脑缺血再灌注大脑皮质微血管生成及胚胎肝激酶1表达与年龄的关系

目的：从Flk-1因子表达变化揭示老年脑缺血/再灌注血管再生机制。方法：SD雄性青年和老龄大鼠,随机分为青年假手术组、青年模型组、老龄假手术组、老龄模型组,模型组分为I 3h、I/R 1d、3d、6d、12d时间点。采用线栓法制备局灶性脑缺血/再灌注模型,运用免疫组化和原位杂交等技术测定脑微血管密度（MVD）、微血管场面积、Flk-1蛋白及mRNA表达。结果：老龄假手术组MVD较青年假手术增高（P<0.01）,老龄模型组I/R 1d、3d、6d、12d MVD、血管场面积较青年模型组降低（P<0.05,P<0.01）。青年模型组MVD于I 3h开始增加,I/R 6d达峰值,持续至I/R 12d;老龄模型组MVD自I 3h持续下降至I/R 12d。青年模型组I/R 1d血管场面积明显增加,I/R 1d～6d逐渐下降,至I/R 12d又明显增高;老龄模型组血管场面积于I/R 1d达峰值,后逐步下降。老龄假手术组Flk-1表达较青年假手术组增强（P<0.01）,老龄模型组I 3h Flk-1表达较青年模型组增强（P<0.01）,I/R 3d、6d、12d Flk-1表达较青年模型组减弱（P<0.01）。老龄模型组Flk-1表达逐步增强至I/R 1d达峰值,此后表达迅速减弱。青年模型组Flk-1表达峰值出现较老龄模型组延迟,I/R 3d表达最强,至I/R 12d表达仍能维持一个较高水平。老龄模型组I/R 3d、6d、12d Flk-1 mRNA表达水平较青年模型组降低（P<0.01）。青年和老龄模型组Flk-1 mRNA均随再灌注时间延长而呈现出表达逐步增强的趋势,均于I/R 1d达到峰值。老龄大鼠Flk-1 mRNA表达于I/R 1d后迅速减弱,而青年大鼠至I/R 12d仍可维持一个相对高的表达水平。结论：老年脑缺血/再灌注损伤后脑微血管生成能力明显减弱,其机制可能与促血管生长因子Flk-1的蛋白及其mRNA表达减弱有关。Flk-1表达在血管生成中具有重要作用,增龄因素可能是导致Flk-1因子表达减弱的主要原因之一。     

老龄大鼠脑缺血再灌注血脑屏障损伤的变化及意义

目的研究老龄大鼠脑缺血再灌注（I／R）血脑屏障（BBB）损伤特点。方法采用大脑中动脉栓塞法复制局灶性脑缺血模型，随机分组，观察脑组织含水量、病理变化、免疫球蛋白（IgG）。结果随着再灌注时间的延长，BBB损伤逐渐加重，含水量增加和IgG漏出以I／R24h、3d显著；模型组含水量（I／R 12h～6d）较假手术组升高；青年模型（I／R12h～6d）和老龄模型（I／R 6h～6d）IgG漏出分别较青年和老龄脑缺血3h组增加；老龄模型组（I／R 12h～I／R6d）IgG的漏出高于同时间青年模型组。结论脑水肿和BBB损伤随着再灌注时间的延长而加重，IgG漏出老年较青年明显，血脑屏障的增龄变化可能是其机制之一。     

