PTTG靶向siRNA表达载体构建及其沉默效率评价

目的：构建针对人脑胶质瘤细胞系U251的高效率沉默垂体瘤转化基因(PTTG)的小分子干扰RNA(siRNA)表达载体。 方法：合成特异性干扰PTTG 的siRNA片段,并与pGenesil2 载体连接,构建PTTG干扰载体（pGenesil2-PTTG siRNA）。利用脂质体将其转染U251细胞,分为正常细胞对照组、HK阴性对照组和3个siRNA干扰组（pGenesil2-PTTG siRNA1、pGenesil2-PTTG siRNA2和pGenesil2-PTTG siRNA3）,应用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法和流式细胞术对转染后U251细胞中PTTG 的mRNA和蛋白表达水平进行分析。 结果：酶切证实PTTG-siRNA表达载体构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致;转染pGenesil2-PTTG siRNA后,3个干扰组的U251 细胞中PTTG基因和蛋白表达水平均较正常对照组显著降低（P<0.01）。 结论：成功构建了能高效率沉默PTTG 的RNAi表达载体;pGenesil2-PTTG siRNA高效地抑制了胶质瘤U251细胞中PTTG基因的表达。     

RNA干扰技术及其在医学领域的研究进展

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是一种由双链RNA介导的基因沉默现象,可以在转录水平和转录后水平发挥作用。RNAi技术作为新兴的基因阻断技术是近几年研究的热点,已经广泛地应用于抗病毒感染、抗肿瘤等热门领域。RNAi技术有望开辟基因治疗的新途径。本文就RNAi的作用机制及RNAi技术在医学中的应用做一综述。     

RNAi技术沉默K562细胞中c-myc基因的初步研究

目的运用RNAi技术，设计针对c-myc的小干扰RNA(siRNA)，研究其干扰效果。方法针对c-myc mRNA的第1357靶位点设计siRNAs，经Lipofectamine^TM 2000脂质体法转染K562细胞，进行RT-PCR、细胞计数和MTT法及流式细胞仪检测，观察其干扰效果。结果转染组与阴性对照组和空白对照组相比，c-myc mRNA表达明显减弱．细胞计数和MTTD(λ)值均有显降低，并有明显的凋亡率。结论运用RNAi技术，可以有效地干扰c-myc的表达．并进一步诱导细胞凋亡。     

骨髓水肿在骨科疾病中的研究进展

骨髓水肿是一种非特异性但敏感的原发性病理征象,广泛存在于骨科疾病,这些疾病通常以疼痛为主要临床表现.既往学者对骨髓水肿的研究不够,认为骨髓水肿是一种正常现象,但骨髓水肿在不同骨科疾病发理机制、治疗及预后方面存在差异.最新研究表明骨髓水肿与骨科疾病关系密切,并且越来越多地被视为疾病活动期的标志物,以及作为慢性退行性或炎症...     

siRNA沉默HLX基因对AML细胞生长的影响

目的 筛选高表达H2.0样同源盒基因（H2.0-like homeobox gene,HLX）的白血病细胞株,沉默HLX后观察急性髓系白血病（acute myelogenous leukemia,AML）细胞株的生长及分化影响,为HLX在AML中的深入研究提供理论基础。方法 实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）筛选高表达HLX基因的白血病细胞株,并检测p21活化激酶1（p21-activated kinase 1,PAK1）的基因表达;设计siRNA-HLX沉默HLX基因表达最高的AML细胞株中的该基因,运用相差显微镜观察细胞生长情况,MTS/PMS比色分析法检测增殖抑制率。结果 AML细胞株中HLX基因的表达水平显著较高（P< 0.01）,干扰HLX基因后,可见AML细胞株生长速度减慢,增殖被抑制,并且PAK1mRNA表达下调（P< 0.01）。结论 HLX基因可抑制AML细胞株的生长、增殖及分化。     

siRNA沉默乳腺癌特异基因1及核酸药物递送系统的研究进展

<正>据调查显示,我国乳腺癌的发病率和死亡率均呈上升趋势,且明显高于发达国家。乳腺癌特异性基因1(breast cancer-specific gene 1,BCSG-1)是一种主要在大脑的突触前末梢和外周神经系统组织中表达的高度保守的可溶性小分子蛋白,与乳腺癌等多种肿瘤的发生及进展关系密切。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指21～25个核苷酸双链siRNA进入细胞质后,使mRNA降解,从而导致具有序列同源性的基因产     

