麻黄-甘草药对抑制过敏性哮喘的效应及机制初探

目的 研究麻黄-甘草药对对过敏性哮喘的影响,并初步探讨其作用机制。方法 建立屋尘螨（HDM）诱导的过敏性哮喘模型,造模同时给予麻黄-甘草药对提取物（MG）。使用无创肺功能仪检测小鼠气道反应性,HE染色观察小鼠肺组织病理学变化,Masson染色观察小鼠肺组织的胶原沉积情况,进行血液嗜酸性粒细胞（EOS）计数,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）及肺组织IL-4、IL-5、IL-13、TGF-β1及血清IgE的表达,免疫组化检测肺组织E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、α-SMA和TGF-β1蛋白表达情况。结果 MG可显著降低气道高反应性,抑制BALF及肺组织IL-4、IL-5和IL-13的表达,降低血液EOS及血清IgE的表达,并且减轻肺组织的炎症浸润及胶原沉积。进一步结果表明MG可抑制肺组织TGF-β1的表达,上调E-cadherin以及下调N-cadherin、Vimentin、α-SMA的表达。结论 MG能够通过抑制支气管上皮间质转化,从而缓解气道的炎症状态以及改善哮喘的气道重塑,进而发挥对过敏性哮喘的治疗作用。      

β-谷甾醇缓解LPS诱导的急性肺损伤大鼠炎症反应和纤维化

【摘要】 目的 探讨β-谷甾醇（β-sitosterol)对脂多糖（LPS)诱导的急性肺损伤大鼠炎症反应和纤维化的改善作用。方法采用LPS法构建急性肺损伤大鼠模型,将60只SD大鼠随机分为健康对照组、模型组、模型+β-sitosterol组（5、10、20 mg/kg),每组12只。采用TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡,ELISA检测外周血炎性因子白细胞介素（IL-1β、IL-4、IL-10）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及诱导型一氧化氮合酶（iNOS)的含量,肺天狼星红染色观察肺组织病理变化,western blotting和RT-PCR检测肺组织中增殖标记物Ki67、半胱天冬酶3（Cas-3）、iNOS、IL-4、α-平滑肌蛋白（α-SMA)、转化生长因子β（TGF-β）及纤维连接蛋白（FN)的表达。结果与健康对照组比较,模型组大鼠肺组织出现细胞凋亡、炎性细胞浸润和纤维化,肺组织中Ki67蛋白的相对表达量下调,外周血IL-1β、TNF-α、iNOS、IL-4、IL-10、肺组织中切割后Cas-3（cleaved Cas-3）/Cas-3水平、iNOS、IL-4 mRNA及蛋白、α-SMA、TGF-β及FN蛋白的相对表达量上调（均P<0.05）;与模型组比较,10、20 mg/kg β-sitosterol组外周血IL-4、IL-10、肺组织中Ki67蛋白的相对表达量、IL-4 mRNA及蛋白的表达上调（均P<0.05）,外周血IL-1β、TNF-α、iNOS、肺组织中cleaved Cas-3/Cas-3水平、iNOS mRNA及蛋白、α-SMA、TGF-β及FN蛋白的相对表达量下调（均P<0.05）。结论β-谷甾醇可能通过抑制肺组织细胞凋亡、降低炎症反应及减轻纤维化,改善LPS诱导的急性肺损伤。     

