青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞Wnt/β-catenin信号通路相关因子表达的影响

目的:探讨青蒿琥酯抑制大鼠肝星状细胞增殖并可促进细胞凋亡的作用机制。方法:大鼠肝星状细胞体外培养,分别用含梯度质量浓度(0,1,5,12.5,25,37.5μg·ml-1)青蒿琥酯的培养基培养24 h。采用Western blot方法检测青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞HSC-T6内Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响;采用实时荧光定量PCR方法检测随着药物浓度的变化在RNA水平上的变化。结果:0~37.5μg·ml-1的青蒿琥酯作用大鼠肝星状细胞24 h后蛋白β-catenin和GSK-3β(ser9)逐渐降低(P<0.05)并且有一定的剂量相关性,而GSK-3β逐渐升高(P<0.05)。实时定量PCR结果提示,1~37.5μg·ml-1的青蒿琥酯能抑制β-catenin的表达,且呈剂量相关性。但是GSK-3β在低剂量青蒿琥酯(1~12.5μg·ml-1)的时候并无明显变化(P>0.05),在高剂量青蒿琥酯(12.5~37.5μg·ml-1)抑制GSK-3β的表达(P<0.05)。结论:青蒿琥酯抑制大鼠肝星状细胞与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

白藜芦醇抑制HCT116结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin的关系研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的分子机制。方法采用结晶紫染色和Western blot分析Res对HCT116细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术和Western blot分析Res对HCT116细胞凋亡的促进作用;利用TCF4/LEF萤光素酶报告质粒检测Res对Wnt/β-catenin信号转导的影响。采用Western blot和PCR分析Res对HCT116细胞内β-catenin表达水平的影响。结果与对照组相比,Res能抑制HCT116细胞增殖,下调PCNA蛋白水平;流式细胞术和Western blot检测结果均显示,Res能明显促进HCT116细胞凋亡;报告质粒分析结果显示,Res呈浓度依赖性降低TCF4/LEF报告质粒萤光素酶活性(Res为20μmol·L-1时,P<0.05;Res为40或80μmol·L-1时,P<0.01);Western blot和PCR分析结果显示,Res不仅明显降低HCT116细胞中β-catenin的蛋白水平,同时也下调β-catenin mRNA的表达水平。结论Res能抑制HCT116细胞增殖并促进凋亡,其机制可能至少与Res下调β-catenin mRNA表达,抑制Wnt/β-catenin信号转导有关。     

美洛昔康抑制人结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究美洛昔康(meloxicam,Mel)对人结肠癌细胞Lo Vo增殖抑制作用及其机制。方法以人结肠癌细胞株Lo Vo为研究对象,体外药物敏感试验(结晶紫染色)和流式细胞术(FCM)分析Mel对细胞的增殖抑制作用;流式细胞术和HE染色检测Mel对细胞凋亡的影响;萤光素酶报告质粒检测Mel对Wnt/β-catenin通路信号转导的影响;Western blot检测Mel对细胞内β-catenin蛋白水平的影响。结果与对照组相比,Mel能抑制Lo Vo细胞增殖,72 h、100μmol·L-1Mel的细胞抑制率高达(57.635±3.86)%(t=10.044,P=0.001);Mel能诱导Lo Vo细胞凋亡,24 h、60μmol·L-1Mel的细胞凋亡率达到(33.6±1.7)%(t=30.166,P=0.001);Mel能降低TCF/LEF及Myc/Max报告质粒的萤光素酶活性,24 h、60μmol·L-1Mel可使TCF/LEF和Myc/Mac报告的荧光素酶活性分别降至(40.05±2.79)%(t=14.864,P=0.001)和(35.9±2.38)%(t=16.904,P=0.001);Mel能下调细胞内β-catenin蛋白水平,40μmol·L-1Mel在24、48 h时,可将β-catenin蛋白水平分别降至(71±3.78)%(t=7.353,P=0.003)、(52.66±3.57)%(t=11.724,P=0.001)。结论 Mel能抑制Lo Vo细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路信号转导,降低细胞内β-catenin蛋白水平有关。     

