miR-183-5p/mTOR信号轴介导有氧糖酵解促进 胃癌细胞增殖

目的 探讨miR-183-5p/mTOR信号轴是否通过影响胃癌细胞有氧糖酵解过程而促进胃癌细胞增殖,为胃癌的治疗提供新靶点。方法 使用转染试剂盒对MGC-803胃癌细胞进行inhibitor NC、miR-183-5p inhibitor、mimics NC、miR-183-5p mimics转染;葡萄糖、乳酸、腺嘌呤核苷三磷酸（adenosine triphosphate,ATP）检测试剂盒检测低葡萄糖、乳酸、ATP水平变化;通过蛋白质印迹和聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）检测雷帕霉素机械靶蛋白（mechanistic target of rapamycin,mTOR）mRNA、葡萄糖转运蛋白（glucose transporter 1,GLUT1）和乳酸脱氢酶（recombinant lactate dehydrogenase A,LDHA）蛋白;二苯基四氮唑溴盐法（multiple table tournament,MTT）检测MGC-803胃癌细胞活性。结果 与inhibitor NC组相比,miR-183-5p inhibitor在胃癌细胞中低表达（P<0.001）,与mimics NC组相比,miR-183-5p inhibitor组在胃癌细胞中高表达miR-183-5p（P<0.0001）;过表达miR-183-5p可促进MGC-803胃癌细胞对葡萄糖的消耗（P<0.01）,生成更多的乳酸和ATP（P<0.01）、上调LDHA和GLUT1蛋白（P<0.01）、促进mTOR mRNA表达、促进胃癌细胞增殖。结论 miR-183-5p/mTOR信号轴通过调控有氧糖酵解相关蛋白表达促进MGC-803胃癌细胞增殖。     

miR-1247-3p激活TGF-β1信号介导肝星状细胞与肝纤维化的关系

目的 探讨miR-1247-3p对肝纤维化的影响,分析其对肝星状细胞增殖与活化的作用及分子机制。方法 四氯化碳（CCl₄）制备肝纤维化大鼠模型,并分离大鼠原代肝星状细胞。慢病毒转染处理细胞,分为空白对照组、miR-1247-3p mimic组和miR-1247-3p inhibitor组。检测miR-1247-3p、转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）水平及细胞增殖能力,并采用荧光素酶报告实验验证miR-1247-3p靶基因。结果 与对照组比较,CCl₄腹腔注射后大鼠肝组织出现纤维化增生,结构破坏,炎症细胞浸润,且随时间延长肝纤维化程度加重（P<0.05）;与对照组比较,模型组大鼠肝组织miR-1247-3p和TGF-β1表达水平均显著增加（P<0.05）;与空白对照组比较,miR-1247-3p mimic组肝星状细胞增殖能力和肝星状细胞α-SMA蛋白表达水平显著增加,miR-1247-3p inhibitor组显著降低（P<0.05）;与空白对照组比较,miR-1247-3p mimic组...     

