应用2D-DIGE及MALDI-TOF-MS筛选胰腺癌血清标志物

目的 利用比较蛋白质组学的方法对胰腺癌患者血清和对照组血清例进行分析,寻找胰腺癌潜在的特异性候选标志物.方法 采用双向差异凝胶电泳分离40例胰腺癌患者、10例慢性胰腺炎患者、10例良性肿瘤患者和40例健康体检者外周血清蛋白质,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术对差异显著的蛋白进行鉴定.结果 成功鉴定出2个胰腺癌差异表达蛋白:转甲状腺素蛋白和载脂蛋白E.该组蛋白在胰腺癌组中呈高表达,在正常对照组、慢性胰腺炎组和良性肿瘤组中呈低表达.结论 双向差异凝胶电泳联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术筛选胰腺癌患者外周血清中的特异性生物标志物的方法具有较好的重复性和稳定性.检测鉴定的差异蛋白质载脂蛋白E、转甲状腺素蛋白可能是胰腺癌早期诊断潜在的血清特异性生物标志物.     

蛋白质组技术在胃癌相关标志物筛查中的应用

目的 建立胃癌组织和正常胃组织双向凝胶电泳图谱，鉴定差异表达蛋白，从中发现有意义的胃癌相关标志物。方法 采用双向凝胶电泳（2-DE）分离胃癌组织和正常胃组织总蛋白，银染显色，PDQuest软件分析，从中选取差异表达蛋白质点，通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）或MALDI-TOF-TOF-MS鉴定差异表达的蛋白质。结果 获得重复性和分辨率较好的胃组织双向凝胶电泳图谱；发现23个差异表达蛋白质，其中15个得到鉴定，在肿瘤组织中高表达的有10个，其余5个在肿瘤组织中低表达。结论 建立了胃癌组织和正常胃组织双向凝胶电泳图谱，并应用质谱技术鉴定了15个差异表达蛋白质。     

前列腺癌骨转移血清蛋白质组学研究

目的:应用蛋白质组学双向凝胶电泳和质谱技术筛选前列腺癌骨转移血清标志物。方法:收集前列腺癌伴骨转移、不伴骨转移各5例血清样本。血清样品用除白蛋白试剂盒除去血清中的白蛋白后进行双向凝胶电泳,ImageMaster 2D Platinum软件分析,有意义的差异蛋白质点行基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。结果:双向凝胶电泳显示,前列腺癌骨转移组血清蛋白中有15个斑点与前列腺癌无骨转移组有显著差异,前列腺癌骨转移患者血清中10个蛋白质表达水平显著增加,5个蛋白质表达水平显著下降。5个差异蛋白点进行胶内原位酶解,肽质量指纹图谱分析成功得到了3个蛋白质肽质量指纹图谱,并查询数据库初步鉴定了该3个蛋白质分别为锌α2糖蛋白、结合珠蛋白和载脂蛋白CⅢ。结论:双向凝胶电泳结合质谱鉴定是血清差异蛋白质组学研究的可靠平台和有力工具。所鉴定出的蛋白质与前列腺癌骨转移的发生、发展有关,可能是前列腺癌骨转移潜在的血清标志物。     

低分化胃癌患者血清中相关标志物的筛查和鉴定

目的 初步探讨蛋白质组技术在血清研究中的应用，建立低分化胃癌患者血清和健康者血清双向凝胶电泳图谱；筛查并鉴定低分化胃癌患者血清和健康者血清中的差异表达蛋白质，期望从中发现有意义的胃癌分子标志物。方法 采用双向凝胶电泳（2-DE）分离低分化胃癌患者血清和健康者血清总蛋白，银染显色，PDQuest软件分析，从中选取差异表达蛋白质，通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定差异表达的蛋白质。结果 获得重复性和分辨率较好的血清双向凝胶电泳图谱；鉴定得到6个仅在胃癌组血清中表达的蛋白质和4个仅在对照组血清中表达的蛋白质。结论 在低分化胃癌患者血清与健康者血清中存在差异表达蛋白质，利用蛋白质组学这一高通量的筛查技术可望从中发现与低分化胃癌相关的标志物。     

