鹿瓜多肽注射液对骨折愈合过程中生长因子表达的影响

目的观察鹿瓜多肽注射液对骨折愈合过程中骨形态发生蛋白2(BMP-2)、转化生长因子(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)等生长因子表达的影响,了解鹿瓜多肽注射液促进骨折愈合的分子生物学机制。方法60只新西兰大白兔随机分为三组,制成双侧桡骨中段3mm骨缺损,三组术后每日分别予以肌肉注射0.1ml/kg、0.2ml/kg鹿瓜多肽注射液和0.2ml/kg生理盐水。术后1、2、4、6周分批处死动物,行组织学免疫组织化学观察。结果①不同剂量的鹿瓜多肽注射液均能使骨折处的BMP-2、TGF-β1和VEGF表达量在各时间段较生理盐水组明显增高(P<0.05);②随着使用剂量的增加,BMP-2、TGF-β1和VEGF的表达量也增加,且表达的高峰期提早。结论鹿瓜多肽注射液能调节骨折愈合过程中BMP-2、TGF-β1和VEGF的合成和分泌,进而调节骨原细胞的增殖和成骨细胞、软骨细胞的分化。     

转化生长因子-β、碱性成纤维生长因子和血小板衍生生长因子在大鼠骨折愈合中的表达

目的观察转化生长因子-β（transforminggrowthfactor-β,TGF-β）、碱性成纤维生长因子（basicfi—broblastgrowthfactor,bFGF）和血小板衍生生长因子（platelet—derivedgrowthfactor,PDGF）在大鼠骨折愈合中的表达和分布情况。方法选用SD大鼠制作胫骨骨折模型,伤后不同时期处死取材,分别进行组织学和TGF-β、bFGF和PDGF的免疫组化染色观察。结果（1）伤后3d开始形成原始骨痂。I周时肉芽组织中的间质细胞开始分化为软骨细胞,软骨形成后再进行软骨内化骨。4周时形成连接骨折端的桥接骨痂。（2）伤后早期血肿中炎性细胞表达bF-GF和PDGF。伤后1周骨膜增殖细胞、肉芽组织中的成纤维细胞、内皮细胞、骨端骨细胞以及原始骨痂成骨细胞表达TGF-β、bFGF和PDGF。伤后2周软骨细胞表达TGF-β、bFGF和PDGF。结论TGF-β、bFGF和PDGF有各自的表达和分布特点,并共同调解骨原细胞的增殖和成骨细胞、软骨细胞的分化,最终完成骨折愈合。     

骨折愈合中的软骨骨痂──形态学演变及超微结构观察

通过光镜下不脱钙骨组织学、组织化学和透射电镜对雄性兔桡骨标准缺损骨折模型愈合中软骨骨痂的形成、演变及超微结构进行了观察，结果显示：软骨骨痂由骨折后进入断端间的肉芽组织分化而成，其形成和改建并不完全相同于骺板软骨内化骨。电镜下，骨痂内软骨细胞可分为５个发育阶段：成软骨细胞、软骨细胞、肥大软骨细胞、变性软骨细胞和残存软骨细胞。我们认为１）软骨骨痂由断端周围组织内的间充质细胞分化而成；２）在改建过程中，软骨骨痂能直接形成骨小梁，我们支持肥大软骨细胞能转化为骨细胞的假说；３）软骨骨痂对骨折愈合有重要的作用，能早期填充骨缺损，联接断端，是骨折在重力负载下完成愈合的基础组织之一。     