粉防己甲素抑制人结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究粉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的机制。方法采用结晶紫染色和流式细胞分析检测Tet对HCT116细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞术分析和Annexin-V EGFP染色检测Tet对HCT116细胞凋亡的影响;利用萤光素酶报告质粒法检测Tet对Wnt/β-catenin信号转导的影响;采用Western blot检测Tet对HCT116细胞内β-catenin蛋白水平的影响。结果与对照组相比,Tet能抑制HCT116细胞增殖,在5μmol·L-1时已明显抑制细胞增殖(P<0.05);流式分析和Annexin-V EGFP免疫荧光染色检测结果均显示,Tet能明显诱导HCT116细胞凋亡;与对照组相比,Tet处理组LEF/TCF4和Myc/Max报告质粒萤光素酶活性降低,并且Tet处理组细胞内β-catenin蛋白水平也明显下降。结论 Tet能抑制HCT116细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与Tet通过降低细胞内β-catenin蛋白水平,抑制Wnt/β-catenin信号转导有关。     

青蒿琥酯对结肠癌细胞增殖、凋亡及β-catenin表达的影响

目的　探讨青蒿琥酯对结肠癌细胞增殖、凋亡及β-catenin 表达的影响。方法　取对数生长期的结肠癌HT-29 细胞,用12.5 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL的青蒿琥酯分别培养24 h、48 h 和72 h。MTT 检测细胞增殖;AnnexinV/PI 双染检测细胞凋亡率;流式细胞术检测细胞周期分布;Western blot 检测β-catenin 蛋白表达。结果　MTT 结果显示,青蒿琥酯能明显抑制结肠癌HT-29 细胞增殖,与对照组（0 μg/mL）相比,差异具有统计学意义（P<0.01）;AnnexinV/PI 检测结果表明,细胞的凋亡率随着青蒿琥酯浓度的增高而逐渐增高,明显高于对照组（P<0.05）;流式细胞仪检测细胞周期变化的结果显示,HT-29 细胞G0/G1 期比例与青蒿琥酯浓度呈反比（P<0.05）,G2/M 及S 期比例逐渐增加（P<0.05）。Western blot 检测结果证实,青蒿琥酯处理细胞后β-catenin 表达随药物浓度升高而降低（P<0.05）。结论　青蒿琥酯可抑制结肠癌细胞增殖,促进细胞凋亡,下调β-catenin 的表达,有望成为临床治疗肿瘤的新型药物。     

dalbinol通过ROS/Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡的作用机制研究

目的探讨天然产物dalbinol对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测dalbinol对人结肠癌HCT116细胞的增殖抑制作用;利用Hoechst 33342荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化;应用流式细胞术检测细胞凋亡率和ROS水平;通过Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路及凋亡相关蛋白的表达情况。结果 dalbinol可抑制人结肠癌HCT116细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性,24、48和72 h的IC50分别为(4.8±0.53)、(2.5±0.43)和(0.6±0.22)μmol·L-1;Hoechst 33342染色观察到细胞皱缩、核固缩和染色质凝集等典型凋亡的形态学变化,同时dalbinol可剂量依赖性地提高细胞凋亡率,且能增加细胞内ROS水平;Western blot结果发现dalbinol通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达水平,上调促凋亡蛋白Bax和Bim的表达,从而促进cleaved caspase-3和cleaved PARP活化裂解,进而诱导细胞凋亡;此外,dalbinol通过抑制Dvl-2和GSK3β(p S9)的蛋白表达,从而降低总的β-catenin和胞核β-catenin的表达,但胞质β-catenin无明显变化,最终下调Wnt/β-catenin通路下游靶蛋白c-Myc和Survivin的表达水平。结论dalbinol可抑制人结肠癌HCT116细胞增殖并诱导其凋亡,其分子机制可能与提高细胞内ROS水平和抑制Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路有关。     

