新型倍半萜Souliene A抑制小胶质细胞活化作用及机制

目的研究Souliene A对LPS与IFN-γ介导的小胶质细胞激活的抑制作用与机制及其对小胶质细胞激活引起的神经元损伤的保护作用。方法分别用LPS与IFN-γ刺激小鼠小胶质细胞BV2,Griess法测定NO。Western blotting和半定量RT-PCR法检测iNOS,COX-2,IL-6,IL-1β,TNF-α的表达及其相关信号通路。ELISA法检测PGE2和IL-6,IL-1β,TNF-α的表达。用流式细胞术检测小胶质细胞内ROS生成。用MTT法检测神经元细胞的存活率。结果 SoulieneA能明显抑制NO和PGE2的生成,减少炎症介质IL-6,IL-1β,TNF-α的表达,抑制小胶质细胞内ROS的产生。SoulieneA还能抑制NF-κB的活化与Akt的磷酸化并能有效的抑制小胶质细胞条件培养液引起的神经元损伤。     

金钗石斛生物总碱对脂多糖激活星形胶质细胞产生炎症因子的影响

目的观察金钗石斛生物总碱对外源性内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活大鼠大脑皮层星形胶质细胞(astrocyte)及诱导其产生和释放炎症介质的影响,探讨石斛生物总碱对星形胶质细胞的抗炎作用。方法通过MTS检测细胞存活率,ELISA法检测TNF-α炎性因子蛋白的表达,实时定量多聚酶链反应(real time RT-PCR)检测炎症相关基因TNF-α、IL-6 mRNA的表达。结果①LPS刺激星形胶质细胞后,MTS检测吸光度明显升高,与正常组比较差异有显著性;②金钗石斛生物总碱能够降低LPS所致的TNF-α蛋白的高表达(P<0.05);③金钗石斛生物总碱能够降低LPS诱导的星形胶质细胞吸光度的升高,同时明显抑制LPS所致的TNF-α、IL-6 mRNA的高表达。结论金钗石斛生物总碱能够拮抗LPS所引起的炎症反应,其作用与抑制星形胶质细胞的激活及其炎症因子的释放密切相关。     

米诺环素调控小胶质细胞激活对PC12细胞生长的影响

目的探讨米诺环素抑制小胶质细胞激活对PC12生长和凋亡的影响。方法 BV2细胞分为对照组、LPS组、LPS加米诺环素组;以LPS刺激激活小胶质细胞系BV2细胞,用米诺环素干预BV2细胞的激活;将各组BV2细胞与PC12细胞进行共培养24h;酶联免疫吸附法检测共培养体系细胞上清液TNF-α、IL-1β的含量,MTT法检测PC12细胞生存率。结果 BV2细胞与PC12细胞共培养24h后,LPS组上清液炎症因子TNF-α、IL-1β表达明显升高,PC12细胞存活率下降,米诺环素能抑制以上趋势。结论 MG激活对PC12细胞存在明显损伤效应,米诺环素可保护MG介导的PC12细胞损伤,可能与通过下调炎症表达有关。     

石菖蒲抑制脂多糖诱导的神经胶质细胞炎性反应及其机制

目的 观察石菖蒲对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠原代神经胶质细胞炎性反应的抑制作用并探讨其可能机制.方法 分离提取大鼠原代神经胶质细胞,用LPS刺激2h后分别加入不同浓度的石菖蒲含药血清,采用硝酸还原酶法检测石菖蒲对一氧化氮的影响,运用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清液中IL-1 β、IL-8、TNF-α水平,通过实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达.结果 LPS能够激活神经胶质细胞,不同浓度的石菖蒲含药大鼠血清在不影响细胞存活率的情况下,可以显著降低细胞培养上清液中NO、IL-1β、IL-8、TNF-α水平,抑制细胞内iNOS mRNA表达(P＜0.05).结论 石菖蒲的神经保护机制可能与抑制胶质细胞炎症反应有关.     