CpG-ODN对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 探讨CpG-ODN对大鼠脑缺血/再灌注（I/R）损伤的保护作用及其机制。方法 将54只大鼠随机分为假手术组、脑I/R模型组、CpG-ODN组,每组18只。采用大脑中动脉线栓法构建大鼠脑I/R模型。CpG-ODN组造模前1 h腹腔注射CpG-ODN（10 μg/25 g）,脑I/R模型组注射等量生理盐水。再灌注12 h采用Longa 5分评分法评估神经功能。再灌注24 h采用TTC染色测定脑梗死体积,HE染色观察组织结构,TUNEL染色分析细胞凋亡,PCR检测酪氨酸激酶（JAK）、信号转导和转录激活因子（STAT）mRNA表达水平,免疫印迹法分析Caspase3、Caspase7、JAK、p-JAK、STAT和p-STAT蛋白水平。结果 与假手术组比较,脑I/R模型组神经功能障碍严重,脑梗死体积显著增大,脑组织发生水肿、坏死等病变;与脑I/R模型组比较,CpG-ODN组明显改善。与假手术组比较,脑I/R模型组脑组织细胞凋亡率和Caspase3、Caspase7蛋白水平明显升高（P<0.05）,脑I/R模型组JAK、STAT mRNA水平和蛋白磷酸化程度显著上调（P<0.05）;与脑I/R模型组比较,CpG-ODN组细胞凋亡率和Caspase3、Caspase7蛋白水平明显降低（P<0.05）,JAK、STAT mRNA和蛋白磷酸化程度均明显下降（P<0.05）。结论 CpG-ODN能有效保护大鼠脑I/R损伤,其机制可能与影响JAK、STAT蛋白磷酸化抑制细胞凋亡有关。     

银丹心脑通对脑缺血再灌注大鼠海马区神经细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的 明确银丹心脑通对脑缺血再灌注时神经细胞凋亡的保护作用,探索其治疗缺血性脑卒中的分子作用机制. 方法 将40只SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、阳性对照组(尼莫地平组)、银丹心脑通组.尼莫地平组及银丹心脑通组预先连续灌胃给药7d,假手术组和模型组每日灌服相当量的蒸馏水,第8大制备大鼠大脑中动脉阻塞模型.脑缺血再灌注24 h后应用TUNEL法检测各组大鼠海马CA1区凋亡阳性神经细胞数,应用免疫组化染色测定各组大鼠脑组织中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达. 结果 模型组大鼠均能见到较多的凋亡阳性细胞数及Caspase-3阳性细胞数,与假手术组比较差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,银丹心脑通组、尼莫地平组能明显减小凋亡阳性细胞数及Caspase-3阳性细胞数,差异有统计学意义(P＜0.05);银丹心脑通组与尼莫地平组在凋亡阳性神经细胞数及Caspase-3阳性细胞数上比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 银丹心脑通对脑缺血再灌注损伤有一定保护作用,能够减少脑缺血再灌注大鼠神经细胞的凋亡,其作用机制可能与减少脑组织中Caspase-3的表达有关.     

重组人粒细胞集落刺激因子对糖尿病脑缺血大鼠神经细胞凋亡及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对糖尿病脑缺血大鼠神经细胞凋亡及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法制备糖尿病大鼠大脑中动脉栓塞模型;对模型鼠采用rhG-CSF50μg/(kg.d)皮下注射;分别于注射后7d、14d和21d采用神经功能评分(NSS)量表进行评分;对脑组织切片予以TUNEL染色,计数脑缺血周边区神经细胞凋亡数;免疫组化法检测脑组织VEGF表达。结果与对照组比较,rhG-CSF组各时间点NSS明显降低(均P<0.01);脑缺血周边区的TUNEL阳性细胞数明显减少(均P<0.01);VEGF蛋白免疫阳性细胞明显增多(均P<0.01)。结论rhG-CSF通过增加糖尿病脑组织缺血后VEGF蛋白的表达,减轻神经细胞的凋亡而发挥脑保护作用。     