siRNA 抑制 HM GA1基因表达对 LX-2细胞生物学功能的影响

目的：探讨高迁移率蛋白 A1（HMGA1）siRNA 对人肝星状细胞 HMGA1、α-SMA 、E-钙黏素（E-cadherin）基因的表达调控作用及增殖活性的影响,并探讨其可能的机制。方法将有效的人工合成的 HMGA1 siRNA 转染人肝星状细胞 LX-2（LX-2）后沉默 HMGA1基因的表达。通过实时荧光定量 PCR（RT-PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 LX-2细胞中HMGA1、α-SMA 和 E-cadherin 的 mRNA 及蛋白表达水平。采用四甲基偶氮唑盐（M TT ）法检测 LX-2细胞增殖水平。结果以HMGA1-siRNA 序列1组沉默效果最好。 TGF-β1刺激组与 TGF-β1＋ NC-siRNA 组之间细胞增殖水平、HMGA1、α-SMA 、E-cad-herin 的基因及蛋白表达水平差异无统计学意义（P ＞0．05）,细胞增殖水平、HMGA1、α-SMA 表达均明显高于正常对照组（P ＜0．05）,E-cadherin 表达显著低于正常对照组（P＜0．05）;TGF-β1＋ HMGA1 siRNA 组细胞增殖水平及 HMGA1、α-SMA 的 mR-NA 及蛋白表达水平较另外3组均显著下降（P＜0．05）,E-cadherin 表达水平显著增高（P＜0．05）。结论靶向 HMGA1的 siRNA能够沉默 LX-2中 HMGA1的表达;抑制 TGF-β1诱导的 LX-2增殖水平,提示 HMGA1参与了 TGF-β1诱导的肝星状细胞活化。     

内源性结缔组织生长因子介导转化生长因子β1对肾小管上皮细胞的转分化效应

目的：探讨内源性结缔组织生长因子（CTGF）在人肾小管上皮细胞（HK2）转分化过程中的作用。方法：将HK2细胞分为4组：对照组;转化生长因子β1（TGF-β1）5ng／ml刺激组;TGF-β1 5ng／ml刺激4-CTGF反义0DN 3 mmol／L干预组;TGF-β1 5ng／ml刺激＋CTGF正义ODN3mmol/L对照组。用倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化,用RT-PCR检测各组细胞中CTGF、上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤连蛋白（FN）mRNA表达变化。结果：TGF-β1刺激使HK2细胞形态由椭圆形转为梭形;下调E-cadherinmRNA表达。上调CTGF、α-SMA和FNmRNA表达．且CTGFmRNA表达变化在时间上早于E-cadherin、α-SMA和FNmRNA表达变化;CTGF反义ODN可对抗TGF-β1引起的细胞形态学改变和E-cadherin、CTGF、α-SMA、FiNmRNA表达变化效应。结论：内源性CTGF介导了TGF-β1对HK2细胞的转分化效应。     

FGF23对支气管上皮细胞生长、免疫平衡和上皮间充质转化的影响

目的 探究成纤维细胞生长因子23（FGF23）对支气管上皮细胞16HBE生长、免疫平衡和上皮间充质转化（EMT）的影响。方法 使用Lipofectamine 3000转染试剂对16HBE细胞分别转染NC-shRNA或FGF23-shRNA。转染后,使用10 ng/mL TGF-β1处理细胞48 h。16HBE细胞分为对照组、NC-shRNA组、FGF23-shRNA组、TGF-β1组、NC-shRNA+TGF-β1组和FGF23-shRNA+TGF-β1组。通过CCK-8法检测细胞增殖。使用ELISA试剂盒检测16HBE细胞上清液中IFN-γ、IL-4、IL-17和IL-10的水平。通过qRT-PCR、Western blot或免疫荧光染色检测16HBE细胞中FGF23、Klotho、FGFR4、E-cadherin、α-SMA和N-cadherin的mRNA或蛋白表达水平。结果 与TGF-β1组相比,FGF23-shRNA+TGF-β1组的OD 450nm 值降低（P<0.05）。与TGF-β1组相比,FGF23-shRNA+TGF-β1组的IFN-γ和IL-10的水平升高,而IL-4和IL-17降低（P<0.05）。与TGF-β1组相比,FGF23-shRNA+TGF-β1组的E-cadherin蛋白表达水平升高,而α-SMA降低（P<0.05）。与TGF-β1组相比,FGF23-shRNA+TGF-β1组的E-cadherin相对荧光强度升高,而N-cadherin降低（P<0.05）。与TGF-β1组相比,FGF23-shRNA+TGF-β1组的FGF23和FGFR4的mRNA和蛋白表达水平均降低,而Klotho均升高（P<0.05）。结论 下调FGF23抑制了TGF-β1诱导的16HBE细胞的生长和EMT过程,并纠正了Th1/Th2和Treg/Th17的失衡,FGF23-Klotho-FGFR4信号可能是哮喘治疗的一种分子靶标     

