CpG岛甲基化和人类肿瘤

CpG岛是真核生物转录起始区域的一段富含GC的序列，位于CATbox附近。CpG岛甲基化可以调控基因转录的效率，使基因转录失活，被认为是反映细胞内DNA转录状态的重要表观遗传学标记。人类肿瘤的发生与多种肿瘤相关基因的CpG岛甲基化水平有关，涉及多种机制。叶酸可以调节基因CpG岛的甲基化水平。CpG岛甲基化的研究可能为临床肿瘤的诊疗提供一种新的靶点和途径。     

肺癌患者CDH13基因启动子甲基化状态研究

目的 应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测非小细胞肺癌(NSCLC) CDH13基因启动子甲基化情况.方法 留取44例非小细胞肺癌患者手术标本及12例非肺癌患者正常肺组织,MSP分析CDH 13基因启动子甲基化情况.结果 44例非小细胞肺癌中CDH 13基因启动子甲基化阳性率为54.5%(24/44),12例正常肺组织中未检测到此基因的甲基化(0/12).CDH13基因甲基化与患者性别及吸烟与否无关;肿瘤分期越晚甲基化的发生率越高.结论 原发性非小细胞肺癌中存在着较高比例的CDH13启动子甲基化,提示CDH13在非小细胞肺癌的发生中起着重要作用.     

骨关节炎患者关节软骨TIMP-3启动子区甲基化水平的初步研究

目的探讨关节软骨中组织金属蛋白酶抑制因子-3（TIMP～3）基因启动子区甲基化与其蛋白表达的相关性,并分析TIMP一3基因CpG岛异常甲基化与骨关节炎（OA）的关联性。方法应用甲基化特异性的聚合酶链反应（MSP）技术和免疫组织化学SP法分别检测14例健康人的正常关节软骨细胞和35例骨关节炎（OA）患者软骨细胞TIMP-3基因启动子区甲基化和蛋白表达情况。结果OA患者和健康人关节软骨中TIMP-3基因启动子区均有甲基化修饰,其阳性率分别为74.3％（26／35）和35．7％（5／14）,0A组TIMP-3基因启动子区甲基化率明显高于健康组（P〈0．05）。14例健康人中,软骨细胞TIMP-3蛋白表达阳性10例（71．4％）,而35例OA患者中,软骨细胞TIMP-3蛋白表达阳性11例（31．4％）。24例OA患者软骨细胞蛋白表达阴性的标本中．TIMP-3启动子区甲基化阳性21例（87．5％）;26例TIMP-3启动子区甲基化阳性的标本中,蛋白表达阴性21例（80．8％）,TIMP-3启动子区甲基化与蛋白表达呈显著负相关（P〈0．05）。结论启动子区CpG岛高甲基化是OA患者关节软骨细胞TIMP-3表达失活的主要机制之一,其可能参与了OA的发生和发展。     

散发性乳腺癌组织BRCA1基因启动子甲基化与蛋白表达的相关性

目的：探讨BRCA1基因启动子甲基化对BRCA1蛋白表达的影响，与散发性乳腺癌发病之间的关系。方法：采用甲基化特异性PCR（MS-PCR）检测51例散发的乳腺浸润性导管癌和10例乳腺良性组织的BRCA1基因启动子甲基化状态，免疫组织化学SP法检测相应组织的石蜡标本BRCA1蛋白表达水平。结果：10例乳腺良性组织中均未检测到BRCA1启动子的异常甲基化，结合免疫组织化学检测，BRCA1蛋白均在细胞核阳性表达，其中70％为强阳性表达；在51例散发性乳腺浸润性导管癌组织中检测到7例BRCA1启动子发生异常甲基化，甲基化比例为13．73％（7／51）；其余44例（44／51，86．27％）未检测到BRCA1启动子甲基化。     

