相关生物因子对体外培养关节软骨细胞促增殖作用的比较研究

目的　筛选关节软骨组织工程种子细胞优化获取的高效促增殖剂。　方法　采用培养细胞3H -胸腺嘧啶脱氧核苷 (3H -TdR)掺入实验、四甲基偶氮唑蓝 (MTT)代谢检测及Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)分析方法 ,比较一定浓度维生素C(vitaminC ,VC) +骨形态发生蛋白 2 (bonemorphogeneticprotein 2 ,BMP2 )、类胰岛素生长因子 1(insulin -likegrowthfac tor1,IGF1 ) (体积分数为 2 %的血清培养时 )及碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)、转化生长因子 - β1 (transforminggrowthfactor- β1 ,TGF - β1 ) (体积分数为 10 %的血清培养时 )对适宜密度接种、体外单层传代培养兔关节软骨细胞的促增殖作用。　结果　适宜浓度VC +BMP2 、IGF1 及bFGF、TGF - β1 均可促进体外传代培养关节软骨细胞的分裂增殖。增殖后的培养细胞仍具有其特异性表型表达 ,而IGF1 培养的细胞则有向成骨样细胞分化的趋向。其综合效能依次为 :VC +BMP2 >bFGF >TGF - β1 >IGF1 。　结论　一定浓度VC +BMP2 及bFGF对适宜密度接种、体外单层传代培养关节软骨细胞具有显著的促增殖作用 ;其中VC +BMP2 具有经济、高效的优点。     

胰岛素样生长因子-Ⅰ对软骨细胞移植修复关节软骨缺损的作用

目的：观察胰岛素样生长因子－Ⅰ（insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)对关节软骨缺损修复的作用。方法：采用组织工程方法制备骨基质明胶（BMG）－软骨细胞移植物。40只4－5个月龄的新西兰兔均分为软骨细胞实验组及软骨细胞对照组,BMG对照组,空白对照组。实验组兔膝关节注射IGF－Ⅰ,各对照组均注射等渗盐水。术后行大体,组织学观察及免疫组化检测。结果：实验组软骨细胞生长较快,术后24周修复的软骨组织Safranin-O染色,Ⅱ型胶原染色与正常关节软骨一致,软骨细胞呈柱状排列,软骨细胞对照组术后24周修复软骨组织Safranin-O染色较淡,部分软骨细胞呈柱状排列,BMG,空白对照组未修复。结论：IGF－Ⅰ能促进关节软骨缺损修复。     

脂多糖对复合培养的肺微血管内皮细胞和肺动脉平滑肌细胞生长周期的影响

以脂多糖（LPS）处理复合培养的大鼠肺微血管内皮细胞（LMVEC）和肺动脉平滑肌细胞（PASMC），利用流式细胞仪检测LMVEC和PASMC细胞周期的变化。结果发现，单独培养和复合培养时，LPS均能使G1期细胞减少，S G2/M期细胞增多；LPS处理16h后，复合培养组LMVEC和PASMC较单独培养组G1期细胞增多，S G2/M细胞数减少；LPS可使单独培养的LMVEC S期细胞增多。说明LPS可促进LMVEC和PASMC分裂、增殖，二者复合培养可减轻LPS引起的LMVEC和PASMC增殖作用；LMVEC和PASMC在细胞增殖方面存在着复杂的调节关系。     

颞下颌关节髁突软骨中生长因子的研究进展

生长因子是一组具有促进细胞生长、增殖和合成作用的蛋白多肽。软骨组织中含有多种生长因子及其受体,它们共同作用于软骨细胞。颞下颌关节髁突软骨属于纤维软骨,它介导了髁突的生长发育及适应性改建。髁突软骨细胞同样受到多种生长因子的调控,主要有：胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor,IGF）、转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF—β）、     

生长因子对骨生长及愈合的作用

生长因子在参与骨组织的生长和愈合中具有重要的作用。大量体内外实验和临床实践证明生长因子不仅参与增生阶段骨组织的增殖和基质的形成,而且还对骨组织的愈合与改建有重要的影响。l胰岛素样生长因子胰岛素样生长因子（IGF）系统由2个多肽,2类受体和至少6种结合蛋白组成,IGF多肽由IGF－l和IGF－l组成,H者分别由70和67个氨基酸组成,分子量皆在75kD左右［’］。骨组织中IGF含量很高,约为10mol／kg,主要由软骨细胞与成骨细胞分泌。在胚胎时期,除哨齿类动物外各类动物骨中IGF－！的含量告高于IGF－l,人骨基质中IGF－1约为I…     

转化生长因子抑制视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

 目的探讨转化生长因子(TGF-β1)对人视网膜色素上皮((hRPE)细胞增殖的抑制作用.方法用不同浓度的TGF-β1(0.01 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml)处理hRPE细胞24 h后,用MTT和氚-标记脱氧核苷(3H-TdR)方法检测TGFF-β1对hRPE细胞和DNA合成的抑制率的影响,用流式细胞仪检测TGF-β1对hRPE细胞周期的影响.结果不同浓度TGF-β1处理hRPE细胞24 h后细胞和DNA合成的抑制率随TGF-β1浓度的增加而增加,TGF-β1将细胞阻滞在G1期.结论TGF-β1能抑制hRPE细胞的增殖且呈剂量依赖性,TGF-β1是通过将hRPE细胞阻止在G1期而发挥抑制作用的.     

