内江市东兴区乙型肝炎病毒基因型、基本核心启动子和前C区变异分析

目的 了解内江市东兴区乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）慢性感染者中的HBV基因型和基本核心启动子（basal core promoter,BCP）、前C(Precore,PC)区变异。方法 从慢性HBV感染者血清标本中提取病毒DNA,进行核苷酸测序,构建进化树确定基因型,分析BCP和前C区位点变异。结果 S基因序列进化树分析显示,64份标本为B基因型,7份为C基因型,1份为I基因型;获取的53份BCP和PC序列标本中,25份标本发生A1762T/G1764A或G1896A变异;7份C基因型标本中6份发生A1762T/G1764A变异;B基因型标本以G1896A变异为主,并与A1762T/G1764A联合变异,HBeAg阳性组和阴性组之间G1896A和A1762T/G1764A变异率有差异（P均<0.05）。其他包括HBeAg前体启动子变异、1846位点核苷酸缺失等。结论 内江市东兴区慢性HBV感染者以B基因型感染为主,1例为I基因型。B基因型HBV以G1896A变异最常见,并与A1762T/G1764A联合变异,C基因型HBV更容易发生A1762T/G1...     

HBV核心区基因突变的研究

目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)核心区的突变模式.方法 在核酸序列比对的基因上,设计靶向HBV各基因型核心区的通用引物.PCR扩增血清病毒DNA,经DNA测序和随后的序列分析,检测和分析核心区的突变模式.结果 在34例可检测样本中,共有23例患者存在HBV核心区突变;其中,基本核心启动子区(BCP)的A1762T(50.0%)和G1764A(52.9%)是最常见的突变位点,并且,通常表现为双碱基突变;其次是核心(C)基因区的L60V氨基酸突变(17.6%);就各基因区的突变频率而言,BCP区、前核心(Pre-C)区和C基因区突变患者分别有18、6、10例,其中,BCP区通常表现为A1762T和G1764A双突变(94.7%),pre-C区以G1896A最为常见(83.3%),C基因区则主要是L60V的氨基酸单突变(50.0%).结论 HBV核心区最常见的突变形式是BCP区A1762T和G1764A的碱基双突变;由于HBV核心区基因具有复杂的突变模式,因此,研究HBV核心区基因突变模式对HBV感染的病情预测和预后判断具有重要的临床应用价值.     

HBsAg阳性母亲HBV核心启动子突变与宫内传播的关系

目的 分析HBV为C基因型的HBsAg阳性母亲核心启动子（BCP）区突变与宫内传播的关系。方法 2011年6月至2013年7月太原市第三人民医院妇产科HBsAg阳性母亲及新生儿399对。收集一般人口学资料,采用荧光定量PCR和电化学发光法分别检测母婴血清HBV DNA及HBV血清学标志物。选择HBV DNA载量≥10⁶ IU/ml的113例母亲为研究对象,其新生儿发生宫内传播的22例为宫内传播组,随机选取其中22例未发生宫内传播者作为对照组,母亲HBV DNA经提取、扩增、克隆、测序和序列编辑及剪接后与从NCBI下载的标准序列比对进行基因分型,最终选择C基因型的39例母亲进行突变分析。结果 HBV为C基因型（88.63%）的母亲共39例,其中宫内传播组19例,对照组20例。母亲A1762T/G1764A双突变率在两组差异显著（7.53% vs.27.72%,P<0.001）。非条件logistic回归分析显示A1762T/G1764A双突变可能是宫内传播的保护因素（aOR=0.065,95% CI：0.006～0.746,P=0.028）。母亲A1762T/G1764A双突变可能与新生儿HBeAg水平有关（P=0.050）。结论 HBV C基因型的HBsAg阳性母亲HBV DNA BCP区A1762T/G1764A双突变可能降低HBV宫内传播的风险。     

132例乙型肝炎病毒感染者基本核心启动子变异分析

目的研究乙型肝炎病毒（HBV）感染者基本核心启动子（BCP）变异情况。方法收集HBV感染者血清标本132份(HBV DNA均阳性),用半巢式聚合酶链反应扩增HBV C基因部分片段,产物纯化后直接测序,检测BCP T1762/A1764变异。用S基因错配聚合酶链反应（PCR RFLP）法确定HBV基因型。结果51例乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性患者BCP T1762/A1764双变异检出率为27.45%,81例HBeAg阴性患者BCP T1762/A1764双变异检出率为62.96%,两组比较,差异有高度显著性（χ2=15.79,P＝0.00）。 BCP T1762/A1764双变异的HBV感染者B基因型检出率为33.85%,明显低于C基因型的检出率66.15%（χ2=24.25,P＝0.00）。结论HBV感染者普遍存在BCP T1762/A1764双变异,以C基因型感染者多见。     

