耐阿米卡星铜绿假单胞菌氨基糖苷类耐药基因及其基因型研究

目的了解耐阿米卡星(AMK)铜绿假单胞菌(Pa)的氨基糖苷类修饰酶基因和氨基糖苷耐药基因的存在情况及其基因型。方法对临床分离的72株多重耐药Pa(其中对AMK耐药Pa组和对AMK敏感Pa组各36株)分别用聚合酶链反应(PCR)测定9种主要的氨基糖苷类修饰酶基因和2种氨基糖苷耐药基因,用基因外重复回文序列(REP)-PCR进行基因型研究。结果在分组研究中AMK耐药Pa组表现为aac(6′)-Ⅰ和aac(3)-Ⅱ基因同时阳性的占42.4%,aac(6′)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ基因同时阳性的占36.4%,是耐药组的主要修饰酶基因;AMK敏感Pa组表现为aac(6′)-Ⅰ基因阳性的占50.0%,aac(3)-Ⅱ基因阳性的占33.2%,是敏感组的主要修饰酶基因。2种氨基糖苷耐药基因(RmtA和RmtD)均为阴性。REP-PCR显示耐药菌株可分为A～G 7型,其中AMK耐药Pa组的主要分型为F型(其中尤以F1型为多);AMK敏感Pa组以E型为多见。结论通过2种或多种氨基糖苷类修饰酶同时作用于AMK是Pa对AMK耐药的重要途径之一。     

鲍曼不动杆菌耐药性及氨基糖苷类耐药基因检测及分析

目的 探讨医院内鲍曼不动杆菌分离菌株氨基糖苷类耐药基因存在情况以及药物敏感性,指导临床合理应用抗生素.方法 采用法国梅里埃VITEK2 COMPACT全自动微生物分析仪对临床标本进行细菌鉴定和药物敏感试验.聚合酶链反应（PCR）检测aac（3）-Ⅰ,aac（3）-Ⅱ,aac（6′）-Ⅰ,aac（6′）-Ⅱ四种氨基糖苷类修饰酶耐药基因.结果 共分离鉴定出36株鲍曼不动杆菌,药敏结果显示分离菌株呈现多重耐药,耐药性最低为多粘菌素,未检测到耐药菌株;其次为亚胺培南,耐药率为55%;其余抗生素耐药率均在86%以上.耐药基因检测显示aac（3）-Ⅰ阳性11株,占30.6 %,aac（3）-Ⅱ阳性 12 株,占33.3 %,aac（6′）-Ⅰ阳性15株,占41.7 %,aac（6′）-Ⅱ未检测出.常见的基因组合为aac（3）-Ⅰ与aac（6′）-Ⅰ同时阳性,占36.4%.结论 鲍曼不动杆菌临床分离株耐药现象严重,aac（3）-Ⅰ,aac（3）-Ⅱ与aac（6′）-Ⅰ耐药基因携带率较高.     

某院多重耐药鲍曼不动杆菌菌株亲缘性分析

目的了解新疆地区鲍曼不动杆菌（A.baumannii,ABA）β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶编码基因、氯己定-磺胺耐药基因存在状况。方法对20株ABA菌进行了9种β-内酰胺酶基因、3种氨基糖苷类修饰酶基因和氯己定-磺胺耐药基因检测。以耐药基因为分子标记作检测结果的样本聚类分析,分析菌株亲缘性。结果 20株ABA菌中blaTEM阳性13株（65%）、blaADC阳性12株（60%）、blaSHV阳性1株（5%）,其余β-内酰胺酶基因均阴性;20株ABA菌中氨基糖苷类修饰酶基因aac（3）-Ⅰ阳性12株（60%）、aac（6′）-Ⅰ阳性13株（65%）、ant（3″）-Ⅰ阳性14株（70%）;14株检出qacE△1-sul1基因（70%）。以耐药基因为分子标记作检测结果的样本聚类分析显示,其中9株为克隆传播。结论该20株菌β内酰胺类、氨基糖苷类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶密切相关,并存在克隆传播。     

