7T Micro-MRI活体观察内皮祖细胞促进小鼠颈动脉损伤后的修复

目的 探讨内皮祖细胞在小鼠颈动脉损伤后修复中的作用及其MR活体评价的可行性.方法 昆明小白鼠(n=12)先行脾脏切除,1周后用金属丝损伤法建立颈动脉内膜损伤模型.体外培养小鼠脾源性单个核细胞获得内皮祖细胞.经尾静脉将内皮祖细胞注入至实验组小鼠体内(n=6),对照组注入PBS液(n=6).术前、术后1 d和15 d对小鼠颈动脉行MR扫描,观察损伤血管的表现,测量血管内腔的面积、管壁的厚度和管壁面积.结果 MR成像能够清晰地观察颈动脉内膜损伤后管壁的增厚和血管腔的狭窄,且可以做定量测量.内膜损伤后第15天对照组 和实验组管壁厚度为(0.450±0.149) mm和(0.272±0.079) mm(t=2.603,P=0.026),管壁面积为(0.756±0.240) mm2和(0.452±0.154) mm2(t=2.604,P=0.026).术前和术后15 d,对照组血管内腔面积为(0.288±0.059) mm2和(0.172±0.069) mm2(t = 4.905,P= 0.004),实验组血管内腔面积为(0.300±0.057) mm2和(0.218±0.097) mm2(t = 2.351,P= 0.065).结论 内皮祖细胞能够促进小鼠动脉内膜损伤后的修复,MR成像可以活体观察和测量损伤的血管.     

运动调节小凹蛋白-1表达改善2型糖尿病小鼠骨髓内皮祖细胞迁移能力

目的:探究不同运动方式是否调节小凹蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)表达及其对2型糖尿病小鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)迁移能力的影响。方法:将40只8周龄雄性db/db小鼠按电脑产生的随机数字进行编号,随机分为有氧运动组、抗阻运动组、联合有氧+抗阻运动组(联合运动组)以及对照组,每组10只。经过8周的运动干预后分离小鼠骨髓细胞,运用密度梯度离心法分离骨髓EPCs,并以EGM-2MV培养基进行体外培养,采用双荧光染色阳性率和流式细胞仪检测表型CD133共鉴定EPCs。采用细胞划痕实验反映细胞迁移情况,Western blot检测各组Cav-1蛋白表达水平。结果:与对照组相比,有氧运动、抗阻运动及联合运动组迁移能力都明显增强(P<0.05),且联合运动组效果最佳(P<0.05)。联合运动组的Cav-1表达水平高于其它三组(P<0.05)。结论:联合运动较单纯有氧、抗阻运动及对照组更能上调Cav-1的表达,且明显改善2型糖尿病小鼠EPCs的迁移能力。     

体外标记内皮祖细胞小鼠缺血性脑梗死模型局部移植后向病灶侧迁移的MRI实验研究

目的探讨多聚左旋赖氨酸(PLL)与超顺磁性氧化铁纳米微粒(Feridex)的复合物(SPIO-PLL)体外标记骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的可行性,观察标记细胞脑内移植至小鼠缺血性脑梗死模型后的迁移情况。方法体视显微镜下线栓小鼠右侧大脑中动脉制备缺血性脑梗死模型30只,随机分成缺血对照组(6只)、生理盐水移植组(6只)、磁性标记EPCs移植组(12只)和未标记EPCs移植组(6只),采用立体定向方法进行脑内移植。对移植后小鼠的神经系统行为和运动功能进行评估,MR在体观察EPCs的迁移情况,普鲁氏蓝检测EPCs的分布。结果移植后1周神经系统行为学评分显示移植组动物改善不明显,磁性标记EPCs脑内移植后1周MR T2WI、GRE-T2*WI显示移植区低信号改变并沿胼胝体向病灶侧迁移,普鲁氏蓝染色示部分移植的标记细胞沿胼胝体向损伤侧迁移。结论移植EPCs短期内不能有效地促进缺血性小鼠神经行为功能的恢复,SPIO-PLL标记能够在体评价细胞移植后的脑内迁移。     