hsa-miR-214-5p通过下调PAK4对子宫颈癌HeLa细胞活力和凋亡的调控作用

目的：探究微小RNA-214-5p（micro RNA-214-5p、miR-214-5p）对宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的作用及机制。方法：将细胞分为HeLa组、mimic-scramble组、miR-214 mimic组和miR-214 inhibitor组,用miR-214 mimic和miR-214 inhi－bitor转染细胞,qRT-PCR检测miR-214和p21活化激酶4（P21-activated kinases 4, PAK4）的表达;生物信息学方法预测miR-214-5p与PAK4的关系,荧光素酶报告实验验证miR-214-5p与PAK4的关系;用pcDNA-PAK4（pc-PAK4）、miR-214 mimic和miR-214 inhibitor转染细胞,Western blot检测PAK4的表达;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果：miR-214 mimic组miR-214-5p mRNA的表达水平（46.02±5.23）较HeLa组（1.00±0.01）明显升高（LSD-t=31.423,P=0.000）,miR-214 mimic组PAK4蛋白的表达水平（0.08±0.04）较HeLa组（0.26±0.05）明显降低（LSD-t=4.296,P=0.002）;miR-214 inhibitor组miR-214-5p mRNA的表达水平（0.41±0.05）较HeLa组（1.00±0.01）明显降低（LSD-t=18.726,P=0.000）,miR-214 inhibitor组PAK4蛋白的表达水平（0.58±0.05）较HeLa组（0.26±0.05）明显升高（LSD-t=5.061,P=0.001）;miR-214-5p与PAK4可靶向结合。miR-214 mimic组细胞生长速度（3.50±0.45）较HeLa组（5.02±0.35）明显降低（tD=8.644,P=0.000）,miR-214 mimic组细胞凋亡率[（11.42±0.71）%]较HeLa组[（2.61±0.63）% ]明显升高（LSD-t=4.032,P=0.003）;miR-214 inhibitor组细胞生长速度（5.89±0.32）较HeLa组（5.02±0.35）明显升高（LSD-t=7.863,P=0.000）,miR-214 inhibitor组细胞凋亡率[（0.53±0.42）%]较HeLa组[（2.61±0.63）% ]明显降低 （LSD-t=4.221,P=0.002）;共转染pc-PAK4能逆转miR-214 mimic对细胞活力和细胞凋亡的调控作用。结论：miR-214-5p能通过靶向下调PAK4抑制宫颈癌HeLa细胞活力并诱导细胞凋亡。     

沙格列汀通过miR-15a-5p/INSR轴缓解糖尿病大鼠胰岛素抵抗的机制研究

目的 探讨沙格列汀通过miR-15a-5p/胰岛素受体(INSR)轴缓解2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的机制.方法 以INSR为常用转录本ENST00000341500为输入,分别获取TargetScan、miRDB和miRWalk数据库中可能靶向INSR的miRNA并取交集.随后荧光素酶实验验证靶向关系.构建胰岛素抵抗2型糖尿病(IR-T2DM)模型.随后对IR-T2DM大鼠进行阴性对照、miR-15a-5p mimic、miR-15a-5p inhibitor转染或沙格列汀处理,8周后处死大鼠获取股四头肌及外周血.对各组大鼠血压、血糖、脂代谢相关指标进行测定,同时测定稳态模型评估(HOMA)胰岛素抵抗指数(IRI)和胰岛素敏感指数(ISI).定量-PCR检测各组大鼠骨骼肌中交集miRNA、INSR、IRS-1 和 GLUT4 mRNA 的表达.Western blot检测各组大鼠骨骼肌中INSR、p-IRS-1和GLUT4蛋白表达.结果 miR-15a-5p被选定为INSR的靶向miRNA.与阴性对照组相比,IR-T2DM大鼠经miR-15a-5p inhibitor或沙格列汀处理后骨骼肌中INSR、IRS-1和GLUT4表达、外周血中HDL-C浓度、BW、ISI升高(均P＜0.05),但外周血中糖化血红蛋白(HbA1c)、三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度、收缩压(SP)、舒张压(DP)和IRI在上述组中降低(均P＜0.05).上述指标的趋势在miR-15a-5p mimic组中与miR-15a-5p inhibitor及沙格列汀组完全相反(均P＜0.05).此外,与沙格列汀或miR-15a-5p inhibitor单独处理比较,两者联合处理能更有效地缓解糖尿病大鼠胰岛素抵抗(均P＜0.05).结论 沙格列汀能通过下调miR-15a-5p来上调INSR表达从而缓解糖尿病大鼠胰岛素抵抗.     