成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合的机制研究

目的 用Y染色体追踪移植细胞在骨折愈合不同时相的存活、转归，及血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF—p1)的动态表达。方法 将SD雄性乳鼠体外培养成骨细胞移植到96只SD雌性鼠骨质疏松性骨折部位(实验组48只；对照组48只)，用原位杂交、免疫组织化学检测骨折愈合不同时相标本的Y染色体；以及VEGF、TGF—β1和VEGFmRNA、TGF—β1RNA的动态表达。结果 实验组大鼠：成骨细胞移植后可在受体骨折部位局部生存、生长繁殖，促进骨质疏松性骨折愈合。移植84d后仍存活。实验组大鼠：VEGF、VEGF—mRNA在7d见阳性细胞，14d有分泌高峰。TGF-β1mRNA在3d见阳性细胞，7～10d有分泌高峰。对照组均未见明显分泌高峰。结论 移植的成骨细胞参与骨质疏松性骨折修复，至少存活84d。VEGF、TGF—β1的动态表达对促进骨折愈合起一定作用。     

β转化生长因子在骨折愈合中的调节作用

在骨折愈合过程中,β转化生长因子(TGF-β)对细胞增殖、分化以及细胞外基质合成起重要调节作用。在修复开始、软骨形成、骨形成等三个阶段中都有TGF-β的定位及表达。TGF-β刺激间充质细胞增殖,并分化为软骨细胞及成骨细胞,并相继分别形成软骨基质及骨基质。     

密骨方对去卵巢大鼠骨折的影响

目的 采用卵巢切除法建立原发性骨质疏松及骨折动物模型,观察中药密骨方对去势大鼠骨痂组织的影响.方法 将90只雌性Wistar大鼠随机分为对照组(sham),模型组(OVX)与密骨方治疗组(MGF),模型组及治疗组行卵巢摘除术,同时3组大鼠均致其右侧股骨上1/3处骨折.MGF组按每日100mg/kg体重的剂量灌胃给药,Sham组和OVX组给予同体积的生理盐水,每日1次,疗程分别为2、4、6周,用SABC免疫组织化学方法检测骨折端转化生长因子(TGF-β1)的表达.结果 在骨折端MGF组软骨细胞的阳性表达率较高;TGF-β1的表达在时间的变化上呈显著升高趋势;第4、6周TGF-β1表达显著高于OVX组和Sham组.结论 密骨方对骨质疏松性骨折的愈合有一定的促进作用.     

复合基因在骨缺损基因治疗中的研究进展

骨缺损愈合是一个涉及多种细胞因子的增殖,分化和细胞外基质的合成与钙化等复杂的过程,目前认为参与骨折愈合的重要细胞因子有：骨形态发生蛋白（BMP）、血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）、转化生长因子-β（TGF-β）、胰岛素样生长因子（IGFs）、血小板衍生生长因子（PDGF）、神经生长因子（NGF）、骨衍生生长因子（BDGF）,其他一些来自血细胞的衍生因子如白细胞溶菌素、肿瘤坏死因子（TNF）、淋巴细胞毒素、干扰素等也参与骨折的愈合。     

骨形态发生蛋白-2在兔骨折愈合过程中的作用

[目的]利用兔骨折动物模型探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对骨折愈合的影响以及BMP-2、转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)三者在骨折愈合中的相互关系及机制。[方法]30只新西兰大白兔制作右侧桡骨骨折模型,随机将其分为两组,每组15只。实验组骨折局部注射BMP-2,对照组注射生理盐水。采用X线片、组织形态学检查观察两组骨折愈合的差异,免疫组化染色观察骨折愈合局部BMP-2、TGF-β1及VEGF蛋白的表达变化。[结果]注射BMP-2的实验组兔的骨痂生长、骨质重建、髓腔再通均早于对照组;两组间影像学评分差异有统计学意义(P0.05)。骨折造模后1、2周BMP-2、TGF-β1、VEGF免疫组化染色的积分吸光度值实验组高于对照组,两组间差异有统计学意义(P0.05),3周时BMP-2、TGF-β1及VEGF免疫组化染色积分吸光度值实验组仍明显高于对照组(P0.05),而5、7周时,两组间免疫组化染色积分吸光度值无明显差异(P0.05)。[结论]BMP-2通过促进TGF-β1及VEGF的表达,可促进血管的再生,提高成骨细胞、破骨细胞的数量及活性,促进骨折愈合。     