TGF-β/Smad/RUNX3信号通路在糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞EMT过程中的作用

【摘要】 目的 探讨TGF-β/Smad/RUNX3信号通路在糖尿病肾病（DN）大鼠肾小管上皮细胞 间充质转化（EMT）过程中的作用。 方法 将45只Wistar雄性大鼠随机分成三组：对照组、模型组和实验组,每组各15只,实验组和模型组制备DN大鼠模型。按照实验分组进行给药。末次给药后,用血糖仪检测各组大鼠血糖含量,全自动生化分析仪检测各组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮及血肌酐含量,过碘酸希夫（PAS）、天狼星红（SR）染色观察各组大鼠肾脏组织病理变化,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测各组大鼠血清白介素1β（IL-1β）、白介素6（IL-6）表达水平,蛋白免疫印迹（Western blot）检测各组大鼠肾脏组织α-SMA、E-cadherin、TGF-β1、Smad3、Smad4、RUNX3蛋白表达情况。 结果 与对照组相比,模型组大鼠肾小管肥大增生,肾间质有炎症细胞浸润现象,肾间质胶原纤维沉积、24 h尿量、24 h尿蛋白、血糖、血尿素氮、血肌酐浓度、血清IL-1β、IL-6表达量、肾脏α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smad4蛋白表达显著升高 (P＜0.05),肾脏E-cadherin、RUNX3蛋白表达显著降低 (P＜0.05);与模型组相比,实验组大鼠肾小管肥大减轻,炎症细胞减少,肾间质胶原纤维沉积、24 h尿量、24 h尿蛋白、血尿素氮、血肌酐浓度、血清IL-1β、IL-6、肾脏α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smad4蛋白表达显著降低 (P＜0.05),肾脏E-cadherin、RUNX3蛋白表达显著升高 (P＜0.05)。 结论 β抑制剂可通过抑制TGF-β/Smad通路激活促进RUNX3表达,减少糖尿病肾病大鼠肾间质纤维化及促炎因子分泌,抑制肾小管上皮细胞EMT的发展。     

瑞舒伐他汀抑制小鼠哮喘模型慢性气道炎症反应的实验研究

目的 评价瑞舒伐他汀对小鼠哮喘模型气道炎症反应的影响.方法 30只雄性BALB/C小鼠随机平均分为3组,即空白组（Control组）、卵清蛋白＋瑞舒伐他汀组（OVA＋ RUS组）和卵清蛋白组（OVA组）.在干预81天后处死小鼠获取支气管灌洗液（BALF）并使用ELISA测定IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α含量,同时测定BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞数;并获得肺组织标本,进行HE染色和PAS染色及粘蛋白糖原表达测量.结果 HE染色发现,OVA致敏和激发81天后BALF中IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α以及细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞数均明显增加（均P＜0.05）;同时小鼠肺组织出现明显的病理改变,且OVA组较OVA＋RUS组更加明显（均P＜0.05）.PAS染色和粘蛋白糖原表达分析发现,OVA干预后小鼠粘蛋白糖原表达明显增加,且OVA组较OVA＋RUS组增加更显著（均P＜0.05）.结论 瑞舒伐他汀可以减轻OVA诱导的慢性哮喘导致的气道炎症反应和气道粘液高分泌,为进一步临床应用奠定了基础.     

肾小管上皮细胞间质转分化过程中E-cadherin和α-SMA基因启动子区甲基化状态研究*

目的：了解大鼠肾小管上皮细胞间质转分化与E-钙黏附蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）基因启动子区甲基化状态之间的关系。方法：将大鼠肾小管上皮细胞分为对照组和TGF-β1处理组。对两组细胞采用免疫细胞化学方法检测E-cadherin和α-SMA蛋白表达情况,用ELISA法检测培养液中Ⅰ型胶原蛋白的含量。同时分别提取两组细胞中的基因组DNA,应用焦磷酸测序技术对E-cadherin和α-SMA基因启动子区甲基化水平进行检测。结果：TGF-β1处理组细胞中E-cadherin基因启动子区有2个CpG位点甲基化频率高于对照组,而α-SMA基因启动子区有2个CpG位点甲基化频率低于对照组。结论：E-cadherin和α-SMA基因启动子区甲基化状态的改变参与了肾小管上皮细胞间质转分化过程。     