广州地区多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的探讨广州地区临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应（PCR）对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶相关基因和氨基糖苷类修饰酶基因检测,并对耐药基因进行测序。结果38株铜绿假单胞菌对多黏菌素B耐药率是0%,对其余抗菌药物耐药率均〉50%,氨基糖苷类修饰酶基因ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ和aac（3）-Ⅱ基因阳性率分别为21.1%、39.5%、28.9%、31.6%和21.1%,未检出aac（3）-Ⅰ基因;β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、DHA-1、PER-1和IMP-1基因阳性率分别为42.1%、18.4%、10.5%、7.9%和31.6%,未检出CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达60.5%。结论广州地区多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因,应引起高度重视。     

云浮地区多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的研究云浮地区临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用K-B法进行药敏实验,聚合酶链反应（PCR）对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶相关基因和氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因检测,并进行测序。结果 25株铜绿假单胞菌未发现对多黏菌素B耐药,其余抗生素耐药率均大于50%,氨基糖苷类修饰酶基因ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ和aac（3）-Ⅱ基因阳性率分别为20%、32%、24%、28%和24%,未检出aac（3）-Ⅰ基因;β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、SHV、DHA-1、PER和IMP-9基因阳性率分别为32%、12%、8%、12%、12%和12%,未检出CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达60%。结论本地区多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因,应引起高度重视。     

大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性及耐药基因检测

目的：了解大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药情况与耐药基因携带情况。方法：使用K-B法检测大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性,同时用PCR技术扩增氨基糖苷类抗生素的耐药基因以明确其基因型。结果：40株大肠埃希菌中耐氨基糖苷类抗生素菌株32株,耐药率为80.0%（32/40）,其中aac（3）-Ⅰ 2株,占6.3%（2/32）,aac（3）-Ⅱ 28株,占87.5%（28/32）,aac（6′）-Ⅰ 12株,占37.5%（12/32）,aac（6′）-Ⅱ 8株,占25%（8/32）,ant（2″）-Ⅰ 4株,占18.8%（6/32）,ant（3″）-Ⅰ 9株,占28.1%（9/32）。结论：耐氨基糖苷类抗生素的大肠埃希菌比较普遍,氨基糖苷类耐药基因以aac（3）-Ⅱ和aac（6′）-Ⅰ为主。     

铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因与耐药表型的研究

目的探讨临床分离的22株铜绿假单胞菌（Pa）氨基糖苷类修饰酶（AMES）基因与耐药表型的关系。方法对22株铜绿假单胞菌采用稀释法检测庆大霉素、阿米卡星、奈替米星、妥布霉素4种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC），并用聚合酶链反应（PCR）法检测6种氨基糖苷类修饰酶基因。结果本组22株Pa菌庆大霉素耐药15株（68．2％）、阿米卡星耐药3株（13．6％）、奈替米星14株（63．6％）、妥布霉素15株（68．2％），检出aac（3）-Ⅰ阳性14株（63．6％）、aac（6’）-Ⅰ阳性5株（22．7％）、aac（6’）-Ⅱ阳性3株（13．6％）、ant（3”）-Ⅰ阳性1株（4．5％）和ant（2”）-Ⅰ阳性7株（31．8％），aac（3）．Ⅰ为阴性。共有18株检出氨基糖苷类修饰酶基因（81．8％）。结论分离自临床的铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因检出率高，且与耐药表型一致。     

多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解南京地区多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法自2007年7—10月间南京地区住院病人标本中分离并筛选出20株多重耐药鲍曼不动杆菌,微量肉汤稀释法测定11种抗菌药物的敏感性;PCR法检测16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因。结果20株多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶(armA、rmtB)基因均为阴性;氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅰ基因阳性株10株、aac(3)-Ⅱ阳性株1株、aac(6′)-Ⅰb基因阳性株13株、ant(3″)-Ⅰ基因阳性株12株;ant(2″)-Ⅰ基因、aac(6′)-Ⅱ基因及aac(6′)-Ⅰad基因均为阴性。结论南京地区多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷药物耐药的主要原因是aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ4种氨基糖苷类修饰酶基因的存在;尚未检出氨基糖苷类修饰酶新亚型———aac(6′)-Ⅰad基因和16S rRNA甲基化酶armA、rmtB基因。     