犬骨髓基质干细胞体外定向分化为软骨细胞

目的 体外诱导犬骨髓基质干细胞(BMSCs)定向分化为软骨细胞，探讨体外诱导成软骨的方法和条件。方法 自犬肋骨取骨髓2～3ml，体外行原代和传代培养扩增，顺序加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)，以培养瓶内较高细胞浓度培养，诱导BMSCs分化为软骨细胞。甲苯胺蓝、阿新蓝染色检测软骨基质的分泌，免疫组织化学染色检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达。结果 诱导的软骨样细胞甲苯氨蓝异染性、阿新蓝染色阳性；Ⅱ型胶原免疫组织化学检测阳性。结论 应用bFGF和TGF-β1体外可以诱导犬BMSCs分化为软骨细胞，诱导的软骨细胞可作为软骨组织工程较理想的种子细胞。     

低频微动后转化生长因子β_1与胰岛素样生长因子在新骨组织中的表达研究

目的研究转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1)与胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactor,IGF-)在低频微动引起骨折间接愈合过程中的表达与意义。方法山东雌性高腿绵羊15只,行双侧胫骨中段横形截骨,形成2mm骨缺损,用带有微动装置的单边外固定支架固定。术后10d,随机选择一侧肢体为微动组,以频率1Hz,幅度0.25mm(30min/d)微动,4周结束;另一侧后肢不微动,为对照组。术后3、4和6周分别处死5只动物,应用免疫组织化学与RT-PCR检测骨痂组织中TGF-β1与IGF-的表达。结果免疫组织化学:术后3周,微动组TGF-β1在骨痂边缘的新生软骨细胞各区均有阳性表达,以增殖区最为显著;IGF-主要表达于软骨内骨化带边缘的成骨细胞,钙化并转化为新骨的软骨细胞与骨细胞中。对照组的相应区域,TGF-β1有少量表达,IGF-几乎无表达。4周,微动组新骨组织逐渐成熟,TGF-β1表达强度减弱,阳性信号主要位于细胞外基质与骨化带周围成骨细胞中;IGF-的表达趋于高峰,主要集中在新骨表面的成骨细胞、趋于成熟的骨细胞及趋于钙化的类骨质。对照组TGF-β1与IGF-仅有少量表达。6周,微动组TGF-β1的表达显著衰退,IGF-仍有适量表达,主要在新生骨小梁骨细胞中。对照组TGF-β1与IGF-仅有微量表达。微动组术后3、4周TGF-β1,3、4、6周IGF-吸光度(A)值与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR电泳示:术后3、4周,微动组骨痂中TGF-β1与IGF-的mRNA有较高的表达量;对照组骨痂中TGF-β1、IGF-的mRNA有轻度表达。术后6周,微动组TGF-β1、IGF-的mRNA表达量显著降低,但仍略高于对照组。微动组术后3、4周TGF-β1,3、4、6周IGF-A值与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低频微动在骨折愈合早期,可以促进TGF-β1与IGF-的表达。它们协同调节软骨内骨化的进程;后期主要由IGF-调节骨细胞的分化与类骨质的矿化,其可能更多的参与调节微动各个时期的细胞生物行为。     