IL-27及其受体对肺成纤维细胞增殖及转化的影响

目的探讨IL-27及其受体（WSX-1）对TGF-β1诱导的小鼠肺成纤维细胞增殖、转化及胶原合成作用。方法构建IL-27R/
pCDNA3.1 过表达载体。实验分为6 个组：正常组,TGF-β1 组,IL-27 组,IL-27 受体组,IL-27+IL-27 受体组,TGF-β1+IL-27+
IL-27 受体组。光学显微镜下观察细胞的生长状况,用MTT检测各处理组对肺成纤维细胞增殖的影响。RT-PCR 和Western
blotting 检测肌成纤维细胞标志物a-SMA以及Ⅰ和Ⅲ型胶原的表达,并用免疫荧光检测a-SMA蛋白的定位及表达情况。结果
（1）IL-27和IL-27R都可以抑制肺成纤维细胞增殖;（2）TGF-β1促进肺成纤维细胞表达α-SMA增加,并促进肺成纤维细胞Ⅰ和
Ⅲ型胶原合成;（3）IL-27及其受体可以抑制肺成纤维细胞α-SMA的表达,并减少肺成纤维细胞I和III型胶原的合成;（4）IL-27/
IL-27R共同作用时,对肺成纤维细胞增殖转化没有影响。结论IL-27或IL-27受体可以抑制TGF-β1诱导的小鼠肺纤维化细胞增
殖、转化和胶原的合成作用,但是IL-27与IL-27受体共同存在的情况下却不能发挥抑制作用,这可能是由于外源性的IL-27与
IL-27受体的中和作用不能激活细胞相关信号。
     

TGF-β3拮抗TGF-β1诱导的FMT 改善小鼠肺纤维化

目的 研究转化生长因子(transforming growth factor, TGF)-β3是否能够抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞(human lung fibroblast, HLF)间质转化。方法 在体外培养原代HLF进行细胞实验,分为3组:对照组:给予等体积超纯水;TGF-β1组:细胞给予TGF-β1(4ng/ml)处理HLF 24h;TGF-β3组:细胞给予20ng/ml的TGF-β3预处理24h后加入TGF-β1(4ng/ml)处理24h。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)和纤连蛋白(Fibronectin)蛋白的表达水平。在体内构建小鼠肺纤维化模型,分为3组:对照组:给予等体积0.9%氯化钠溶液气管滴注;模型组:博来霉素溶于0.9%氯化钠溶液,按2.0U/kg的浓度给予小鼠气管内滴注;TGF-β3干预组:于造模前1天,将TGF-β3(100μg/kg)给予小鼠尾静脉注射。HE和Masson染色法观察肺组织病理学变化,免疫荧光法检测α-SMA和Fibronectin蛋白的变化。结果 在体外,与TGF-β1组比较,TGF-β3组细胞迁移和侵袭能力降低,α-SMA和Fibronectin蛋白表达下调。在体内,与模型组比较,TGF-β3组小鼠肺组织病理变化改善,胶原沉积减少,α-SMA和Fibronectin蛋白荧光强度降低。结论 TGF-β3抑制TGF-β1引起的HLF间质转化,并改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化。     