微流控芯片上胰岛素样生长因子1和碱性成纤维细胞生长因子对兔关节软骨细胞增殖的影响

目的 在微流控芯片平台上探索三维培养环境下胰岛素样生长因子1(IGF-1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对软骨细胞体外增殖的影响.方法 微流控芯片上,分别在IGF-1、bFGF以及二者组合浓度梯度下三维培养兔关节软骨细胞,2周后计算软骨细胞增殖率并与传统的96孔板培养结果进行比较.结果 IGF-1在57.14ng/ml产生最大增殖效应,平均倍增2.38倍；bFGF在5.72ng/ml产生最大增殖效应,平均倍增3.85倍；85.71ng/ml IGF-1+1.43ng/ml bFGF的组合可使软骨细胞产生最大的增殖效应,平均倍增4.76倍.微流控芯片与96孔板传统培养的软骨细胞增殖率差异无统计学意义.结论 一定浓度组合的IGF-1和bFGF可协同产生最大的增殖效应；微流控芯片技术可用于软骨组织工程领域,具有广阔的应用前景.     

碱性成纤维细胞生长因子缓释微球对成骨细胞作用的实验研究

目的 旨在探讨碱性成纤维细胞生长因了(bFGF)缓释做球生物活性保存情况及其对于成骨细胞的作用。方法 将bFGF、bFGF-聚乳酸-聚乙二醇共聚物(PELA)做球和bFGF-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)微球加入成骨细胞培养液中．用细胞计数法、四甲基偶氮唑盐微量反应比色法(MTT法)、流式细胞仪观察细胞增殖情况，并检测成骨细胞上清液中骨钙素(BGP)含量。结果 培养1d后．四组细胞计数、吸光度(A)值差异均无显著性意义；4，6d时PLGA做球组细胞计数和A值明显优于其余三组；培养6．8d后．bFGF组值仍然高丁PELA做球组，但差异无显著性意义。流式细胞仪检测显示，培养2b后，bFGF组的G2／M s期百分数最高，4，8d后PLGA微球组G2／M S期百分数最高。成骨细胞上清液中BGP含量．PLGA做球组最高，其次为PELA做球组。结论 bFGF—PELA微球效果不佳．制备工艺需要改进；bFGF-PLGA微球通过较长时间持续释放活性bFGF，明显促进成骨细胞增殖和分化     

5.21Gy软X射线局部照射伤口后组织细胞周期时相变化的研究

目的 研究软X射线局部照射后大鼠伤口组织细胞周期的时相变化。方法 PI染色，流式细胞术（FCM）检测细胞周期；BrdU掺入后采用SABC染色检测细胞增殖。结果 在伤后3－9d，对照侧G0／G1期细胞逐渐减少，S期细胞增加，9d时达到峰值；G2／M期细胞增加，15d时达到峰值。照射侧G0／G1期细胞增加，S期和G2／M期细胞减少。在伤后12－22d，照射侧S期细胞逐渐增加，22d时达到峰值，大量的细胞停留在S期。在整个愈合过程中，G2／M期细胞百分数均低于对照侧。BrdU掺入SABC染色阳性细胞主要为成纤维母细胞、血管内皮细胞以及平滑肌细胞。结论 5．21Gy软X射线局部照射后，细胞发生G1期阻滞和S期延长，G2／M转换障碍，细胞分裂增殖受抑，创伤愈合延迟与细胞周期的紊乱有关，G1期阻滞和S期延长越严重，愈合延长时间越长。     

成纤维细胞生长因子对关节软骨细胞转化生长因子β1作用的免？…

观察成纤维细胞生长因子对培养兔关节软骨细胞转化生长因子β１的表达。方法培养１月龄新兰兔关节软骨细胞，在每次换液时加入成纤维细胞生长因子１００ｎｇ／ｍｌ，铺灌后收集细胞，作关节软骨细胞转化生长因子β１常规及电镜免疫组织化学观察。     

