显色法、API法和YBC法三种鉴定念珠菌方法的比较

本文采用科玛嘉显色培养基与生物梅里埃的API２０CAUX鉴定条和Vitek３２－YBC卡三种方法，对临床分离到的１４５株念珠菌鉴定比较，现报告如下。１材料与方法１．１菌株来源１４５株念株菌分离自住院病人的痰液、脓液、引流液、尿液等标本。１．２培养基CHROMagar（科玛嘉）念珠菌显色培养基干粉购自博赛科技公司API２０CAUX鉴定条和VTEK３２－YBC卡为生物梅里埃公司产品。１．３方法标本接种科玛嘉显色培养基（显色法），置３０℃培养２４～７２小时观察结果，再以API２０CAUX鉴定条（API法）和VITEK３２－YBC卡（YBC…     

显色法、API法和YBC法三种鉴定念珠菌方法的比较

本文采用科玛嘉显色培养基与生物梅里埃的API20CAUX鉴定条和Vitek32-YBC卡三种方法,对临床分离到的145株念珠菌鉴定比较,现报告如下.     

科玛嘉显色培养和API20C AUX鉴定酵母样真菌的临床价值

目的探讨科玛嘉显色培养和API20CAUX(简称API20C)鉴定酵母样真菌的对比研究。方法收集该院微生物室2012~2013年无菌体液标本分离出的酵母样真菌121株,对所有菌株进行科玛嘉显色培养鉴定和API20C鉴定。通过基因序列分析法将真菌准确鉴定到种。结果显色培养基除13株无法鉴定、8株鉴定错误外其余菌株均鉴定正确,正确率为92.59%(100/108)。API20C除5株鉴定错误、4株无鉴定结果外其余菌株均鉴定正确,正确率为92.56%(112/121);其中对显色培养能鉴定菌株的正确率为95.37%(103/108),对显色培养无法鉴定菌株的正确率为69.23%(9/13)。结论科玛嘉显色培养和API20C方法对大多数临床分离菌株能够准确鉴定到种,API20C对少见真菌和显色不典型菌种的鉴定有待进一步验证。     

显色培养法与形态学方法结合鉴定临床常见酵母菌

我们用常规鉴定法与CHROMagar念珠菌显色方法鉴定了临床标本中常见的 16种酵母菌 ,选择并结合两种方法的优点 ,探索一个简便、快速、准确的鉴定临床酵母菌的方法。1　材料和方法1 1　菌株来源　所试菌株为标准菌 (11种 )或本实验室从临床标本中分离的菌株 (5种 )。临床标本分离菌株经芽管试验、厚膜孢子或假菌丝观察等形态学以及生化反应鉴定(VITEKAMSYBC卡或 2 0CAUX系统 )。1 2　培养基　CHROMagar念珠菌显色培养基、玉米 吐温 80培养基。1 3　仪器　NikonMicrophot FX多功能显微镜。1 4　鉴定方法　将所试菌株分别接种于CHR…     

70株室间质量评价菌株鉴定差异及其纠正方法探讨

目的探讨对经过全自动微生物分析仪Vitek 2 Compact、基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪Vitek MS鉴定为“不确定”菌,以及在不同显色平板上产生类似色素菌的进一步鉴定方法,以明确病原学诊断。方法对来自国家卫生健康委临床检验中心与广东省临床检验中心室间质量评价菌株中的“不确定”菌70株,使用不同的鉴定系统结合表型特征、血清学试验进行鉴定,并对显色平板上产生类似色素的菌株做补充鉴定。结果自动化微生物鉴定系统报告的32株“不确定”菌中,Vitek 2 Compact有65.6%(21/32)需要进一步鉴定,Vitek MS有59.4%(19/32)需要进一步鉴定,部分菌株在2种自动化微生物鉴定系统间的鉴定结果存在差异;32株“不确定”菌经不同鉴定系统、表型特征、血清学试验鉴定,全部鉴定到种/型水平。对念珠菌平板等3种不同显色平板上产生类似色素的38株菌的补充鉴定,结果全部为非目标菌。结论通过不同鉴定方法的互补,可以提高临床微生物鉴定的质量。     