尿毒症患者血清蛋白质组份的双向凝胶电泳-飞行时间串联质谱分析研究

目的建立和比较尿毒症患者及正常人的血清蛋白质双向电泳图谱，寻找和鉴定尿毒症患者差异表达的血清蛋白质谱。方法以固相pH梯度（IPG）等电聚焦（IEF）为第一向和垂直十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）为第二向，分别对尿毒症患者和正常者血清蛋白质样品进行二维双向电泳，经银染显色和ImageMaster2D5、0软件分析凝胶图像，对有差异性表达的尿毒症者的蛋白质用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱进行鉴定。结果成功获得了重复性较好的双向电泳银染图谱。尿毒症患者血清蛋白质表达谱发生了改变。将其中26个明显差异性表达的蛋白质点进行肽质指纹图谱和串联质谱分析，在International Protein Index（IPI）human数据库中检索，鉴定出其中20个蛋白。结论固相pH梯度双向凝胶电泳分离尿毒症患者血清总蛋白获得重复性较好的结果。尿毒症患者血清蛋白质表达谱发生了明显改变，基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱分析鉴定的结果为尿毒症蛋白质毒素的研究提供了依据。     

炎症性肠病患者混合样本策略的蛋白质组学研究

目的 应用混合样本策略的蛋白质组学方法在炎症性肠病患者血清中寻找与疾病相关的蛋白质.方法 选取2007年3月至2008年6月中山大学附属第六医院收治的炎症性肠病患者以及健康受试者血清蛋白样本各8例,混合样本后用不同的CyDye荧光染料标记后进行胶内双向差异凝胶电泳,并对获得的图谱进行分析及对差异蛋白质进行基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定和生物学信息分析.应用DeCyder V6.0软件中的胶内差异分析及生物学差异分析软件进行统计分析.组间比较采用t检验.结果 成功建立炎症性肠病和健康受试者的胶内荧光差异染色双向凝胶图谱,发现了炎症性肠病患者中存在56个表达异常蛋白质点,质谱分析和数据库检索筛选后共鉴定出30个点有意义,包括结合珠蛋白、补体B因子、载脂蛋白A-Ⅱ、K-ras基因等.结论 采取混合样本策略、双向差异凝胶电泳、MALDI-TOF-MS技术路线的蛋白质组学方法能很好显示炎症性肠病患者与健康受试者血清蛋白质表达差异,所鉴定的蛋白质可为研究炎症性肠病的生物学行为提供新的分子标志物.     

应用SELDI-TOF-MS技术分析胆管恶性肿瘤患者外周血清蛋白的差异表达

目的 应用蛋白质组学技术分析胆管恶性肿瘤患者外周血清中差异表达的蛋白质,初步探讨其对胆管恶性肿瘤早期诊断的意义.方法 应用表面加强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,对58例胆管恶性肿瘤患者及58例对照者(38例健康体检者及20例胆囊结石患者)外周血清蛋白质进行检测,应用Ciphergen蛋白质芯片软件对蛋白质谱进行分析.结果 与对照组外周血清蛋白质谱相比,胆管恶性肿瘤患者外周血清中相对分子质量为5.900×103、9.080×103及11.863×103 的3个蛋白质点呈明显高表达(P<10-5); 相对分子质量为6.959×103、14.000×103、14.129×103、14.302×103、17.557×103、17.690×103及28.552×103的7个蛋白质点呈明显低表达(P<10-5),其中相对分子质量为11.863×103的蛋白质点在胆管恶性肿瘤组外周血的平均峰值约为对照组的8倍.有黄疸与无黄疸的胆管癌患者的外周血清中上述10个蛋白质点未见差异表达,但检测出另外3个差异表达的蛋白质点,其相对分子质量分别为7.255×103、12.364×103和15.873×103,并均在伴黄疸患者外周血清中呈高表达(P<10-5).相对分子质量为5.900×103的蛋白质点在Ⅱ期胆管癌患者的表达明显高于Ⅲ、Ⅳ期患者(P<10-5), 另9个蛋白质点在胆管癌不同临床分期中的表达差异均无统计学意义.结论 胆管恶性肿瘤患者外周血清蛋白质表达与对照组相比有明显变化,相对分子质量为11.863×103的蛋白质点具有作为胆管恶性肿瘤早期诊断的生物学标志物潜力.     

胆囊癌血清标志物的蛋白质组学研究

目的 分析胆囊癌患者和健康人血清蛋白质组的差异,筛选胆囊癌血清分子标志物.方法 以6例健康人和6例早胆囊癌患者的血清为样本,图像分析两组血清图谱寻找差异蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对差异蛋白点进行鉴定.Western blot和免疫组织化学方法检测差异蛋白质S100A10和结合珠蛋白在胆囊癌患者和健康人血清中的表达.结果 建立了健康人和胆囊癌患者血清样品的二维凝胶电泳图谱,质谱鉴定出24种非冗余的血清蛋白质.Westernblot证实了S100A10蛋白和结合珠蛋白在胆囊癌患者和健康人血清中的差异表达.免疫组织化学证实胆囊癌组织中S100A10及结合珠蛋白高表达.结论 24种血清差异蛋白质为筛选胆囊癌的血清分子标志物提供了实验依据.     

