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相似文献
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1.
目的研究不同剂量UVB辐射对人角质形成细胞HaCaT DNA损伤的影响及机制。方法采用紫外辐照装置照射人角质形成细胞Ha Ca T建立急性紫外辐射细胞模型;MTT法检测不同剂量紫外辐射对细胞存活的影响;免疫荧光和流式细胞术分别检测细胞核内磷酸化γH2AX焦点形成及蛋白表达水平;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测不同剂量不同时间照射后早期细胞凋亡百分数;免疫印迹法分别检测Caspase-3活化水平。结果 UVB辐射可抑制HaCaT细胞的存活,有一定的量效关系;相对较大剂量的UVB辐射可观察到明显的焦点形成;UVB照射后各剂量点磷酸化γH2AX的表达均明显高于未照射的对照组;UVB辐射可通过Caspase-3活化诱导细胞发生早期凋亡,照射后20 h,早期凋亡细胞百分数明显增加,特别是在UVB相对较大剂量范围内更明显,并有随照射剂量增高而增加的趋势。结论 UVB辐射可通过诱导DNA双链断裂抑制人HaCaT细胞存活,并通过激活Caspase-3而诱导细胞凋亡,细胞凋亡延迟,可能导致细胞更易于发生突变进而形成皮肤肿瘤。  相似文献   

2.
目的探索氢醌(hydroquinone,HQ)致DNA整体低甲基化的分子机制。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0、10.0和20.0μmo/lL HQ染毒TK6细胞为处理组。应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达水平。结果与对照组相比,DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的mRNA表达量在各HQ处理组细胞中均下降,其中以20.0μmo/lL组细胞的下降最为明显,分别下降46%(P0.05)、83%(P0.05)和48%(P0.05),且DNMT1和DNMT3a的表达量随着HQ剂量的增加而下降。结论 HQ致DNA整体低甲基化下调机制可能与DNMT1、DNMT3a和DNMT3b表达异常有关。  相似文献   

3.
不同价态砷对DNA和砷甲基转移酶的影响   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的观察不同价态、不同剂量砷染毒大鼠肝脏中DNA甲基转移酶和砷甲基转移酶mRNA的表达情况,寻找两者间的相关性及不同价态砷(iAs3+和iAs5+)体内甲基化间的差异。方法将35只健康清洁级Wistar雄性大鼠按体重随机分为7组,分别为正常对照(去离子水)组和低剂量(1/45 LD50,2.33 mg/kg)、中剂量(1/15 LD50,6.67 mg/kg)、高剂量(1/5LD50,20.00 mg/kg)砷酸氢钠(iAs5+)染毒组以及低剂量(2.33 mg/kg)、中剂量(6.67 mg/kg)、高剂量(20.00 mg/kg)亚砷酸钠(iAs3+)组,每组5只。采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒90 d。采用实时荧光定量PCR法测定肝脏中DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)和砷甲基转移酶(As3MT)mRNA的表达情况。结果与对照组相比,各染毒组大鼠肝脏中As3MT mRNA的表达量较高,DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达量较低,高、低剂量亚砷酸钠染毒组和高剂量砷酸氢钠染毒组DNMT1 mRNA的表达量均较高,中剂量亚砷酸钠染毒组和低剂量砷酸氢钠染毒组DNMT1 mRNA的表达量均较低,差异有统计学意义(P<0.05)。随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,大鼠肝脏中As3MT mRNA的表达量呈上升趋势,DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达量呈下降趋势;随着砷酸氢钠染毒剂量的升高,大鼠肝脏中As3MT mRNA的表达量呈下降趋势,DNMT3A、DNMT3B、DNMT1 mRNA的表达量呈上升趋势。As3MT的表达量与DNMT3A和DNMT3B表达量呈负相关(P<0.01);与DNMT1表达量无相关关系(P>0.01)。结论长期亚慢性暴露iAs3+和iAs5+均可促进As3MT的表达,抑制DNMT3A及DNMT3B的表达,但iAs3+和iAs5+间在剂量-效应关系上呈反向性;机体As3MT表达上调与DNMT3A和DNMT3B表达抑制间具有协同效应,并可导致基因低甲基化。  相似文献   

4.
目的 探讨DNA甲基转移酶1A(DNMT1)在妊娠期滋养细胞肿瘤中的表达及意义.方法 取2015年8月-2019年6月妊娠期滋养细胞肿瘤58例为观察对象,其中完全性葡萄胎25例,部分性葡萄胎18例,绒毛膜癌15例.抽取相应患者住院时未进行任何药物治疗时空腹肘静脉血4~5 ml后分离血浆,手术后获得相应患者肿瘤组织.采用...  相似文献   