脂氧素A4通过p38 MAPK及Nrf2通路调控气道炎症反应

目的：研究脂氧素A4（LXA4）对脂多糖（LPS）诱导的人正常支气管上皮细胞炎症反应的抑制作用及其机制。方法：将对数生长期的BEAS-2B细胞分为3组。对照组：不做任何处理;LPS组：100 ng/mL LPS刺激24 h;LPS+LXA4组：100 nmol/L LXA4预处理30 min,加入100 ng/mL LPS刺激24 h。qPCR法检测IL-6、IL-1β、血红素加氧酶-1（HO-1）、醌氧化还原酶（NQO-1）mRNA表达水平;流式细胞术测定胞内活性氧（ROS）水平;谷胱甘肽（GSH）试剂盒检测GSH水平。为进一步了解LXA4的作用机制,Western blot法检测各处理组p38的磷酸化水平以及Nrf2的核转位及磷酸化水平。结果：与对照组相比,LPS组IL-6、IL-1β mRNA以及胞内ROS表达水平升高（P＜0.05）,HO-1 mRNA水平下降（P＜0.01）,p38磷酸化水平上升（P＜0.01）,胞核中Nrf2相对表达量下降（P＜0.01）,总Nrf2磷酸化水平下降（P＜0.05）。经LXA4干预后,与LPS组相比,除上述改变逆转外（P＜0.05）,NQO-1和GSH水平显著上升（P＜0.05）。结论：LXA4可减轻LPS引起的BEAS-2B细胞炎症反应并促进炎症消退,其机制可能一方面与抑制p38 MAPK通路,减少促炎因子的分泌有关;另一方面与增强Nrf2的核转位以及磷酸化,减轻氧化应激损伤有关。     

蛋白磷酸酶2A 在肾间质纤维化中的作用

目的：探讨蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)在大鼠单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)及TGF-β1刺激的人近端肾小管上皮细胞-2(human kidney proximal tubular epithelial-2,HK-2)的肾纤维 化模型中的作用。方法：1)15只雄性SD大鼠随机分成假手术组( sham组)、模型组(UUO组)和UUO+冈田酸(okadaic acid,OA)干预组(OA组),每组各5只。术后OA组每日给予1.8%酒精稀释的OA 30 μg/kg,胃管饲喂72 h,对照组和模型 组给予相等体积的1.8%酒精胃管饲喂,72 h后处死大鼠,收集血和肾组织,检测肾功能并采用免疫组织化学、Western 印迹和RT-PCR法检测肾组织PP2A的c亚基(PP2Ac)、纤维连接蛋白(fi bronectin,FN)、胶原-I(collagen-I,Col-I)、E-钙黏 蛋白(E-cadherin,E-cad)和α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的蛋白及mRNA的表达。2)采用台盼蓝排斥 实验及MTT 法找出适宜的OA浓度。常规培养HK-2细胞,随机分为对照组、TGF-β1组(TGF-β1 5 ng/mL干预24 h)、TGF- β1+OA组(TGF-β1 5 ng/mL+OA 40 nmol/L,同时干预24 h),Western印迹检测肾小管上皮细胞PP2Ac,FN,Col-I,E-cad 和α-SMA 蛋白的表达。结果：1)肾功能表明UUO组尿素氮和肌酐较sham组升高,OA组尿素氮、肌酐均比UUO组下 降(均P<0.05)。免疫组织化学、Western印迹和RT-PCR均显示：与sham组比较,UUO组PP2Ac,FN,Col-I和α-SMA表 达升高,而E-cad表达下降(均P<0.05);与UUO组比较,OA组PP2Ac,FN,Col-I和α-SMA表达下降,E-cad表达升高(均 P<0.05);2) OA 40 nmol/L为最适宜的实验质量浓度;Western印迹显示：与对照组比较,TGF-β1组PP2Ac,FN,Col-I 和α-SMA表达升高,E-cad表达下降(均P<0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+OA组PP2Ac,FN,Col-I和α-SMA表达下 降,E-cad表达升高(均P<0.05)。结论：PP2A能促进肾间质纤维化。     

IL-33／TLR4信号通路在A549细胞上皮间质转化中的作用

［摘要］目的: 探讨IL-33／TLR4信号通路在上皮来源的A549细胞上皮间质转化中的作用。方法: 培养A549细胞,用5 ng／mL的转化生长因子β1(TGF-β1)刺激A549细胞;在不同时间点(0,12,24,48 h)MTT法检测TGF-β1对A549细胞增殖的影响;荧光定量PCR方法检测IL-33信号通路中关键因子IL-33,Toll样受体4(TLR4)基因的表达改变;蛋白质印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cad)、磷酸化蛋白激酶(p-AKT)的动态表达。结果： TGF-β1刺激A549细胞后,细胞增殖无明显变化(P>0.05),IL-33 表达量先升高,后下降(P<0.05);E-钙黏蛋白表达量逐渐下降,α-SMA表达量逐渐升高,TLR4先升高后下降(P<0.05);p-AKT表达量逐渐升高(P<0.05)。结论： IL-33／TLR4信号通路在A549细胞的上皮间质转化中发挥了重要作用。     