电刺激小脑顶核对成年大鼠局灶脑缺血再灌注后脑内神经营养因子bFGF mRNA的影响

目的 观察对局灶脑缺血再灌注大鼠进行电刺激小脑顶核(FNS)后,侧脑室和海马神经营养因子bFGF mRNA的动态变化.方法 将雄性Wistar大鼠随机分为正常组(NC组)、假手术组(SC组)、模型组(I/R组)、小脑顶核假刺激组(I/RFs组)、小脑顶核刺激组(I/RF组),每组于缺血再灌注后1 d,3 d,7 d,14 d,21 d,28 d 6个时间点进行观察(n=6).采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉局灶脑缺血/再灌注模型.应用原位杂交检测缺血侧侧脑室和海马bFGF mRNA随缺血再灌注后的动态变化规律.结果 (1)在侧脑室区域,局灶脑缺血/再灌注后1 d,I/R组缺血侧bFGF mRNA 3 d时达一小高峰(P<0.01),7 d开始下降(P<0.01),14 d后迅速下降,28 d时下降到略高于正常水平(P<0.05);局灶脑缺血/再灌注后再给予FNS,I/RF组1 d时bFGF mRNA即明显增加(P<0.01),3 d时增加更明显(P<0.01),7 d才达到高峰(P<0.01),14 d后缓慢下降,28 d时虽已明显下降,但仍高于其他各组水平(P<0.05).(2)在海马,局灶脑缺血/再灌注后,I/R组缺血侧bFGF mRNA 1 d时开始增加(P<0.05),3 d即达一小高峰(P<0.01),7 d开始下降;局灶脑缺血/再灌注后再给予FNS,缺血侧海马bFGFmRNA的表达更加强烈,1 d时明显增加(P<0.01),3 d后bFGFmRNA继续升高(P<0.01),到7 d时才达高峰(P<0.01),峰值更高,14 d时缓慢下降(P<0.01).结论 FNS能够持续上调bFGF mRNA的表达,使其反应更迅速、表达更高,并使其高峰延迟,表达时程更长,提示FNS对缺血性脑损伤具有较持久的脑保护作用.     

通心络对大脑中动脉栓塞模型大鼠脑缺血后脑组织caspase-3、P53和HSP70的影响

目的探讨通心络胶囊在缺血脑保护方面的作用机制。方法采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。将SD大鼠随机分为假手术组、MCAO模型组、MK-801组及通心络大、小剂量治疗组。MK-801组按体重0.5 mg/(kg.d)经腹腔注射MK-801,1次/d;通心络大、小剂量治疗组分别按体重1.0、0.5 g/(kg.d)给予通心络原粉灌胃,2次/d。采用流式细胞、Western blot及RT-PCR技术观察通心络对大鼠脑缺血后神经细胞凋亡率和caspase-3、P53、HSP70蛋白及其mRNA表达的影响。结果通心络和MK-801均可明显降低MCAO模型大鼠缺血后各时间点脑部神经细胞凋亡百分率(P<0.05,P<0.01),以通心络大剂量治疗组效果最显著;模型组caspase-3、P53蛋白及其mRNA表达较假手术组4明显增高,通心络和MK-801均可使其表达降低,其中通心络大剂量治疗组最显著(P<0.01);与模型组比较,各治疗组HSP70蛋白及其mRNA表达明显增高(P<0.05,P<0.01)。结论通心络可降低MCAO模型大鼠神经细胞凋亡百分率而发挥脑保护作用,其机制可能与抑制细胞凋亡相关因子caspase-3、P53表达及促进应激保护性HSP70表达有关。     

雌激素对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织NF—κB、iNoS表达和细胞凋亡的影响

目的 研究雌激素对大鼠局灶性脑缺血再灌注(I/R)损伤后NF-κB、iNOS蛋白和细胞凋亡变化的影响.方法 采用线栓法复制局灶性脑I/R模型.应用免疫组化检测NF-κB、iNOS蛋白表达;利用原位缺口末端标记法(TUNEL )研究凋亡细胞的变化.结果 与对照组大鼠相比,雌激素组脑缺血再灌注后NF-κB、iNOS表达明显减弱(P<0.01);凋亡细胞显著减少(P<0.01).结论 雌激素能抑制脑I/R后NF-κB、iNOS表达,减少细胞凋亡,这可能是其脑保护作用的机制之一.     

bFGF和PDGF-B蛋白在脑缺血再灌注大鼠模型中的表达和血管形成的研究

目的 探讨脑缺血再灌注大鼠不同时间碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血小板源性生长因子-B(PDGF-B)的表达水平及其与血管形成的关系。方法 采用线栓法制备大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注(MCAO/R)模型,分为假手术组和MCAO/R组,MCAO/R组缺血2 h后根据再灌注时间窗的不同分为0、6、24 h、3、7、14、21 d共7组,应用HE染色观察病理变化并测定脑梗死体积,用免疫组化法检测CD34蛋白的表达水平并计数微血管密度(MVD),用免疫组化法检测bFGF和PDGF-B蛋白的表达水平。结果 bFGF蛋白表达水平在MCAO/R 6 h后即开始升高,3 d到达高峰,7 d开始降低。PDGF-B蛋白表达水平在MCAO/R 24 h后明显升高,3 d到达高峰,7 d有所下降,持续到14 d左右。MVD表达在MCAO/R 3 d开始升高,7 d到达高峰。bFGF和PDGF-B蛋白表达水平与MVD变化呈正相关(P<0.01)。结论 局灶性脑缺血再灌注损伤可诱导bFGF、PDGF-B和新生血管表达增加,激活内源性脑保护机制。     