广西地区乙型肝炎病毒无症状携带者乙型肝炎病毒前C区突变分析

目的 调查广西地区乙型肝炎病毒（HBV）无症状携带者HBV前C区基因突变株的流行情况。方法 用套式聚合酶链反应（PCR)对77例广西南部，北部地区人群HBV无症状携带者血清HBV前C区进行扩增，阳性者用直接测序法进行序列分析。结果 39例HBsAg无症状携带者血清HBVDNA阳性，阳性率为50.7%(39/77)，突变株出现率为22.1%(17/77)。南部地区阳性率为55.6%(20/36)，其中6份标本出现突变株，占30%，常见的突变类型是nt1858位发生点突变（T→C),只有一份标本在nt1896发生点突变（G→A），导致终止密码产生，该标本同时伴有nt1837点突变（A→G）；北部地区阳性率为46.3%(19/41)，其中有11份标本出现突变株，占57.9%,常见的突变类型是ny1896位发生点突变（G→A），这些标本中有4份同时在nt1846发生点突变（A→T），2份同时在nt1862发生点突变（G→T)；标本734分别在nt1856,1858发生点突变（C→T，T→C）。结论 广西地区HBV无症状携带者HBV前C区突变株的流行率居全国中等水平，广西南部，北部是否存在主要突变类型不同值得进一步研究。     

海南岛乙型肝炎病毒BCP/PreC基因突变及临床意义的研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前C区G1896A、基本核心启动子(BCP)A1762T/G1764A与HBV复制水平和肝功能之间的关系。方法提取患者血清DNA,采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增包含HBV C基因启动子和前C区的核苷酸链(nt1643-nt2112)对PCR产物进行DNA测序。结果在83例CHB患者中,共检出BCP A1762T/G1764A突变株25例(30.12%)。BCP突变组ALT(211.56±81.58)U/L和TBIL(55.17±28.50)μmol/L显著地高于BCP区未突变组(P﹤0.05)。前C区G1896A突变组HBV DNA的水平(4.86±1.30)显著地低于前C区未突变组(5.42±1.15)(P﹤0.05)。结论 BCP突变A1762T/G1764A双突变可能导致HBV致病力增强,更易引起严重的肝脏损害;前C区G1896A突变可能会降低HBV的复制能力。     

乙型肝炎病毒核心基因启动子变异与患者血清病毒载量和标志物及肝功能的关系

目的探讨乙型肝炎病毒核心基因启动子(HBV BCP)变异与患者血清病毒载量(HBV DNA)和标志物及肝功能的关系。方法采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,对176例HBV慢性感染者血清进行检测BCP区核苷酸(nt)1762A→T和1764G→A联合突变。结果BCP变异在HBeAg阴性病例的阳性率为49.4%,显著高于HBeAg阳性病例的阳性率33.3%(P<0.05);BCP变异阳性组的HBV DNA含量显著高于阴性组的含量(P<0.01);BCP变异阳性组HBV DNA含量在HBeAg阳性病例及HBeAg阴性病例中均较BCP变异阴性组高(P<0.01);BCP变异阳性组对肝功能的损害明显高于阴性组(P<0.01)。结论BCP变异可引起HBeAg阴转,病毒复制水平提高;HBV血清标志物联合HBV DNA同步检测,具有重要的临床应用价值;对HBsAg阳性、HBeAg阴性患者需要进一步检测HBV DNA,以免由于基因变异导致将HBeAg阴性者误认为病毒的免疫清除或静息而延误抗病毒治疗时机;BCP变异可使病情加重。     

HBV核心启动子双点突变抑制前CmRNA转录的机制

乙型肝炎病毒(HBV)核心启动子上的核苷酸1762A→T及1764G→A的双点突变在慢性活动性肝炎中具有选择优势,但与HBeAg表型的关系及其具有选择性优势的机制一直不明确。晚近研究发现,这种突变可能是通过降低前C mRNA转录水平,进而增加病毒的复制率而被选择的。本文就HBV核心启动子双点突变株抑制前c mRNA转录的机制予以综述,并阐明其与HBeAg状态的关系及在慢性HBV感染中具有选择性优势的重要原因。     