温阳消癥方对5/6肾切除小鼠肾纤维化的作用及其机制

目的：观察温阳消癥方对5/6肾切除小鼠残肾功能及肾脏纤维化的影响,并探讨其作用机制。方法：随机从32只小鼠中取24只制作5/6肾切除慢性肾功能衰竭肾纤维化模型,2周后根据血清肌酐值将24只小鼠分为5/6肾切除组、代文组和温阳消癥方组,另8只作为假手术组。治疗8周后,Western blot检测各组小鼠肾组织JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad3、I型胶原蛋白（Col-I）、III型胶原蛋白（Col-III）、α-SMA蛋白表达水平,免疫组织化学染色法测定小鼠肾组织Col-I、Col-III、α-SMA水平,用RT-qPCR法测定TGF-β1、Smad3 mRNA水平。结果：治疗8周后,模型组小鼠肾组织JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1、Smad3、Col-I、Col-III、α-SMA蛋白表达均较假手术组上调（P＜0.01）,模型组小鼠肾组织TGF-β1、Smad3 mRNA表达较假手术组上调（P＜0.01）;与模型组比较,代文组、温阳消癥方组JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1、Smad3、Col-I、Col-III、α-SMA蛋白表达和TGF-β1、Smad3 mRNA表达均下调（P＜0.01）;与代文组比较,除TGF-β1、α-SMA外,温阳消癥方组其余指标均下调（P＜0.01）。结论：温阳消癥方能够保护5/6肾切除小鼠残肾功能,减轻肾纤维化病变程度,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3、JAK2/STAT3通路相关。     

LRC5调节转化生长因子-β1诱导的肝星状细胞活化及逆转对肝纤维化的影响

背景　肝纤维化是多种慢性肝病的共同病理改变。在肝纤维化过程中,转化生长因子-β1（TGF-β1）高度表达,诱导肝星状细胞（HSC）活化并促进纤维化的进展。NLRC5作为最主要的核苷酸结合寡聚化结构域NOD样受体（NLRs）家族成员,是炎症途径中的重要负性调节因子。有证据表明,NLRC5是肝纤维化及其逆转的关键调节因子,可以通过调节炎症信号和肝纤维化反应参与肝纤维化的发展及逆转。目的　探讨NLRC5在TGF-β1诱导的HSC活化及逆转中的作用,并分析其与肝纤维化的关系。方法　2018年3-7月选取24只8周龄雄性C57BL/6小鼠（体质量15~20 g）,根据随机数字表法分为实验组、正常对照组和逆转组,每组8只。实验组和逆转组建立肝纤维化模型,然后处死小鼠,进行HE、Masson染色和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化,观察各组肝纤维化程度;检测小鼠肝组织NLRC5及其mRNA、磷酸化抑制蛋白α IκBα（P-IκBα）、IκBα、胞质p65、核p65水平。体外培养LX-2细胞,将培养的细胞分为对照组、TGF-β1组及TGF-β1+MDI组;检测各组LX-2细胞中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原α1（Col1α1）及其mRNA水平,NLRC5及其mRNA水平。siRNA干扰NLRC5后,将激活的LX-2细胞分为NLRC5-siRNA组、Control-siRNA组及正常细胞组,检测NLRC5及其mRNA、α-SMA、Col1α1、P-IκBα、IκBα、胞质p65、核p65。结果　HE染色结果显示正常对照组肝细胞索排列整齐,无坏死变性、炎性细胞浸润现象;实验组小鼠肝组织存在点状坏死和再生现象,可见脂肪变性、气球样变性;逆转组可见肝脏恢复红润,结构趋于正常。Masson染色结果显示与正常对照组相比,实验组小鼠镜下可见大量蓝色胶原纤维;而逆转组胶原纤维增生相比实验组有一定程度的改善。实验组小鼠肝组织中α-SMA阳性细胞比例高于正常对照组和逆转组（P<0.05）。实验组小鼠肝组织中NLRC5、NLRC5 mRNA水平高于正常对照组、逆转组（P<0.05）。实验组小鼠肝组织P-IκBα、核p65水平高于正常对照组及逆转组,胞质p65水平低于正常对照组及逆转组（P<0.05）。TGF-β1组LX-2细胞的α-SMA、Col1α1及其mRNA水平均高于对照组、TGF-β1+MDI组（P<0.05）。TGF-β1组LX-2细胞中NLRC5及其mRNA水平高于对照组、TGF-β1+MDI组（P<0.05）。NLRC5-siRNA组NLRC5水平（0.679±0.045）低于Control-siRNA组（1.260±0.071）（P<0.001）。NLRC5-siRNA组α-SMA、Col1α1及其mRNA水平低于Control-siRNA组,高于正常细胞组（P<0.05）。NLRC5-siRNA组P-IκBα和核p65水平高于正常细胞组和Control-siRNA组,胞质p65水平低于正常细胞组和Control-siRNA组（P<0.05）。结论　NLRC5可调节TGF-β1诱导的HSC活化和细胞外基质（ECM）合成,并可以调节和干扰与肝纤维化相关的关键过程,其可能通过核因子（NF）-κB信号通路在调节肝纤维化进展及逆转中起关键作用。     