肿瘤坏死因子-α诱导脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立及评价指标

[目的]确定运用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）建立胰岛素抵抗模型的最适时间与剂量,并通过检测TNF-α对葡萄糖转运体4（GLUT4）表达及膜转位的影响探讨模型成立的评价指标。[方法]用不同浓度（5、10、15、20、25 ng/mL）的TNF-α作用于3T3-L1脂肪细胞不同的时间（48、72、96 h）,建立胰岛素抵抗模型。另外,分别采用蛋白免疫印迹法（Western blot）和高内涵筛选技术检测模型组细胞GLUT4蛋白表达及分布情况。[结果]与对照组相比,10 ng/mL TNF-α作用3T3-L1脂肪细胞96 h后的模型组的葡萄糖摄取及GLUT4的表达均有显著的降低;加入胰岛素后,对照组的葡萄糖摄取及GLUT4的表达有明显的升高,而模型组无明显变化;胰岛素抵抗模型中,GLUT4膜转位显著降低,差异有统计学意义。[结论]10 ng/mL的TNF-α作用3T3-L1脂肪细胞96 h有利于建立胰岛素抵抗模型。此外,葡萄糖摄取结合GLUT4的蛋白表达及膜转位可作为胰岛素抵抗模型建立的评价标准。     

miR-671-3p靶向调控CKAP4对人脑胶质瘤细胞增殖及迁移的影响

目的探讨miR-671-3p靶向调控细胞骨架相关蛋白4(CKAP4)对人脑胶质瘤细胞增殖及迁移的影响。 方法收集术后脑胶质瘤组织及配对癌旁正常组织标本,检测其miR-671-3p和CKAP4表达水平。将人脑胶质瘤U251细胞株分为miR-671-3p NC组、miR-671-3p mimic组和miR-671-3p inhibitor组,并转染相应质粒。采用实时荧光定量PCR测定miR-671-3p表达,CCK-8实验测定细胞增殖能力,Transwell实验测定细胞迁移能力。Western blotting测定CKAP4表达水平。 结果人脑胶质瘤组织中miR-671-3p、CKAP4表达水平高于癌旁正常组织(P＜0.05)。细胞增殖率、迁移率miR-671-3p mimic组高于miR-671-3p NC组,miR-671-3p inhibitor 组低于miR-671-3p NC组(P＜0.05)。miR-671-3p对CKAP4具有靶向调节作用。miR-671-3p mimic组CKAP4蛋白表达量低于miR-671-3p NC组,miR-671-3p mimic组低于miR-671-3p inhibitor组(P＜0.05)。 结论miR-671-3p可靶向调控CKAP4促进人脑胶质瘤细胞增殖及迁移能力。     

柚皮素通过抑制miR-29b的过表达对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响

目的 探讨柚皮素对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用,和miR-29b过表达在柚皮素与3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗效应中的关系,进一步研究阐述柚皮素对糖尿病的防治作用机制。方法 利用地塞米松诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,并建立胰岛素抵抗模型,用不同浓度柚皮素进行分组干预胰岛素抵抗模型细胞和被miR-29b mimic和inhibitor转染的胰岛素抵抗模型细胞,分别用qRT-PCR和Western blot检测胰岛素信号传导通路中IRS-1、Akt/p-Akt、GLUT4基因和蛋白的表达。结果 柚皮素干预可逆转3T3-L1胰岛素抵抗模型细胞中IRS-1、Akt/p-Akt、GLUT4的基因和蛋白表达的降低;柚皮素通过抑制miR-29b高表达增加3T3-L1胰岛素抵抗模型细胞IRS-1、Akt/p-Akt、GLUT4的基因和蛋白的表达。结论 柚皮素具有改善3T3-L1细胞胰岛素抵抗的作用,其分子机制可能通过抑制miR-29b的高表达影响PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达。     