尼古丁受体参与小胶质细胞炎性因子的释放

目的 研究尼古丁受体(nAChR)对细菌脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞(MGCs)炎性反应的影响.方法 体外培养大鼠MGCs,以LPS诱导MGCs的炎性反应.实验随机分为4组:空白对照组(C组)、LPS对照组(L组)、nAChR激动剂尼古丁干预组(N组)、nAChR拮抗剂美加明干预组(M组).收集细胞培养液,应用ELISA法检测MGCs的炎性介质肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β).收集细胞爬片固定后行SP法免疫细胞化学染色观察小胶质细胞表面补体Ⅲ型受体(OX-42).结果 与C组和N组比较,L组TNF-α、IL-1β表达明显增加,OX-42显色明显加深(P<0.05);L组与M组TNF-α、IL-1β表达及OX-42显色均无明显差异(P>0.05).结论 LPS可激活MGCs,使其表达TNF-α、IL-1β增加,OX-42增加;nAChR参与LPS诱导的MGCs的炎性反应,其激动剂尼古丁可抑制MGCs的炎症反应.     

吡格列酮对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性细胞因子释放的影响

目的研究吡格列酮对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症介质释放的抑制作用及其信号传导通路。方法神经胶质酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)免疫荧光染色法鉴定星形胶质细胞纯度。ELISA方法检测IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达量的变化。Griess法测定培养细胞上清液中一氧化氮(NO)含量。结果星形胶质细胞经GFAP免疫荧光鉴定,其阳性率可达95%以上。LPS组能明显增加星形胶质细胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α及NO。吡格列酮能明显抑制LPS引起的这些作用,并呈一定浓度依赖性。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的特异性阻断剂GW9662能明显对抗吡格列酮对LPS引起的IL-1β、IL-6、TNF-α及NO增加的抑制作用。与LPS组相比,JNK特异性阻断剂SP600125(5μmol·L-1)亦能有效对抗LPS诱导星形胶质细胞IL-1β、IL-6、TNF-α及NO分泌的增加;特异性iNOS抑制剂SMT可明显抑制LPS引起的NO分泌增加。结论吡格列酮能明显改善LPS诱导的大鼠皮层星形胶质细胞的损伤,这种作用可能与激活PPARγ、抑制JNK信号传导通路有关。     

安宫牛黄丸及朱砂和雄黄对脂多糖诱导的神经损伤的作用(英文)

目的探讨朱砂和雄黄在安宫牛黄丸(AGNH)配方中对脂多糖(LPS)介导的神经损伤的保护作用及机制。方法制备大鼠中脑原代神经元-神经胶质细胞联合培养模型。实验分为正常对照组、LPS 10μg.L-1模型组、LPS +朱砂(4和40 mg.L-1)组、LPS +雄黄(4和40 mg.L-1)组和LPS +AGNH(40和400mg.L-1)组。药物与细胞作用30 min后加入LPS;7 d后进行实验指标检测。采用免疫组织化学染色法检测酪氨酸羟化酶阳性的细胞数量和形态学变化以及小神经胶质细胞的激活情况,实时RT-PCR检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)与Griess试剂分别检测细胞培养上清液中TNF-α和一氧化氮(NO)的含量。结果与正常对照组比较,LPS10μg.L-1作用于细胞,多巴胺能神经元的数量明显下降了40%(P<0.05);LPS显著诱导小神经胶质细胞的激活,TNF-αmRNA和iNOS mRNA的表达分别增加了9倍和2倍(P<0.05),同时神经元-胶质细胞联合培养上清液中TNF-α和NO的含量分别增加了20倍和30倍(P<0.05)。与LPS模型组比较,AGNH400mg.L-1和雄黄40 mg.L-1能明显拮抗LPS对多巴胺能神经元的毒性作用,多巴胺神经元数量分别上升了40%和30%(P<0.05);AGNH400 mg.L-1和雄黄40 mg.L-1能抑制小神经胶质细胞的激活,小胶质神经细胞中TNF-αmRNA分别下降了61%和52%(P<0.05)和iNOS mRNA的表达分别降低了58%和51%(P<0.05),而且神经元-神经胶质细胞联合培养上清液中TNF-α的含量分别降低了55%和43%(P<0.05)以及NO的含量分别下降了53%和34%(P<0.05)。而朱砂对LPS的作用无影响。结论 AGNH能改善LPS介导的神经元损伤,雄黄是其抗炎作用的有效成分之一,朱砂未见明显的神经保护作用。     