乳腺癌 NOEY2基因启动子区甲基化的研究

目的：检测 NOEY2基因在乳腺癌发生不同阶段的甲基化状态及其在乳腺浸润性导管癌(IDC)中的mRNA 表达水平,探讨 NOEY2基因启动子区异常甲基化与乳腺癌发生发展的关系。方法收集2010年1月—2012年1月手术切除乳腺的女性患者标本,其中 IDC 组46例,乳腺普通型导管增生(UDH)组30例,癌旁正常乳腺组织(NBT)组20例,乳腺原位导管癌( DCIS) 组20例,乳腺非典型导管增生( ADH)组13例,采用甲基化特异性 PCR (MSP)检测 NOEY2基因的甲基化率及水平,分析其与临床病理参数的关系;采用实时定量 PCR 检测30例 IDC 中NOEY2基因的 mRNA 相对表达量,分析 NOEY2基因甲基化对其 mRNA 表达的影响。结果 IDC 组的完全甲基化率高于 NBT 及 UDH 组(P <0．01);NOEY2基因完全甲基化与乳腺癌患者的临床分期、组织学分级有关(P <0．05),而与年龄、肿瘤大小、ER、PR、HER2无相关性(P >0．05);完全甲基化的 IDC 标本 NOEY2 mRNA 表达量低于部分甲基化的IDC 标本(P <0．05);IDC 中 NOEY2基因的甲基化水平与 NOEY2基因 mRNA 表达量呈负相关( r =-0.659,P <0．05)。结论 NOEY2基因启动子区异常高甲基化及其导致的 mRNA 表达下调在乳腺癌发生发展过程中起重要作用。     

乳腺癌NOEY2基因启动子区甲基化的研究

目的检测NOEY2基因在乳腺癌发生不同阶段的甲基化状态及其在乳腺浸润性导管癌(IDC)中的mRNA表达水平,探讨NOEY2基因启动子区异常甲基化与乳腺癌发生发展的关系。方法收集2010年1月—2012年1月手术切除乳腺的女性患者标本,其中IDC组46例,乳腺普通型导管增生(UDH)组30例,癌旁正常乳腺组织(NBT)组20例,乳腺原位导管癌(DCIS)组20例,乳腺非典型导管增生(ADH)组13例,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测NOEY2基因的甲基化率及水平,分析其与临床病理参数的关系;采用实时定量PCR检测30例IDC中NOEY2基因的mRNA相对表达量,分析NOEY2基因甲基化对其mRNA表达的影响。结果 IDC组的完全甲基化率高于NBT及UDH组(P<0.01);NOEY2基因完全甲基化与乳腺癌患者的临床分期、组织学分级有关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小、ER、PR、HER2无相关性(P>0.05);完全甲基化的IDC标本NOEY2 mRNA表达量低于部分甲基化的IDC标本(P<0.05);IDC中NOEY2基因的甲基化水平与NOEY2基因mRNA表达量呈负相关(r=-0.659,P<0.05)。结论 NOEY2基因启动子区异常高甲基化及其导致的mRNA表达下调在乳腺癌发生发展过程中起重要作用。     

ERα／β蛋白表达与基因启动子甲基化在中国女性散发性乳腺癌中的相关性研究

目的：探讨雌激素受体α（Estrogen Receptorα,ERα）、雌激素受体β（EstrogenReceptorβ,ERβ）基因启动子区甲基化与ERα、ERβ蛋白失表达关系。方法：甲基化特异性PCR（Methylation specific PCR,MSP）法检测138例散发性乳腺癌和14例乳腺纤维腺瘤组织中ERα基因启动子区四个CpG岛密集区域甲基化及ERβ启动子区甲基化状态,免疫组织化学方法检测ERα、ERβ蛋白的表达。结果：纤维腺瘤组织中,ERα、ERβ甲基化发生率分别为28．6％（3／14）、14．3％（2／14）：乳腺癌组织ERα、ERβ总甲基化发生率分别为60．1％（83／138）、53．6％（74／138）,ERQ启动子区ER1、ER2、ER3、ER4四个检测区域的甲基化发生率分别为34．896、35．5％、39．1％、36．996,ER1 ER4各检测区域间甲基化率未见显著性差别;乳腺癌组织ERα、ERβ甲基化发生率均显著高于纤维腺瘤组织（60．1％vs．28.6％,）（2=5．117,P=0．023;53．6％vs．14．3％,X2=11．418,P=-0．004）;分析乳腺癌中ERQ基因启动子甲基化与ERa表达相关性发现ERα阳性的乳腺癌组织中ERα基因启动子甲基化发生率为37．7％（26／69）,而在ERα阴性组织总甲基化发生率82．6％（57／69）。进一步针对四个CpG岛密集区域异常甲基化检测发生率,发现在职α阳性的乳腺癌组织中职α基因启动子甲基化发生率分别为14．5％、18．896、7．296、17．4％,在ERα阴性的乳腺癌组织中ERα基因启动子甲基化发生率明显升高,分别为55．1％、52．2％、58％、56．5％,以ERα表达水平与甲基化检出率做Spearman相关性分析,二者呈显著负相关（r=-0．469,P〈0．0001）;分析乳腺癌中ERβ基因启动子甲基化与ERβ蛋白表达的相关性发现ERβ阳性的乳腺癌组织中ERβ基因启动子甲基化发生率为35．4％（29／82）,而在ERβ阴性组织总甲基化发生率80．4％（45／56）。以ERβ表达水平与甲基化检出率做Spearman相关性分析,二者呈显著负相关（r=-0．743,P〈0．0001）。结论：中国女性散发性乳腺癌存在较高频率的ERα、ERβ基因启动子异常甲基化;乳腺癌组织中ERα、ERβ失表达与其基因启动子异常甲基化有关。     