科玛嘉显色法与Vitek—32YBC卡法鉴定念珠菌的比较

目的：了解法国科玛嘉(CHROMagar)念珠菌显色培养基鉴定念珠菌的实际应用情况并探讨其与生物梅里埃Vitek—32YBC卡念珠菌鉴定的符合率。方法：对我院临床送检细菌培养标本接种于科玛嘉念珠菌显色琼脂平板，经培养后根据科玛嘉念珠菌显色琼脂平板上生长菌落的颜色和形态直接肉眼鉴定，而后再挑取显色平板上生长菌落用生物梅里埃Vitek—32YBC卡上机生化鉴定。结果：对占临床分离念珠菌90％以上的白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌等两法鉴定符合率较好，对临床较少见的念珠菌则显色法鉴定有待研究。结论：科玛嘉念珠菌显色培养基与YBC卡鉴定念珠菌符合率高，操作简便，鉴定快速，适合推广使用。     

两种MALDI-TOF MS系统快速鉴定血培养中白念珠菌以外酵母样真菌

目的评价2种基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)系统(Autoflex MALDI-TOF MS和Vitek MALDI-TOF MS)在快速鉴定血培养中分离的白念珠菌以外酵母样真菌的应用。方法收集复旦大学附属中山医院2010年10月至2013年1月住院患者血培养中分离的白念珠菌以外酵母样真菌59株,以真菌内转录间隔区(ITS)测序鉴定结果为金标准,比较Autoflex MALDI-TOF MS、Vitek MALDI-TOF MS和API 20C AUX 3种系统鉴定的准确性。结果 59株菌株包含了11种真菌,其中近平滑复合体30株(占50.8%)、热带念珠菌11株(占18.6%)、光滑念珠菌8株(占13.6%)、克柔念珠菌2株(占3.4%)、新生隐球菌2株(占3.4%)、异常威克汉姆酵母2株(占3.4%)、季也蒙念珠菌复合体1株(占1.7%)、葡萄牙念珠菌1株(占1.7%)、阿萨希毛孢子菌1株(占1.7%)和酿酒酵母1株(占1.7%)。3种系统鉴定真菌总的准确性分别为Autoflex MALDITOF MS 93.2%、Vitek MALDI-TOF MS 83.1%和API 20C AUX 79.7%,2种MALDI-TOF MS比较,差异无统计学意义(P=0.155)。其中对白念珠菌以外酵母样真菌的鉴定准确性分别为Autoflex MALDI-TOF MS 100.0%、Vitek MALDI-TOF MS 84.9%和API 20C AUX 84.9%,2种MALDI-TOF MS比较,差异具有统计学意义(P=0.006)。对念珠菌属外的少见真菌鉴定准确性分别为Autoflex MALDI-TOF MS 33.3%、Vitek MALDI-TOF MS66.6%和API 20C AUX 33.3%。结论 MALDI-TOF MS系统和目前常规生化鉴定方法相比,具有快速、操作简便、结果准确等优点;对于临床血培养分离真菌的鉴定,Autoflex MALDI-TOF MS鉴定准确性和Vitek MALDI-TOF MS相似,但对常见非白念珠菌的鉴定,Autoflex MALDI-TOF MS鉴定准确性优于Vitek MALDI-TOF MS。     

