中国人FVⅢ基因内XbaI多态性研究与甲型血友病基因诊断

Polymorphism of an XbaI restriction endonuclease site in intron 22 of the factor VIII gene was studied. 79 heredity-unrelated X chromosomes from 83 Chinese were analyzed. The frequency of the polymorphic site was 0.56, providing polymorphism information content (PIC) of 0.49. Fourteen out of 17 families with hemophilia A could be diagnosed by the Xba 1/22i restricted fragment length polymorphism (RFLPs). Therefore, as a genetic marker within the factor VIII gene, Xba I/22i RFLPs should be useful for prenatal diagnosis of hemophilia A and for detection of its carriers.     

凝血因子Ⅷ基因内Bcl Ⅰ多态性的研究及其在甲型血友病产前基因诊断中的应用

甲型血友病是一种最为常见的遗传性凝血疾病,是由于凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因缺陷所致。以克隆的 FⅧ DNA片段为探针对中国人FⅧ基因内的Bcl Ⅰ多态性及其在甲型血友病基因探测中的应用进行研究。利用这一多态性为遗传标志,成功地进行了1例甲型血友病高危胎儿的产前基因诊断。     

应用FⅧ基因RFLP对甲型血友病的连锁分析

甲型血友病(hemophiliaA)是先天性凝血障碍中最常见的一种出血性疾病,由凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因缺陷所导致的X—连锁隐性遗传病。临床上对甲型血友病的治疗,携带者检测和产前诊断尚无满意方法。现已知FⅧ基因定位于Xq28,国     

应用凝血因子Ⅷ基因内XbaⅠ/FⅧ_(E22)RFLP对甲型血友病携带者的诊断

用FⅧ基因内第22外显子FⅧ_(E22)为探针,分析苏州地区正常人XbaI/FⅧ_(E22)RFLP,显示出9.6/4.8Kb 的多态性,频率为0.36/0.64.PIC 值为0.46。并以此为基础对1例甲型血友病携带者进行检测。     

甲型血友病携带者的基因诊断

甲型血友病是一种常见的 X连锁隐性遗传性出血性疾病 [1]。为了杜绝患儿的出生 ,提高人口素质 ,检出其携带者是关键。本文采用 PCR技术结合限制酶谱分析对甲型血友病 4个家系共 1 5个成员进行了可疑携带者的诊断。1　材料和方法1 .1　标本及处理　甲型血友病家系成员及外周血标本由省一附院血液科提供。采用 0 .5mol/L EDTA抗凝 ,蛋白酶消化法 [2 ] 制备基因组 DNA。1 .2　 PCR扩增 [3] 　 引物序列如下 :5′-TAAAAGCTTTAAATGGTCTAGGC-3′和 5′-TTCGAATTCTGAAATTATCTTGTTC-3′( Bcl I位点 ) ;5′-CACGAGCTCT…     

FⅧ基因内5个SNPs位点多态性对血友病A基因诊断的意义

目的 通过对FⅧ基因内5个单核苷酸多态性(SNP)位点的杂合度进行分析,以寻找新的可用于血友病A(HA)家系基因诊断的多态位点.方法 50例汉族正常女性血样用于5个SNP位点的多态性分析;收集16个无血缘关系的HA家系成员血样,将具有多态性的SNP位点用于家系连锁分析,评价其对HA基因诊断的意义.结果 5个FⅧ基因内SNP位点在所研究的人群中有3个位点具有多态性,即rs1509787、rs3861554和rs1470586,多态信息量分别为0.106 4、0.344 4和0.310 8.利用这3个SNP位点对16个家系中的7个家系可作出诊断,诊断率为43.75％,其中rs3861554对HA的诊断率最高(31.5％).结论 在所选人群中有3个SNP位点具有多态性,对HA家系具有一定的诊断意义;rs3861554可作本地人群HA诊断的常用多态位点.     