乙型肝炎病毒前C区及基本核心启动子区变异与基因型的临床相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒前C区G1896A突变、基本核心启动子区A1762T、G1764A双突变与基因型、拉米夫定疗效的相关性。方法采用基因测序法对接受拉米夫定治疗的81例慢性重型乙型肝炎患者的血清标本进行前C区、基本核心启动子区(BCP区)、基因型及逆转录酶区(P区)检测,并对前C区、BCP区的变异与基因型、逆转录酶区的变异进行相关性分析。结果 81例慢性重型乙型肝炎患者送检标本中,68份标本可检出前C区G1896A变异或BCP区A1762T/G1764A变异;单纯G1896A突变31例,单纯A1762T/G1764A突变24例,前C区联合BCP区变异13例;81例慢性重型乙型肝炎患者经拉米夫定治疗后,有45例发生变异,其中180M和204V变异株35例,204I变异株10例;前C区变异在野生型组、变异型组中的检出率分别为38.9%、66.7%,两者差异有统计学意义(P<0.05);BCP区变异在野生型组、变异型组中的检出率分别为33.3%、55.6%,两者差异有统计学意义(P<0.05);在81例慢性重型乙型肝炎患者血清标本中,B基因型18例,C基因型63例;前C区变异在B、C基因型中的检出率分别为72.2%、33.3%,两者差异有统计学意义(P<0.05);BCP区变异在B、C基因型中的检出率分别为16.7%、54.0%,两者差异有统计学意义(P<0.05);G1896A突变在B基因型感染者中检出率明显高于C基因型感染者;A1762T/G1764A双突变在B基因型感染者中检出率明显低于C基因型感染者。结论发生G1896A突变和A1762T/G1764A突变的患者,在接受拉米夫定治疗后更易发生逆转录酶区的变异;G1896A突变易出现在B基因型感染者中,A1762T/G1764A突变易出现在C基因型感染者中。     

乙型肝炎病毒前S缺失突变与肝癌关系的巢式匹配病例对照研究

目的了解乙型肝炎病毒(HBV)前S基因缺失突变是否是肝癌的危险因素以及它的作用是否受HBV核心基因启动子双突变的混淆影响。方法按巢式匹配病例对照研究的方法,从隆安研究队列中选择33对病例(肝癌患者)和对照(HBsAg无症状携带者),配对的条件之一是病例和对照HBV核心基因启动子序列相同,用套式聚合酶链反应(nested PCR)对研究对象血清HBV前S基因扩增和序列分析。结果肝癌患者组前S基因缺失突变率(45.5%,15/33)显著高于对照组(6/33,18.2%)(χ2=7.364,P0.01);男女间突变率无显著性差异(28%与43.8%,χ2=1.386,P0.05)。多因素条件logistic回归分析结果显示,前S缺失突变是肝癌的危险因素(危险比为7,95%可信区:0.861-56.894),而HBeAg,抗-HBe及肝功能则与肝癌无关。核心基因启动子双突变组与核心基因启动子野毒株组之间的前S缺失突变率无显著性差异(χ2=0.597,P0.05)。结论HBV前S缺失突变是肝癌的独立的危险因素,它的发生及作用与核心基因启动子双突变无关。     

The incidence rate over 10 years of naturally occurring,cancer related mutations in the basal core promoter of hepatitis B virus

Cross-sectional analyses showed that the prevalence of basal core promoter (BCP) double mutations (nt 1762T, 1764A) of hepatitis B virus (HBV) gradually increases with age. We aimed to determine the incidence rate of the mutations over 10 years. Study subjects were selected from the Long An cohort established in 2004, including 59 with HBV with single mutations at nt 1762 or 1764 in the BCP and 342 with wild type BCP sequences at baseline. Their serum samples for analysis were obtained at the 3rd and 10th annual visits, respectively. The results showed that the annual incidence rate of BCP double mutations is 3.8% (95% confidence interval [CI]: 1.4–6.2) and tends to decrease with age. The peak incidence is in the 30–34 years age-group. The incidence rate in HBeAg positive individuals (5.5%) is significantly higher than in those without HBeAg (3.4%) (P < 0.05). The incidence rate is significantly higher in genotype C (4.8%) than in genotype B (2.8%) or I (3.1%). The incidence rate of the mutations (6.8%) developing from a single mutation at nt 1762 or 1764 is significantly higher than that (3.8%) from the wild type sequence (P < 0.005). The difference in incidence of single mutations between nt 1762 (0.7%) and 1764 (0.03%) is significant (P < 0.05). In conclusion, the incidence rate of BCP double mutations tends to decrease with age after the age of 35 years. Viruses with a single mutation at nt 1762 or 1764 are more prone to develop double mutations. Nt 1762 is the more common site of the first mutation.     