乳腺癌p53和C-erbB2的表达及意义

目的探讨抑癌基因(p53)、原癌基因(C-erbB2)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)在乳腺癌中的表达与临床病理的关系。方法免疫组化检测516例乳腺癌组织中p53、C-erbB2、ER、PR的表达,并分析其与腋窝淋巴结转移,肿瘤大小,病理类型的相互关系。结果 516例患者C-erbB2、p53、ER、PR表达阳性率分别为p53为43.7%、56.7%、43.2%、41.4%。C-erbB2、p53表达与乳腺癌转移及预后呈正相关,ER、PR表达则呈负相关。结论联合检测p53、C-erbB2、ER、PR可为判断预后提供依据,有助于乳腺癌患者的治疗和预后判断。     

子宫内膜癌与正常子宫内膜组织中PR基因启动子区CpG岛甲基化的对比研究

目的研究子宫内膜癌中孕激素受体亚型PRA、PRB表达与其启动子区甲基化状态的关系,探讨子宫内膜癌组织、细胞分子变化特征及孕激素受体亚型表达下调的机制。方法①应用免疫组化SP法检测子宫内膜癌组织中PRA、PRB蛋白的表达。②应用甲基化特异性PCR检测子宫内膜癌组织及经5-杂氮脱氧胞苷(ADC)处理前后子宫内膜癌Hec-1-B细胞系中PRA、PRB的甲基化状态。③应用免疫印迹法检测ADC处理Hec-1-B细胞系前后PRA、PRB蛋白的表达。结果①与正常子宫内膜组织比较:PRA蛋白在高、中低分化子宫内膜癌组织中表达差异无统计学意义;PRB蛋白在高分化子宫内膜癌组织中表达无明显降低,差异无统计学意义,在中低分化子宫内膜癌组织中表达明显降低,差异有统计学意义。②与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织中,PRA启动子区CpG岛甲基化率较低,差异无统计学意义,PRB启动子区CpG岛甲基化率较高,差异有统计学意义,与组织分化程度有关,与病理类型及有无淋巴结转移和有无肌层浸润无关。结论子宫内膜癌组织以及Hec-1-B细胞系中,存在PR基因异常甲基化,ADC可通过去甲基化作用使PRB恢复表达,可能提高子宫内膜癌的临床内分泌治疗效果。     

肼苯哒嗪去甲基化作用对肿瘤基因影响的研究进展

肼苯哒嗪（Hydralazine,Hyd）是一种传统的用于心脑血管疾病治疗的药物,经长期临床应用发现其可致机体免疫性疾病毒副作用,其机制是Hyd的去甲基化效应所致。DNA甲基化（DNAmethylation）是哺乳动物最普通的一种复制后调节方式,其在个体发育、肿瘤发生、免疫紊乱中起着重要作用。近年研究表明,基因启动子区CpG岛（哺乳类生物基因组中的一段富含CpG二核苷酸成分的DNA序列）高度甲基化是多种肿瘤细胞中常见的变异,多个肿瘤抑制基因因其启动子区CpG岛甲基化而表达沉默,与恶性肿瘤的发生发展、侵润及转移密切相关。笔者现就近几年Hyd去甲基化效应用于抗肿瘤治疗的研究进展作一综述。     