孕酮对大鼠脑缺血再灌注损伤后TASK3蛋白表达的影响

目的观察孕酮对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠脑组织TASK3蛋白表达的影响,探讨孕酮对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组(I/R组)和孕酮+I/R组,后3组按缺血再灌注后不同时间随机分为0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h和120 h 8个亚组。线栓法建立大鼠右侧MCAO模型,缺血2 h再灌注24 h进行脑损伤评估,检测各组大鼠死亡率、神经功能缺陷评分以及2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定脑梗死体积;采用免疫印迹法检测各组大鼠脑组织缺血2 h再灌注后不同时间点TASK3蛋白的表达。结果孕酮+I/R组大鼠死亡率(18.18%)明显低于I/R组(40.66%),该组动物脑梗死体积(21.85%±3.53%)也显著低于I/R组(37.21%±3.50%)(P<0.01),且该组神经功能缺陷评分(2.00±0.74)显著低于I/R组(2.67±0.49)(P<0.05)。与正常对照组相比,假手术组各时间点脑组织TASK3蛋白的表达无明显变化,而I/R组各时间点脑组织TASK3蛋白的表达均显著降低(P<0.05);与I/R组相比,孕酮+I/R组各时间点脑组织TASK3蛋白的表达显著升高(P<0.05)。结论孕酮对脑缺血再灌注损伤的大鼠具有脑保护作用,其机制可能与上调TASK3通道蛋白的表达有关。     

脑缺血再灌注损伤模型大鼠大脑皮质BDNF mRNA表达减少

目的制备局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型,并观察大脑皮质脑源性神经营养因子(BDNF)mR-NA表达的变化。方法雄性SD大鼠,采用线栓法闭塞大脑中动脉2h后进行再灌注3d,制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型。采用神经缺失评分观察大鼠的行为学表现;TTC染色检查脑组织梗死情况;HE染色观察大鼠脑组织形态结构;RT-PCR技术检测大鼠大脑皮质BDNF mRNA的表达。结果假手术组大鼠无神经功能障碍表现;脑组织未见梗死灶;脑组织神经细胞形态规则;大脑皮质BDNF mRNA的相对表达量,与正常组相比,未见明显变化。与假手术组相比,局灶性脑缺血再灌注损伤模型大鼠出现神经功能障碍;左侧半球可见梗死灶;梗死侧脑组织形态学观察显示神经细胞大量坏死脱落、胞质呈空泡变性、疏松、胞核浓缩深染;大脑皮质BDNF mRNA表达量明显减少。结论大脑中动脉闭塞2h后进行再灌注3d可造成脑缺血再灌注损伤,可能与大脑皮质BDNF mRNA的表达减少有关。     

步长脑心通胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的研究步长脑心通胶囊对脑缺血再灌注(IR)损伤的神经保护作用。方法采用Longas法制备大鼠脑IR模型,分为IR组、步长脑心通组;再灌注后2h开始给药,依照IR的持续时间不同又分为1d、3d、7d、10d及15d共5组。各时相点取材,用HE染色和电镜观察脑部组织学改变,用干湿重法进行脑含水量测定;免疫组化染色检测脑组织血管内皮生长因子(VEGF)的表达,并使用多媒体彩色病理图像分析系统进行定量分析。结果与IR组比较,步长脑心通组脑组织中皱缩或肿胀神经元数目少,胞浆肿胀较轻,胶质细胞肿胀不明显,血管周围间隙水肿和渗出较轻;脑含水量及VEGF的表达差异具有显著性(均P<0.05)。结论步长脑心通胶囊可减少IR后脑含水量并增强VEGF表达,从而起到神经保护作用。     