青蒿素基于PI3K/AKT信号通路对人急性髓系白血病细胞凋亡的作用机制

目的分析青蒿素基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对人急性髓系白血病(AML)细胞凋亡的作用机制。方法以44例AML患儿原代细胞及K562细胞株4株为研究样本,平均分为对照组、实验组(分别加入12.5、25.0、50.0μg/ml青蒿琥酯),细胞计数法观察72 h内细胞生长趋势,采用流式细胞术检测不同浓度青蒿琥酯对细胞凋亡的影响,免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白(PI3K、AKT、P-AKT、Bcl-2、Bax、caspase-3、PTEN)的表达。结果 AML原代细胞、细胞株K562 24 h内细胞存活率≥80%,对照组AML原代细胞、细胞株K562 48～72 h细胞存活率仍≥70%,而实验组AML原代细胞、细胞株K562培养48 h细胞存活率均降至50%以下,且明显低于对照组(P<0.05);青蒿琥酯呈浓度依赖性诱导人AML原代细胞及K562细胞株凋亡,且25.0μg/ml组、50.0μg/ml组的细胞存活率低于12.5μg/ml组及对照组(P<0.05),25.0μg/ml组、50.0μg/ml组的细胞存活率比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养48 h后,实验组原代细胞及K562细胞株的PI3K、P-AKT、Bcl-2均明显下调(P<0.05),而Bax、caspase-3、PTEN表达上调(P<0.05),且青蒿琥酯浓度为25.0μg/ml组各项指标变化最明显,AKT无明显变化(P>0.05)。结论青蒿素类衍生物青蒿琥酯可经PI3K/AKT信号通路调节其Bcl-2、Bax、caspase-3、PTEN等凋亡相关蛋白表达,促进人AML细胞凋亡,25μg/ml浓度时效果较佳。     

青蒿琥酯通过wnt／β-catenin信号通路抑制低分化大肠癌的生长及转移

目的：研究青蒿琥酯（ART）对低分化大肠癌细胞生长和转移的影响，探讨Wnt／β-catenin信号通路在此抗癌效应中发挥的作用。方法：用免疫荧光和激光共聚焦扫描技术，筛选出β-catenin在细胞核内高度聚集。体外试验中，用MTT法、流式细胞术和ki-67免疫荧光法检测ART对该大肠癌细胞增殖和凋亡的影响；用western blot和免疫荧光法，分析ART对β-catenin表达量及细胞内分布的影响。体内试验中，将荷瘤裸鼠随机分组静脉注射给药，20天后处死裸鼠，称量瘤重，并用免疫组化法检测ART对肿瘤组织中β-catenin表达及分布的影响。用活体生物发光成像技术，实时监测ART对肿瘤增殖和转移活性的影响。结果：来源于中国大肠癌患者肝转移灶的肿瘤细胞CLY，其β-catenin聚集于细胞核内，Wnt／β-catenin通路高度激活。体外试验中，ART对CLY的IC50为20．34±2．20μM；10、20及50μM ART作用于CLY 72h后，凋亡率分别为17．37％，31．22％和40．18％，ki-67的表达也呈现出明显的剂量依赖性降低。ART不影响β-catenin的表达量，但能使其从细胞核内转移到细胞膜上，并下调Wnt／β-catenin通路靶基因c-myc和survivin的表达量，这提示该通路活性受到抑制。体内试验中，ART大剂量问歇给药组和小剂量持续给药组的抑瘤率分别为50．5％和35．4％；肿瘤组织中的β-catenin从细胞核内转移到细胞膜上。ART能有效降低CLY细胞转移活性。结论：ART通过下调低分化大肠癌细胞Wnt／β-catenin通路的活性，抑制其增殖、促进其凋亡，并降低其转移活性。     

青蒿琥酯对人大肠癌Lovo细胞侵袭影响的初步研究

目的观察青蒿琥酯对大肠癌细胞的侵袭作用,并探讨其作用机制。方法采用不同浓度的青蒿琥酯(20、80、160μmol·L-1)作用于人大肠癌Lovo细胞,软琼脂集落形成实验检测青蒿琥酯对Lovo细胞锚着不依赖性增殖的影响;Transwell侵袭实验检测其对Lovo细胞侵袭的影响;Western blot方法分别检测Lovo细胞内HMGB1和MMP-2蛋白质水平的表达情况。结果青蒿琥酯能有效抑制Lovo细胞的增殖和侵袭能力,且呈剂量依赖性(P<0.01)。与对照组相比,不同浓度青蒿琥酯处理组HMGB1和MMP-2蛋白表达逐渐减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论青蒿琥酯可明显抑制大肠癌Lovo细胞侵袭,其机制可能与抑制HMGB1蛋白,下调MMP-2表达有关。     