结肠腺瘤性息肉病基因启动子区甲基化状态在乳腺癌演变过程中的作用

目的：检测结肠腺瘤性息肉病( APC)基因在乳腺癌中的甲基化状态及其mRNA表达水平,探讨APC基因启动子区异常甲基化与乳腺癌发生的关系。方法采用甲基化特异性PCR( MSP)检测17例癌旁正常乳腺组织( NBT),27例乳腺普通型导管增生( UDH),13例乳腺非典型导管增生( ADH),20例乳腺原位导管癌( DCIS)及46例乳腺浸润性导管癌( IDC)标本中APC基因的甲基化率,并分析其与临床病理参数的关系;采用定量聚合酶链反应( QPCR)检测26例IDC中APC基因的mRNA相对表达水平,分析APC基因甲基化对其mRNA表达的影响。结果ADH、DCIS及IDC标本APC甲基化率高于NBT及UDH标本(P<0．05);IDC标本APC甲基化水平高于ADH与DCIS标本(P<0．05),APC基因mRNA的相对表达水平低于NBT标本(P<0．05);APC基因的甲基化水平与APC基因mRNA表达量呈负相关(r=-0.0469, P<0．05)。 IDC中APC基因甲基化状态与临床病理参数无关(P>0．05)。结论 APC基因启动子区异常高甲基化及其导致的mRNA表达下调在乳腺癌发生过程中起着重要作用。     

乳腺癌p16基因甲基化和蛋白表达的检测及其临床意义

目的:探讨p16基因在乳腺癌中甲基化状态、表达情况及其与临床的关系.方法:应用甲基化特异性的聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)检测48例乳腺癌中p16基因甲基化状态,应用免疫组化检测p16基因的蛋白表达情况.结果:p16基因在乳腺癌中甲基化率为27.1%(13/48),有淋巴结及远处转移的甲基化率(52.6%,10/19)高于无转移的甲基化率(10.3%,3/29)(P＜0.05);13例甲基化病例中P16蛋白失表达率(76.9%,10/13)高于非甲基化病例(8.6%,3/35)(P＜0.05).结论:p16基因高甲基化是乳腺癌中常见的分子生物学改变之一,p16基因高甲基化和乳腺癌浸润及转移有相关性;P16蛋白表达和其高甲基化呈负相关,甲基化是p16抑癌基因失活的主要方式之一.     

Detection of HER2 Gene Polymorphism in Breast Cancer: PCR Optimization Study

Cancers are the most deadly diseases in the world and their incidences continue to increase over time. Particularly, breast cancer in females places 1^st rank among other types of cancers in term of cancer cases (23%) and death incidence (14%). Recent findings support the correlation between ^Ile655^Val SNP in the HER2 gene with breast cancer risk. Moreover, the ^Ile655^Val HER2 gene polymorphism could be a predictive factor in a neoadjuvant therapy setting. Precise detection of the ^Ile655^Val HER2 gene SNP in early breast cancer patients will be beneficial in designing the most suitable treatment and in increasing the efficacy of anticancer drugs. Here we develop a rapid and inexpensive method for ^Ile655^Val SNP detection in the HER2 gene based on allele-specific PCR technology. Two forward primers and one common reverse primer were designed to anneal specifically either on the HER2 gene fragment containing the GG genotype or to the HER2 gene fragment containing the AA genotype where one of these primers had been added with poly-GC at 5’ upstream. Moreover, to increase discrimination level, mismatch bases at the SNP site and the 3^rd base of each forward primers from 3’end were added. To test the performance of the designed primers in discriminating a polymorphism and its annealing temperature, breast cancer specimen-derived genomic DNA (with GG genotype) and pGEM_HER2/AA (with AA genotype) were used as templates in the PCR reaction. The optimal annealing temperature for SNP detection was at 51.5°C as showed by the appearance of a 150 base pair (bp) band as AA genotype (pGEM_HER2/AA template), 116bp band as GG genotype (genomic DNA template), and both types of bands as AG genotype (mix of pGEM_HER2/AA and genomic DNA template). Allelic types of breast cancer patients were also determined using this optimized method compared to sanger sequencing. The 100% accordance was shown for all types of genotypes in both methods. The allele-specific PCR in this study may have application in determining polymorphisms of the breast cancers-originated ^Ile655^Val HER2 gene.     