＋GZ重复暴露对大鼠脑组织神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子基因表达的影响

目的了解＋ＧＺ重复暴露后大鼠脑组织神经生长因子（ＮＧＦ）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达的变化,探讨两种生长因子在＋ＧＺ暴露所致脑损伤中的作用和意义。方法２４只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成对照组、＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ四组,每组６只。对照组大鼠Ｇ值为＋１ＧＺ,实验组大鼠在动物离心机上经历了３次＋１０ＧＺ／３ｍｉｎ（两次间间隔３０ｍｉｎ）作用。分别于暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ处死大鼠取脑,提取总ＲＮＡ,用半定量反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测方法检测＋ＧＺ重复暴露后大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达水平。结果＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ和６ｈ,大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ明显升高,２４ｈ降至正常。结论＋ＧＺ重复暴露可诱导大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ的表达增加,这两种生长因子的表达增加可能对神经细胞具有保护和损伤修复作用,是脑的自身保护机制之一。     

The effect of microRNA-21 on proliferation and matrix synthesis of chondrocytes embedded in atelocollagen gel

The objective of this study was to investigate the effect of microRNA-21 (miR-21) on the proliferation and matrix synthesis of chondrocytes embedded in atelocollagen gel. Articular cartilage was harvested aseptically from the knee and hip joints of rats. In the experimental group, double-stranded miR-21 was transfected into the chondrocytes, and in the control group, scrambled siRNA was used. After that, chondrocytes were cultured in atelocollagen gel for 3 weeks. At 1, 2, and 3 weeks after transfection, the cell numbers were counted, and the expression levels of Col2a1 and aggrecan were measured by real-time PCR. Histological analysis by toluidine blue staining was performed at 3 weeks. The cell number in the experimental group rapidly increased compared to the control group. The expression levels of Col2a1 and aggrecan in the experimental group were higher than in the control. Histological analysis revealed that many more cells with a metachromatic stain were present in the experimental group than in the control. This study demonstrated that miR-21 promotes high proliferation and matrix synthesis of chondrocytes embedded in atelocollagen gel.     

模拟失重环境碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨在模拟失重环境下碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)增殖的影响. 方法 试验分对照组、模拟失重组和模拟失重加hPDLF组3组.采用酶消化组织块培养法分离、培养原代hPDLF.应用噻唑蓝比色法,检测模拟失重条件下,不同时间和不同浓度的bFGF对hPDLF增殖的影响. 结果 在模拟失重12h、24h组hPDLF增殖较对照组没有显著差别,在48h、72h模拟失重组较对照组显著降低,差异有统计学意义(t=7.303、8.668,P<0.01).模拟失重48 h时bFGF浓度在50～100μg/L范围内加bFGF组hPDLF增殖高于模拟失重组,差异有统计学意义(P<0.05),而bFGF浓度为1～10μg/L时,两组没有显著差别. 结论 模拟失重在48 h、72 h对hPDLF的增殖有抑制作用,模拟失重环境bFGF浓度在50～100μg/L范围内具有促进hPDLF增殖的效应.     

Signalling cascades in mechanotransduction: cell–matrix interactions and mechanical loading

Mechanical loading of articular cartilage stimulates the metabolism of resident chondrocytes and induces the synthesis of molecules to maintain the integrity of the cartilage. Mechanical signals modulate biochemical activity and changes in cell behavior through mechanotransduction. Compression of cartilage results in complex changes within the tissue including matrix and cell deformation, hydrostatic and osmotic pressure, fluid flow, altered matrix water content, ion concentration and fixed charge density. These changes are detected by mechanoreceptors on the cell surface, which include mechanosensitive ion channels and integrins that on activation initiate intracellular signalling cascades leading to tissue remodelling. Excessive mechanical loading also influences chondrocyte metabolism but unlike physiological stimulation leads to a quantitative imbalance between anabolic and catabolic activity resulting in depletion of matrix components. In this article we focus on the role of mechanical signalling in the maintenance of articular cartilage, and discuss how alterations in normal signalling can lead to pathology.     

Perivascular release of insulin-like growth factor-1 limits neointima formation in the balloon-injured artery by redirecting smooth muscle cell migration

PURPOSE: Insulin-like growth factor-1 (IGF-1) is a potent chemoattractant to vascular smooth muscle cells (SMCs). The authors hypothesize that perivascular release of IGF-1 in vivo can direct migration of SMCs away from the lumen and reduce neointima formation in a rabbit model of arterial balloon injury. MATERIALS AND METHODS: Balloon angioplasty of the common femoral arteries was performed in adult male New Zealand White rabbits (n = 8 per treatment group) and controlled release microspheres delivering either IGF-1 or blank control treatment were implanted perivascularly at the angioplasty site prior to surgical closure. At 7 days, five arteries per group were harvested and cross-sections were subjected to anti-PCNA (proliferating cell nuclear antigen) immunostaining to determine the number and distribution of proliferating SMCs. At 28 days, the remaining three arteries per group were harvested and sections were evaluated for intima-to-media (I/M) ratios by means of VVG-Masson staining. One-way analysis of variance with Fisher protected least significant difference post hoc testing was used to determine statistical significance at P < .05. RESULTS: At 7 days, PCNA(+) medial SMCs assumed a significantly more peripheral (ie, further from lumen) distribution in the vessel wall with use of perivascular IGF-1 than with use of blank treatment (P < .05). Overall SMC proliferation was not significantly different, thus the change in distribution was likely due to directionally altered SMC migration. At 28 days, perivascular IGF-1 significantly decreased I/M ratios by 44% relative to control treatment (P < .05). CONCLUSIONS: Perivascular release of IGF-1 can directionally guide SMC migration away from the lumen and reduce neointima in the balloon-injured artery. This novel strategy might have implications in the development of antirestenosis therapies.     

