紫草组分的抗肿瘤活性及其凋亡机制研究

目的研究紫草组分的体外抗肿瘤作用及其作用机制。方法用MTT法、流式细胞仪,观察1.25～10.00μg.mL-1紫草组分对B16F10及HepG2细胞作用24 h的生长抑制作用及凋亡诱导作用;用激光共聚焦显微镜,观察药物的细胞分布;用Western-blot法检测细胞凋亡相关蛋白分子的变化。结果紫草组分能够抑制HepG2和B16F10细胞的增殖并诱导其早期凋亡,并呈浓度与时间依赖性。药物主要分布于细胞质中,在给药后30 min,给药组的p-JNK与p-p38分子明显增加。结论紫草组分可抑制HepG 2和B16F10细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

紫草素诱导A375-S2细胞凋亡的分子机制研究

目的　研究紫草素诱导人黑色素瘤A375 S2细胞凋亡的分子机制。方法　MTT法、Hoechst33258荧光染色、DNA片段化分析、Westernblot、流式细胞分析以及caspase活力分析等。结果　10μmol·L-1紫草素可明显地抑制A375 S2细胞的生长,其半数有效抑制浓度IC50为 (10 9±1 8)μmol·L-1。10μmol·L-1紫草素可诱导A375 S2细胞凋亡,并经历了caspase 9和caspase 3的激活。紫草素促进p53蛋白的积聚,Bax蛋白表达的上调和Bcl xL蛋白表达的下调,进而导致细胞色素C的释放,致使细胞凋亡。紫草素可使细胞周期停止在G1 期。结论　紫草素可诱导A375 S2细胞周期停止在G1 期,其诱导细胞凋亡的途径经过p53介导的Bax和caspase 9的激活。     

白术内酯Ⅰ对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡的影响

目的：研究白术内酯Ⅰ（atractylenolide Ⅰ）对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-3、p53、Bcl-2表达的影响。方法：建立SGC-7901裸鼠移植瘤模型,观察白术内酯Ⅰ对肿瘤生长的影响;TUNEL法检测移植瘤组织中的细胞凋亡;Western blotting检测瘤组织中Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3及p53蛋白表达。结果：白术内酯Ⅰ不同程度抑制裸鼠SGC-7901移植瘤的生长,与对照组比较,给药后肿瘤体积（TV,tumor volume）、相对肿瘤体积（RTV,relative tumor volume）和相对肿瘤增殖率[T/C（%）,T_RTV/C_RTV]明显下降;移植瘤组织中凋亡细胞明显增多;白术内酯Ⅰ上调移植瘤组织中Bax、cleaved caspase-3及p53的蛋白表达,下调Bcl-2 的蛋白表达。结论：白术内酯Ⅰ能明显抑制人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤的生长,分子机制主要包括增加Bax、cleaved caspase-3、p53蛋白表达,减少Bcl-2蛋白表达,最终导致肿瘤细胞凋亡。     

桔梗多糖对U-14宫颈癌抗肿瘤作用的研究

目的研究桔梗多糖抑制U14宫颈癌实体瘤小鼠肿瘤生长的作用及相关机制。方法建立小鼠宫颈癌(U14)实体瘤模型,观察小鼠桔梗多糖(20,40和60mg·kg-1)灌胃给药15d后,对肿瘤生长抑制作用的影响;用原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞的凋亡情况;利用免疫组织化学法分析与细胞凋亡密切相关的基因(突变型p53,p19ARF,Bax)蛋白表达的情况。结果桔梗多糖体内有显著抑制小鼠宫颈癌U14实体瘤生长的作用,桔梗多糖上调了p19ARF和Bax蛋白表达量,诱导突变型p53蛋白表达显著下降。结论桔梗多糖具有抑制实体瘤U14生长的作用,推测该多糖可能是通过调节细胞凋亡相关基因的表达,进而促进肿瘤细胞的凋亡而发挥其抗肿瘤作用。     