5.
目的 研究小鼠植入前胚胎DNA甲基转移酶(Dnmt)1和3b的表达模式及体外培养对其表达的影响.方法 应用荧光免疫细胞化学法检测在体内和体外培养的小鼠植入前胚胎Dnmt1、Dnmt3b的表达.结果 Dnmt1、Dnmt3b在体内组2、4、8细胞胚胎和桑椹胚的胞浆内均呈高表达,在囊胚期则为胞浆内低表达,而核内均无明显表达;Dnmt1、Dnmt3b在体外组囊胚期前胚胎的表达模式均与体内组相似,为胞浆内高表达,而囊胚期则为胞核内低表达.结论 体外培养改变了小鼠囊胚期Dnmt1、Dnmt3b的表达模式,影响基因的表达水平和表达模式.  相似文献   

6.
目的探讨三氯乙酸(TCA)染毒对L-02细胞DNA甲基化转移酶1(DNMT1)蛋白及mRNA表达的影响。方法取处于对数生长期的正常肝细胞(L-02细胞),分别加入含0(对照)、0.1、0.3、0.9 mmo/L TCA的培养液继续培养24、48、72 h,同时,设DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-aza-d C,5μmol/L)处理组,TCA-re组(0.9 mmol/L TCA处理后换正常培养基继续培养24 h)和人肝癌(HepG2)细胞组作为对照。检测细胞DNMT1蛋白和mRNA的表达水平。结果与对照组比较,各浓度TCA染毒组及5-aza-d C处理组、TCA-re组L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平均较低,而HepG2细胞组DNMT1 mRNA的表达水平较高,差异均有统计学意义(P0.05)。与相同剂量TCA染毒24 h比较,各浓度TCA染毒48、72 h后L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平均较低,除0.1、0.9 mmol/L TCA染毒48 h外,差异均有统计学意义(P0.05)。且随着TCA染毒浓度的升高和染毒时间的延长,L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平均呈下降趋势。与0.9 mmol/L TCA染毒组比较,TCA-re组L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平较高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各浓度TCA染毒组及5-aza-d C处理组L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平均较低,除0.1 mmol/L TCA染毒24、48 h及0.3mmol/L TCA染毒24 h外,差异均有统计学意义(P0.05);而TCA-re组L-02细胞和HepG2细胞组DNMT1蛋白的表达水平均无明显变化。与相同剂量TCA染毒24 h比较,各浓度TCA染毒48、72 h后L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P0.05)。除TCA染毒24 h时L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平随染毒浓度的升高而呈先升高后下降的趋势外,随着TCA染毒浓度的升高和染毒时间的延长,L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平均呈下降趋势。与0.9 mmol/L TCA染毒组比较,TCA-re组L-02细胞DNMT1蛋白表达水平较高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 TCA体外染毒可能通过抑制DNMT1的表达维持或者促进细胞的DNA低甲基化状态。  相似文献   

