促红细胞生成素对缺氧缺血性脑损伤新生 Wistar 大鼠海马 GFAP 和 BrdU 表达的影响

目的探讨外源性促红细胞生长素(EPO)对新生Wistar大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马CA1区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和海马DG区5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)表达的影响。方法48只7日龄新生Wistar大鼠随机分为HIBD模型组、EPO实验组,另设假手术组24只;通过结扎右侧颈总动脉、并吸入8%O2加92%N2低氧混合气体2h制作HIBD模型;免疫组织化学法检测并比较三组新生鼠制模术后14d、21d、28d海马CA1区GFAP表达、以及DG区BrdU阳性细胞数的变化。结果术后14d、21d,三组新生Wistar大鼠海马CA1区GFAP以及DG区BrdU阳性细胞数的差异均有统计学意义(P0.01),均以EPO实验组最多,HIBD模型组其次,假手术组最少;术后28d,三组间GFAP表达以及DG区BrdU阳性细胞数比较均无统计学意义(P0.05)。各组大鼠不同时间(术后14d、21d、28d)之间比较,CA1区GFAP以及DG区BrdU阳性细胞表达的差异均有统计学意义(P0.01),均以术后14d表达最多,21d表达次之,28d表达最少。结论早期给予外源性EPO治疗可促进新生鼠HIBD后海马CA1区GFAP表达增多,DG区BrdU阳性细胞增加,表明EPO可促进受损神经细胞增殖、再生;EPO在新生鼠缺氧缺血性脑损伤中发挥神经保护作用。     

bFGF对新生大鼠缺氧缺血后海马CA 1 区神经细胞凋亡的影响

为研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对新生大鼠缺氧缺血(HI)后海马CA 1区神经细胞凋亡的影响,应用新生Wistar大鼠制备缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,用HE染色、电镜及原位缺口末端标记(TUNEL)法检测bFGF对HI后海马CA 1区神经细胞凋亡的影响.结果显示HE染色、电镜及TUNEL法均证实HI后海马存在选择性神经细胞凋亡,尤以CA 1区为重,CA 2和CA 3区病变较轻.TUNEL检测结果,bFGF治疗组阳性细胞数(15.23±14.2)低于未治疗组(25.12±20.25),差异显著(P＜0.05).因此,bFGF对HI后海马CA 1区神经细胞确有保护作用.     

银杏叶提取物对发育期戊四氮点燃癫癎大鼠学习记忆与海马神经干细胞增殖、分化的影响

目的 探讨银杏叶提取物( EGb)对癫癎点燃模型幼鼠神经发生的影响及与学习记忆的关系.方法 选择21日龄SD大鼠,随机分为9g·L-1盐水对照组(NS组)、戊四氮(PTZ)点燃对照组(PTZ7d组、PTZ 14 d组)以及EGb治疗组(EGb7 d组、EGb 14d组).应用PTZ制作慢性点燃癫癎模型;使用Y-型电迷宫测试模型建立前后及EGb治疗前后大鼠的行为学变化;通过免疫组织化学法观察大鼠点燃成功后EGb 7 d或EGb 14 d治疗对海马区细胞增殖情况的影响;同时通过标记5-溴脱氧尿核苷(BrdU)、神经元核蛋白( NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)观察神经干细胞(NSCs)分化情况.结果 1.Y-型电迷宫测试:EGb治疗前,PTZ各点燃大鼠与NS组相比,达到学会标准所需的电击次数明显增多(P＜0.01);EGb(300mg·kg-1·d-1)治疗7d和14 d大鼠达到学会标准的次数均明显少于PIZ点燃对照组(Pa＜0.01).2.NSCs增殖情况:选择Nestin阳性细胞表达作为判断NSCs增殖的指标,PTZ点燃对照组Nestin阳性细胞表达量较NS组明显增多(P＜0.01);EGb 7 d组和EGb 14 d组Nestin阳性细胞表达量均较相对应PTZ点燃对照组表达进一步增多(Pa＜0.05),随着疗程增加,EGb 14 d组Nestin阳性细胞数量要低于EGb7 d组(P＜0.05),增殖的Nestin阳性细胞均主要分布于海马CA1 、CA3区颗粒细胞层和颗粒细胞下层.3.EGb治疗后BrdU/NeuN阳性细胞数明显多于EGb治疗前,且EGb 14 d组BrdU/NeuN阳性细胞表达百分比又高于EGb 7 d组,差异均有统计学意义(Pa＜0.05),EGb治疗组有4％～5％共表达GFAP.结论 EGb可诱导NSCs增殖、分化,且NSCs的这种改变与改善大鼠学习记忆有关.     