褐藻糖胶通过抑制Wnt/β-catenin通路诱导多发性骨髓瘤细胞PRMI8226凋亡

目的探讨褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞PRMI8226凋亡时Wnt/β-catenin通路的变化。方法褐藻糖胶不同浓度(25、50、100、200、400μg·mL-1)分别作用于PRMI8226细胞24、48、72 h,采用MTT法检测PRMI8226细胞增殖情况并求得半数抑制浓度(IC50);以1/2 IC50浓度的褐藻糖胶作用于PRMI8226细胞72 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。将细胞分为空白对照组、Wnt通路抑制剂(DKK-1)组(100 ng·mL-1)及褐藻糖胶(25μg·mL-1)组,采用Western blot检测β-catenin、c-myc、bax及caspase 3蛋白表达水平。结果褐藻糖胶对PRMI8226细胞增殖抑制作用呈时间-剂量依赖性增强。PRMI8226细胞经褐藻糖胶25μg·mL-1处理72 h后,其凋亡率(12.22%)明显高于对照组(4.82%)(P<0.05)。Western blot结果显示,与空白对照组比较,两组β-catenin和c-myc表达水平均有显著差异(P<0.05),褐藻糖胶组β-catenin和c-myc表达水平与DKK-1组比较无显著差异(P>0.05);褐藻糖胶组caspase3和bax蛋白表达水平较DKK-1组增加(P<0.05),两组与空白对照组比较表达亦增加,均有显著差异(P<0.05)。结论褐藻糖胶通过抑制Wnt/β-catenin通路的活化,能诱导多发性骨髓瘤PRMI8226细胞凋亡。     

黄芩苷通过Wnt/β-catenin信号通路对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的促进作用

目的研究黄芩苷(baicalin)对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow derived mesenchymal stem cells,r BMSC)成骨分化过程中Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法采用贴壁筛选法体外培养r BMSC,给予黄芩苷3、5、7 d后,比较药物处理组与对照组之间碱性磷酸酶(ALP)的活性。同时检测给予黄芩苷对碱性磷酸酶阳性克隆和矿化结节形成的影响。提取总mRNA和总蛋白,用实时荧光定量PCR检测黄芩苷对Wnt10a、GSK-3β、β-catenin以及LEF1 mRNA水平的影响。免疫印迹检测药物处理对β-catenin以及Runx2蛋白表达量的影响。结果黄芩苷明显提高ALP的活性。10μmol·L-1浓度的黄芩苷还可增加碱性磷酸酶克隆数和钙化结节的形成。黄芩苷还可提高Wnt10a、β-catenin、GSK-3β、LEF1以及osteocalcin的mRNA水平,并提高β-catenin和Runx2的蛋白表达量。结论黄芩苷在0.1~50μmol·L-1的给药浓度下可促进rB MSC的成骨分化成熟,Wnt/β-catenin信号可能参与调控rB MSC的成骨分化。     

熊果酸诱导人急性髓系白血病细胞株U937细胞凋亡的实验研究

目的探讨熊果酸对人急性髓系白血病细胞株U937细胞的作用及机制。方法用不同浓度的熊果酸处理对数生长期的U937细胞48 h后,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测其对细胞增殖的影响;Annexin V/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫印迹法(Western blot)检测Wnt、β-catenin、p53、Bcl-2、Bax表达,以及细胞浆凋亡诱导因子(AIF)和细胞色素蛋白C(CytC)蛋白表达。结果熊果酸呈浓度依赖性诱导U937细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax和细胞浆AIF、CytC表达,下调Wnt、β-catenin、p53及Bcl-2表达。结论熊果酸对U937白血病细胞有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能为抑制Wnt/β-catenin/p53信号途径促发白血病细胞死亡。     