骨痂中转化生长因子-β1的基因表达和延迟手术中骨痂植骨的研究

目的：通过测定骨痂中的组织学内容和转化生长因子-β1的含量来了解延迟手术中骨折端周围骨痂组织的再利用价值。方法：在手术中取少许骨痂组织，采用不脱钙的骨痂组织做冰冻切片，采用非同位家Dig标记原位杂交，观察转化生长因子--β1在骨痂中的基因表达。对延迟手术的病人分别采用单纯骨痂植骨、髂骨植骨、骨痂加髂骨植骨，随访观察。结果：骨折后第2周，有少量纤维骨痂，软骨骨痂较多，TGF-β1在软骨小岛内的软骨细胞中高表达。骨折后4周左右TGF-β1在成骨细胞内表达显著。8周左右大量骨痂生长，并以软骨化骨为主，成纤维细胞、骨痂、成骨细胞、骨小梁越来越多，术后6周TGF-β1在各种细胞内的表达消失，但随着骨重建过程增强，8周时骨基质中TGF-β1表达又有增高趋势。不同的植骨方式在愈合时间上没有显著性差异。结论：TGF-β1在骨愈合的平衡中发挥重要作用，不同阶段骨痂的组织变化和TGF-β1量的变化有着必然的联系，骨痂是机体修复和重建的产物，作者认为骨痂植骨再利用是一种可行的方法。对需要植骨的病人可减少其痛苦和损伤。     

甲状旁腺激素联合降钙素对大鼠骨质疏松性骨折骨生长因子的影响

目的探讨甲状旁腺素联合降钙素对大鼠骨质疏松性骨折骨相关生长因子及骨折愈合的影响。方法75只雌性SD大鼠随机分为:假手术组、去势组、甲状旁腺素组、降钙素组、联合用药组,15只/组,首先构建去卵巢大鼠骨质疏松性骨折动物模型。观察并评估骨折愈合,测定骨痂BMD和BMC,检测血清BMP-2、VEGF、TGF-β、IGF-1水平和骨痂蛋白表达,观察骨痂形态结构变化。结果去势组较假手术组骨折愈合评分、骨痂BMD和BMC、血清BMP-2、VEGF、TGF-β、IGF-1水平和骨痂蛋白表达均显著降低(P均<0.05),而联合用药组较去势组上述指标均显著升高(P均<0.05)。去势组骨痂骨小梁明显减少,生长稀疏,排列紊乱,大量间充质干细胞及纤维软骨细胞,成骨细胞及微血管少见;联合用药组骨痂大量骨小梁,生长旺盛,互相交错网状,排列致密有序,可见较多成熟的骨细胞及成骨细胞。结论甲状旁腺素联合降钙素通过介导提高相关骨生长因子表达,提高骨质疏松性骨折骨密度和矿物含量,改善骨组织形态学,加快骨折愈合。     

骨折愈合过程中转化生长因子—β1基因表达

目的：研究转化生长因子－β１基因在骨折后不同修复细胞中的表达及其变化，了解其在骨折愈合过程中的来源及产生机理。材料与方法：大鼠肋骨骨折标本，制作脱钙石蜡切片，用原位杂交技术检测骨折修复细胞中的转化生长因子－β１信使核糖核酸。结果：骨折后２、５、１０、１５天分别在相应修复细胞中检测到转化生长因子－β１ｍＲＮＡ的阳性信号，即骨膜生发层细胞、膜内成骨区的成骨细胞、软骨形成区的软骨细胞及软骨内成骨区的成骨细胞。其中成熟软骨细胞内信号最强，而肥大软骨细胞内显示阴性信号。结论：转化生长因子－β１可以在骨折局部由修复细胞自身产生，其产生量与细胞的分化状态、功能水平有关，它可能以自分泌或旁分泌方式参与骨折愈合的调节。     

TGF-β1和VEGF在结肠癌组织中的表达和临床意义

目的:研究转化生长因子β 1 (TGF-β1)与血管内皮生长因子(VEGF)在结肠癌组织中的表达、相互关系及临床意义.方法:采用免疫组织化学SP法检测65例结肠癌组织标本中 TGF-β 1、VEGF蛋白表达,RT-PCR检测其mRNA表达,并选择39例正常人结肠黏膜组织作为正常对照.结果:免疫组化法检测TGF-β 1、VEGF蛋白在结肠癌组织中的阳性率较正常对照组明显增高(P＜0.05),RT-PCR检测TGF-β1、VEGF mRNA表达量癌组织高于正常组织.免疫组化检测的TGF-β1和VEGF表达阳性率在T3～T4高于T1～T2;有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组DukesC～D期表达阳性率高于DukesA～B期,差异均有统计学意义(P＜ 0.05);VEGF和TGF-β1之间存在较明显的相关性(P＜0.05).结论:TGF-β 1、VEGF在结肠癌组织中呈高表达,与浸漓深度、淋巴结转移、Dukes分期密切相关,两者也存在相关性,与肿瘤进展及预后相关,可作为结肠癌判断预后的参考指标.     