胃癌患者唾液蛋白质组学分析

目的 应用差异蛋白质组学方法筛选唾液中与胃癌相关的蛋白质分子.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离胃癌患者和正常人群唾液总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质;Western blot 验证蛋白质组学分析的结果.结果 通过两组人群唾液的双向凝胶电泳图谱分析发现15个差异蛋白质斑点,质谱鉴定出9种蛋白质,在胃癌患者唾液中高表达的有3个,其余6个在胃癌患者唾液中低表达.Western blot对表达增高的蛋白鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)进行检测,结果与蛋白质组学分析结果一致.结论 蛋白质组学研究是筛选胃癌患者唾液中特异性标记物的有效手段.     

胃癌患者唾液蛋白质组学分析

目的 应用差异蛋白质组学方法筛选唾液中与胃癌相关的蛋白质分子.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离胃癌患者和正常人群唾液总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质;Western blot 验证蛋白质组学分析的结果.结果 通过两组人群唾液的双向凝胶电泳图谱分析发现15个差异蛋白质斑点,质谱鉴定出9种蛋白质,在胃癌患者唾液中高表达的有3个,其余6个在胃癌患者唾液中低表达.Western blot对表达增高的蛋白鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)进行检测,结果与蛋白质组学分析结果一致.结论 蛋白质组学研究是筛选胃癌患者唾液中特异性标记物的有效手段.     

Annexin 5刺激大鼠睾丸Leydig细胞后的差异表达蛋白的研究

目的:研究annexin 5作用于大鼠睾丸Leydig细胞后的差异表达蛋白。方法:原代培养大鼠睾丸Leydig细胞,1 nmol/L的annexin 5处理Leydig细胞24 h,提取细胞蛋白用二维电泳分离蛋白并进行比较。选择与对照组有明显差异表达的蛋白点,进行质谱分析。结果:获得了分辨率和重复性均很好的差异蛋白图谱。筛选出的显著差异表达的50个蛋白点,共有36个蛋白点被成功鉴定,其中annexin 5处理组中高表达的为23个,低表达的为13个。结论:初步建立了annexin 5作用于大鼠睾丸Leydig细胞后的差异蛋白谱,筛选并鉴定出的这些蛋白质可能是影响睾丸Leydig细胞合成睾酮过程中的关键蛋白,研究结果为阐明annexin 5调控大鼠睾丸Leydig细胞分泌睾酮的具体机制奠定了基础。     

前列腺高级别上皮内瘤和良性前列腺增生患者血清的蛋白质组学研究

目的:探讨双向凝胶电泳和质谱技术在前列腺高级别上皮内瘤(HGPIN)和良性前列腺增生(BPH)患者血清蛋白质表达研究中的应用。方法:用双向凝胶电泳分离HGPIN和BPH患者血清总蛋白;从胶上切下表达有差异的兴趣蛋白质点,经胶内原位酶解后,用质谱仪测得其肽质量指纹谱;然后通过数据库检索鉴定蛋白质。结果:成功获得了HGPIN和BPH患者血清蛋白质的二维凝胶电泳图谱;HGPIN银染胶上检测到1421~1532个蛋白质点,BPH银染胶上检测到1466~1778个蛋白质点。经过比对,选择了9个蛋白质表达量相差5倍以上的蛋白质点进行质谱分析,并发现促瘤基因Serum amyloid A的表达产物在HGPIN中表达而在BPH中表达微弱或不表达。结论:用蛋白质组学对HGPIN和BPH患者的血清进行研究是可行的。可为HGPIN的临床早期无创性诊断以及发展变化提供实验依据。亦为今后从更高的水平来寻找前列腺疾病的功能蛋白质和差异性蛋白质,阐明前列腺疾病相互发生发展的分子生物学机制等研究提供了有益的探索。     

几丁糖对人成纤维细胞蛋白质表达谱的影响

目的 观察几丁糖对人成纤维细胞蛋白质表达谱的影响.方法 取第5代人成纤维细胞,实验组用含1 g/L几丁糖的培养液作用24 h,对照组仪用培养液培养24 h.分别提取实验组和对照组的成纤维细胞总蛋白,用双向凝胶电泳进行分离,银染后进行图像分析,识别有表达差异的蛋白质点;用基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱技术鉴定部分差异蛋白质点.结果 实验组和对照组有43个差异蛋白质点,其中17个点在实验组中表达上调,26个点在实验组中表达下调.经质谱分析,鉴定出6个已知蛋白,3个未知蛋白.已知蛋白分别与细胞凋亡、信号转导、细胞骨架及代谢等有关.结论 在几丁糖作用下,成纤维细胞的部分蛋白质表达发生变化.     