Caveolin-3在白藜芦醇改善高脂诱导骨骼肌胰岛素抵抗中的作用

 【目的】在高脂诱导的胰岛素抵抗大鼠模型上,探讨微囊蛋白3（CAV-3）在白藜芦醇改善骨骼肌胰岛素抵抗中的作用及机制。【方法】实验大鼠分三组:正常饮食组（NORM）,高脂饮食组（HFD）,高脂饮食加白藜芦醇干预组（HFD+ RSV）。通过腹腔糖耐量试验,空腹血糖和空腹血清胰岛素值以及2-脱氧-[3H] 葡萄糖的摄取,从整体上探讨白藜芦醇对胰岛素抵抗的保护作用。再通过免疫印迹检验微囊蛋白3(CAV-3)与葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）在以上过程中的表达情况。【结果】HFD能显著诱导胰岛素抵抗,补充RSV能抑制高脂的诱导作用。离体骨骼肌实验证实,RSV的保护作用与其促进胰岛素诱导的葡萄糖摄取有关。免疫印迹证实RSV能够增加骨骼肌CAV-3蛋白表达,促进GLUT4向细胞膜的转运。【结论】白藜芦醇能改善高脂诱导的胰岛素抵抗,其保护作用与其上调CAV-3蛋白表达,促进GLUT4向细胞膜转运,改善骨骼肌葡萄糖的摄取有关。     

MicroRNA-196a对食管癌预后的评估价值及其生物学行为的调控机制

探讨microRNA-196a（miR-196a）对食管癌预后的评估价值及其生物学行为的调控机制。方法收集120 例行食管癌根治性手术切除的食管癌组织及癌旁组织,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测组织miR-196a 表达水平,分析miR-196a 表达与食管癌患者临床资的关系。对食管癌患者进行随访,记录患者总生存期（OS）和无病生存期（DFS）;以OS 和DFS 作为评价指标,采用单变量和多变量Cox 比例风险模型评价患者预后的影响因素。分别采用miR-196a mimic、NC-mimic、miR-196a inhibitor、NC-inhibitor 转染 食管癌TE1 细胞,MTT实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测细胞ANXA1、NTN4、HMGA2、HOXB8 蛋白表达。结果miR-196a在食管癌组织中表达水平高于癌旁组织（p <0.05）;在TE1 细胞中,miR-196a mimic 组miR-196a表达水平高于NC-mimic组,miR-196a inhibitor组miR-196a 表达水平低于NC-inhibitor 组（P<0.05）,证实细胞转染实验成功。将食管癌患者按照miR-196a 表达分为miR-196a高表达组51 例和低表达组69 例,miR-196a 表达与年龄、性别、分化程度、N 分期、肿瘤位置等无关（p >0.05）,随着T 分期、TNM 分期和肿瘤直径增加,miR-196a 高表达率升高（p <0.05）。生存分析显示,miR-196a 高表达患者总生存期（ p=0.015）和无病生存期（ p=0.017）低于miR-196a低表达者;单因素和多因素分析显示,T 分期、miR-196a表达是影响患者总生存期和无病生存期的的独立危险因素（p<0.05）。MTT 实验结果显示,第48～120 h,miR-196a mimic 组吸光度值高于NC-mimic 组,miR-196a inhibitor 组吸光度值低于NC-inhibitor 组（ p<0.05）;Transwell 小室实验显示,miR-196a mimic 组穿膜细胞数量高于NC-mimic 组,miR-196a inhibitor 组穿膜细胞数量低于NC-inhibitor组（p < 0.05）;细胞划痕实验显示,miR-196a mimic 组细胞迁移距离高于NC-mimic 组,miR-196a inhibitor组细胞迁移距离低于NC-inhibitor 组（p <0.05）。Western blot实验结果显示,miR-196a mimic 组、NC-mimic组、miR-196a inhibitor 组、NC-inhibitor 组HMGA2、HOXB8 蛋白表达比较差异均无统计学意义（p >0.05）,miR-196a mimic 组ANXA1、NTN4 蛋白表达低于NC-mimic 组,miR-196a inhibitor 组ANXA1、NTN4 蛋白表达高于NC-inhibitor 组（p <0.05）。结论miR-196a 能够作为食管癌预后的预测指标之一;miR-196a可能通过抑制ANXA1、NTN4 基因的表达参与调控食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移等生物学行为。     