siRNA介导RRM2基因沉默治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤

目的 探讨siRNA沉默核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)基因联合顺铂治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的可行性。 方法 常规体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,采用皮下注射法建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,将24只荷瘤鼠随机分为对照组、顺铂组、siRNA组、siRNA联合顺铂组,每组6只,分组给药。观察肿瘤生长情况,测瘤体积并计算肿瘤生长抑制率。采用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测肿瘤组织中RRM2 mRNA及蛋白表达。 结果 对照组、siRNA组、顺铂组和siRNA联合顺铂组平均肿瘤体积分别为(358.28±46.40)、(261.38±52.49)、(261.65±31.97)、(189.37±41.67)mm³,单药作用后肿瘤体积差异有统计学意义(F_siRNA-RRM2=22.399,P_siRNA-RRM2<0.001;F_顺铂=22.254,P_顺铂<0.001);两药间无交互作用(F=0.474,P=0.499)。对照组、siRNA组、顺铂组和siRNA联合顺铂组肿瘤生长抑制率分别为0、36.39%、41.10%、64.33%。siRNA-RRM2与顺铂单药各自均能降低RRM2 mRNA表达水平(F_siRNA-RRM2=9.37,P_siRNA-RRM2=0.006;F顺铂=11.90,P顺铂=0.003)和蛋白表达水平(F_siRNA-RRM2=8.71,P_siRNA-RRM2=0.008;F顺铂=13.01,P顺铂=0.002);两药间无交互作用(F_{RRM2 mRNA}=3.93,P_{RRM2 mRNA}=0.061;F_RRM2蛋白=1.72,P_RRM2蛋白=0.204)。 结论 单用siRNA或联用顺铂均可有效抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤瘤体的生长,可能与其沉默RRM2基因表达有关,特异性沉默RRM2或可成为卵巢癌治疗的一个新思路。     

RNAi技术沉默K562细胞中c-myc基因的初步研究

目的 运用RNAi技术,设计针对c-myc的小干扰RNA(siRNA),研究其干扰效果。方法 针对c-mycmRNA的第1357靶位点设计siRNAs,经Lipofectamine^TM2000脂质体法转染K562细胞,进行RT-PCR、细胞计数和MTT法及流式细胞仪检测,观察其干扰效果。结果 转染组与阴性对照组和空白对照组相比,c-mycmRNA表达明显减弱,细胞计数和MTTD(λ)值均有显著降低,并有明显的凋亡率。结论 运用RNAi技术,可以有效地干扰c-myc的表达,并进一步诱导细胞凋亡。     

小分子干扰RNA在细胞凋亡调控中的应用研究进展

细胞凋亡是由细胞内预存的细胞死亡程序引发的高度精密调节的、能量依赖性的、有序的细胞自杀过程,这一过程对消除机体内老化细胞及具有潜在性异常生长的细胞,以及保持机体处于稳态等中起着重要作用。细胞凋亡受相关基因调控,如果调控机制发生紊乱则可使机体发生多种疾病。小分子干扰RNA(siRNA)技术是将靶基因沉默的一种方法,它能够较简便且准确地产生与基因剔除相似的作用。本文着重介绍运用siRNA技术对凋亡诱导基因或抑制基因进行调控,及其在癌症、病毒感染性疾病及肺损伤等治疗中的研究进展,展望siRNA作为一种新型基因封闭工具的应用前景。     

治疗性基因沉默在神经系统疾病中的研究

近期,RNA的内源性细胞基因沉默机制——RNA干扰(RNA interference,RNAi)——在蠕虫、果蝇、鼠和人类中被发现。这个发现开辟了RNA治疗的领域并且使应用RNA为基础的基因沉默技术治疗人类疾病的发展前景更为乐观。神经系统疾病是一类适用于RNA疗法的疾病。此类疾病是发达国家人口死亡的主要原因,并呈上升趋势,目前缺乏有效的治疗方法,因此急需一种崭新的针对此类疾病分子病理的治疗方法。发展基因疗法特别适用于神经系统有以下原因[1](:1)与其他组织相比,脑组织表达更多的特异基因序列,因而许多遗传疾病表现为神经学表型。(2)因为血…     

封闭式负压引流技术在骨科疾病中的运用及护理

目的:总结32例封闭式负压引流技术(Vacuum Sealing Drainage,VSD)治疗骨科皮肤缺损的护理经验.观察其临床效果及预后.方法:术前做好心理护理,完善术前检查、戒烟；术中彻底清创；术后妥善摆放体位,加强封闭式负压引流装置的护理.结果:保证有效的负压,以及正确的功能锻炼.结论:通过精心的护理和健康指导,所有患者能顺利完成全程治疗,恢复良好,康复出院.     

RNA干扰技术及其在病毒感染疾病治疗中的研究进展

2002年被《科学》杂志评为重大科学突破之一的RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术是一种特殊的转录后基因表达沉默（Posttmnscripofional gene silence,PIGS）现象。近年来应用RNAi技术治疗病毒感染性疾病的实验研究取得了很大的进展,其高效、特异的抗病毒作用,设计灵活的多靶位效应使其成为一种应用前景广阔的基因治疗手段。     

RNA干扰技术的研究现状及应用

RNAi是一种细胞内导入与特定基因序列相同的双链RNA(double—stranded RNA)，从而特异关闭基因的新方法。随着dsRNA对靶mRNA抑制作用的特异性高效性的确认，RNAi技术得到广泛重视。如今，RNAi技术的新基因筛选、基因功能的鉴定、基因治疗和获得抗病毒植株等方面已被广泛应用。     