死精子症精子相关蛋白的蛋白质组学研究

目的:运用双向电泳(2-DE)和质谱技术比较1例死精子症患者和正常人精子的蛋白质组成差异。方法:用2-DE分离了10例正常生育者30份精子标本和1例死精子症3份精子标本的蛋白质,分别获得其参考图谱并进行比较,用质谱技术鉴定其中部分差异蛋白点。结果:在正常精子图谱和死精子症患者精子图谱分别分离出(905±57)和(792±28)个蛋白质点,死精子症患者精子图谱上有178个点未能匹配。对其中6个在患者图谱中缺失的蛋白质点进行了鉴定。结论:死精子症患者图谱上缺失的6个蛋白,可能与死精子症的形成有关。     

正常脊髓室管膜与脊髓室管膜瘤的差异蛋白组学研究

目的 应用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸离子电离飞行时间质谱(MAL-DI-TOF-MS)的蛋白组学方法,观察正常脊髓室管膜与脊髓室管膜瘤的差异表达蛋白质.方法 收集7例脊髓室管膜瘤标本作为肿瘤组,4例尸解得到的脊髓室管膜标本作为对照组.提取各组标本的蛋白质,定量后进行IEF和SDS-PAGE双向电泳分离,得到的2-DE图谱经染色后,通过软件找到差异蛋白点并且使用MALDI-TOF-MS技术进行鉴定,部分差异蛋白质进行Western blot验证.结果 成功鉴定出50个有效的差异蛋白质点(其中肿瘤组较对照组上调24个,下调13个,仅在肿瘤组中表达10个,仅在对照组表达3个).Western blot实验证实了差异蛋白波形蛋白(Vimentin)、膜联蛋白Ⅰ(Annexin Ⅰ)和HSPA8在肿瘤组中的高表达.结论 应用2-DE串联MALDI-TOF-MS技术能够建立具有高分辨率及可重复性的正常脊髓室管膜与脊髓室管膜瘤2-DE图谱,并能有效鉴定差异蛋白质.其中的Vimentin、Annexin Ⅰ、HSPA8等蛋白可能与脊髓室管膜瘤的发病机制有关.     

利用蛋白质组技术进行胃癌差异蛋白质研究

目的分离胃癌蛋白质组，找出胃癌组织的差异蛋白质点。方法利用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（2-DE）分离胃癌组织和正常对照组织的总蛋白质，并通过质谱分析技术对9个差异蛋白质点进行检测，以确定胃癌的差异蛋白质。结果在胃癌组织中点检测共有蛋白质点1147个，正常胃黏膜组织中点检测共有蛋白质点1079个。胃癌和正常胃黏膜组织两者共有164个差异蛋白质点，其中41个点仅在胃癌组织中表达，27个点仅在正常胃黏膜中表达；39个点在胃癌组织中高表达，57个点在胃癌组织中低表达。确定了7种在胃癌组织中明显高表达的蛋白质。结论利用蛋白质组技术获得了胃癌蛋白质组与正常对照组的差异蛋白质点，并获得了7种两者的差异蛋白质，为寻找胃癌的特异蛋白质奠定了基础。     

胆管癌肿瘤标志物的蛋白质组学初步研究

目的:蛋白质组学分析被认为是一种寻找潜在生物标志物,尤其是肿瘤标志物的有效方法。二维电泳蛋白质组学分析是一种流行和行之有效的技术。使用二维微分凝胶电泳(2-D DIGE)的研究是为了解癌症病人和对照组不同的蛋白质表达,并从蛋白质在二维图像上分布模式发现潜在的肿瘤标志物。方法:选取5例胆管癌病人和5例对照组胆管标本作为实验样本。然后提取DIGE裂解的蛋白质。随后提取的蛋白质以3种不同CyDyes进行标记,并通过2-D DIGE分离。结果:2-D DIGE从肿瘤和对照组标本中分离出多种蛋白质,点状分布在长13 cm、pH值在3.0～10.0的固相pH梯度胶条上。经过DeCyder软件的生物变异分析模块分析,所有胆管癌病人有20处蛋白质点被发现显着升高,5处蛋白质点下调(配对t检验,P