牡荆素对人肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用及其机制的影响

目的: 研究牡荆素(vitexin)对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用, 并初步探讨其作用机制。方法: 体外培养人肝癌细胞SMMC-7721, 分别采用MTT法和Hoechst33258核染色法检测牡荆素对人肝癌细胞SMMC-7721活力的影响以及观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位(ΔΨm) 变化;蛋白免疫印迹法检测p53、Bcl-2、Bax等相关凋亡蛋白水平的表达情况。结果: 牡荆素培养人肝癌细胞SMMC-7721 48, 72, 96 h后能明显抑制细胞增殖, 呈时间-剂量依赖性(P<0.05), 其IC₅₀分别是150.37, 116.24, 90.19 μmol·L^-1。牡荆素作用于人肝癌细胞SMMC-7721 72 h后, 以浓度依赖性方式增加细胞凋亡率、降低线粒体膜电位(ΔΨm) 以及上调p53、Bax、Caspase-3等相关促凋亡蛋白的表达, 下调Bcl-2抗凋亡蛋白的表达。结论: 牡荆素能抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖诱导凋亡, 呈时间-剂量依赖性, 其作用机制可能通过依赖P53途径下调Bcl-2, 上调Casepase-3、Bax、P53、PARP等基因表达, 进而诱导凋亡有关。     

冬凌草甲素与西妥昔单抗联用通过线粒体途径及内质网应激途径协同诱导人喉癌细胞凋亡

目的探讨冬凌草甲素与西妥昔单抗联用协同诱导人喉癌细胞凋亡的分子机制。方法首先采用MTT法考察冬凌草甲素与西妥昔单抗联用对两株人喉癌细胞(HEp-2和Tu212细胞)增殖的影响;建立HEp-2裸鼠移植瘤模型考察冬凌草甲素与西妥昔单抗联用体内抗肿瘤效果;采用高内涵技术和流式细胞术检测冬凌草甲素与西妥昔单抗联用对两株人喉癌细胞凋亡比例、线粒体变化及活性氧(ROS)的水平。进一步采用Western印迹法检测线粒体途径相关蛋白(Bax和Bcl-2)及内质网应激相关蛋白(GRP78和CHOP)的变化;同时引入ROS清除剂NAC考察其对联合用药引起的线粒体途径及内质网应激相关蛋白变化的影响。结果 MTT结果显示,与两个单药组相比,冬凌草甲素与西妥昔单抗联用可以明显增加细胞生长抑制作用(P<0.01),且协同指数(CI值)<1。在HEp-2裸鼠移植瘤模型中,西妥昔单抗可以明显增强冬凌草甲素单药对移植瘤的生长抑制作用,说明在体内和体外水平二者联用均可以协同抑制人喉癌细胞生长。高内涵技术及流式细胞术均证明,与单独用药组相比,联合用药可以明显降低线粒体膜电位(P<0.05,P<0.01),同时联合用药也可以明显增加线粒体质量和ROS的含量(P<0.01)。西妥昔单抗可以增加冬凌草甲素单药对于Bax蛋白上调及Bcl-2蛋白下调作用(P<0.05),说明内源性途径参与了冬凌草甲素与西妥昔单抗联用诱导的细胞凋亡过程。此外,联合用药显著上调内质网应激相关蛋白GRP78及CHOP蛋白表达(P<0.05),提示联合用药可能通过激活内质网应激诱导人喉癌细胞发生凋亡。加入ROS的清除剂NAC可以逆转联合用药诱导的Bax,GRP78和CHOP的上调及Bcl-2的下调。结论冬凌草甲素与西妥昔单抗联用具有协同抗喉癌生长的作用,二者联用可以通过ROS介导线粒体途径及内质网应激诱导人喉癌细胞凋亡。     