miRNA-148b-3p调节胎盘滋养细胞GLUT1表达与ICP子代糖代谢紊乱关系的研究

  目的  研究miRNA-148b-3p在妊娠期肝内胆汁淤积症（intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP）孕妇胎盘组织中的表达及对滋养细胞葡萄糖转运蛋白-1（glucose transporter 1,GLUT1）的调控,探索ICP孕妇子代糖代谢异常的可能机制。  方法  收集2017年3月至2018年1月于四川大学华西第二医院产科行剖宫分娩的ICP孕妇30例,正常妊娠孕妇30例,分别收集胎盘组织、母血及脐血,提取胎盘组织miRNA,母血及脐血送检生化指标。采用实时荧光定量PCR验证miR-148b-3p在两组胎盘中的表达差异。通过lipofectaine3000脂质体包裹miR-148b-3p inhibitor/mimics转染人滋养细胞HTR-8,实时荧光定量PCR验证转染后细胞中miR-148b-3p的表达水平;Western blot检测转染后细胞中GLUT1的表达水平。  结果  ICP孕妇母血空腹血糖（fasting blood glucose,FPG）及其胎儿脐血胰岛素水平较对照组增高（P<0.05）。ICP组胎盘组织中miR-148b-3p表达量较对照组下降（P<0.05）。转染miR-148b-3p inhibitor后,与转染inhibitor control比较,HTR-8细胞中miR-148b-3p的表达水平下降（P<0.05）,GLUT1蛋白的表达量升高（P<0.05）;转染miR-148b-3p mimics后,与转染mimics control比较,HTR-8细胞中miR-148b-3p的表达水平上升（P<0.05）,GLUT1蛋白的表达量降低（P<0.05）。  结论  miR-148b-3p可能通过对胎盘滋养细胞GLUT1表达的负向调控参与了ICP子代糖代谢异常的发生。     

MiR-18B-5p调节BTG3及其下游信号通路促进肝细胞癌的发生发展

目的 本研究旨在探讨miR-18B-5p在肝癌中的作用及其机制。 方法 检测miR-18B-5p在肝癌患者血清中的表达水平,对其临床意义进行分析。下调miR-18B-5p表达水平,检测miR-18B-5p在肝癌细胞系增殖、迁移和侵袭中的作用,用实时荧光定量聚合酶链反应和荧光素酶报告法探讨其作用机制。 结果 低miR-18B-5p表达组患者生存率高于高miR-18B-5p表达组（P＜0.05）,多因素分析结果显示,miR-18B-5p的表达水平（RR:2.064,95%CI:1.522~2.800）和年龄（RR:1.762,95%CI:1.347~2.305）是患者生存的影响因素,HepG2细胞表达的miR-18B-5p水平高于Bel-7402组、MHCC97组和Hep3B组（P＜0.05）,Si-miR-18B-5p细胞系的Si-miR-18B-5p表达和细胞增殖低于HepG2细胞系（P＜0.05）,在Si-miR-18B-5p细胞系miR-18B-5p下调,细胞迁移和侵袭能力低于HepG2细胞系（P＜0.05）,Si-miR-18B-5p细胞中BTG3的mRNA表达高于HepG2细胞系（P＜0.05）,BTG3 WT相对荧光素活性低于BTG3 Mut（P＜0.05）。 结论 MiR-18B-5p可作为肝癌新的治疗靶点和预后标志物。     