7.
8.
目的 探讨叶酸和DNA甲基转移酶1(DNMT1)与宫颈癌发生发展的关系及其在宫颈癌变中的相互作用.方法 选择经病理学确诊的宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者100例、宫颈上皮内瘤样变(CrN)患者101例和宫颈炎(CI)患者109例为研究对象.在收集全部对象人口学特征、生殖因素等相关资料的同时,检测血清叶酸水平(RIA法)、人乳头瘤病毒16的感染状况(PCR法)和DNMT1蛋白的表达量(Westernblot法).采用SPSS 16.0分析软件,进行相关资料的t检验、x2检验、因素与疾病之间关联强度指标(OR值95%CI)的计算及交互作用分析.结果 在SCC、CIN和CI组,血清叶酸含量分别为(2.60±1.61)、(3.14±2.08)和(3.32±1.74)ng/ml,DNMT1蛋白表达水平分别为2.40±0.99、1.88±0.33和0.89±0.29,随着宫颈病变的加重叶酸含量逐渐降低,DNMT1蛋白表达水平逐渐增高,两者呈负相关关系(r=-0 186,P=0001).交互作用分析显示,叶酸水平低和DNMTl蛋白高表达在CIN和SCC组均存在正相加交互作用,OR值分别为2.50(95%CI:1.21~9.22)和6.03(95%CI:2.79~21.72),交互作用指标超额危险度、交互作用归因危险比和交互作用指数在CIN组分别为0.92、0.36和2.59,在SCC组分别为2.47、0.41和1.96.结论 血清叶酸水平低及DNMT1蛋白高表达均是导致宫颈癌和癌前病变发生的危险因素,两者存在协同作用.
Abstract:
Objective To explore the effect of folic acid and DNA methyltransferase 1 (DNMT1) on cervical cancer and cervix precancerous lesion. Methods 100 patients with cervix squamouscell carcinoma (SCC), 101 patients with cervical intraepithelial neoplasm (CIN) and 109 patients with cervix inflammation (CI) diagnosed by histology were included in this study. Radioimmunoassay (RIA), polymerase chain reaction (PCR) and Western blot were used to detect the levels of serum folate, HPV16 infection and the expression of DNMT1 protein,respectively. Results The average levels of serum folate were (2.60 ± 1.61) ng/ml, (3.14 + 2.08) ng/ml and (3.32+1.74) ng/ml,and the expression of DNMT1 protein were 2.40 + 0.99,1.88 + 0.33 and 0.89 ± 0.29 in the group of SCC, CIN and CI, respectively.The relationship of folate levels and DNMT1 protein expression showed inverse correlation (r=-0.186, P=0.00l). The results in our study indicated that there was an additive interaction between low-level of serum folate and high-expressionof DNMT1 protein related to the risk of CIN and SCC, with OR value as 2.50(95%C/: 1.21-9.22) and 6.03 (95%C/: 2.79-21.72) respectively. The relative excessrisk of interaction (RERI) , attributableproportion of interaction (API) and synergy index (S) were 0.92, 0.36 and 2.59 in the CIN group while 2.47, 0.41 and 1.96 in the SCC group. Conclusion The low level of serum folate and high expression of DNMT1 protein seemed to be associated with high risk of cervical cancer and its precancerous lesion. It suggested that there might be a synergistic action between serum folate and DNMT1 in the progression of cervix carcinogenesis.  相似文献   

9.
目的体外研究重组质粒pshRNA-DNMT3b对膀胱癌T24细胞中DNMT3bmRNA和蛋白的沉默效应以及细胞增殖抑制的影响,初步探讨DNMT3b在膀胱肿瘤发生过程中的作用。方法实验分为空白对照组、HK组及pshRNA-DNMT3b组(24、48、72h);常规培养T24细胞,用脂质体lipofectamine2000将重组质粒pshRNA-DNMT3b转染进入T24细胞,后进行RT.PCR、WesternBlot、MTY检测,观察pshRNA-DNMT3b对T24细胞中DNMT3bmRNA、蛋白质水平变化以及细胞增殖的影响。结果重组质粒pshRNA-DNMT3b成功的转染进入T24细胞;RT-PCR电泳结果用Gel-proanalyzer图像分析系统进行灰度分析,空白对照组、HK组、pshRNA-DNMT3b组(24、48、72h)条带的IOD相对比值(DNMT3/β-actin)分别是(99.56±1.24)%、(99.12±1.35)%、(75.77±1.42)%、(44.69±1.05)%和(20.52±0.89)%;Westernblot图像分析结果各组的相对比值分别是(99.43±1.28)%、(98.90±1.31)%、(67.83±1.02)%、(43.43±1.05)%和(21.92±0.89)%;在MTF检测中空白对照组和HK组之间差异无统计学意义(P〉0.05),pshRNA-DNMT3b组仅在72h后和前2组之间差异有统计学意义(P〈0.01),但抑制率仅增加0.45%左右。结论重组质粒pshRNA-DNMT3b能有效的降低膀胱癌1、24细胞中基因DNMT3bmRNA的转录及蛋白的表达,但在抑制细胞增殖上作用甚微。  相似文献   

10.
DNA修复酶6-氧-甲基嘌呤-DNA甲基转移酶研究进展   总被引:2,自引:0,他引:2  
Foote与Olsson等于 1980年发现E .coli 6 氧 甲基嘌呤 DNA甲基转移酶 (MGMT或AGT ,EC2 .1.1.6 3)与O6 甲基鸟嘌呤 (O6mG)的修复有关。Kautianinen等又于 1986年发现肿瘤转化株细胞内的MGMT活力成倍增高。随后 ,人们发现2 0 %的人类肿瘤细胞系的MGMT活力下降 ,MGMT活力还与肿瘤的诱导及耐药性有关[1] 。一、MGMT基因与MGMT蛋白质1 基因结构 :人MGMT(hMGMT)基因位于 10号染色体2 6q上[2 ] ,含有 5个外显子、4个内含子[3 ] 。碱基组成比例为A :174、C :2 31、G…  相似文献   

11.
目的 了解不同剂量的亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因mRNA转录和蛋白表达的影响.方法 分别以0、3.13、6.25、12.5和25μmol/L NaAsO2溶液重复间隔处理HaCaT细胞72 h(NaAsO2处理24...  相似文献   