Vitek MS与Bruker MS对希木龙念珠菌复合体鉴定能力评估

目的评估中国医院侵袭性真菌监测网(CHIF-NET)2010-2015年收集的希木龙念珠菌复合体原始鉴定、Vitek MS和Bruker MS基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定结果。方法收集CHIF-NET 2010-2015年40株希木龙念珠菌和5株假希木龙念珠菌,所有菌株均经过分子生物学方法进行复核鉴定确认。以复核鉴定结果作为"金标准",评估各医院原始常规方法鉴定结果,并评估Vitek MS和Bruker MS对希木龙念珠菌复合体的鉴定性能。结果与分子生物学复核鉴定结果相比,希木龙念珠菌的原始鉴定准确率为47.5%,分别有15%的菌株被显色培养,ATB Rapid ID32C,API 20C或Vitek 2Compact错误鉴定为奥默毕赤酵母和新型隐球菌;常规鉴定方法无法鉴定假希木龙念珠菌,其中3株被错误鉴定为希木龙念珠菌;与分子生物学鉴定结果相比,Vitek MS IVD2.0和Bruker MS DB 5 989对希木龙念珠菌的鉴定准确率分别为100.0%和57.5%。Vitek MS IVD 2.0数据库中无假希木龙念珠菌的参考谱图,故将5株菌全部错误鉴定为希木龙念珠菌,且可信度90%。Vitek MS RUO数据库中无希木龙念珠菌复合体参考谱图,故无鉴定结果。Bruker MS DB 5989对假希木龙念珠菌的菌种鉴定准确率为20%。Bruker MS自建库后对所有菌株均能正确鉴定到种水平。结论该研究率先在国内评估了Vitek MS与Bruker MS鉴定希木龙念珠菌复合体的性能,对于少见菌种的鉴定可通过增加数据库质谱谱图提高质谱的鉴定能力。     

用DHPA法及API法鉴定酵母菌的对比分析

目的 对比分析双歧层次鉴定法（DHPA法）与API法对酵母菌鉴定的准确性与可比性。方法 用DHPA法及API 20C AUX试条鉴定酵母菌。结果 DHPA法和API法对酵母菌对43个KIU鉴定的正确性均为100％。对256株临床分离酵母菌的鉴定符合率为81．3％。在48株两种方法鉴定不符合的菌株中，有8株为API缺码，占鉴定不符合菌株的16．7％，而DPHA法无缺码现象。结论 DPHA法解决了API法存在的缺码或不能鉴定问题，是酵母菌准确、快速、简便、经济和实用的鉴定方法。     

Vitek 2 Compact系统鉴定临床少见疑难细菌的应用及评价

目的回顾分析室间质评1304号菌株的鉴定过程,评价Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统(简称Vitek 2 Compact系统)在临床少见疑难细菌鉴定中的应用。方法采用传统的细菌形态学检查、手工生化反应及Vitek 2 Compact系统等多种手段对1304号菌株进行鉴定分析,同时用基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)仪对最终鉴定结果进行佐证。结果 1304号菌株为革兰阴性小杆菌,氧化酶试验阳性,初次上机鉴定结果为支气管炎鲍特菌,鉴定率99%,转种分纯后2次上机鉴定结果为低分辨,粪产碱杆菌占51%,类产碱假单胞菌占49%,补充硝酸盐还原试验,结果为阴性,报告最终鉴定结果为粪产碱杆菌,质谱鉴定得分值为2.158,与最终结果相符。结论 Vitek 2 Compact系统鉴定临床少见疑难细菌有一定局限性,遇到少见疑难细菌应该用多种方法加以确定,综合分析以免造成错误鉴定。     

酵母样真菌酶反应模式的初步建立

利用尿素底物和１８种带有显色基团的合成底物，对４属１４种１５６株酵母样真菌进行酶活性测定，初步建立了酵母样真菌酶反应模式。结果表明所试１４种菌各有其特异的酶反应模式。酶法鉴定具有快速、准确、简便等优点，是今后临床实验室常规酵母样真菌鉴定具有潜在发展前景的方法。我们建立的酶反应模式如做进一步充实和完善后，可以作为标准反应模式用于临床菌株的快速鉴定。     