局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑、肝中IGF-1的动态表达及其意义

目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑、肝中的表达变化及其意义.方法 采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组化染色方法检测大鼠脑缺血再灌注后2h、1d、3d、7d时脑、肝标本中IGF-1蛋白的含量.结果 正常脑组织有低水平的IGF-1表达,脑缺血再灌注后2h后表达即有明显升高,1d时持续升高,至3d时达高峰,7d时又有所回落,其表达主要位于大脑皮质区.经方差分析,脑组织中IGF-1蛋白含量脑缺血再灌注组与对应各时间点假手术组比较差异均有统计学意义(P<0.05);假手术组各时间点比较差异无统计学意义(P>0.05);脑缺血再灌注组1d和7d间比较差异无统计学意义(P>0.05),其余脑缺血再灌注组各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.05).正常肝组织中有极低水平IGF-1表达,脑缺血再灌注2h、1d、3d后肝组织中IGF-1蛋白含量与假手术组各对应时间点比较差异无统计学意义(p>0.05),脑缺血再灌注7d时与脑缺血再灌注组其余各时间点及假手术组对应时间点比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 脑缺血再灌注损伤后大鼠脑、肝中内源性IGF-1水平有明显变化,提示IGF-1的变化与脑缺血再灌注损伤有关联.     

大鼠脑缺血再灌后凝血酶与PAR-1的表达及意义

目的探讨大鼠脑缺血再灌后凝血酶（thrombin）及蛋白酶活化受体-1（PAR-1）的表达变化及意义。方法栓线法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,用Western Blot方法检测对照组及脑缺血2h再灌注不同时程组（12、24h,3、7d）凝血酶和PAR1蛋白表达水平。结果对照组可以检测到少量凝血酶（thrombin）和PAR-1的表达,两种蛋白于再灌注12h显著上升。3d达高峰（P〈0．01）,7d下降;缺血再灌注后凝血酶与PAR-1的表达呈高度正相关（r=0．934,P〈0．01）。结论凝血酶和PAR-1蛋白的表达增加可能与脑缺血冉灌注损伤的发病机制有关;凝血酶可能通过激活PAR-1参与了再灌注损伤的病理生理过程。     

Matrix metalloproteinase-9 expression and blood brain barrier permeability in the rat brain after cerebral ischemia/reperfusion injury

BACKGROUND: The integrity of the blood brain barrier (BBB) plays an important role in the patho-physiological process of cerebral ischemia/reperfusion injury. It has been recently observed that metalloproteinase-9 (MMP-9) is closely related to cerebral ischemia/reperfusion injuryOBJECTIVE: This study was designed to observe MMP-9 expression in the rat brain after cerebral ischemia/reperfusion injury and to investigate its correlation to BBB permeability.DESIGN, TIME AND SETTING: This study, a randomized controlled animal experiment, was performed at the Institute of Neurobiology, Central South University between September 2005 and March 2006.MATERIALS: Ninety healthy male SD rats, aged 3-4 months, weighing 200-280g, were used in the present study. Rabbit anti-rat MMP-9 polyclonal antibody (Boster, Wuhan, China) and Evans blue (Sigma, USA) were also used.METHODS: All rats were randomly divided into 9 groups with 10 rats in each group: normal control group, sham-operated group, and ischemia for 2 hours followed by reperfusion for 3,6,12 hours, 1,2,4 and 7 days groups. In the ischemia/reperfusion groups, rats were subjected to ischemia/reperfusion injury by suture occlusion of the right middle cerebral artery. In the sham-operated group, rats were merely subjected to vessel dissociation. In the normal control group, rats were not modeled.MAIN OUTCOME MEASURES: BBB permeability was assessed by determining the level of effusion of Evans blue. MMP-9 expression was detected by an immunohistochemical method.RESULTS: All 90 rats were included in the final analysis. BBB permeability alteration was closely correlated to ischemia/reperfusion time. BBB permeability began to increase at ischemia/reperfusion for 3 hours, then it gradually reached a peak level at ischemia/reperfusion for 1 day, and thereafter it gradually decreased. MMP-9 expression began to increase at ischemia/reperfusion for 3 hours, then gradually reached its peak level 2 days after perfusion, and thereafter it gradually decreased.CONCLUSION: MMP-9 expression increases in rat brain tissue after focal cerebral ischemia/reperfusion injury, which correlates with increased permeability of the BBB.     