12.
乳腺癌组织中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶的表达   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
采用原位杂交方法检测30例乳腺癌组织O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)表达水平。结果显示,MGMT阳性率为93.4%(28/30),其中高表达28.6%(8/28),中、低表达71.4%(20/28)。乳腺癌组织MGMT的表达与临床分期无关。  相似文献   

13.
目的:探讨三氯乙烯(TCE)对体外培养的人皮肤角质形成细胞线粒体的损伤作用:方法:不同浓度的TCE作用于体外培养的人皮肤角质形成细胞不同时间后.利用MTT法检测细胞活力改变,并据此计算线粒体酶活力抑制状况;利用试剂盒检测ATP酶活力抑制状况。结果:随着TCE浓度的升高和作用时间的延长,细胞活力、ATP酶活性下降,线粒体酶抑制率升高.当TCE浓度超过0.5mmol/L,作用时间大于8h时,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P〈0.05):结论:TCE可引起体外培养的皮肤KC细胞线粒体发生损伤。  相似文献   

14.
[目的]了解燃煤污染型砷中毒患者血中O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(MGMT基因)启动区甲基化及患者皮肤组织中MGMT mRNA转录表达的情况,探讨两者间关系及其在砷中毒发生发展乃至癌变中的作用。[方法]采用甲基化特异性PCR法(MSP)检测99例砷中毒患者和103例正常对照MGMT基因启动区甲基化情况;同时采用原位杂交技术检测其中61例砷中毒患者皮肤组织中MGMT mRNA的表达情况。[结果]①砷中毒组MGMT基因启动区甲基化阳性率为40.4%,对照组为2.91%;随病情加重砷中毒患者甲基化阳性率逐渐升高,轻、中、重度砷中毒组甲基化阳性率分别为22.73%、39.02%和52.78%,非癌变组与癌变组甲基化阳性率分别为27.78%和65.00%,均显著高于对照组(P〈0.05或P〈0.01)。②随着砷中毒患者皮肤病变的加重,MGMT mRNA阳性表达率逐渐降低,其表达率在非癌变组与癌变组分别为71.05%和30.43%,两组间差异有统计学意义(P〈0.01)。③MGMT基因启动区甲基化阳性率升高与该基因mRNA表达降低有关联(r=0.456,P=0.01)。[结论]MGMT基因启动区高甲基化是砷中毒发生发展乃至癌变发生的早期事件;MGMT基因启动区高甲基化可导致MGMT mRNA转录水平下降并可能是进一步导致蛋白活性降低的重要原因之一。  相似文献   

15.
目的 探讨紫外线B(UVB)照射对小鼠免疫功能的抑制效应和程度。方法 UVB照射后小鼠脾细胞对丝裂原反应,混合淋巴细胞培养,溶血空斑形成细胞及脾细胞的白细胞介素-2(IL-2)产生等非特异免疫功能指标的测定。结果 发现UVB照射小鼠可抑制小鼠脾细胞对ConA、LPS刺激的反应。在20kJ/m^2时,分别为36.6%和41.0%。对异型淋巴细胞混合培养的反应也是有明显抑制效应(抑制率为41.0%),并在约两周恢复正常,对溶血空斑形成细胞(PFC)及脾细胞IL-2的产生亦呈抑制效应(抑制率分别为35.5%和75.0%)。结论 UVB照射小鼠可使其机体免疫功能下降。  相似文献   

16.
Background: In humans, inorganic arsenic is metabolized to methylated metabolites mainly by arsenic (+3 oxidation state) methyltransferase (AS3MT). AS3MT polymorphisms are associated with arsenic metabolism efficiency. Recently, a putative N-6-adenine-specific DNA methyltransferase 1 (N6AMT1) was found to methylate arsenic in vitro.Objective: We evaluated the role of N6AMT1 polymorphisms in arsenic methylation efficiency in humans.Methods: We assessed arsenic methylation efficiency in 188 women exposed to arsenic via drinking water (~ 200 µg/L) in the Argentinean Andes by measuring the relative concentrations of arsenic metabolites in urine [inorganic arsenic, methylarsonic acid (MMA), and dimethylarsinic acid] by high-performance liquid chromatography coupled with hydride generation and inductively coupled plasma mass spectrometry. We performed genotyping for N6AMT1 and AS3MT polymorphisms by Taqman assays, and gene expression (in blood; n = 63) with Illumina HumanHT-12 v4.0.Results: Five N6AMT1 single nucleotide polymorphisms (SNPs; rs1997605, rs2205449, rs2705671, rs16983411, and rs1048546) and two N6AMT1 haplotypes were significantly associated with the percentage of MMA (%MMA) in urine, even after adjusting for AS3MT haplotype. %MMA increased monotonically according to the number of alleles for each SNP (e.g., for rs1048546, mean %MMA was 7.5% for GG, 8.8% for GT, and 9.7% for TT carriers). Three SNPs were in linkage disequilibrium (R2 > 0.8). Estimated associations for joint effects of N6AMT1 (haplotype 1) and AS3MT (haplotype 2) were generally consistent with expectations for additive effects of each haplotype on %MMA. Carriers of N6AMT1 genotypes associated with lower %MMA showed the lowest N6AMT1 expression, but associations were monotonic according to copy number for only one genotype and one haplotype.Conclusions: N6AMT1 polymorphisms were associated with arsenic methylation in Andean women, independent of AS3MT. N6AMT1 polymorphisms may be susceptibility markers for arsenic-related toxic effects.  相似文献   