槲皮素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经再生的影响

目的探讨槲皮素对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的神经保护机制。方法 48只7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组、HIBD组、Que组,每组16只。HIBD组和Que组经右颈总动脉结扎并缺氧制作HIBD模型,假手术组仅分离右颈总动脉。Que组在造模后即刻予腹腔注射槲皮素(40 mg/kg),每日1次,连续7 d;假手术组和HIBD组在同一时间点予等量生理盐水腹腔注射。各组大鼠在末次给药1 h后行神经功能评分,28日龄行Morris水迷宫检测空间学习记忆能力。水迷宫实验结束后断头取脑,HE染色观察海马病理学改变,免疫组织化学法检测海马CA1区脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长相关蛋白(GAP-43)表达情况。结果三组大鼠的神经功能缺陷评分和学习记忆能力差异均有统计学意义(P0.01),HIBD组神经功能缺陷评分最高,学习记忆能力最差。病理检查显示,假手术组大鼠海马神经元结构完整;HIBD组海马结构疏松紊乱,且出现神经元丢失;Que组与HIBD组比较,结构疏松紊乱较轻,神经元数量有所增多。三组大鼠海马CA1区BDNF和GAP-43阳性表达差异均有统计学意义(P0.01),HIBD组均低于Que组和假手术组,Que组低于假手术组,差异有统计学意义(P0.01)。结论槲皮素可以通过上调海马CA1区BDNF和GAP-43表达,促进神经再生,改善HIBD新生大鼠的远期学习记忆能力,发挥脑保护作用。     

Calpain抑制剂-3对新生大鼠脑缺氧缺血后海马CA1区Caspase-3表达和神经元凋亡的影响

目的：钙依赖中性蛋白酶Calpain的活化可引起神经元凋亡,其抑制剂3(MDL28170)对成年动物脑缺血有治疗作用,但尚不清楚MDL28170对新生动物缺氧缺血性脑损伤(HIBD)是否也有治疗作用。本研究观察了MDL28170对新生大鼠HIBD后海马CA1区Caspase3表达及细胞凋亡的影响,探讨其神经保护作用机制。方法：将7日龄新生SD大鼠随机分为HIBD模型组(n=40)、干预组(n=40)及对照组(n=8),干预组在HI后0h、2h、4h予腹腔注射MDL2817050mg/kg,模型组和对照组同时予腹腔注射生理盐水。干预组和模型组大鼠在HI后6h、12h、24h、48h、72h各处死8只,用免疫组化染色和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分别检测海马CA1区Caspase3的表达和神经凋亡。结果：HIBD组大鼠损伤侧海马CA1区Caspase3阳性细胞在HI后6h时较对照组增多(13.4±3.5/HPvs2.6±0.6/HP,P=0.028),于48h(27.1±4.1/HP)达到高峰,72h仍高于对照组(22.6±4.8/HP,P<0.001);TUNEL阳性细胞于HI后6h开始增多,12h时与对照组比较差别有显著性(25.0±1.7/HPvs2.3±1.5/HP,P<0.001),48h(67.8±2.6/HP)到达高峰,72h仍处于较高水平(44.3±6.8/HP)。MDL28170干预可明显减少Caspase3及TUNEL阳性细胞数量,与模型组比较48h内差异有显著性,72h以后作用不明显。结论：MDL28170可通过抑制海马CA1区Caspase3的表达,减少脑细胞凋亡,起到脑保护作用。     