大鼠脑缺血-再灌注损伤早期DWI参数和AQP4蛋白表达相关性研究

目的脑水肿是脑缺血后主要的病理表现之一,研究表明水通道蛋白4(AQP4)在脑梗死后脑水肿的形成和发展中起着重要作用,目前尚缺乏磁共振弥散加权成像(DWS)与AQP4表达在急性脑缺血-再灌注早期相关性的研究。本文旨在评估大鼠脑缺血—再灌注早期脑损伤区水通道蛋白4表达、DWI信号强度(SI)及表观扩散系数(ADC)之间的相关性以及AQP4表达与缺血性脑水肿之间的关系。方法健康成年SD雄性大鼠(n=40),随机分成4组,分别为脑缺血—再灌注12h、1d、3d组和假手术组,采用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉缺血—再灌注(MCAO/R)模型,Zea Longa评分评价神经功能损伤程度,Philips Achieva 3.0T MRI扫描仪对假手术组和缺血—再灌注后不同时间点大鼠脑部行冠状位DWI扫描,在工作站上重建ADC图,测量基底核层面梗死灶DWI-SI和ADC值,计算相对ADC值(rADC)和相对DWI—SI(rDWI—SI)值。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评价梗死体积的变化。免疫组化染色测定AQP4蛋白表达,用平均吸光度(MOD)值评价染色程度。结果假手术组动物麻醉苏醒后未见神经功能缺损,脑缺血—再灌注后12h、1d和3d组大鼠出现不同程度神经功能损伤,1d组最重。假手术组TTC染色未见梗死体积,脑缺血—再灌注后12h、1d和3d梗死体积逐渐增加,3d时最大。水肿变化规律同梗死体积相仿。假手术组海马区及皮质区AQP4免疫组化染色较浅淡,MCAO/R后12h缺血侧海马区及皮质均可见AQP4阳性细胞,12h-3d AQP4的MOD值随时间延长逐渐增高,3d时达到高峰。12h、1d和3d组大鼠脑水肿体积与相应时间点缺血侧皮质区和海马区AQP4表达均呈正相关(r=0.642,r=0.605,均P0.05);三组大鼠基底核区梗死灶rADC值与缺血侧皮质区、海马区AQP4表达均呈正相关(r=0.542,P=0.037;r=0.655,P=0.008)。结论大鼠脑缺血—再灌注早期脑水肿体积、rADC值与AQP4的表达水平存在时间上的相关性。因此结合DWI检查对脑缺血后AQP4表达部位、作用及调节机制进行更深入系统的研究,可能为临床早期治疗缺血性脑水肿提供新的思路。     

硫酸镁对脑缺血再灌注大鼠脑组织Bcl-2表达的影响及神经保护作用

目的探讨硫酸镁对脑缺血再灌注大鼠脑组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响及脑保护作用。方法将32只大鼠随机分为缺血组(n=15)、硫酸镁组(n=15)和正常对照组(n=2)。采用改良的Pulsinelli法建立脑缺血再灌注大鼠模型;制模后分别给予缺血组和硫酸镁组大鼠腹腔注射生理盐水(1.5 ml/d)及硫酸镁(90 mg/kg.d)。缺血再灌注第1、3、7 d分别观察各组大鼠海马CA1区病理学改变和Bcl-2的表达水平。结果正常对照组大鼠海马CA1区神经细胞数量多,排列整齐。缺血再灌注1 d时,缺血组及硫酸镁组大鼠海马CA1区神经元均未见明显死亡;3 d时,缺血组海马CA1区神经元可见少量死亡,残存神经细胞呈较严重缺血性改变,硫酸镁组海马CA1区神经元无明显死亡;7 d时,缺血组海马CA1区神经元大部分死亡,伴有小胶质细胞增生,硫酸镁组仅见部分神经元死亡。与缺血组相比,硫酸镁组神经元受损程度较轻,坏死区较小。硫酸镁组缺血再灌注各时间点大鼠Bcl-2阳性细胞较缺血组均明显增加(均P<0.05)。结论硫酸镁能上调脑组织Bcl-2的表达,对缺血再灌注大鼠的脑组织有明显的保护作用。     