偎脓长肉法对大鼠慢性溃疡组织病理学及肉芽组织 VEGF、Notch1、TGF-β1表达的影响

目的:观察偎脓长肉法对大鼠皮肤慢性溃疡愈合过程中肉芽组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)及Notch1表达的影响。方法:将24只大鼠随机分为正常组、模型组、对照组、治疗组共4组,每组6只。正常组无创面,其他3组大鼠采用“激素干预-皮肤缺损-细菌感染”复合因素叠加法制备慢性皮肤溃疡模型,模型组给予生理盐水换药,对照组给予凡士林纱条外敷,治疗组给予生肌象皮膏外敷,每日换药1次,共14 d。于治疗3、7、14 d,分别取各组大鼠溃疡创面肉芽组织,行HE染色观察组织病理学改变,并采用免疫组化方法检测VEGF、TGF-β1、Notch1等的表达情况。结果:治疗组应用偎脓长肉法治疗14 d后创面为(0.012±0.004)cm2,基本愈合,与模型组、对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在创面修复早、中期(3~7 d),与模型组、对照组比较,治疗组创面组织TGF-β1、VEGF表达水平升高,Notch1表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);疮面修复晚期(14 d),各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:偎脓长肉法可能通过调节肉芽组织VEGF、Notch1、TGF-β1的表达,起到促进肉芽组织生长、促进疮面修复的作用。     

血必净对局灶节段性肾小球硬化大鼠的肾脏保护作用

目的：观察中药血必净注射液对局灶节段性肾小球硬化症（FSGS）大鼠转化生长因子-β1（TGF-β1）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响，探讨血必净对FSGS大鼠的肾脏保护作用。方法：建立单侧肾切除加重复注射阿霉素的FSGS大鼠模型，分为血必净组、模型组，并设假手术组为对照组。检测各组大鼠第0、4、6、8周24h尿蛋白定量及血生化值，计算内生肌酐清除率（Ccr）；对肾组织进行病理形态学观察，计算肾小球硬化指数（SI）、肾小球细胞外基质与肾小球面积之比（ECM／GA），采用免疫组织化学方法检测肾组织TGF-β1、VEGF的表达。结果：与模型组相比，血必净治疗组大鼠尿蛋白排泄减少，肾脏病理改变明显减轻，肾组织TGF-β1、VEGF的表达减少。结论：血必净可以抑制局灶节段性肾小球硬化大鼠肾组织TGF-β1、VEGF的高表达，具有一定的肾脏保护作用。     

老年大鼠骨痂中转化生长因子-β_1的表达

目的　探讨增龄对骨折愈合过程中转化生长因子 β1(TGF β1)表达的影响。方法　建立老年大鼠股骨骨折模型 ,于第 1、2、4、8、12周取骨痂 ,进行组织学观察 ,并用免疫组织化学方法进行TGF β1表达测定。结果　在 2、4周TGF β1主要在软骨细胞、间充质细胞而在 8周新生类骨质中有TGF β1表达。结论　增龄可引起成骨细胞功能降低 ,导致TGF β1分泌减少 ,使骨折的愈合延缓     