枸橼酸咖啡因对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经细胞增生与凋亡及长期学习能力的影响

目的研究枸橼酸咖啡因(CC)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经细胞增生与凋亡及长期学习记忆能力的影响。方法 7日龄SD新生大鼠随机分为假手术组、HIBD组、CC组,每组16只;HIBD组及CC组经左颈总动脉结扎并缺氧制作HIBD模型,CC组在HI前、HI后0 min、24 h、48 h、72 h给予CC 20 mg/kg腹腔注射,假手术组和HIBD组分别在同一时间点给予等量生理盐水腹腔注射;同时从生后10日龄起腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)标记新生细胞,剂量50 mg/kg,每12 h 1次,共5次。12日龄时每组随机选取8只大鼠处死,免疫组织化学染色检测海马齿状回颗粒下层5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)和海马CA1区活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(活化Caspase-3)的表达情况,TUNEL法测定海马CA1区神经细胞凋亡情况,其余各组大鼠28日龄时行Y迷宫学习和记忆能力测试。结果三组新生大鼠脑组织中均可见Brd U阳性细胞,差异有统计学意义(F=101.38,P0.01);HIBD组、CC组Brd U阳性细胞数均较假手术组增多,差异有统计学意义(P0.05)。三组新生大鼠海马CA1区均可见活化Caspase-3阳性细胞,差异有统计学意义(F=379.77,P0.01);CC组活化Caspase-3阳性细胞较HIBD组显著减少,但仍多于假手术组,差异有统计学意义(P0.05)。三组新生大鼠海马CA1区中均可见TUNEL阳性细胞,差异有统计学意义(F=505.92,P0.01),以HIBD组最多,假手术组最少,两两比较差异均有统计学意义(P0.05)。Y迷宫实验结果,各组大鼠达标所需训练总次数的差异有统计学意义(F=32.05,P0.01),以HIBD组所需训练次数最多。24 h后正确反应率在三组间的差异也有统计学意义(F=24.99,P0.01),以HIBD组大鼠正确反应率最低。结论枸橼酸咖啡因可以改善HIBD大鼠长期学习记忆力,其机制可能与通过减少缺氧缺血后神经细胞的凋亡有关。     

脑源性神经营养因子及酪氨酸激酶BmRNA在胆红素神经损伤豚鼠皮质及海马表达变化的实验研究

目的探讨新生豚鼠胆红素脑神经损伤时脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸激酶B的mRNA(TrkB mRNA)在大脑皮质及海马表达特点。方法取生后2～5 d的豚鼠60只,随机分为3组,每组各20只。T1组腹腔注射晶体胆红素100μg/g;T2组腹腔注射胆红素200μg/g;C组为对照组,腹腔注射生理盐水。分别在注射后4、8 h各处死10只。作脑组织切片,电镜、光镜观察病理改变;并采用免疫组化、原位杂交和图像分析,观察不同时间点BDNF、TrkB mRNA在皮质及海马表达变化。结果胆红素脑神经元损伤模型成功建立。在腹腔注射胆红素4 h时,皮质及海马的BDNF阳性细胞数降低,而TrkB mRNA阳性细胞数增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。随时间延长至8 h时,皮质及海马的BDNF和TrkB mRNA阳性细胞数均较4 h时增加,差异有统计学意义(P均<0.05)。T2组与T1组比较,皮质和海马的BDNF和TrkB mRNA的阳性细胞数变化更明显。结论胆红素脑神经元损伤时,皮质和海马的BDNF、TrkB mRNA表达变化可能在抑制神经元凋亡和神经元修复中发挥重要作用,有利于减轻神经元损伤,以及神经元的修复和再生,这可能是胆红素脑神经元损伤时机体的自我保护机制之一。     

缺氧缺血后新生大鼠海马组织CA1区脑源性促红细胞生成素的表达

目的观察缺氧缺血（HI）后新生大鼠海马CA1区脑源性促红细胞生成素（EPO）的表达,探讨HI后新生大鼠内源性因素激发海马神经发生上调的可能机制。方法选用144只7日龄SD大鼠,随机分为4组：正常对照组（C组）、单纯缺氧组（H组）、单纯缺血组（I组）、缺氧缺血组（HI组）,每组又分为1h、6h、16h、1d、3d和7d共6个时间点。分别对其行HE染色和EPO免疫组织化学法CA1区脑源性EPO表达。采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果C组各时间点CA1区EPO表达无明显差异（F=1.185P〉0.1）,其余各组各时间点差异显著[F（H组）=33.57,F（I组）=133.6,F（HI组）=69.75Pa〈0.001];HI后16h,海马CA1区脑源性EPO表达达到较高水平,与该组总体比较差异显著（t=13.08P〈0.001）,以后随时间延长逐渐下调;H组、I组、HI组与C组比较差异均有显著意义（q=32.06,23.84,47.12Pa〈0.001）。结论脑源性EPO表达在新生大鼠HI后增加,受低氧影响最明显;EPO表达高峰在缺氧早期,推测低氧、EPO早期高表达可能是参与海马神经发生的内源性因素之一。     