miR-590-5p和miR-590-3p参与肝细胞肝癌发展的机制

目的研究miR-590的两个臂—miR-590-5p和miR-590-3p对肝癌细胞增殖能力的影响,以及参与肿瘤发生发展的机制。
方法利用miRNA芯片、QPCR对肝癌标本和各细胞株miR-590的表达谱系进行分析和验证。通过脂质体将miR-590 mimic或
inhibitor 转染正常肝细胞或肝癌细胞,MTT生长曲线分析和软琼脂克隆形成实验检测转染后细胞增殖及存活能力的变化。
Targetscan预测miR-590-5p和miR-590-3p的靶基因,并通过萤光素酶报告系统以及western blot进行验证。结果miRNA芯片
结果显示3个肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）组织相对于癌旁正常组织,miR-590-5p和miR-590-3p表达上调。通
过QPCR验证了10 例临床HCC肿瘤标本发现80%的HCC组织相对于癌旁组织miR-590-5p 和miR-590-3p 均同步显著上调。
QPCR结果进一步发现,HepG2、Hep3B、Huh7三株HCC细胞株相对于正常肝细胞株L-O2 miR-590-5p/3p同样表达上调。MTT
和软琼脂克隆形成结果显示,L-O2 分别过表达miR-590-5p 和miR-590-3p,细胞的增殖能力都显著增加（P<0.05）;而HepG2、
Hep3B、Huh7分别下调miR-590-5p和miR-590-3p的表达后,细胞的增殖能力也都显著降低（P<0.05）。Targetscan预测,PDCD4
和PTEN 分别作为miR-590-5p 和miR-590-3p 的潜在靶基因。萤光素酶报告系统以及western blot 结果显示miR-590-5p 和
miR-590-3p 可以分别直接下调靶基因PDCD4 和PTEN的表达（P<0.05）。进一步我们发现miR-590-3p 通过下调PTEN激活
PI3K-AKT信号通路,促进AKT1-S473的磷酸化水平。结论在HCC发展过程中miR-590扮演着重要的致癌因子角色,我们结
果发现miR-590的两个臂都具有促进肿瘤发生的生物学功能,它们分别通过靶向调节抑癌基因PDCD4和PTEN的表达来促进
HCC细胞的增殖和存活,并激活核心的PI3K-AKT肿瘤信号通路。由此可见miR-590 在HCC发生发展过程中具有重要的意
义,也可作为临床诊治潜在的新靶标。
     

二甲双胍通过miR-194-5p/RBM6通路抑制肝细胞癌细胞的恶性细胞表型的机制研究

目的 观察二甲双胍对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)细胞HepG2增殖、凋亡的影响,并探究其潜在机制与miR-194-5p/RNA结合基序蛋白6(RNA binding motif protein 6,RBM6)通路之间的关系。方法 随机将100例接受手术的HCC患者分为对照组、试验组,每组50例。对照组患者给予安慰剂口服,试验组给予二甲双胍口服。脂质体法将antagomiRNA、antagomiR-194-5p、pcDNA 3.1、pcDNA 3.1-RBM6、二甲双胍+si-NC、二甲双胍+si-RBM6、antagomiR-194-5p+si-NC、antagomiR-194-5p+si-RBM6转染至HepG2细胞。荧光定量聚合酶链式反应实验检测血清、组织、细胞中miR-194-5p、RBM6的表达;噻唑蓝法、5-溴-2-脱氧尿嘧啶染色检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性;蛋白免疫印迹实验检测细胞RBM6蛋白。结果 试验组患者的2年无瘤生存期显著延长,患者治疗后血清miR-194-5p表达明显降低(P...     

miR-150-5p与NCAPG的靶向关系及其对肝细胞肝癌Huh7细胞的抑制作用

目的：探究miR-150-5p与非SMC凝聚体Ⅰ复合物亚基G (NCAPG)的靶向关系及其对肝细胞肝癌(HCC)细胞生物学功能的影响,为HCC的临床诊断和治疗提供潜在靶点。方法：通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与NCAPG的靶向关系。将HCC Huh7细胞根据转染质粒不同分为模拟物阴性对照(mimic NC)组、miR-150-5p模拟物(miR-150-5p mimic)组、miR-150-5p模拟物+过表达阴性对照(miR-150-5pmimic+ovNC)组和miR-150-5p模拟物+过表达NCAPG(miR-150-5p mimic+ovNCAPG)组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中NCAPG mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中NCAPG蛋白表达水平,5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测各组细胞EdU阳性率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell实验检测各组细胞中迁移和侵袭细胞数。将裸鼠分为agomiR-NC组、agomiR-150-5p组、agomiR-150-5p+过表达阴性...     

miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响

  目的  探讨miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响。  方法  将宫颈癌HeLa细胞分为对照组、mimic-NC组、miR-503-5p mimic组、E2F3组、mimic+E2F3组,并通过Lipofectamine 2000将质粒分别或者联合转染进入各组HeLa细胞,运用基因预测软件预测靶基因,荧光素实验验证靶向关系,RT-PCR检测miR-503-5p和E2F3的表达,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、E-cadherin和N-cadherin的表达,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移。将裸鼠分为对照组和miR-503-5p mimic组,在裸鼠右后肢腹侧皮下分别注射0.2 mL转染mimic-NC或miR-503-5p mimic的宫颈癌HeLa细胞悬液,第30天颈椎脱位法处死裸鼠,测量肿瘤质量,并用免疫组化方法检测肿瘤组织中Ki67和Vimentin表达情况。  结果  宫颈癌HeLa细胞中miR-503-5p的表达量明显下调,miR-503-5p与E2F3在3′UTR区存在结合位点, miR-503-5p直接靶向作用于E2F3,过表达miR-503-5p抑制E2F3表达; miR-503-5p过表达降低细胞生长速度、Ki67和PCNA表达量,减少侵袭细胞数目,增宽划痕、降低愈合率,上调E-cadherin表达、下调N-cadherin表达（P<0.01）;miR-503-5p过表达减小移植瘤体积、减轻移植瘤重量,减少Ki67和Vimentin的阳性所占比率（P<0.01）。  结论  miR-503-5p通过靶向调控E2F3抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化。     

COPD中MicRNA-320c-5p调节SERPINA1基因表达的研究

目的 通过双荧光素酶报告系统验证miR-320c-5p对SERPINA1基因的靶向调控关系。方法 从人正常肺上皮细胞基因组库中获取SERPINA1基因的3′UTR序列,并通过序列匹配拟定候选miRNA。利用3%香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract, CSE)诱导人支气管上皮细胞(BEAS-2b细胞)建立慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)细胞模型作为实验组,正常培养的BEAS-2b细胞作为对照组,使用实时荧光定量聚合酶链反应(real time flurocent qualitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法检测两组SERPINA1和候选miRNA的表达水平。构建野生型及突变型双荧光素酶报告基因载体,分别将双荧光素酶报告质粒(psiCHECK-2-SERPINA1-3′UTR和psiCHECK-2-SERPINA1-3′UTR mut)和miRNA质粒(miR-320-5p mimic)共转染到293T细胞,进行荧光活性测定。结果 通过序列...     

miR-138-5p调控CDC5L表达对胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响

目的 探讨微RNA (microRNA,miR)-138-5p对胶质瘤细胞增殖、侵袭的调控机制。方法 体外培养人胶质瘤U251细胞,采用随机数字表法将其分为对照组(n=6)、miR-NC组(n=6)、miR-138-5p组(n=6)、miR-138-5p+pc-NC组(n=6)、miR-138-5p+pc-细胞分裂周期5样(cell division cycle 5-like,CDC5L)组(n=6)。采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测细胞中miR-138-5p、CDC5L mRNA水平,检测细胞增殖活力、细胞周期和细胞凋亡以及细胞侵袭能力,检测细胞中CDC5L和侵袭相关蛋白表达。结果 miR-138-5p的过表达可下调CDC5L mRNA和蛋白水平,降低胶质瘤细胞增殖活力和侵袭能力,并诱导G2/M期细胞周期停滞,促进细胞凋亡,降低N-钙粘蛋白、波形蛋白水平,升高E-钙粘蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05);上调CDC5L表达可明显逆转过表达miR-138-5p对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响(P<0....     