白细胞介素 -18抑制肝癌细胞增殖、促进细胞凋亡的机制研究

目的 探讨白细胞介素-18(IL-18)通过调控Wnt/β-连环素(β-catenin)信号通路影响肝癌细胞增殖及凋亡的作用机制.方法 培养肝癌细胞株HepG2、Bel-7402与正常肝细胞株L02,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测细胞IL-18 mRNA及蛋白表达.预实验中筛选出HepG2细胞为实验细胞,分别转染pcDNA、pcDNA-IL-18,Western blotting验证转染效率.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)与膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)染色实验分别检测HepG2细胞增殖及凋亡情况.qRT-PCR与Western blotting分别检测HepG2细胞中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、β-catenin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平.HepG2细胞中转染IL-18过表达质粒后再加入Wnt/β-catenin通路激活剂(SKL2001),并检测其对HepG2细胞增殖及凋亡的影响.结果 与L02细胞相比,肝癌HepG2、Bel-7402细胞中IL-18 mRNA及蛋白表达均显著降低[(1.02±0.12)比(0.39±0.09)/(0.45±0.12);(0.41±0.14)比(0.11±0.13)/(0.19±0.14)](P<0.05);IL-18过表达后HepG2细胞吸光度[24 h(0.31±0.10)比(0.27±0.13);48 h(0.63±0.12)比(0.39±0.14);72 h(0.98±0.18)比(0.54±0.15)]、Bcl-2及β-catenin、Cyclin D1蛋白表达水平均明显低于pcDNA组,而细胞凋亡率[(6.93±0.22)％比(20.54±3.97)％]及Bax蛋白表达水平均明显升高;SKL2001可激活Wnt/β-catenin信号通路进而逆转IL-18对肝癌细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的促进作用.结论 IL-18可下调肝癌细胞β-catenin表达而抑制Wnt/β-catenin信号通路进而减弱肝癌细胞增殖能力并提高细胞凋亡水平.     

党参炔苷调节AKT/GSK-3β/snail信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的 探究党参炔苷(LOB)调节蛋白激酶B(AKT)/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)/Snail信号通路对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法 将GC细胞株SGC7901随机分为对照组(Control组)、低浓度LOB组(LOB-L组,10μmol/L LOB)、中浓度LOB组(LOB-M组,20μmol/L LOB)、高浓度LOB组(LOB-H组,40μmol/L LOB)和高浓度LOB+AKT激活剂SC79组(LOB-H+SC79组,40μmol/L LOB+20μmol/L SC79)。CCK-8法检测5组细胞增殖能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。流式细胞术检测细胞凋亡。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法测定5组细胞AKT、GSK-3β、snail1 mRNA的表达。Western Blot检测5组细胞AKT/GSK-3β/snail信号通路和凋亡、EMT过程相关蛋白表达。结果 与Control组比较,LOB-M组、LOB-H组SGC7901细胞OD450值(48 h、72 h)、细胞划痕愈合率、细胞侵袭数目...     

葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖研究

目的 探讨葛根素(puerarin)对人子宫颈癌细胞株HeLa的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制.方法 MTT法检测不同浓度葛根素(0,12.5,25,50)处理48 h对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞术检测葛根素对HeLa细胞凋亡的影响.Western blotting 检测葛根素对HeLa细胞Wnt,β-catenin ,Bax,Bcl-2,p53和p21表达水平影响.结果 葛根素对 HeLa细胞增殖有明显的抑制作用,呈明显的剂量-效应依赖性;葛根素明显促进HeLa细胞凋亡;Western blotting检测显示,经葛根素处理72 h后,Wnt,β-catenin ,Bcl-2,p53和p21表达明显下降,呈浓度依赖性.结论 葛根素可诱导HeLa细胞增殖抑制和凋亡, 其作用机制与抑制Wnt/β-catenin 信号通路相关.     

汉防己碱对人膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的分析汉防己碱(Tet)对人膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,并初步探讨其分子机制。方法利用结晶紫染色和克隆形成实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞侵袭;Hochest 33258染色和Western blot检测细胞凋亡;Western blot检测Wnt/β-catenin信号的活化情况。结果汉防己碱可抑制人膀胱癌细胞增殖和侵袭,并促进细胞凋亡。汉防己碱可抑制DVL蛋白表达,抑制GSK3β在9位丝氨酸的磷酸化,并降低β-catenin及其下游靶分子Cyclin D1和c-Myc的蛋白水平。结论汉防己碱可抑制人膀胱癌细胞增殖和侵袭,并促进细胞凋亡,这可能与其对Wnt/β-catenin信号的抑制作用有关。     

多纳非尼抑制胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制研究

目的 研究多纳非尼抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制。方法 将人胆管癌TFK-1细胞分为对照组（加入等量的二甲基亚砜处理）,2、5、10μmol/L多纳非尼组。CCK-8法检测细胞增殖抑制率;平板克隆实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测通路蛋白Wnt、β-catenin、细胞周期蛋白-D1(Cyclin D1)、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax的表达;免疫荧光实验检测β-catenin进入细胞核的变化。结果 随着多纳非尼浓度增加,TFK-1细胞增殖抑制率、凋亡率升高,平板克隆形成数、细胞迁移和侵袭数量逐渐减少,Wnt、β-catenin、Cyclin D1、Bcl-2表达均逐渐下降,Bax表达逐渐增高（P<0.05）;免疫荧光显示,与对照组比较,2μmol/L多纳非尼组能够抑制β-catenin进入细胞核（P<0.05）。结论多纳非尼可以抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路活化及促进细胞凋亡相关。     