API法与16S rRNA法鉴定棒状杆菌比较

目的解决API法无法鉴定的棒状杆菌的鉴定问题，比较API法与16S rRNA法鉴定棒状杆菌的不同。方法86株棒状杆菌临床分离株用法国生物梅里埃API Coryne鉴定系统鉴定，经API法鉴定结果无编码的和可信度小于80％的以及两家医院结果不一致的共9株，自行设计引物用16S rRNA鉴定法完成。结果经API法鉴定结果无编码的和可信度小于80％的以及两家医院结果不一致的共9株棒状杆菌用16S rRNA法得以准确鉴定。结论难以用表型鉴定的棒状杆菌用16S rRNA法得以准确鉴定，表型鉴定法的准确性一定程度上受方法学限制。     

PYR斑点法快速鉴定细菌的初步应用

在临床细菌检验中，以色原为底物或以荧光为底物进行酶检测可以快速、简便地鉴定细菌。Mul-czyk和Szewczwk[1]提出检测PYR酶的活性来鉴定细菌的实验方法。本文应用斑点法快速检测PYR并了其临床应用，现报告如下。1材料1.1菌种：公安医院细菌室保存的标准菌株和自临床标本中分离的菌株。均经Vitek自动微生物分析仪鉴定。1.2纸片：Whatman1号滤纸用打孔器打成直径6mm的圆形纸片。2方法2.1.1L-吡咯烷酮-β-萘胺（Sigma）2.1.2pH7.2、0.15mol／l磷酸盐缓冲液2.1.3对二甲氨基肉桂醛（Sigma）2.2方法2.2.1配0.2％L一毗咯烷酮一p一家胺溶于95…     

PCR-反向微孔板杂交法检测医学真菌初步应用

目的通过建立PCR-反向微孔板杂交法鉴定临床常见的致病真菌,为临床治疗提供可靠依据。方法应用通用引物对真菌ERG11基因的保守序列进行扩增,扩增片段包被于微孔板中,再将真菌特异性引物与之杂交,经漂洗后显色,读取450nm处吸光度值判断结果。结果8种真菌特异性探针不与其他种的真菌、细菌和人类DNA分子杂交,而只和其对应的真菌DNA扩增产物反应,呈现阳性杂交结果。55例临床血液病、肿瘤等患者的血液、脑脊液及痰等标本分别用PCR一反向微孔板杂交法和真菌培养法（API20C）鉴定,2种方法的结果基本一致（阳性率分别为34．5％和30．9％）。结论PCR-反向微孔板杂交法可用于临床不同标本致病真菌的检测。     

β-萘酚辛酸酯的合成及其临床应用

目的　制备 β 萘酚辛酸酯 ,用辛酸酯酶法快速检出沙门菌。 方法　采用辛酸与氯化亚砜作用生成辛酰氯 ,再与 β 萘酚反应制得 β 萘酚辛酸酯 ;将其制成酶底物纸片 ,对底物浓度、最适 pH、反应温度及时间进行了探讨 ,确定了实验的最佳条件。 结果　本法底物最佳浓度为 2 g/L ,最适 pH7.0 ,反应温度 35℃ ,1 0 g/L固蓝B显色 ,反应时间 5min。以此条件用自制底物与进口的比较 ,效果完全一致。鉴定了标准菌株 5株 ,临床分离菌株 1 4 2株。辛酸酯酶法鉴定沙门菌的敏感性为 1 0 0 % ,特异性为94 1 %。结论　本法可代替常规检验方法提前 2～ 3d报告结果 ,为沙门菌鉴定提供了一种快速、简便、准确的新方法     