低氧/低氧诱导因子-1α通过TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞上皮间质转化

目的：探讨低氧/低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对人肝内胆管上皮细胞（HIBEC）上皮-间质转化（EMT）的诱导作用及其分子机制。方法：HIBEC在1%氧浓度的低氧环境中培养,分析细胞迁移、侵袭能力的变化,以及EMT相关标志E-钙黏蛋白和S100A4的表达水平。以HIF-1α的siRNA和转化生长因子-β1（TGF-β1）抑制剂LY364947分别沉默或抑制HIF-1α和TGF-β1,再重复上述实验。结果：与常氧培养相比较,低氧条件下,HIBEC的细胞迁移和侵袭能力明显增强,上皮细胞标志物E-钙黏蛋白表达明显下降,间质细胞标志物S100A4表达明显升高（P＜0.05）。以HIF-1α的siRNA和TGF-β1分别沉默或抑制HIF-1α和TGF-β1后,上述低氧引起的HIBEC生物学变化均受到明显抑制（P＜0.05）。结论：低氧可以通过活化HIF-1α诱导HIBEC发生EMT,这种诱导作用主要是通过TGF-β1完成的。     

HBV在HK-2细胞内的表达及对其转分化的影响

目的   研究乙型肝炎病毒（HBV）在人近端肾小管上皮细胞（HK-2）的表达及对其转分化的影响。方法   体外培养HK-2细胞,分为HK-2组、HK-2-PHY106组（空质粒PHY106转染组）、HK-2-PHY106-HBV组（PHY106-HBV质粒转染组）。用脂质体lipofectamineTM2000转染HK 2细胞。用ELISA法检测各组细胞培养上清液中HBsAg与HBeAg的含量。免疫细胞化学染色及Western blot印迹检测转染72h后E-钙黏素（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。RT-PCR法检测转染72h后转化生长因子-1（TGF-β1）的mRNA。结果   HK-2-PHY106-HBV组细胞培养上清液中可检测到HBsAg和HBeAg的高表达;免疫细胞化学染色及Western blot印迹检测均显示HK-2-PHY106-HBV组E-cadherin表达显著下调（P＜0.05）,而α-SMA表达与其他两组相比明显上调（P＜0.05）;RT-PCR显示HK-2-PHY106-HBV组TGF-β1的mRNA表达上调（P＜0.05）。结论   HBV可在HK-2细胞内高效复制,并能够导致HK-2转分化,其机制可能是通过上调TGF-β1来实现的。     