雷帕霉素对内皮祖细胞数量与功能的影响

目的观察雷帕霉素对外周血内皮祖细胞（EPCs）数量与功能的影响。方法采用密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7天后收集贴壁细胞,加入不同浓度（1.0、2．0、5．0ug／m^3）雷帕霉素分别培养6、12、24、48h。激光共聚焦显微镜鉴定,FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,流式细胞仪检测其表面标志以进一步鉴定EPCs,并在倒置荧光显微镜下计数。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、黏附能力测定实验和体外血管生成试剂盒来观察EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力。结果EPCs数量随雷帕霉素浓度与作用时问增加而减少,其增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力亦随雷帕霉素浓度与作用时间增加而降低。结论雷帕霉素降低EPCs的数量、增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,并呈浓度和时间依赖性。     

内皮祖细胞与MAPK信号传导通路

内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是血管内皮细胞的前体细胞,尤其是骨髓来源的EPCs在心脏修复、临床肢体缺血的治疗、冠状动脉疾病的治疗、脑中风治疗、改善血管移植物通畅率、改善糖尿病患者的血管形成能力、作为基因治疗导向载体和靶细胞及抑制肿瘤血管生成等方面具有广阔的应用前景。细胞因子、炎症因子、激素以及药物等可以通过多种细胞信号传导通路影响EPCs的迁移、分化、增值和凋亡,其中丝裂原活化蛋白酶(MAPK)信号传导通路是近几年国内外研究热点。本文就EPCs的生物功能与MAPK信号传导通路的关系进行了综述。     

血管内皮祖细胞移植防治动脉粥样硬化形成的MRI实验研究

目的通过动物实验，探讨血管内皮祖细胞移植防治动脉粥样硬化形成的可行性。方法分离、鉴定并培养新西兰大白兔外周磁粒子标记血管内皮祖细胞（EPCs），制备氧化铁（Fe2O3）-多聚左旋赖氨酸（PLL）并体外标记EPCs。用2．5F球囊扩张并损伤兔右侧颈动脉血管内皮，对损伤血管进行局部EPCs移植，A组8只，移植Fe：O，-PLL标记的EPCs；B组3只，移植荧光标记的EPCs；C组5只为空白对照，局部注射生理盐水。细胞移植后4d，所有实验兔用1．5TMR仪进行活体颈动脉扫描，并任意选A、B、C组各1只，取受损伤血管做病理组织学检查，并与MRI信号变化进行对比分析，其余所有实验兔继续高脂饲料喂养，15周后对损伤血管做MR及病理组织学检查。结果EPCs的Fe2O3-PLL标记率〉95％，A组标记细胞移植后4d，MR T2·WI显示损伤血管壁呈明显低信号区，而B组和C组无明显异常信号改变；病理学检测显示A组损伤血管内膜有普鲁士蓝染色阳性细胞黏附，B组损伤血管内皮有强荧光表达，C组损伤血管内皮无表达。15周后，A、B组动脉粥样硬化形成（3／9）明显低于C组（4／4）。结论活体MR技术可示踪并检测EPCs在损伤血管内皮的黏附及分布；血管内皮祖细胞局部移植可预防动脉粥样硬化的形成。     

Resovist标记内皮祖细胞及1.5T磁共振成像的体外研究

目的确定Resovist体外标记内皮祖细胞(EPCs)的最佳条件,并探讨1.5T磁共振体外示踪标记细胞的方法。方法采用密度梯度离心法从人脐带血中分离、培养、鉴定EPCs,以不同浓度(0、10、25、50、751、00μg/ml)Resovist标记EPCs,分别检测细胞的标记效率、增殖活性、迁移能力及成血管能力,并采用1.5T磁共振对标记的EPCs进行体外成像观察。结果普鲁士蓝检测表明细胞标记效率随Resovist浓度增加而增高,在50μg/ml浓度时已接近95%。透射电镜观察可见胞质内高密度物质聚集。MTT结果表明75、100μg/ml的Resovist可显著抑制EPCs的增殖活力、迁移能力和成血管能力,且100μg/ml浓度的抑制作用大于75μg/ml浓度(P<0.05)。1.5T磁共振成像显示,10μg/ml Resovist标记后EPCs在T2加权像上即呈低信号,与对照组比较差异显著(P<0.01),且浓度越高信号差异越明显。结论采用Resovist可简单高效标记EPCs,且不影响细胞的生物学特性,并能在1.5T磁共振下进行示踪,其最佳标记浓度为25~50μg/ml。     