人参皂苷Rh2调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡

目的探究人参皂苷Rh2(ginsenoside Rh2,Rh2)诱导人结肠癌细胞SW480凋亡作用机制。方法 CCK-8法检测Rh2对SW480细胞增殖的影响;流式细胞术(Flow cyto Metry,FCM)检测Rh2对SW480细胞凋亡的影响;Hoechst33258染色观察Rh2对SW480细胞凋亡形态学的影响;Western blot检测经Rh2诱导SW480细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、cleaved caspase-3,PI3K/AKT/GSK-3β信号通路相关蛋白PI3K、AKT、P-AKT、GSK-3β、P-GSK-3β表达量变化;LY294002、Rh2单独及联合诱导SW480细胞后,蛋白PI3K、AKT、P-AKT、GSK-3β、P-GSK-3β表达量变化。结果CCK-8结果显示Rh2呈时间浓度依赖抑制SW480细胞增殖。FCM结果显示细胞早期凋亡率由正常对照组的(0.70±0.09)%增至(11.06±1.04)%(P<0.05)。Hoechst33258结果显示,Rh2诱导SW480细胞48h后呈现典型的凋亡形态学改变。Western blot结果显示,经Rh2诱导的SW480细胞,凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低,Bax、p53、激活型胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达增加;PI3K/AKT/GSK-3β信号通路蛋白PI3K、P-AKT、P-GSK-3β表达量与对照组比较明显减少,AKT、GSK-3β表达量无明显变化;LY294002、Rh2和LY294002与Rh2联合诱导SW480细胞后,总AKT蛋白和总GSK-3β蛋白表达量基本一致,LY294002与Rh2联合用药对SW480细胞中PI3K、P-AKT和P-GSK-3β的表达抑制作用较单独用药更加明显。结论Rh2可能是通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β通路,激活p53信号通路,激活caspase-3,破坏Bcl-2/Bax比例,诱导结肠癌细胞SW480凋亡。     

青蒿琥酯对人肝癌细胞HepG2增殖迁移及细胞凋亡的影响

目的利用多种生物学方法检测青蒿琥酯对肝癌细胞在增殖、周期、迁移、细胞凋亡等生物学特性方面的影响。方法在一定时间下,将不同浓度的青蒿琥酯(ART)作用于人肝癌细胞株HepG2,利用噻唑蓝(MTT)方法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡变化情况;利用trans-well检测细胞迁移变化情况;利用聚合酶链反应(PCR)方法,检测ART用药前后与细胞凋亡相关的基因Caspase3的表达变化情况。结果对照组(0 mg/L ART)HepG2细胞在增殖、迁移等方面的能力显著高于青蒿琥酯实验组;对照组静息期(G0/G1期)细胞比例、细胞凋亡率显著低于ART实验组;ART实验组细胞Caspase3基因的表达水平显著高于对照组。结论实验结果表明ART是新的潜在的有效抗肝癌药物,可以通过抑制细胞增殖、迁移,阻滞细胞周期,提高细胞凋亡率等方面起到抑癌作用。     

柚皮素对胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响

目的 探讨柚皮素对胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响及糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在其中的作用。方法 PANC-1细胞根据随机数字表分为7组(每组12孔，细胞密度为2 500个/mm²):0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、control virus和GSK-3β virus组。0μmol/L组，加入相应体积溶剂；50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L和400μmol/L分别在培养液中加入终浓度为50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L和400μmol/L的柚皮素进行培养；Control virus组，感染了对照病毒的PANC-1细胞培养液中加入200μmol/L的柚皮素进行培养；GSK-3β组，感染了GSK-3β过表达慢病毒的PANC-1细胞培养液中加入200μmol/L柚皮素。CCK-8检测细胞活力，细胞计数仪测定细胞数量，流式细胞测量凋亡细胞百分比，Western blot方法检测Ki-67、cleaved caspase-3、GSK-3β和p-GSK-3...