白果内酯对高血糖大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察白果内酯对高血糖大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制.方法 采用50%的葡萄糖溶液腹腔注射(6 ml/kg)建立急性高血糖模型.采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,按随机数字表方法将40只大鼠分为高血糖假手术组(假手术组),高血糖+缺血再灌注损伤组(模型组),高血糖+缺血再灌注损伤+白果内酯组(白果内酯组),白果内酯分三个剂量组(2.5,5,10 mg/kg),每组各8只.白果内酯组于术前3 d连续给予白果内酯腹腔注射,术前1 h再给予腹腔注射1次.脑缺血2 h,再灌注24 h后行神经功能缺损评分、脑梗死体积及脑含水量测定,同时测定脑组织中水通道蛋白-4(AQP4)mRNA的表达,超氧化物歧化酶(SOD)的活力,计算脑组织中丙二醛(MDA)的含量及去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)的表达.结果 白果内酯(5,10 mg/kg)组大鼠与模型组相比,神经功能缺损评分下降,脑梗死体积缩小,脑含水量降低,缺血侧脑组织中AQP4 mRNA的表达下调,SOD活力提高,MDA含量减低,NE、DA及5-HT的含量增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 白果内酯对高血糖条件下的局灶性脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用.     

大鼠局灶脑缺血病灶周围新血管生成的相关实验研究

目的本研究主要探讨大鼠局灶脑缺血病灶周围新血管形成现象,探讨外周血CD34+细胞和脑组织AC133抗原在新血管形成中的作用。方法将成年SD雄性大鼠随机分为:1.正常组,2.假手术组,3.动物模型组。分别取缺血再灌注1h、3h、6h、12h、24h、48h、3d、4d、7d、14d、28d共11个观察点。取前10个观察点外周血标本,采用流式细胞术检测单个核CD34+细胞平均荧光强度。采用免疫组化染色法检测48h、3d、4d、7d脑组织AC133抗原表达。对28d组进行脑血管荧光分布面积的检测。每个观察点5只大鼠,共65只大鼠,根据神经功能计分纳入实验。结果1.脑缺血再灌注28d梗死半球半暗带区域的血管荧光总面积较非梗死半球相似区域增加24.79%。2.大鼠脑缺血/再灌注3d外周血单个核CD34+细胞平均荧光强度明显降低,直到7d。14d恢复到基线水平。3.AC133抗原在再灌注4d梗死半球半暗带区域的血管内皮细胞表达阳性,3d、7d组无阳性表达。结论本研究证实大鼠脑缺血28天梗死半球半暗带区域的血管面积较非梗死半球增大。研究提示循环CD34+干细胞和AC133+细胞可能参与脑缺血损伤的血管修复和新血管形成。     

依达拉奉对脑缺血-再灌注大鼠的神经保护作用及其机制研究

目的探讨依达拉奉对局灶性脑缺血-再灌注损伤的影响及其可能的神经保护机制。方法用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型,用试剂盒检测脑组织丙二醛(MDA)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性;分别测定脑组织含水量;免疫组织化学染色检测水通道蛋白4(AQP-4)的表达水平。结果缺血再灌注损伤后,大鼠脑组织脂质过氧化产物丙二醛含量和一氧化氮合酶活性增高,MDA含量和NOS合酶活性于脑缺血-再灌注后30min开始增高,于3d达到高峰,于7d基本恢复正常;脑组织含水量于脑缺血再灌注后1d开始增高,于3d达到高峰,于7d时下降至大致正常水平;AQP-4的表达于脑缺血-再灌注后6h开始增高,于3d达到高峰,于7d时下降至大致正常水平。依达拉奉干预能显著降低MDA含量和NOS活性,降低脑组织的含水量,并使AQP-4的表达明显下降。结论在脑缺血-再灌注损伤后,依达拉奉能通过清除自由基而减轻脂质过氧化损伤,并通过抑制AQP-4的表达减轻脑水肿,从而起到神经保护作用。