甲型血友病基因携带者检测与产前基因诊断的研究进展

近年来，分子生物学技术的应用，使因子Ⅶ以及血友病甲的研究有了很大进展。本文将对甲型血友病基因携带者及产前基因诊断的研究作一综述性介绍。     

甲型血友病基因诊断的研究

本文对5个甲型血友病家系,24名成员进行了基因诊断。应用Bcl Ⅰ/I14-E18检测家系C及D的携带者分别为3.0kb/2.3kb及3.3 kb/2.3kb杂合体,而可以Bcl Ⅰ/I14-E18 RFLP连锁分析作基因诊断。以PCR技术RFLP连锁分析家系A与B,发现其携带者为142 bp/99 bp杂合子,其致病基因与142 bp片段连锁。对1名携带者孕妇抽取绒毛组织进行DNA分析,以Bgl Ⅱ/Dx 13 RFLP连锁分析结果,胎儿为甲型血友病,建议中止妊娠。     

应用PCR技术对甲型血友病携带者诊断的研究

应用多聚酶链反应(PCR)技术,通过两对外物分别扩增FVⅢ基因内含限制性内切酶BclⅠ和XbaⅠ多态位点的特异DNA片段,扩增长度分别为142bp和96bp,经相应内切酶酶解后,12％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,分析本地区人 BcⅠ/FVⅢ el8及XbaⅠ/FVⅢi22,显示为142/99bp和96/68bp,频率分别为0.24/0.76及 0.44/0.56,PIC为 0.36和 0.49,联合应用的PIC为0.67。对30名女性检测其杂合频率分别为     

安徽人FⅧ基因内及其旁侧RFLPs的研究

研究若干不相关安徽个人体的四个凝血因子Ⅷ（ＦⅧ）基因内限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）（ＢｃｌⅠ、ＨⅢ、ＸｂａⅠ、ＭｓｐⅠ）及四个基因旁侧的ＲＦＬＰｓ（ＢｓｔｘⅠ、ＰｓｔⅠ、ＭｓｐⅠ、和ＡｃｃⅠ）。ＢｃｌⅠ／ＨｉｎｄⅢ、ＸｂａⅠ、ＭｓｐⅠ基因内多态位点的杂合子频率分别为０．２３、０．４２、０．４９６。在接近内含子２２处，发现了两个额外的ＸｂａⅠ多态位点。在基因旁侧，应用ＢｓｔｘⅠ和ＰｓｔⅠ发现安     

中国人获得性血友病A患者中一个FⅧ基因多态性位点的发现

目的 研究8例中国人获得性血友病A患者的FⅧ基因变异,尝试寻找与疾病相关的潜在基因位点.方法对患者进行表型检测,包括APTT﹑FⅧ：C和FⅧ抑制物浓度的测定;采用LD-PCR和多重PCR分别检测FⅧ基因内含子22倒位和内含子1倒位,采用PCR产物直接测序的方法对FⅧ基因进行序列分析,寻找突变和多态性位点.结果 8例患者均表现为APTT延长,FⅧ：C降低,并且能够检测出浓度不等的FⅧ抑制物.在FⅧ基因3＇UTR区域内发现c.8899 G/A（rs1050705）的多态性位点,其等位基因＂A＂的频率远高于另一等位基因＂G＂的频率.结论 c.8899 G/A（rs1050705）多态性位点的等位基因频率可能与获得性血友病A患者中FⅧ抑制物的形成存在一定的联系,这对进一步研究该疾病的分子发病机制具有重要意义.     