贵州省乙型肝炎病毒前C区及基本核心启动子变异分布

目的调查贵州省乙型肝炎病毒(HBV)前C区A1896、基本核心启动子区(BCP) T1762/A1764变异分布。方法收集贵阳、遵义、凯里、都匀4地区不同民族无症状携带者(ASC)、慢性肝炎(CH)、肝炎肝硬化(LC)、肝细胞肝癌(HCC)患者血清482份,用测序及限制性片段长度多态性检测A1896、T1762/A1764变异,用S基因PCR-RFLP确定基因型。结果A1896、T1762/A1764变异检出率分别为23.03%和29.67%。汉族感染者A1896、T1762/A1764变异检出率为27.64%和36.04%,高于侗、苗、布依族感染者合并后的7.96%、8.85%(P<0.01)。A1896变异在B、C基因型中的分布为20.34%和27.13%(P>0.05),T1762/A1764变异为18.97%和46.28%(P<0.01)。A1896、T1762/A1764变异在HBeAg阴、阳性组间的分布差异有统计学意义(P值均<0.01)。从ASC到HCC组,A1896、T1762/A1764变异分布逐渐增高,LC、HCC组的检出率明显高于CH和ASC组(P值均<0.01)。A1896、T1762/A1764变异的分布:贵阳(分别为31.79%和41.06%)高于遵义(10.94%和14.06%)、都匀(8.64%和11.1I%)及凯里(2.86%和2.86%),但多因素logistic回归分析在控制了HBeAg、HBV基因型及临床类型影响后,在地区间分布差异无统计学意义。结论A1896、T1762/A1764变异在贵州省不同民族间分布有一定差异。C型感染者易发生T1762/A1764变异,两种变异均与疾病进展有关。     

Genetic analysis of precore/core and partial pol genes in an unprecedented outbreak of fulminant hepatitis B in India

SUMMARY We investigated an unprecedented outbreak of fulminant hepatitis B virus (HBV) that occurred in Modasa, Gujarat (India) in 2009. Genomic analysis of all fulminant hepatic failure cases confirmed exclusive predominance of subgenotype D1. A1762T, G1764A basal core promoter (BCP) mutations, insertion of isoleucine after nt 1843, stop codon mutation G1896A, G1862T transversion plus seven other mutations in the core gene caused inhibition of HBeAg expression implicating them as circulating precore/BCP mutant virus. Two rare mutations at amino acids 89 (Ile→Ala) and 119 (Leu→Ser) in addition to other mutations in the polymerase (pol) gene may have caused some alteration in either of four pol gene domains to affect encapsidation of pregenomic RNA to enhance pathogenicity. Sequence similarity among patients' sequences suggested an involvement of a single hepatitis B mutant strain/source to corroborate the finding of gross and continued usage of HBV mutant-contaminated syringes/needles by a physician which resulted in this unprecedented outbreak of fulminant hepatitis B. The fulminant exacerbation of the disease might be attributed to mutations in the BCP/precore/core and pol genes that may have occurred due to selection pressure during rapid spread/mutation of the virus.     

乙型肝炎病毒前C区/BCP区突变对血清HBV DNA含量的影响

目的利用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒(HBV)前C区/BCP区基因突变,探讨前C区/BCP区基因突变后血清HBV DNA水平的变化。方法应用基因芯片技术检测95例慢性乙肝的HBV前C区1896、1814及HBV C基因启动子(BCP)1762、1764四位点突变,同时用荧光定量PCR检测血清HBV DNA含量。结果95份血清标本中,有91份分别检测到了HBV前C区/BCP区基因突变,阳性率95.8%,其中G1896A突变33例(36.3%),A1762T G1764A联合突变64例(70.3%),G1896A A1762T G1764A联合突变22例(24.2%),未检测到A1814C突变毒株。G1896A A1762T G1764A联合突变后,血清HBV DNA水平较未变异组降低(P<0.05),其它各组则无显著变化。结论应用基因芯片法可同时检测HBV多个突变位点。乙型肝炎病毒前C区/BCP区突变对血清HBV DNA含量有一定的影响。     