17.
目的探讨移动电话微波辐射对体外培养人皮肤角朊细胞的影响.方法体外培养的人皮肤角朊细胞(HaCaT细胞)暴露于或假暴露于频率为1.8GHz、SAR为1W/Kg、2W/Kg、3W/kg的模拟移动电话微波辐射4小时后,检测乳酸脱氢酶(LDH)活力及细胞死亡率.结果在SAR 3W/kg组可引起细胞死亡率的增高,为13.4±0.1,与对照组12.0±0.1相比,有显著性差异(P<0.05);在SAR 2W/Kg和SAR 3W/kg组,培养液中LDH活力值(U/L)增高,分别为1342.7±226.4和1414.1±134.7,与对照组LDH活力值1017.6±204.5U/L和985.9±274.9U/L相比,有显著性差异(P<0.05).结论移动电话微波辐射对体外培养人皮肤角朊细胞有损伤作用.  相似文献   

18.
目的:探讨凋亡抑制蛋白Livin和Survivin在尖锐湿疣(CA)组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法分别检测Livin和Survivin蛋白在56例CA组织和18例正常上皮组织中的表达。结果:尖锐湿疣组织中Livin和Survivin蛋白阳性表达率分别为82.14%(46/56)、85.71%(48/56),正常人对照组分别为22.22%(4/18)、38.89%(7/18);尖锐湿疣组织中Livin和Survivin蛋白阳性表达强度多为(++)-(+++),正常对照组多为(-)-(++)。两组Livin和Survivin阳性表达率及表达强度差异均具有统计学意义(P〈0.05)。尖锐湿疣组织中Livin和Survivin表达呈负相关(r=-0.634,P〈0.01)。结论:尖锐湿疣组织中存在Livin和Survivin过表达,Livin和Survivin的过表达可能对尖锐湿疣的发生发展有一定作用。  相似文献   

19.
目的:研究雌激素对去势大鼠大脑、心脏和肝脏等组织中沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达的影响,以探讨其抗衰老作用。方法:选取3个月龄Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠33只,手术切除大鼠双侧卵巢以建立大鼠去势模型,以部分模拟更年期的某些病理生理改变,分为实验组、去卵巢对照组和假手术对照组(每组各11只),实验组灌胃给予雌二醇(E2),去卵巢对照组和假手术对照组给予等量生理盐水,每天1次,共12周。满12周后腹主动脉采血,测定大鼠血卵泡刺激素(FSH)、E2水平,处死大鼠后取大脑、心脏、肝脏等组织。采用逆转录聚合酶链反应实验(RT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组织SIRT1 mRNA及其蛋白水平,分析比较各组间SIRT1的表达水平。结果:大鼠灌胃12周后,去卵巢对照组FSH水平高于实验组和假手术对照组(P<0.001),E2水平低于实验组和假手术对照组(P<0.001)。在大鼠心脏、肝脏和脑组织中,实验组和假手术对照组SIRT1蛋白及mRNA水平均高于去卵巢对照组(P<0.05),实验组和假手术对照组SIRT1蛋白及mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05)。在实验组和假手术对照组中,心脏SIRT1蛋白水平高于肝脏和脑组织(P<0.05),肝脏组织SIRT1蛋白量高于脑组织(P<0.05);而去卵巢对照组的心脏和肝脏组织SIRT1蛋白水平高于脑组织(P<0.05),但心脏和肝脏组织SIRT1蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。3组心脏和脑组织SIRT1 mRNA水平均低于肝脏组织(P>0.05)。结论:雌激素可显著提高去势大鼠SIRT1蛋白及mRNA水平,进而发挥其抗衰老作用。  相似文献   

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