达，ELISA检测16HBE细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)含量。结果 COPD大鼠肺泡巨噬细胞促进16HBE细胞的增殖和迁移，上调16HBE细胞黏蛋白和TNF-α、 IL-6的表达。COPD组大鼠肺泡巨噬细胞外泌体中miR-380明显上调。过表达miR-380及敲低CFTR均可下调16HBE细...     

转染miRNAs降低脂多糖诱导的大鼠肠微血管内皮细胞水通道蛋白1表达

目的探讨大鼠肠微血管内皮细胞miRNAs对脂多糖(LPS)诱导的水通道蛋白1(AQP1)表达的影响。方法用机械吹打法及胰蛋白酶消化法从大鼠空肠分离微血管内皮细胞,用免疫荧光染色鉴定细胞;用荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测AQP1和miRNAs的表达; miRNAs芯片分析结合在线软件筛选调控AQP1表达的miRNAs,瞬时转染miRNAs模拟体及对照序列进行进一步验证。结果肠微血管内皮细胞v WF免疫荧光染色为阳性。用LPS(0、0. 1、1和10 mg/L)处理细胞后,AQP1 m RNA表达水平随LPS浓度增加呈下降趋势,其中1和10 mg/L LPS处理细胞后AQP1 m RNA表达水平与对照组相比有明显差异(P0. 05和P0. 001);与对照组相比,LPS处理组有22个表达上调2倍以上的miRNAs及9个下调2倍以上的miRNAs;软件预测显示芯片结果中的miR-423-5p、miR-874-5p、miR-361-3p、miR-219a-5p、miR-27b-3p、miR-133b和miR-666可与AQP1启动子区互补配对; miR-874-5p、miR-361-3p、miR-133b和miR-666在LPS处理后的肠微血管内皮细胞中表达上调;转染miR-133b和miR-666模拟体后可使AQP1 m RNA表达水平下调。结论 LPS可通过上调miR-133b和miR-666表达水平,间接抑制AQP1的表达,继而影响肠黏膜通透性。     

黄芩素调控miR-378a-5p对脂多糖诱导的心肌细胞损伤和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨黄芩素对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞(H9C2)损伤和凋亡的影响,并分析其机制是否与调控miR-378a-5p表达有关。方法:将H9C2细胞分为对照组、LPS组、LPS+10μmol/L黄芩素组、LPS+20μmol/L黄芩素组、LPS+40μmol/L黄芩素组、LPS+20μmol/L黄芩素+miR-con组、LPS+20μmol/L黄芩素+miR-378a-5p组。细胞计数法、流式细胞术分析细胞活力和凋亡。试剂盒检测丙二醛(MDA)水平、乳酸盐脱氢酶(LDH)释放量、TNF-α和IL-6分泌量以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。实时定量PCR分析miR-378a-5p表达量。结果:LPS处理显著降低H9C2细胞存活率、促进细胞凋亡,增加MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量、miR-378a-5p表达量,降低SOD和GSH-Px活性(P<0.05)。黄芩素显著提高LPS处理的H9C2细胞存活率,抑制细胞凋亡,降低MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量、miR-378a-5p表达量,并增加SOD和GSH-Px活性(P<0.05)。过表达miR-378a-5p显著减弱黄芩素对LPS处理的H9C2细胞存活率、凋亡、MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量以及SOD和GSH-Px活性的影响(P<0.05)。结论:黄芩素可减轻LPS诱导的心肌细胞损伤和凋亡,其机制可能与下调受损心肌细胞miR-378a-5p表达有关。     

新风胶囊通过抑制miR-155/NF-κB信号通路改善强直性脊柱炎活动期患者高凝状态

目的新风胶囊(XFC)对强直性脊柱炎(AS)活动期患者miR-155、核因子κB(NF-κB)信号通路、高凝状态的影响,探讨其可能的机制。方法采用随机数字表法将56例AS活动期患者分为新风胶囊组(XFC组)和柳氮磺吡啶组(SASP组)。实时荧光定量PCR检测miR-155。反转录PCR检测核因子κB激活蛋白1(Act1)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、IκB激酶β(IKKβ)、NF-κB p65、NF-κB p50 mRNA的水平,Western blot法检测NF-κB P65、NF-κB P50蛋白表达,ELISA检测血清血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列环素F1(6-keto-PGF1)、血小板颗粒膜蛋白(GMP140)、血小板活化因子(PAF)、纤溶酶原激活抑制剂(PAI-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)、IL-10、IL-17。同时评价XFC对AS患者临床疗效。结果 XFC组Bath AS疾病活动指数50%达标率(BASDAI50)显著高于SASP组。与SASP组治疗后相比,XFC组治疗后血小板(PLT)、纤维蛋白原(FBG)、D-D二聚体(D-D)、TXB2、GMP140、PAF、PAI-2、IL-17、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、视觉模拟评分(VAS)、Bath AS疾病活动指数(BASDAI)、Bath AS功能指数(BASFI)、Bath AS总体指数(BAS-G)降低更明显,且其可明显升高6-keto-PGF1、IL-4、IL-10;与SASP治疗后相比,XFC治疗后IKKβ、IκBα、NF-κB p65、NF-κB p50 mRNA及NF-κB P65、NF-κB P50蛋白、miR-155表达水平更低。结论 XFC能有效改善AS活动期患者的高凝状态,可能与抑制miR-155、抑制NF-κB信号通路活化有关。     