血小板衍生生长因子C对体外培养的人卵巢透明细胞癌细胞的增殖和趋化作用

 目的 观察血小板衍生生长因子-C(platelet-derived growth factor-C,PDGF-C)对体外培养的人卵巢透明细胞癌(ovarian clear cell carcinoma,OCCC)ES-2细胞的增殖和趋化作用。方法 体外培养ES-2细胞,添加不同浓度的PDGF-C进行干预,应用CCK8试剂盒法评价细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,利用Transwell细胞迁移实验、细胞划痕实验测定细胞迁移能力。结果 与未加PDGF-C的对照组相比,PDGF-C能明显刺激ES-2细胞的增殖,在第4天增殖达高峰,PDGF-C促增殖最佳作用浓度是20 μg/L;经不同浓度PDGF-C的刺激,处于细胞周期G1期的ES-2细胞比例较对照组明显降低(P<0.05),处于S期的ES-2细胞比例显著升高(P<0.05),而处于G₂+M期的细胞比例则无明显变化(P＞0.05)。同时,PDGF-C提高了ES-2细胞的迁移能力。结论 PDGF-C可促进体外培养的ES-2细胞的增殖、迁移能力。     

微丝在碱性成纤维细胞生长因子调节伤口愈合中的作用

目的 探讨微丝在碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）调节伤口愈合中的作用。方法 采用免疫荧光染色、显微荧光光度计及＾３Ｈ－ＴｄＲ及参入法研究ｂＦＧＦ诱导的成纤维细胞微丝骨架的变化,观察用细胞松弛素Ｂ破坏微丝后,ｂＦＧＦ对细胞运动及细胞增殖的影响。结果 ｂＦＧＦ使成纤维细胞微丝骨架发生有序的变化;使Ｆ－肌动蛋白（Ｆ－ａｃｔｉｎ）含量增高,并呈一定的时间－剂量依赖关系．用细胞松弛素Ｂ破坏微丝,可明显抑制     

NGF对体外培养人血管内皮细胞细胞周期和PCNA表达的影响

 目的研究神经生长因子(Nerve growthfactor,NGF)对人血管内皮细胞的细胞周期和对增殖细胞核抗原(Prolifer-ating cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响.方法将NGF作用于体外培养的HUEVC 304细胞,利用流式细胞仪检测其细胞周期、DNA相对含量的变化,利用免疫组织化学的方法检测对PCNA表达的改变.结果NGF作用组出现C0～G1期细胞数量明显减少,S期细胞、G2～M期细胞明显增加,DNA相对含量无明显变化,PCNA表达明显增加(P＜0.05).结论NGF能明显促进HEVC增殖.     

外源性胰岛素样生长因子-2促进骨骼肌损伤修复的实验研究

目的 :研究局部使用外源性胰岛素样生长因子 2 (Insulin-likeGrowthFactor-2 ,IGF -2 )对骨骼肌钝性打击伤后愈合速度、质量和对内源性IGF -1、IGF -2的mRNA表达的影响。方法 :对大鼠右下肢腓肠肌内侧面中段实施钝性打击伤 ,分别于损伤局部注射外源性IGF -2 (实验组 )及生理盐水(对照组) ,观察骨骼肌损伤修复情况。结果 :伤后实验组比对照组更早形成基底板层保护膜 ,更早更多地激活成肌细胞、生成肌丝、形成肌管、融合成肌纤维 ,愈合质量也较好。实验组的IGF -1mRNA含量在伤后 1、2、3、4天升高 ,IGF -2的mRNA含量在伤后 1、2、3、4、6、9、1 4天均升高 ;对照组的IGF -1mRNA含量在伤后 2、3、4、6、9、1 4天升高 ,IGF -2的mRNA含量在伤后 3、4、6、9天升高。结论 :局部注射外源性胰岛素样生长因子 -2可以使内源性的IGFmRNA表达提早 ;可以刺激成肌细胞增生 ,促进肌管形成 ,加速肌管融合成肌纤维 ,加速骨骼肌创伤后修复过程 ,改善愈合质量