重组人p53腺病毒联合表阿霉素抑制胃癌细胞的作用

目的 分析重组人p53腺病毒（即rAd-p53）与表阿霉素（EPI）对胃癌细胞的抑制作用。方法 将胃癌细胞（MGC-803）平均分为对照组、EPI组、rAd-p53组、两药联合组,通过观察胃癌细胞的增殖曲线、细胞内瑞氏染色和化学染色,对各组的细胞繁殖周期及细胞形态、p53基因的表达进行比较。结果 与其对照组相比,两药联合组的抑制百分率为：59.93%、67.05%、68.65%、99.40%,两药联合运用的抑制率与单药处理的抑制率相比差异具有统计学意义（P〈0.01）。流式细胞的分析发现,重组人p53腺病毒主要使胃癌细胞停留于G2/M期,联合EPI对细胞G2/M期的阻滞作用,使Sub-G1峰极高。而通过瑞氏染色可得,EPI组的细胞呈现聚集状,结构和形态较为完整;rAd-p53组则只有少量聚集,并且细胞形态破坏,细胞凋亡。两药联合组的细胞数急剧减少,形态结构破坏,凋亡数目比rAd-p53组明显增多。对细胞进行免疫化学染色可得,rAd-p53组与两药联合组的细胞核以及细胞质之中均有p53蛋白的表达,两药联用组表达更明显;而对照组与EPI组中,p53蛋白只于细胞核中表达。结论 重组人p53腺病毒联合表阿霉素对胃癌细胞的抑制作用十分显著,在临床应用中值得推广。     

雷帕霉素对肝癌化疗的增敏作用及相关机制研究

目的探讨雷帕霉素(rapamycin)对阿霉素(DOX)治疗肝癌效果的影响以及相关机制。方法 DOX单独或与rapamycin联合处理HepG2、Hep3B 2种肝癌细胞48 h,用MTT法测定细胞的增殖情况;DOX、rapamycin以及两者联合处理HepG2、Hep3B细胞24 h,以流式细胞术检测细胞凋亡率,用Western blot法检测PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白(p-Akt、p-mTOR、p21和p53)的表达。结果 DOX能浓度依赖性抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖,且对HepG2细胞的抑制作用明显强于Hep3B细胞;与单用DOX比较,DOX与rapamycin联用对2种细胞增殖的抑制作用明显增加,且增加Hep3B细胞对DOX敏感性的作用尤为显著。DOX作用HepG2和Hep3B细胞24 h,可诱导2种细胞发生不同程度的凋亡,rapamycin单独作用的促凋亡作用不明显,但与DOX联用后能明显增加DOX的促凋亡作用,2种细胞的凋亡率均明显增加。Western blot结果显示,rapamycin能明显上调p-Akt、p21和下调p-mTOR在2种细胞的表达水平,轻度上调p53在HepG2中的表达;DOX能轻度上调p-Akt、p21和下调p-mTOR在2种细胞的表达水平,明显上调p53在HepG2中的表达,Hep3B中无p53表达;两药合用对上述蛋白表达的影响有协同作用。结论 rapamycin能增加DOX对不同p53状态肝癌细胞的增殖抑制和促凋亡作用及肝癌对DOX化疗的敏感性,其机制可能与rapamycin激活凋亡的p53和不依赖p53的p21途径有关。     

基底细胞癌中p16、bcl-2基因蛋白的检测

基底细胞癌,又称基底细胞上皮瘤,是皮肤的恶性上皮瘤,可能有起源于表皮及其附件的基底细胞。近年来的研究发现,一些与凋亡有关的基因如 p53、Bax、bcl-x 及增殖细胞核抗原等在基底细胸癌中表达异常,提示基底细胞癌可能有异常的细胞凋亡。bcl-2是与细胞凋亡关系密切的原癌基因之一,p16为近年发现的新的抑癌基因,我们采用免疫组化技术对30例基底细胞癌组织中细胞凋亡相     

蛇床子素通过p53信号通路诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡

目的 探讨蛇床子素对人乳腺癌细胞株MCF-7的作用及其机制。方法 对数生长期的MCF-7 细胞用0,25,50,100 mmol·L^-1的蛇床子素处理。细胞培养48 h后,利用MTT检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡和膜电位。RT-PCR检测p53、p21、BCL-2、Bax和CytC mRNA水平;免疫印迹法检测p53、p21、BCL-2、Bax 和CytC 表达。结果 蛇床子素可以成浓度依赖性诱导MCF-7 细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax、p53、p21和CytC表达,下调 Bcl-2的表达以及细胞膜电位。结论 蛇床子素可通过激活p53信号通路而诱导MCF-7细胞凋亡。