铜绿假单胞菌ICU分离株耐药基因分析

为了解自我院ICU住院病人分离到的铜绿假单胞菌（Pseudornonas aoruginosa,Pa）对β-内酰胺类和氨基糖苷类抗生素耐药的原因,我们用分子生物学技术检测了15种β-内酰胺类抗生素耐药相关基因（TEM、SHV、OXA-10群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、SPM、GIM、DHA、FOX、MOX和oprD2）,6种氨基糖苷类修饰基因[aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅱ,结果如下。     

铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的研究

目的了解氨基糖苷类抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌16S r RNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的携带情况,探讨铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药机制。方法收集临床分离的氨基糖苷类抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌35株,采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定及体外药物敏感性试验,聚合酶链反应(PCR)检测arm-A、rmt-A、rmt-B、rmt-C、rmt-D 5种16S r RNA甲基化酶基因和aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ6种氨基糖苷修饰酶基因。结果对氨基糖苷类药物耐药的铜绿假单胞菌同时对多种其他抗菌药物耐药,仅碳青霉烯类的亚胺培南耐药率较低,为5.7%。21株检出rmt-B 16S r RNA甲基化酶基因,占60.0%;30株检出氨基糖苷修饰酶基因,占85.7%,其中28株检出aac(3)-Ⅱ基因,占80.0%,18株检出ant(3″)-Ⅰ基因,占51.4%,其余8种基因未检出。结论在铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药的菌株中,检测出rmt-B 16S r RNA甲基化酶基因和aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ氨基糖苷修饰酶基因,铜绿假单胞菌多重耐药现象严重。     

一株多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因的研究

目的：研究铜绿假单胞菌多重耐药情况和相关机制。方法：采用聚合酶链式反应（PCR）法对一株多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、氯霉素类基因、耐消毒剂和磺胺类基因检测。结果：PCR结果显示该株PA的TEM,MIR,CTX-M1群,OXA-1群,OXA-10群,aac（6′）-b,aac（6′）-,aac（3）-,ant（2″）-,catB,qacE△1-sul1基因均为阳性,GES,DHA,VEB,cmlA基因均阴性,Opr D2未缺失。结论：该株铜绿假单胞菌存在多重耐药基因,而且对胺类、胍类消毒剂耐受。     

导致阿米卡星双圈耐药肠杆菌科细菌耐药性研究

目的探讨临床分离的纸片扩散法药物敏感性试验对阿米卡星（AMK）呈双圈耐药的肠杆菌科细菌相关携带基因及药物诱导对耐药基因rnRNA表达量的影响。方法收集纸片扩散法药物敏感性试验对AMK呈双圈耐药的大肠埃希菌（编号Ec085）和肺炎克雷伯菌（编号Kpn110）各1株;纸片诱导法探讨耐药表型的改变;聚合酶链反应（PCR）扩增氨基糖苷类修饰酶基因、整合子及其可变区以及16SrRNA甲基化酶基㈥;逆转录PCR分析armA基因在AMK诱导前后菌株中的表达情况;接合试验探讨耐药基因的可传递性。结果Ec085和Kpn110分别在第10代和第16代诱导后转变为双圈消失;2株菌均扩增出I类整合子基因,可变区分别携带aadA5-dfra17和aadA2-dfrA12基因盒,未扩增出Ⅱ和Ⅲ类整合子基因;Ec085扩增出aac（6）-I基因,而Kpnll0扩增出ant（3”）-I基因;Ec085和Kpn110均扩增出armA基因,基因测序未发现突变,未检出rratB基因;经AMK诱导后菌株armA基因mRNA表达量明显上升;接合试验未获成功。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯茵对AMK呈双圈耐药可能与16SrRNA甲基化酶armA基因的诱导表达相关。     

多药耐药铜绿假单胞菌耐药基因研究

目的研究1株多药耐药铜绿假单胞菌的β-内酰胺酶基因、菌膜蛋白OprD2基因、整合子和转座子介导的各种耐药基因、16SrRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰基因以及氯霉素与四环素相关耐药基因的的存在情况。方法以K—B法测量其对抗菌药物的耐药性;以PCR法检测其相关耐药基因;以PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序。结果该株铜绿假单胞菌检出TEM基因OXA-10基因,且伴有OprD2缺失;转座子遗传标记MerA阳性,Ⅰ类整合子遗传标记qacEAl-Sul1阳性;耐氨基糖苷类基因aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅱ、rmtB阳性,耐氯霉素基因cm1A阳性。结论造成本株铜绿假单胞菌多药耐药的主要原因是该菌株存在多种抗生素相关耐药基因。     