甲型血友病携带者的PCR-RFLP检测

①目的　探讨甲型血友病携带者的基因诊断方法。②方法　应用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）结合限制性酶切片段长度多态（ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ）分析技术,对５ 个甲型血友病家系的 ２９ 名成员进行了 ＦⅧ基因外显子 １８ 和内含子 ２２ 两个多态位点的扩增片段限制酶切长度多态性连锁分析。并对其中的１ 个家系进行了产前基因诊断。③结果　５ 个家系中有 ５ 名女性被确定为携带者,１ 个家系的男性胎儿被确定为病人。④结论　 Ｐ Ｃ Ｒ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ方法可对多数甲型血友病进行基因诊断。     

St14/BclⅠ限制性片段长度多态性基因频率

St14-1(DXS52)是位于人X染色体长臂远端的一段DNA顺序,与第Ⅷ凝血因子(FⅧ:C)基因紧密连锁.用其作探针,BcII酶切,对人基因组DNA进行Southern印迹杂交分析,可检测到一限制性片段长度多态性(RFLP).我们分析广东地区汉族人群中st14/BcII RFLP,等位基因片段长度分别为17.4kb和16·6kb(见附图).15条无遗传关系的X染     

应用凝血因子Ⅷ基因多态性产前诊断血友病甲

以凝血因子Ⅷ重组基因克隆 FⅧ_(E18—st14)为探针,用限制性内切酶 Taq I 酶解后所产生的限制性片段长度多态性(RFLP)连锁分析,成功地对1例血友病甲高危胎儿进行了产前基因诊断,排除了血友病甲的可能,使妊娠得以继续进行。另外,对该家系的血友病发病机制进行了分析与探讨。     

应用St14（DXS52）位点VNTR多态进行甲型血友病基因诊断

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增４２例东北地区正常人Ｓｔ１４（ＤＸＳ５２）位点ＶＮＴＲ多态，共检出８种等位基因片段。最长扩增片段为２．４ｋｂ。频率最高的扩增片段为７００ｂｐ，约占５０％。检测的女性杂合子率较高。利用此ＶＮＴＲ多态作为遗传标记，对３个甲型血友病家系进行了基因连锁分析，在一个家系中确定了一名女性为正常人，非携带者；在另二个家系中各检出一名男性胎儿患者。     

中国人凝血因子Ⅷ基因多态性和血友病A的产前诊断

本文应用克隆化的凝血因子Ⅷ(下称FⅧ)基因cDNA及其旁侧的DNA片段作为探针,分析了123名中国正常人和22例血友病A患者的FⅧ基因及其旁侧的多态性位点Bcl Ⅰ/18e,Xbal/221,MspI/St14和BgI I/DX13。获得了中国人上述4个位点的RFLP资料,并应用RFLP连锁分析对2例血友病A高危妊娠进行了产前诊断。     

四个血友病乙家系携带者基因检测及产前诊断

应用凝血因子Ⅸ（FⅨ）PⅧ／Xmn IPⅧ/Taq I探针对四个血友病乙家系21人进行限制性片面多态性（RFLP）基因连锁分析。确定携带者5例，非携带者5例，对其中1例携带者的高危胎儿进行了基因产前诊断，经PCR性别鉴定及RFLP分析确定为女性携带者。     

中国人DX13/Bgl Ⅱ RFLPs研究与甲型血友病基因连锁分析

分析59名中国人58条无遗传关系的X染色体,发现中国人DX13上Bg1Ⅱ多态性位点出现的频率为81％,明显高于国外同类研究结果。以DX13/Bg1 Ⅱ RFLPs为遗传标志对9个甲型血友病家系进行连锁分析,4个家系中的甲型血友病基因可以得到确定。     

血友病A家系因子Ⅷ基因内含子重复序列多态性的检测及分析

目的探索一种更简便和更特异的方法，用于血友病A的基因诊断及其家系遗传咨询。方法提取两个血友病A家系中成员外周血DNA，进行因子Ⅷ基因中内含子13（CA）n、内含子22（GT）n和（AG）n二核苷酸重复序列多态性分析。结果通过对内含子13和内含子22的两个STR位点的检测，两个家系均检出携带者。结论凝血因子Ⅷ基因中内含子重复序列是血友病A高多态性遗传标志之一，用于血友病A家系分析有较大的实用价值。