血管内皮生长因子抑制肾小管上皮间充质转化及其与结缔组织生长因子和PI3K-Akt信号通路的关系

目的　探讨血管内皮生长因子（VEGF）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的肾小管上皮间充质转化（EMT）的作用,及其与结缔组织生长因子（CTGF）、PI3K-Akt信号通路的关系。 方法 （1）将体外培养的HK2细胞分为正常对照组、TGF-β1（5 μg/L,下同）组、VEGF组（100 μg/L,下同）、TGF-β1＋VEGF组。HK2细胞体外培养48 h,用免疫组化双染方法检测肾小管上皮细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E钙黏蛋白的表达。（2）将体外培养的HK2细胞分为正常对照组、TGF-β1组、VEGF组、TGF-β1＋VEGF组、PI3K-Akt信号通路阻断剂LY294002组（25 μmol/L,下同）、TGF-β1＋LY294002组、VEGF＋LY294002组、TGF-β1＋VEGF＋LY294002组。HK2细胞体外培养48 h,用Western印迹和RT-PCR方法检测α-SMA和CTGF的表达;用ELISA方法检测培养上清中纤连蛋白（FN）和I型胶原（ColⅠ）的表达。 结果 免疫组化结果显示,TGF-β1组α-SMA表达比正常对照组增强,而E钙黏蛋白表达减弱; TGF-β1＋VEGF组α-SMA表达比TGF-β1组显著减弱,而E钙黏蛋白表达增强。 TGF-β1组α-SMA、CTGF蛋白和 mRNA及FN、ColⅠ表达比正常对照组显著增强（均P < 0.05）;TGF-β1＋VEGF组α-SMA、CTGF蛋白和mRNA及FN、ColⅠ表达比TGF-β1组显著减弱（均P < 0.05）;TGF-β1＋VEGF＋LY294002组α-SMA、CTGF蛋白和 mRNA及FN、ColⅠ表达比TGF-β1＋VEGF组显著增强（均P < 0.05）。 结论　VEGF能抑制TGF-β1诱导的体外培养的HK2细胞发生EMT,其机制可能与VEGF下调HK2细胞CTGF表达及减少细胞外FN、ColⅠ合成有关。VEGF的这种作用可能部分通过PI3K-Akt信号转导通路实现,其确切机制有待进一步研究。     

RhoA/ROCK通路在转化生长因子-β1诱导骨髓基质干细胞向软骨分化中的作用

目的 探讨RhoA／ROCK信号通路在转化生长因子-β1（TGF-β1）体外诱导骨髓基质干细胞（BMSCs）向成软骨细胞表型分化过程中的表达及作用。方法 由小鼠骨髓中分离出BMSCs，体外传代培养，取第3代细胞通过TGF-β1诱导向软骨细胞分化。采用Western-blot和RT-PCR方法分别检测RhoA和ROCK1／2、Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达及应用Rho激酶抑制剂Y27632后的表达。结果 RhoA和ROCK1／2在分化过程中均有表达。Rho激酶抑制剂Y27632导致诱导后成软骨细胞相关的Ⅱ型胶原表达减少。结论 RhoA／ROCK信号通路可能在BMSCs分化为软骨细胞过程中起着重要调控作用。     

联合应用外源性TGF-β2及IGF-1对大鼠骨折愈合的影响

[目的]对比观察外源性TGF-β2、IGF-1及两种生长因子联合应用在大鼠骨折愈合过程中的影响。[方法]取SD大鼠120只,随机分成4组。建立右侧胫骨骨折模型。A组IGF-1组,B组TGF-β2组,C组联合组,D组为空白对照组。术后行大体观察、影像学观察及评分、ALP检测、骨痂干重检测、组织学观察、生物力学观察。[结果]各时间点,通过大体观察,D、A、B、C硬组织范围不断增大,硬度不断增加。通过影像学观察及组织学观察,D、A、B、C骨折愈合速度明显加快,影像学评分逐渐加大。通过ALP检测、骨痂干重检测、生物力学观察,D、A、B、C各组数值逐渐增大。[结论]局部应用外源性转化生长因子-β2(TGF-β2)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)均可以促进骨折愈合,但TGF-β2的作用更强,二者联合应用具有协同作用,促进骨折愈合的作用更强。