BCSG1蛋白在乳腺癌组织中的表达情况及临床意义

目的：探讨乳腺癌特异基因1(breast cancer specific gene l, BCSG1)及其蛋白在乳腺癌组织中的表达情况,并分析其与乳腺癌临床病理特征的关系及其在乳腺癌治疗和预后中的临床意义。方法收集2010年1月—2013年1月手术获取的乳腺癌组织93例,同时选取30例乳腺腺病患者的正常乳腺组织作为对照,分别采用反转录聚合酶链反应( RT-PCR)和免疫组化法检测乳腺癌、正常乳腺组织中BCSG1 mRNA和蛋白水平的表达。根据BCSG1的表达情况分析BCSG1在乳腺癌患者中表达水平的高低与其预后的关系。结果乳腺癌组织中的BCSG1 mRNA和蛋白表达水平显著高于正常乳腺组织(P<0．05),且BCSG1蛋白的表达水平与乳腺癌临床分期和淋巴结转移呈显著相关性(P<0．05)。 BCSG1阴性表达患者1、2、3年累积复发率显著低于BCSG1阳性表达患者,且1、2、3年生存率显著高于BCSG1阳性表达患者(P<0．05)。结论乳腺癌组织中BCSG1 mRNA和蛋白异常高表达,与乳腺癌临床分期及淋巴结转移有一定的相关性,且与乳腺癌的预后呈密切相关性,可能是乳腺癌发生发展的危险因素。     

BRCA1基因与乳腺癌的研究进展

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。BRCA1是重要的乳腺癌易感基因,亦是一种抑癌基因。它参与了细胞周期的调节,DNA损伤修复,基因的转录调控等功能。BRCAl基因的突变与家族性乳腺癌的发生密切相关,而BRCA1蛋白在散发性乳腺癌中的表达水平降低,提示其在散发性乳腺癌中也有重要作用。该文将对BRCA1的基因突变,甲基化和多态性等遗传学改变与乳腺癌的易感性,治疗和预后作了综述。了解BRCA1与乳腺癌的发生、发展及预后,对于最终发现治疗乳腺癌的新方法有着重要价值     

TFAP2E基因CpG岛甲基化状态与食管癌患者化疗疗效的关系研究

目的 探讨TFAP2E基因CpG岛甲基化状态与食管癌患者诊断及基于氟尿嘧啶类药物化疗疗效之间的关系。方法 搜集101例病理学明确诊断的食管癌组织及50例癌旁正常组织,通过荧光定量甲基化特异性PCR检测组织甲基化率。对其中75例晚期（IV期）患者接受基于氟尿嘧啶药物为基础化疗的疗效进行评价,并分析TFAP2E基因CpG岛甲基化状态和临床病理资料及化疗疗效间的关系。结果 肿瘤组织中TFAP2E甲基化的发生率高于正常组织（P<0.05）。TFAP2E甲基化率和肿瘤分化程度和淋巴结转移有关。TFAP2E甲基化状态和化疗疗效有关,Logistic回归分析表明低甲基化TFAP2E患者化疗效果明显优于高甲基化患者（OR=2.89,95% CI：1.57~5.37;P<0.05）。结论 TFAP2E基因CpG岛甲基化和接受基于氟尿嘧啶化疗食管癌患者疗效相关,可能成为预测化疗效果的有效生物标志。     

HER—2原癌基因在乳腺癌中的异常表达

采用分子杂交技术检测２例人原发性乳腺癌ＨＥＲ－２原癌基因ＤＮＡ及ＲＮＡ水平的改变。结果该基因在肿瘤组织未见扩增与重排,但其中１例在ＲＮＡ水平却异常表达,推测这种现象可能与该基因转录调控的失调有关。提示ＨＥＲ－２原癌基因的激活亦可能依赖其转录途径完成。