广泛耐药鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物获得性耐药基因研究

目的了解重症监护病房（ICU）患者分离的广泛耐药（XDR）-鲍曼小动杆菌（AB）对氨基糖苷类药物获得性耐药基因情况。方法用phoenix-100全自动细菌鉴定药物敏感性分析仪对AB进行细菌鉴定和药物敏感性试验,gyrA和parC基因扩增测序确定AB。聚合酶链反应（PCR）测定20株XDR—AB的10种氨基糖苷类修饰酶基因、6种16SrRNA甲基化酶基因和外排泵adeB基因,并用DNA测序比对。结果20株XDR—AB中,氨基糖苷类修饰酶基因aac（3）-I、aac（6’）-Ib、ant（3”）-I、aph（3’）-I检出率分别为90．0％、30．0％、95．0％、95．0％,而aac（3）-lI、aac（6’）-Iad、aac（6’）-lI、ant（2”）-I、ant（4’）-I及aph（3’）-VIa基因均未检出。armA型16SrRNA甲基化酶基因和外排泵adeB基因检出率均为100％。结论20株XDR—AB均携带rarmA和adeB基因,同时aac（3）-I、ant（3”）-I和aph（3）-I检出率较高,提示ICU分离的XDR—AB对氨基糖苷类药物高水平耐药可能与携带的耐药基因有关。     

多重耐药的铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子与其多重耐药基因的相关性分析

目的 调查本院多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因的存在状况,Ⅰ类整合子的分布情况以及其与多重耐药基因相关性分析.方法 采用K-B法测定临床分离的铜绿假单胞菌对15种药物的耐药性,筛选出35株多重耐药菌株,采用聚合酶链反应(PCR)检测β-内酰胺酶编码基因、OPrD2基因、氨基糖苷类修饰基因和Ⅰ类整合子基因.结果 35株多重耐药铜绿假单胞菌中β-内酰胺酶编码基因CTX-M-1、TEM、SHV的检出率分别为51.4%、31.4%、14.0%;OPrD2基因的阳性率为28.6%;氨基糖苷类修饰基因aac(6′)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ和ant(3″)-Ⅱ的阳性率分别为20%、2.86%、14.3%和17.1%;Ⅰ类整合子阳性的菌株中,CTX-M-1、TEM、SHV、aac(6′)-Ⅱ和ant(3″)-Ⅰ的检出率为45.4%、9.1%、27.3%、36.4%和27.3%,未检出aac(6″)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ基因.结论 本院多重耐药铜绿假单胞菌存在多种耐药基因,常见的有β-内酰胺酶编码基因、OPrD2基因和氨基糖苷类基因.Ⅰ类整合子广泛存在于多重耐药的铜绿假单胞菌中,并携带多种耐药基因参与形成铜绿假单胞菌的多重耐药.     

多重耐药鲍曼不动杆菌氨基糖苷类耐药基因的研究

目的调查山东省潍坊市人民医院临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌氨基糖苷类耐药基因的流行情况,为院内感染控制提供依据。方法采用VITEK2全自动微生物仪对2013年11月26日至12月12日山东省潍坊市人民医院临床分离的9株多重耐药鲍曼不动杆菌进行细菌鉴定和药敏试验,部分抗菌药物的敏感度检测采用纸片扩散法。聚合酶链反应检测氨基糖苷类耐药基因,对部分阳性基因进行测序。结果 9株多重耐药鲍曼不动杆菌中,2株aac(3)-Ⅰ基因阳性,3株ant(3″)-Ⅰ基因阳性,3株aac(6′)-Ⅰ基因阳性,9株armA基因阳性。所有菌株对氨基糖苷类抗菌药物阿米卡星、庆大霉素和妥布霉素耐药。5株标本来源于重症监护病房,3株标本来源于神经外科病房。所有标本来源于痰液。结论该院这段时间分离的多重耐药鲍曼不动杆菌对阿米卡星、庆大霉素和妥布霉素同时耐药与携带armA氨基糖苷类耐药基因有关。院感部门应重点监测重症监护病房和神经外科病房多重耐药鲍曼不动杆菌引起的院内感染。