RNA干扰技术的应用

RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)是与靶基因序列同源的双链RNA诱导的一种特异性的转录后基因沉默现象。目前 ,RNAi的作用机制已经基本明确 ,并显示了广阔的应用前景。RNAi技术作为新的基因阻断技术已经成功地应用于人类基因组功能的研究 ,同时提供了一条人类抗病毒治疗的新技术。另外 ,借助RNAi技术还有望在将来于基因水平对肿瘤进行治疗。     

体外冲击波碎石在治疗骨科疾病中的应用

自从1979年德国Dornier公司研制成功第一台Dornier-HM1型体外冲击波碎石机,并于1980年2月7日成功用于肾结石患者治疗以来,人们对冲击波的物理学特性及其对组织的影响进行了广泛深入的研究。利用冲击波可使细胞膜的通透能力一过性增加的特性,还可用于骨不连、股骨头坏死、慢性肌腱炎和足跟痛的治疗。     

人工智能在骨科疾病诊治中的研究进展

人工智能是一门新的技术科学,它深入研究开发用于模拟延展和扩充人脑智能的理论、方式、核心技术及应用软件与控制系统。其专业领域内容涵盖了机器人、图像识别和专家系统等。人工智能技术在众多医学学科领域内都有着重要的应用价值。特别在骨科领域中,人工智能不仅提升了影像科医师与骨科医师的工作效率、降低了工作负荷,与此同时也为患者提供了更多安全可靠、有力的临床技术保障,给临床骨科疾病的诊断、治疗带来了极大推动。本文回顾了近几年来人工智能技术在骨科疾病中的最新研究成果,旨在综述人工智能技术在骨科诊断、治疗领域的最新进展和尚存局限,为促进人工智能技术和骨科领域新的深度融合提供文献参考。     

负压封闭引流技术在骨科疾病中的临床治疗效果

目的：探析负压封闭引流技术在骨科疾病中的临床治疗效果。方法将120例骨科疾病患者作为研究对象,随机分为2组,各60例。对照组给予常规负压引流技术治疗,观察组应用负压封闭引流技术治疗,对2组的治疗效果进行对比分析。结果观察组的创面愈合率和感染复发率分别为100.0%、1.7%,而对照组的创面愈合55例（91.7%）,对照组患者感染复发4例（6.7%）差异有统计学意义（P<0.05）,此外,在住院时间方面,对照组患者平均住院时间为（24.4±6.2）d,费用为（7128.4±363.1）元,观察组患者平均住院时间为（18.3±5.1）,住院花费为（5683.7±313.5）元;与对照组相比较,观察组的感染复发率低、住院时间短、花费低,更具有经济优势,差异有统计学意义（P<0.05）。结论临床上运用负压封闭引流技术对骨科疾病患者进行治疗,不仅可以降低感染复发率、缩短住院时间,在一定程度上还能有效提高治疗效果,改善患者预后生活质量。     

siRNA介导垂体瘤转化基因沉默抑制人泌乳素型垂体瘤凋亡的研究

目的探讨垂体瘤转化基因(PTTG)对人泌乳素型垂体瘤(HPA)细胞凋亡的影响。方法设计并合成针对PTTG的特异性siRNA序列,通过siPORTTM NeoFXTM转入原代培养HPA细胞,Western blot法检测siRNA作用后PTTG蛋白表达,DNA ladder和annexin V/PI染色法检测PTTG沉默对细胞凋亡的影响。结果siRNA转染组细胞内PTTG蛋白表达减弱;在CDDP诱导后,对照组和siRNA组均出现细胞凋亡,siRNA组DNA ladder形成不明显,Annexin V染色凋亡细胞数目减少,对照组细胞凋亡率为18.6%,而siRNA组仅为8.7%。结论垂体瘤转化基因对人泌乳素型垂体瘤细胞具有促进凋亡作用。     

siRNA介导的MAPKp42沉默诱导HeLa细胞凋亡

目的应用siRNA沉默HeLa细胞MAPKp42,研究其对细胞存活的影响。方法体外合成靶向MAPKp42的siRNA-1和siRNA-2,并用脂质体转染HeLa细胞,Western印迹法和免疫组织化学法检测p42^MPAK的表达;电镜观察,TUNEL法测定细胞凋亡,Annexin-PI法测定不同凋亡时期细胞的分布。结果siRNA-1和siRNA-2均可使HeLa细胞MAPK p42沉默,使p42^MAPK表达下调,与阴性对照组相比分别降低2、5倍和3．2倍。电镜观察证实,siRNA-1和siRNA-2转染组部分细胞丧失表面微绒毛,细胞内空泡增加,细胞核染色质边集。处理组HeLa细胞早期凋亡率显著增加,其中siRNA-1组晚期凋亡率也明显增加。结论siRNA介导的MAPKp42沉默可以诱导HeLa细胞凋亡。