番茄红素对小鼠肝纤维化的保护作用

［摘要］目的: 探讨番茄红素对刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的小鼠肝纤维化的干预作用。方法: 24只小鼠随机均分为3组,对照组、模型组及预防组。模型组小鼠予以腹腔注射Con A(20 mg/kg),每周1次,对照组腹腔注射等量PBS溶液,预防组在注射Con A的同时予番茄红素灌胃(20 mg/kg),每天1次,8周后处死小鼠。收集血液检测肝纤维化指标,测定肝组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和丙二醛水平,病理学及半定量计分系统(semi-quantitative scoring system, SSS) 观察肝纤维化程度,免疫印迹法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、Smad3蛋白、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达。结果： 与对照组比较,模型组血清透明质酸(hyaluronic acid, HA)、层黏连蛋白(laminin, LN)、Ⅲ型前胶原(procollagen type Ⅲ, PC Ⅲ)水平,SSS计分,丙二醛,α-SMA、TGF-β1、Smad3的表达明显增加,SOD表达明显降低;与模型组相比,预防组HA、LN、PCⅢ水平,SSS计分,丙二醛,α-SMA、TGF-β1、Smad3的表达明显降低,SOD表达明显升高(P<0.01)。结论： 番茄红素通过减轻过氧化损伤,保护肝细胞,减少胶原生成,抑制α-SMA、TGF-β1及Smad3等致纤维化因子的表达,从而抵抗Con A诱导的肝纤维化作用。     

The role of CTLA4- Ig in a mouse model against allergic asthma

Objective To investigate CTLA4- Ig’s potential role in therapy for allergic asthma by blocking B7/CD28 interactions with cytotoxic T lymphocyte antigen 4- Ig (CTLA4- Ig).Methods We divided BALB/C mice into the three groups: Sham/Sham (control), ovalbumin (OVA)/OVA and mCTLA4- Ig. Blood, bronchoalveolar lavage, histology and determination of cytokines were performed 24 hours after airway challenge.Results In the OVA/OVA group, the number of cells, the percentage of inflamed cells and the level of IL- 4 in BALF were increased. Airways in our murine model for allergic asthma underwent pathological changes, which were significantly reduced after treatment with mCTLA4- Ig.Conclusion Blockage of co- stimulation with mCTLA4- Ig can inhibit allergy- specific response of T cells, and asthmatic response as well.     

拉米夫定和水飞蓟素对酒精刺激的HBV转基因小鼠肝纤维化相关因子的影响

目的：观察在肝损伤早期,拉米夫定和水飞蓟素对酒精刺激的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)转基 因小鼠肝组织保护作用,并通过检测肝纤维化相关因子探讨其机制。方法：将40只1.3拷贝HBV转基因BALB/C小鼠 随机分为4组。对照组以生理盐水灌胃;模型组以体积分数为50%的白酒5 mL/kg灌胃,1 次/d;拉米夫定组在模型组 处理基础上以拉米夫定溶液(100 mg/kg)灌胃,1 次/d;水飞蓟素组在模型组处理基础上以水飞蓟素溶液(200 mg/kg) 灌胃,1 次/d。10周后荧光定量PCR检测各组小鼠血清HBV-DNA载量,全自动生化仪检测血清ALT和AST水平。HE 染色,Masson染色镜检观察肝组织病理变化,荧光实时定量PCR检测肝组织TGF-β1,Smad3,Smad7,结缔组织生长 因子(connective tissue growth factor,CTGF) mRNA表达水平,免疫组织化学检测肝组织TGF-β1,CTGF,α-平滑肌肌 动蛋白(α-SMA)表达水平。结果：与对照组相比,模型组肝组织病理损伤加重,血清HBV病毒载量,ALT和AST水平 明显增高,肝组织内TGF-β1,Smad3,Smad7,CTGF mRNA及TGF-β1,CTGF,α-SMA蛋白表达增加(P<0.05)。与模 型组相比,拉米夫定组和水飞蓟素组肝组织病理损伤均减轻,肝组织内TGF-β1,Smad3,CTGF mRNA及TGF-β1, CTGF,α-SMA蛋白表达减少(P<0.05),Smad7 mRNA的表达进一步增加(P<0.05),水飞蓟素组血清ALT和AST水平降低 (P<0.05)。结论：拉米夫定和水飞蓟素可通过调节TGF-β1/Smads信号通路,减少CTGF表达,抑制肝星状细胞活化等 机制阻断酒精刺激的HBV转基因小鼠肝组织纤维化的发生和进展。