miR-125a-5p靶向LIMK1逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的:探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂耐药性的影响及其作用机制。方法:RT-qPCR检测非小细胞肺癌组织及其细胞株A549和A549/DDP中miR-125a-5p和LIM激酶1(LIMK1)的表达;在A549/DDP细胞中上调或下调miR-125a-5p或LIMK1表达,分别采用MTT法、流式细胞术和Western blot检测细胞活力、凋亡率及耐药相关蛋白表达;TargetScan在线预测、萤光素酶报告基因实验验证miR-125a-5p和LIMK1的靶向关系;共表达miR-125a-5p和LIMK1,检测细胞活力、凋亡率及耐药相关蛋白表达。结果:在非小细胞肺癌组织及其细胞株中,miR-125a-5p表达下调,LIMK1表达上调(P0.05);萤光素酶报告基因实验表明miR-125a-5p可负向调控LIMK1表达。过表达miR-125a-5p或敲减LIMK1表达使A549/DDP细胞的活力下降,细胞凋亡率增加,顺铂的IC_(50)减小,耐药相关蛋白表达下调(P0.05)。过表达LIMK1则使miR-125a-5p对A549/DDP细胞活力和耐药相关蛋白表达的抑制作用减弱。结论:miR-125a-5p能通过抑制LIMK1基因表达,下调耐药相关蛋白表达,从而逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

强直性脊柱炎患者外周血CD4+调节性T细胞的变化及意义

目的 探讨强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者外周血中CD4+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的表达、功能及意义.方法 采用流式细胞术检测78例AS患者和50例健康志愿者外周血中CD4+CD25+CD127lo/- Treg、细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)和NK细胞,采用ELISA法检测血清中β型转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平.从患者外周血单个核细胞中磁珠分选出CD4+CD25+ Treg细胞,混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture, MLC)分析其免疫抑制功能.结果 AS活动期患者外周血中CD4+CD25+CD127lo/-Treg占CD4+ T淋巴细胞的百分比为(4.36±1.21)%,MLC中CD4+CD25+ Treg抑制同种异体T淋巴细胞增殖功能低下,与其Treg分泌TGF-β减少相关,CD4+ Treg含量及功能均低于健康志愿者(P<0.05).AS患者外周血中CD4+CD25+CD127lo/- Treg水平与TGF-β呈正相关,与TNF-α呈负相关.结论 AS患者外周血中Treg表达水平低,且存在功能缺陷,导致体内诱导免疫耐受机能不足,可能参与AS免疫发病.     

miR-203a-5p通过抑制丝裂原活化蛋白激酶1的表达调控人牙周膜干细胞的炎性反应

目的检测炎性人牙周膜干细胞(hPDLSCs)中miR-203a-5p及丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)的表达水平,探讨二者间的靶向关系对牙周炎炎性反应的调控作用。方法分离培养及流式细胞计量术鉴定hPDLSCs;将hPDLSCs分为:对照组、LPS刺激组、miR-203a-5p模拟物转染组及miR-203a-5p抑制剂转染组,用RT-qPCR检测miR-203a-5p及MAPK1 mRNA表达,Western blot检测MAPK1蛋白表达,双荧光报告系统验证miR-203a-5p与MAPK1的靶向关系。结果干细胞表面标志物CD73及CD90阳性;LPS刺激组miR-203a-5p的表达明显上调(P0.05);miR-203a-5p模拟物及LPS使miR-203a-5p的表达明显上调(P0.05),同时MAPK1 mRNA及蛋白的表达下调(P0.05);miR-203a-5p抑制物使miR-203a-5p的表达量下降(P0.05),同时MAPK1 mRNA及蛋白的表达增加(P0.05);miR-203a-5p与MAPK1具有靶向作用。结论 miR-203a-5p通过靶向下调MAPK1基因的表达来调控牙周炎的炎性反应过程。     

miR-155-5p靶向下调SOCS1减轻脂多糖诱导的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞炎症损伤

目的 探讨微小RNA-155-5p(miR-155-5p)对脂多糖(LPS)诱导SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞神经炎症损伤的影响。方法 采用人SH-SY5Y细胞，设立miR-155-5p过表达及其阴性对照(miR-155-5p mimic组、mimic-NC组)和miR-155-5p低表达及其阴性对照(miR-155-5p inhibitor组、inhibitor-NC组),将LPS处理上述各组转染成功细胞24 h,并设置未转染SH-SY5Y细胞的对照组和LPS处理组(LPS组)。噻唑蓝(MTT)法检测SH-SY5Y细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡率，反转录PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10 mRNA水平和miR-155-5p表达，Western blot法检测细胞裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、磷酸化核因子κB p65/核因子κB p65(p-NF-κB p65/NF-κB p65)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p3...     

依托咪酯通过促进miR-142-3p表达减轻缺氧诱导的PC12细胞神经炎症反应和细胞凋亡的分子机制研究

目的：探究依托咪酯是否通过调控miR-142-3p影响缺氧诱导的PC12细胞炎症反应和细胞凋亡。方法：采用不同剂量（2、6、12μmol/L）的依托咪酯预处理PC12细胞后建立缺氧模型;转染miR-142-3p模拟物或抑制剂后,采用0或12μmol/L依托咪酯预处理建立缺氧模型。采用CCK-8法、流式细胞术、Western blot分别检测细胞活性、凋亡、蛋白（CyclinD1、Cleaved-caspase-3）表达,ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平,RT-qPCR检测miR-142-3p表达。结果：依托咪酯提高缺氧诱导的PC12细胞活性、CyclinD1蛋白和miR-142-3p表达,降低细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平（P<0.05）。上调miR-142-3p可提高缺氧诱导的PC12细胞活性、CyclinD1蛋白表达,降低细胞凋亡率、Cleavedcaspase-3蛋白表达及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平（P<0.05）。下调miR-142-3p可逆转依托咪酯对...