早期环境对大鼠脑源性神经营养因子及其受体表达和脑发育的影响

目的：通过研究早期环境对大鼠学习记忆能力及脑源性神经营养因子（BDNF）及其受体-酪氨酸激酶受体B（TrkB）表达的影响,探讨早期环境对发育期大鼠脑发育的影响及可能调控机制。方法：45只新生Sprague-Dawlely（SD）大鼠随机分为丰富环境组、隔离环境组及对照组,每组15只。丰富环境组处于丰富环境中饲养,隔离环境组大鼠在单调环境下成长,对照组大鼠在普通环境中常规饲养。大鼠生后28~29 d采用“Y”臂迷宫试验检测学习记忆功能。海马CA3区与额叶皮质区神经元数量及BDNF、TrkB表达水平分别采用尼氏染色、免疫组织化学染色方法进行检测。结果：与隔离环境组及对照组相比,丰富环境组大鼠达到学会标准所需训练的次数减少（P＜0.01）,记忆保持百分率提高（P＜0.01）;与对照组相比,隔离环境组大鼠达到学会标准所需训练的次数增加（P<0.01）,记忆保持百分率下降（P<0.01）。尼氏染色结果显示,3组间额叶皮质区及海马CA3区神经元数量以丰富环境组最高,对照组次之,隔离环境组最低（P<0.01）;免疫组织化学染色结果显示,丰富环境组大鼠海马CA3区及额叶皮质区BDNF及TrKB表达水平高于对照组和隔离环境组（P<0.01）,且隔离环境组BDNF及TrKB表达水平低于对照组（P<0.01）。结论：早期环境可通过影响海马与额叶BDNF及其受体TrkB表达,而影响发育期大鼠远期脑发育及脑功能。     

雄激素对新生大鼠缺氧缺血脑损伤的保护作用及机制研究(英文)

目的：雄激素对缺氧缺血后脑损伤有神经保护作用,但其作用机制尚不完全清楚。该研究探讨雄激素对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用及其可能的机制。方法：64只7日龄SD大鼠随机分为假手术组、HIBD对照组和雄激素干预组。通过结扎左颈总动脉和吸入8%氧气和92%氮气的混合气体制备新生鼠HIBD模型。假手术组仅做颈正中切口,游离左颈总动脉,不结扎,不行低氧处理。雄激素干预组在模型制成后即刻注射丙酸睾丸酮(25mg/kg)。缺氧缺血(HI)后6h、24h、72h、7d取脑组织制作石蜡切片,用免疫组化法观察Bcl-2和Bax蛋白在各组大鼠皮质和海马表达的动态变化。HI后6h、24h、48h断头取脑制作脑匀浆,测定SOD活性和MDA含量。结果：假手术组大鼠左脑的皮质及海马可见少量Bcl-2蛋白和Bax蛋白免疫阳性细胞表达,与HIBD对照组和雄激素干预组比较差异均有显著性意义(P<0.01)。雄激素干预组HI后6h、24h、72hBcl-2蛋白在皮层和海马的表达水平明显高于HIBD对照组(P<0.05或0.01)。雄激素干预组Bax蛋白的表达水平在HI后24h显著低于HIBD对照组(P<0.05),其他时间点两组Bax蛋白的表达无明显差别。与假手术组比较,HIBD对照组HI后6h大鼠脑组织中SOD活性明显降低,MDA含量明显增加(P<0.05)。HIBD对照组HI后24hSOD活性降至最低值,MDA含量升至最高。雄激素干预增加了SOD活性,雄激素干预组HI后6h、24h、48hSOD活性均明显高于HIBD对照组,差异有显著性意义(P<0.05或0.01)。雄激素干预亦导致了脑组织中MDA含量降低,雄激素干预组HI后6h、24hMDA含量均明显低于HIBD对照组,差异有显著性意义(分别P<0.05、P<0.01)。结论：雄激素发挥脑保护作用可能通过上调Bcl-2蛋白、下调Bax蛋白表达以及通过减少抗氧化剂的消耗和抑制氧自由基的生成,从而减轻缺氧缺血后神经细胞的损伤。