红花注射液通过抑制脊髓小胶质细胞激活及炎性因子的释放缓解大鼠炎性痛的研究

目的探讨红花注射液缓解完全弗氏佐剂所致大鼠炎性痛的药理作用机制。方法将24只大鼠随机分为假手术组、完全弗氏佐剂组、地塞米松阳性对照组和红花注射液治疗组,每组6只。通过测定大鼠热刺激缩足反应潜伏期和机械缩足反射阈值,观察红花注射液是否具有缓解大鼠炎性痛的作用。采用免疫荧光检测炎性痛大鼠脊髓小胶质细胞的激活;免疫印迹法检测炎性痛大鼠脊髓背角神经元细胞内p-ERK、p-CREB蛋白的表达;ELISA法检测炎性痛大鼠脊髓背角组织中TNF-α、IL-1β和IL-6的表达;RT-PCR法检测炎性痛大鼠脊髓背角神经元细胞内c-fos基因的表达。结果红花能够延长炎性痛大鼠热刺激缩足反应潜伏期,提高炎性痛大鼠机械刺激缩足反射阈值;红花通过抑制脊髓小胶质细胞激活,减少炎性痛大鼠脊髓背角p-ERK和p-CREB蛋白,抑制TNF-α、IL-1β和IL-6的释放,降低c-fos基因的表达发挥镇痛作用。结论红花对炎性痛具有较好的缓解作用,其机制可能与抑制小胶质细胞激活,调节p-ERK信号通路和减少TNF-α、IL-1β和IL-6的释放有关。     

新视角重探小鼠胶质细胞体外培养技术与炎症模型

目的通过比较新材料与传统材料在胶质细胞培养中的优劣及特点,优化小鼠胶质细胞炎症模型。方法利用q PCR、流式细胞术、免疫荧光等手段,表征胶质细胞组成比例与细胞纯度。在LPS刺激下,从mRNA与蛋白水平,评估不同包被材料对细胞炎症反应的影响。结果 LPS(100μg·L~(-1))刺激48 h,混合胶质细胞炎症因子表达量明显高于小胶质细胞,如PDL包被时,混合胶质细胞TNF-α表达量为(903. 8±322. 2) ng·L~(-1),明显高于小胶质细胞(565. 4±159. 8) ng·L~(-1); Matrigel包被时,混合胶质细胞表层的小胶质细胞状态更佳。而小胶质细胞在未包被时,对LPS更为敏感,TNF-α水平为(6861. 4±1606. 6) ng·L~(-1)。结论 Matrigel包被培养的混合胶质细胞,可最大程度模拟体内环境,为建立胶质细胞炎症模型的最佳条件;评估炎症模型应以蛋白水平检测结果为主要指标。     

淫羊藿次苷Ⅱ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应

目的研究ICSⅡ对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症反应的作用。方法体外分离新生SD大鼠脑皮质组织提取原代星形胶质细胞并进行培养。将星形胶质细胞分为空白组、空白+ICSⅡ高浓度组、模型组、模型+ICSⅡ低浓度组、模型+ICSⅡ中浓度组、模型+ICSⅡ高浓度组、模型+地塞米松组。ICSⅡ(5,10,20μmol·L-1)或DSMX(1μmol·L-1)预处理星形胶质细胞1 h后,继续与LPS共同作用24 h。采用MTT法检测ICSⅡ作用于星形胶质细胞的安全浓度范围,确定安全浓度后再观察ICSⅡ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响;采用ELISA法检测星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β,NO,Aβ1-40和Aβ1-42的水平;采用Western蛋白免疫印迹技术检测COX-2,i NOS,IκB-α,NF-κB(p65)(胞核),NF-κB(p65)(胞质)和BACE1的蛋白表达,以及NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β磷酸化水平;采用分子对接技术模拟ICSⅡ与BACE1蛋白的结合。结果 ICSⅡ(0～50μmol·L-1)对星形胶质细胞无毒性作用。模型组较空白组星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β和NO水平均显著上升(P<0.05);细胞炎症通路蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(p65)(胞核)及BACE1表达升高(P<0.05);IκB-α和NF-κB(p65)(胞质)表达显著降低(P<0.05);NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平明显上升(P<0.05)。给予ICSⅡ能够明显降低TNF-α,IL-1β和NO水平(P<0.05)。此外,ICSⅡ显著下调炎症相关蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(胞核)及BACE1的表达(P<0.05),明显上调NF-κB(胞质)和IκB-α蛋白表达(P<0.05)。同时,明显降低NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平(P<0.05),对LPS诱导的IκB-α降解、NF-κB活化及细胞核易位均具有显著的抑制作用。结论本研究条件下,ICSⅡ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路发挥其对LPS诱导的星形胶质细胞炎症损伤的保护作用。