慢性乙型肝炎患者HBV前C区及BCP区变异与血清细胞因子的关系

目的探讨乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性和阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者乙型肝炎病毒(HBV)前C区、基本核心启动子(BCP)区变异特点以及与血清细胞因子干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-10水平的关系。方法将120例HBV DNA阳性CHB患者(HBeAg阴性和阳性各60例)与60例健康体检者(对照组)纳入研究。荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测HBeAg阴性和阳性组患者HBV DNA水平,直接测序法检测两组前C区G1896A变异及BCP区A1762T和G1764A变异,双抗夹心酶联免疫吸附试验检测血清细胞因子IFN-γ/、IL-10的水平。结果 120例HBV DNA阳性CHB患者HBV前C区和BCP区变异总检出率为60.00%(72/120),其中HBeAg阴性组变异检出率为80.00%(48/60),HBeAg阳性组变异检出率为40.00%(24/60),两组比较,差异有显著性(x~2=20.00,P=0.000)。HBeAg阴性组G1896A变异(38.33%)和联合变异(G1896A、A1762T和G1764A同时变异,25.00%)的检出率明显高于HBeAg阳性组(16.67%、0.00%)(分别x~2=7.06,P=0.008;x~2=17.14,P=0.000)。变异组血清IFN-7水平为(102.33±27.20)pg/mL,明显高于无变异组(79.18±16.43)pg/mL及对照组(35.77±4.23)pg/mL(分别t=5.72,t=19.33,均P=0.000);变异组血清IL-10水平为(28.13±7.00)pg/mL,明显高于无变异组(13.91±5.42)pg/mL及对照组(13.68±2.27)pg/mL(分别t=12.50,t=15.65,均P=0.000)。结论 G1896A变异和联合变异更常见于HBeAg阴性CHB;G1896A和A1762T/G1764A变异与血清细胞因子IFN-γ和IL-10水平升高有关。     

慢性乙肝BCP区（1762／1764）双位点变异对肝癌发病率影响

目的探讨慢性乙肝BCP区（1762／1764）双位点变异对肝癌发病率的影响。方法对1012例慢性乙肝和肝硬化的患者（肝癌患者除外）,根据A1762T与G1764A变异检测结果分为观察组和对照组,双变异者为观察组,无变异者为对照组,追踪观察后继发生肝癌情况,计算两组的肝癌发病率并进行统计学分析。结果观察组的肝癌发病率为873．7／10万人,对照组为146．4／10万人,经统计学分析观察组的肝癌发病率明显高于对照组（P〈0．05）。结论BCP区（1762／1764）双位点变异的患者肝癌发病率增高,对该类人群应加强肝癌的筛查。     

乙型肝炎病毒基因型和前C及基本核心启动子突变与乙型肝炎疫苗阻断母婴传播的关系

目的探讨乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）基因型和前C及基本核心启动子（BCP）突变与乙肝疫苗阻断母婴传播的关系。方法采集江苏省16对乙肝疫苗阻断失败的母婴血清样本32份,以及88对阻断成功的母婴血清样本176份。以型特异性引物PCR法检测16对乙肝疫苗阻断失败的母婴和88例阻断成功的母亲血清样本中HBV基因型,用PCR产物直接测序法检测HBV前C/ BCP突变,采用Clustal W 1．8软件进行序列分析。结果在16例阻断失败的母亲中,15例（93．8%）为HBeAg阳性,且均为C型（15/15,100%）;88例阻断成功的母亲中,51例（58．0%）为HBeAg阳性,其中C基因型占45．1%（23／51）。在HBeAg阳性母亲中,阻断失败组的C基因型检出率明显高于阻断成功组（X~2=14．3,P=0．003）。但在C基因型HBeAg阳性母亲中,阻断成功组与失败组的T1762/ A1764突变率差异无统计学意义（分别为13．3%和33．3%,P=0．4）,且均无A1896突变。结论感染HBV基因C型的母亲可能更易导致乙肝疫苗阻断失败,而前C/BCP基因突变与阻断母婴传播无关。