Ghrelin对骨髓源性内皮祖细胞迁移能力的影响

目的 探讨ghrelin对体外培养的内皮祖细胞(EPCs)迁移能力的影响及相关的信号转导途径.方法 密度梯度离心法获取大鼠骨髓单个核细胞层,接种至纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7～ 10d后观察细胞形态学改变,以免疫组织化学染色法检测Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acLDL),FITC标记的荆豆凝集素1(FITC-UEA-1),以及CD34、CD133、人血管性血友病因子(vWF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)特异的酪氨酸激酶受体(Flk-1),鉴定细胞种类后传代培养.采用不同浓度(10-9～10-6mol/L)的ghrelin干预EPCs后,通过Transwell小室迁移实验检测EPCs迁移能力的变化.用不同浓度(10-9～10-6mol/L)的ghrelin干预EPCs l5min或10-7mol/L的ghrelin干预0～ 60min,Western blotting 检测蛋白激酶B(Akt)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及其磷酸化状态的表达;分别用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的特异性抑制剂LY294002和eNOS的特异性抑制剂L-NAME预处理EPCs,检测ghrelin对EPCs迁移及Akt、eNOS及其磷酸化蛋白表达的变化.结果 新分离24h内的EPCs近似圆形,培养第4～7天转化为梭形贴壁细胞,培养至第9天后梭形细胞呈条索样排列生长.Dil-acLDL和FITC-UEA-1双染色阳性,CD34、CD133、vWF和flk-1免疫组织化学染色均呈阳性反应.分别用10-9～10-6mol/L的ghrelin干预内皮祖细胞,发现10-8、10-7mol/L的ghrelin可明显促进内皮祖细胞的迁移(P＜0.001),而更高浓度( 10-6mol/L)的ghrelin则可显著抑制EPCs的迁移(P＜0.05).Ghrelin呈时间和剂量依赖性地促进EPCs表达磷酸化Akt和eNOS;PI3K特异性抑制剂LY294002能明显抑制ghrelin诱导的Akt、eNOS的磷酸化表达(P＜0.05);eNOS的特异性抑制剂L-NAME能明显抑制ghrelin诱导的eNOS磷酸化表达(P＜0.05),但对Akt的磷酸化表达无影响.LY294002和L-NAME均能显著抑制ghrelin诱导的内皮祖细胞迁移(P＜0.05).结论 Ghrelin可通过激活PI3K/Akt/eNOS信号途径促进骨髓源性EPCs迁移,但其效应呈现一定的浓度依赖性.     

CXCR4反义核酸对结肠癌细胞VEGF-C mRNA表达的影响及体外侵袭的抑制作用

目的 研究趋化因子受体CXCR4反义核酸转染对结肠癌细胞HT-29血管内皮生长因子-C(VEGF-C)mRNA功能性表达和其体外侵袭能力的影响.方法 利用自行设计的引物,借助RT-PCR技术获得两端含不同限制性酶切位点的CXCR4 cDNA片段,反向插入pcDNA 3.1( )质粒中,构建CXCR4反义真核表达载体.以脂质体转染法将质粒导入HT-29细胞,用RT-PCR检测其对HT-29细胞VEGF-C mRNA表达的影响,Western blot检测HT-29细胞CXCR4蛋白表达的变化,MTT法测定HT-29细胞的生长曲线,体外侵袭实验观察转染前后HT-29细胞体外侵袭能力的变化.结果 成功构建了CXCR4反义重组质粒.与未转染(HT-29)组表达的VEGF-C mRNA相比,CXCR4反义核酸转染(HT-29tran)组的表达量下降54.2%,而空白质粒转染(HT-29KZ)组的表达量仅下降9.4%,HT-29tran组和HT-29KZ组相比差异显著(P＜0.01).穿膜细胞百分率HT-29tran组为61.3%±5.8%,而HT-29KZ组为93.7%±7.8%,两组相比差异显著(P＜0.05).结论 CXCR4反义核酸转染可明显抑制HT-29细胞VEGF-C mRNA的表达,并可显著降低HT-29细胞的体外生长和侵袭能力.     

内皮祖细胞治疗急性肺损伤的研究进展

急性肺损伤(ALI)是临床上常见的危重疾病,目前尚无特效疗法。保护内皮细胞受损并逆转已形成的损伤成为ALI治疗发展的新趋势,受到广泛关注。一系列研究提示从骨髓动员至外周血的内皮祖细胞(EPCs)在受损的肺组织处可以直接分化为血管内皮细胞,并能调节失控的炎症反应、增强受损肺组织的抗氧化能力,对血管内皮细胞的修复和维持肺泡毛细血管屏障的完整性起着重要作用,因此内皮祖细胞的移植治疗将成为降低ALI/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)死亡率的治疗新靶向。     

Optimization of the system of medical service of students of Cadet Schools of the Ministry of Defense of the Russian Federation

One of the factors of the successful military career guidance Cadet schools students is preserving and promoting their health. Medical support of children and adolescents aged 10-17 years should include the full range of medical and preventive measures defined for this group. The state of providing outpatient care for pupils at the Cadet School in St. Petersburg was studied. These results show that full medical care in accordance with the standards can be based only on children's health clinics. It is important that the organization of medical support pupils cadet schools should be cooperate with civilian health care.     