纤维蛋白溶解活性动力图形分析及意义

目的建立动态检测人纤维蛋白溶解功能的方法。方法采用血凝-溶解法和发色底物法,应用Un i-co-20000分光光度计连接微机,动态监测血浆或优球蛋白凝溶或显色情况。结果利用发色底物法测得20名正常人在显色180 s时的纤溶酶活性为(86.8±37.2)%,标准曲线有良好的线性相关(活性为3.9%~125%时r=0.978,7.8%~125%时r=0.997),22例糖尿病患者会出现各种纤维蛋白溶解活性生成异常图形,而大多数病例表现为纤维蛋白溶解活性增强。结论应用血凝-溶解和发色底物法,以血浆或优球蛋白为检测标本,其结果更有利判断人体纤维蛋白溶解功能改变的性质,而且利用发色底物法以优球蛋白为检测标本较血浆更为敏感,上述方法可作为传统检测方法的补充。     

革兰阴性细菌鉴定编码系统（GN—30）对肠杆菌科细菌的鉴定评价

目的 用常规细菌鉴定方法和API20系统两种方法对我们自行设计的革兰阴性细菌鉴定编码系统（GN－30）进行评价。方法 用三种方法对16株质控菌株（14株全国质控菌株,2株省质控菌株）,42株临床菌株进行重新鉴定,分析鉴定结果。结果 GN－30细菌鉴定板与常规鉴定方法符合率为100％,API 20E系统与常规鉴定方法、CN－30系统完全符合者37株,符合率为85．7％,三种方法在统计学上无显著性差异（P＞0．05）。结论 GN－30系统在肠杆菌科细菌鉴定方面使用较为满意,可作为一种适用于各级医院临床常规细菌鉴定的较为可靠的方法。     

两种酵母样真菌培养鉴定方法评价

目的 选择和评价实用性强、快速、准确酵母样真菌培养鉴定方法。为临床诊断和治疗真菌感染性疾病提供可靠的病原学依据。方法 将API酵母样真菌鉴定试条鉴定出的白色念珠菌（48株），热带念珠菌（15株），克柔氏念珠菌（19株）。光滑念珠菌（6株）转种科玛嘉酵母样真菌显色平板，经35℃，24—48小时培养，分析科玛嘉酵母样真菌显色平板鉴定结果正确率。结果 科玛嘉显色平板鉴定出白色念珠菌43株，热带念珠菌13株，克柔氏念珠菌8株，光滑念珠菌5株。科玛嘉显色平板法与酵母样真菌鉴定符合率为80％-90％．结论 科玛嘉显色平板法操作简单、快速。价格低廉，可作为酵母样真菌鉴定的初筛方法。     

46株酵母菌的分离鉴定及药敏结果分析

目前,酵母菌的感染率不断上升,已成为医院感染的主要病原之一。但国内对酵母菌的鉴定及药敏试验在方法、材料上尚存在许多不足。1998年1月我科引进了API-20CAUX酵母菌鉴定系统及ATB-Fungus酵母菌药敏系统(法国Bio-Mérieux)。现报告46株酵母菌的鉴定和药敏试验结果。材料和方法一、样品来源　均为我院1998年1月至1998年12月的病人中尿、分泌物、粪便、咽拭子、痰、血液、脑脊液等1658份标本。二、标准质控菌株　近平滑念珠菌ATCC22019、克柔念珠菌ATCC6258(购自四川省临床检验中心)。三、方法　API半自动鉴定系统、API-20CAUX…     

用DHPA法及API法鉴定酵母菌的对比分析

目的对比分析双歧层次鉴定法(DHPA法)与API法对酵母菌鉴定的准确性与可比性.方法用DHPA法及API 20C AUX试条鉴定酵母菌.结果DHPA法和API法对酵母菌对43个KIU鉴定的正确性均为100%.对256株临床分离酵母菌的鉴定符合率为81.3%.在48株两种方法鉴定不符合的菌株中,有8株为API缺码,占鉴定不符合菌株的16.7%,而DPHA法无缺码现象.结论DPHA法解决了API法存在的缺码或不能鉴定问题,是酵母菌准确、快速、简便、经济和实用的鉴定方法.