MicroRNA-7-5p 调控p53 表达对非小细胞肺癌 增殖及侵袭能力的影响

目的 探讨microRNA-7-5p（miR-7-5p）是否通过调控p53 基因的表达而影响人非小细胞肺 癌（NSCLC）细胞体外的增殖、侵袭能力。方法 通过双荧光素酶报告证明p53 为miR-7-5p 的下游靶基 因,将miR-7-5p 转染至人NSCLC 细胞株NCI-H1975,依据实验对照原则分为空白对照组、miR-7-5p 组 和miR-NC 组,观察细胞中p53 基因在转录和蛋白水平的表达变化;然后通过细胞增殖、细胞周期实验及 侵袭实验,观察NCI-H1975 细胞体外增殖和侵袭能力的变化。结果 miR-7-5p 组的p53 mRNA 相对表达 量、迁移细胞数及克隆形成数均低于miR-NC 组（P <0.05）。miR-7-5p 组3''UTR 荧光素酶的表达活性较 miR-NC 组低（P <0.05）。miR-7-5p 组p53 mRNA 和蛋白相对表达量较miR-NC 组低（P <0.05）。miR- 7-5p 组细胞增殖能力较miR-NC 组低（P <0.05）。miR-7-5p 组细胞周期G0/G1 期比例高于空白对照组 和miR-NC 组（P <0.05）。miR-7-5p 组细胞周期的G2/M 期比例低于miR-NC 组（P <0.05）。miR-7- 5p 组细胞周期的S 期比例低于空白对照组和miR-NC 组（P <0.05）。miR-7-5p 组细胞侵袭能力低于空白对 照组和miR-NC 组（P <0.05）。结论 miR-7-5p 主要是通过靶向p53 促进其mRNA 和蛋白的表达,并减弱人 NSCLC 的增殖和侵袭能力。     

miR-125b-5p调控HK2抑制胆囊癌细胞增殖和糖酵解

  目的  研究miR-125b-5p通过HK2调控人胆囊癌细胞增殖和糖酵解的作用机制。  方法  分别在人胆囊癌细胞GBC-SD中转染NC mimic、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic+pcDNA-NC、miR-125b-5p mimic+pcDNA-HK2。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real Time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR）检测miR-125b-5p和HK2 mRNA的表达,Western blot检测HK2和LDHA、PDK1的蛋白表达。细胞计数试剂盒-8（cell countingKit-8,CCK-8）检测细胞增殖活力,糖酵解相关试剂盒检测乳酸生成、葡萄糖消耗以及ATP生成。双荧光素酶报告基因实验对miR-125b-5p和HK2的靶向关系进行验证。  结果  miR-125b-5p在胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ（P < 0.001）以及组织（P < 0.01）中表达降低,且在GBC-SD细胞中低于NOZ细胞中。过表达miR-125b-5p可显著抑制GBC-SD细胞的增殖（P < 0.05）、葡萄糖消耗（P < 0.05）、乳酸（P < 0.001）和ATP的生成（P < 0.01）以及LDHA（P < 0.01）、PDK1（P < 0.001）、HK2（P < 0.0001）表达。starBase数据库和双荧光素酶报告基因实验证实miR-125b-5p靶向负调控HK2。过表达miR-125b-5p和HK2组中细胞的增殖（P < 0.01）、葡萄糖摄取（P < 0.05）、乳酸（P < 0.01）和ATP（P < 0.05）的生成以及LDHA（P < 0.05）、PDK1（P < 0.05）、HK2（P < 0.05）表达显著高于仅过表达miR-125b-5p组。  结论  过表达miR-125b-5p靶向HK2,抑制人胆囊癌细胞GBC-SD的增殖和有氧糖酵解。