带状疱疹83例误诊原因分析

带状疱疹是由水痘—带状疱疾病毒引起的皮肤科常见疾病。其主要的病理损害,一是受累神经的严重炎症性浸润,继而导致受侵犯神经节内神经细胞变性、坏死;二是皮肤的水泡。迅速抑制神经节和相应的感觉神经纤维的充血、水肿和坏死,防止粘连形成,达到迅速镇痛、改善皮损,缩短病程及防止后遗症的发生是治疗的关键。因而,尽早明确诊断,     

Estimation of accumulated dose of radiation by method of ESR-spectrometry of dental enamel of mammals

ESR-spectrometry was used to investigate radiation-induced paramagnetic centers in enamel of mammals: carnivores (polar bear and fox), ungulates (reindeer, European bison, moose), and man. Values at half the microwave power saturation of the radiation signal, P_1/2, evaluated at room temperature, was found to range from 16 to 26 mW for animals and man. A new approach to discrimination of the radiation induced signal from the total ESR spectrum of reindeer enamel is proposed. ‘Dose-response’ dependencies of enamel of different species mammals were measured within the dose range from 0.48 up to 10.08 Gy. Estimations of ‘radiosensitivity’ enamel of carnivores and ungulates showed good agreement with radiosensitivity enamel of man by ESR method.     

Analysis of the results of the international comparison of activity measurements of a solution of Fe

The results of an international comparison of activity measurements of a solution of ⁵⁵Fe organized by the BIPM in 2005 are reported and analysed. This exercise, which follows the procedures of the CIPM mutual recognition arrangement to update older comparisons, is a renewal of the comparison organized by the BIPM that took place in 1978. A EUROMET comparison was organized in 1996 specifically to compare activity measurements of a ⁵⁵Fe solution by means of liquid-scintillation techniques. Results of these three comparisons are presented and discussed in this paper.

The radionuclide solution was provided by the NPL, which also distributed the samples to the participants. The activity of the ampoules was measured by 16 laboratories using 12 methods producing 25 results. Some general considerations on uncertainty assessments pertaining to the different techniques used are drawn. The outcome of four different estimators is compared from which the presence of at least one outlier can be confirmed. Further measurements should be made to try to reduce the discrepancy between the results. To date the outcome of the present comparison does not show an improvement to that of the 1996 comparison.     

Evaluation of the results of various technics of non-surgical therapy of varicocele

A new method of non-surgical treatment of varicocele syndrome is described: it consists in sclerotherapy of spermatic vein by trans-femoral percutaneous catheterization with balloon-catheters. In 8 cases venous thrombosis has been induced by direct electric clotting. The techniques and a 6 months follow-up are discussed. It is pointed out that this procedure should be considered as the method of choice for tubular lesions and sub-fertility prophylaxis in young people and in childhood.     

延迟性脾破裂误漏诊原因分析

目的探讨延迟性脾破裂误漏诊原因和预防措施.方法回顾性分析总结12例延迟性脾破裂中的诊断和误漏诊的经验与教训.结果本组延迟性脾破裂的误漏诊5例(41.66%).对多发伤与脾破裂并存可能认识不足,外伤史轻微或伤员隐瞒外伤史,缺乏腹痛-缓解-突然再腹痛的典型病史,缺乏“对冲性脾破裂”力学分析和整体化诊断思路等为其误漏诊的主要原因.结论详细的外伤史和全面系统检查,重视腹以外多发伤掩盖腹内脏器伤及延迟性脾破裂可能.确立外伤-腹内脏器伤-脾破裂整体化诊断思路.不间断地辅以B超检查脾形态学变化和腹内有无积液,腹腔穿刺确定有无血腹、X线胸腹部检查观察左侧胸肋角和膈肌运动情况、必要时CT检查以尽早发现脾包膜下血肿,降低延迟性脾破裂误漏诊率.