重复高压氧预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤时糖调节蛋白78表达的影响

目的探讨重复高压氧预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤保护中糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响。方法雄性SD大鼠36只,体重250～300g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=12)假手术组(S组)、脊髓缺血再灌注组(I/R组)和重复高压氧预处理(HOP组)。HOP组采用高压氧预处理[1000ml/L O2,2.5 atmosphere absolute(ATA),1h/d,5天],最后一次处理后24h,I/R组和HOP组采用Zivin法制备脊髓缺血再灌注模型(缺血15min,再灌注1h),24、48、72h后分别评价后肢运动功能,然后处死大鼠,取L5～7节段脊髓组织,测定GRP78的mRNA及其蛋白表达水平,光镜下观察病理学结果。结果与S组比较,I/R组和HOP组后肢运动功能和脊髓前角正常运动神经元计数降低,脊髓组织GRP78 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.05);与I/R组比较,HOP组后肢运动功能和脊髓前角正常运动神经元计数升高,脊髓组织GRP78 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.05)。HOP组脊髓组织病理学损伤程度轻于I/R组。结论重复高压氧预处理可上调大鼠脊髓缺血再灌注时GRP78表达,从而减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤。     

丁苯酞预处理对缺血再灌注大鼠脑组织抗氧化能力的影响

脑梗死等临床常见缺血性脑血管病严重危害人类健康。开展对这类疾病的研究和防治是目前一项重要任务,药物预处理防治脑缺血再灌注损伤已成为目前研究的热点。近年研究发现,丁苯酞（dl-3n-butylphthalide,NBP）能够从多个环节改善脑缺血性损伤,对缺血性卒中具有较佳的治疗作用。但目前关于应用NBP对脑缺血再灌注损伤预防性保护作用的报道较少。本研究应用NBP预处理大鼠,观测神经功能评分和SOD、GSH-Px活性及MDA含量的变化,探讨NBP对大鼠脑缺血再灌注抗氧化能力的影响及可能机制。     

盐酸戊乙奎醚预处理对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤及凋亡相关基因caspase-3的影响

目的:观察盐酸戊乙奎醚预处理对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为 3 组(每组20只)。对照组（C组）：进行假手术操作,未使用线栓法建立局灶脑缺血模型;缺血-再灌注组（I-R组）：麻醉前30 min腹腔内注射生理盐水2.0 mg•kg^-1后,使用线栓法建立大鼠局灶脑缺血模型,缺血120 min后进行再灌注;盐酸戊乙奎醚预处理组（P组）：麻醉前30 min腹腔内注射盐酸戊乙奎醚2.0 mg•kg^-1后,用线栓法建立大鼠局灶脑缺血模型,缺血120 min后进行再灌注。氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察测定脑梗塞体积;HE 染色法观察大鼠海马神经细胞形态的变化;半定量RT-PCR法测定海马组织caspase-3 mRNA的表达水平。结果:与I-R组比较,P组脑梗塞体积显著减小（P< 0.05）;I-R组海马神经细胞发生严重损伤,细胞核固缩、浓染,P组海马神经细胞损伤显著减轻;I-R组和P组caspase-3 mRNA表达水平明显高于C组（P< 0.05）,但P组caspase-3 mRNA表达水平低于I-R组（P< 0.05）。结论：盐酸戊乙奎醚预处理可以显著改善大鼠局灶脑缺血再灌注后海马神经细胞损伤,从而对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用,这种保护作用可能与盐酸戊乙奎醚抑制大鼠脑海马组织凋亡蛋白酶caspase-3 mRNA的表达有关。     

丁苯酞注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察丁苯酞注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的保护作用。方法选取雄性SD大鼠50只,随机分为假手术组(10只)、缺血再灌注组(20只)、丁苯酞注射液组(20只)。制备SD大鼠右侧大脑中动脉脑缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注22 h,丁苯酞注射液组于缺血1 h后予丁苯酞注射液腹腔注射,假手术组和缺血再灌注组予等体积生理盐水。应用TTC染色观察脑梗死体积;免疫组织化学检测方法观察Bcl-2和Bax表达的变化。结果与缺血再灌注组相比,丁苯酞注射液组神经功能缺损程度减轻,梗死灶体积减小,Bcl表达增多,Bax表达减少。结论丁苯酞注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞的凋亡有保护作用。     

内质网应激相关分子GRP78在高血压加重全脑缺血大鼠神经损伤中的作用

目的观察常态大鼠和自发性高血压大鼠全脑缺血再灌注后海马区葡萄糖调节蛋白78（GRP78）表达变化,探讨其在高血
压增加脑缺血再灌注神经易损性中的可能意义。方法60只雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠随机分为假手术组和全脑缺血再灌
注组;另取30只雄性自发性高血压大鼠为高血压全脑缺血再灌注组。采用改良的Pulsineli4血管阻断（4-VO）法制作全脑缺血
再灌注模型。应用苏木伊红染色观察海马区神经细胞形态变化;免疫组织化学法和免疫印迹法检测海马区GRP78表达;八臂迷
宫检测动物行为学变化。结果与假手术组比较,全脑缺血再灌注组存活神经细胞密度降低;GRP78表达增高,24h达高峰,与
脑缺血再灌注组比较,高血压全脑缺血组各时间点存活神经细胞密度降低;GRP78表达6h增高,24、48h持续减少;动物行为学
评分与全脑缺血组差异显著。结论高血压加重脑缺血再灌注神经损伤,其机制与下降GRP78表达、增加神经细胞丢失有关。
     

大鼠局灶性脑缺血预处理后caspase-12mRNA及其蛋白的表达变化

目的观察缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后caspase-12 mRNA及其蛋白表达和神经元凋亡的影响。方法 SD大鼠120只,随机分为假手术组(SO)、脑缺血再灌注组(MCAO)和脑缺血预处理组(BIP)3组,每组按照再缺血后12 h和1、2、3 d 4个时间点分为4个亚组。采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,用原位杂交法和Western blot法观察再缺血后各个时间点caspase-12 mRNA及其蛋白的表达变化,用流式细胞术检测神经细胞凋亡率。结果 (1)MCAO组12 h caspase-12 mRNA及其蛋白表达均达高峰,随再灌注时间延长其表达逐渐下降(P<0.05,P<0.01);BIP组较MCAO组caspase-12 mRNA表达明显降低,其蛋白表达也明显降低(P<0.05,P<0.01)。(2)MCAO组12 h细胞凋亡发生率显著增加,1 d时达到高峰,以后时间点逐渐下降(P<0.01);BIP组各个时间点神经元凋亡发生率较MCAO组显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论脑缺血预处理可能通过抑制caspase-12表达发挥其神经保护作用。     

大鼠缺血预处理诱导脑缺血再灌注损伤后BcI-2及BcI-xI表达

为探讨凋亡抑制基因Bcl-22及Bcl-x1在缺血预处理(IPC)对大鼠海马CAl区神经元细胞保护中的作用，利用大鼠四血管阻断和再灌注及再通建立前脑缺血再灌注损伤模型，采用尼氏小体染色光镜观察、流式细胞术、免疫组织化学等技术，观测缺血预处理海马CAl区部分神经元病理组织学改变，细胞凋亡百分率及Bcl-2和Bcl-x1蛋白表达的情况。结果发现，大鼠前脑缺血再灌注引起海马CAl区部分神经元发生凋亡，IPC还可明显的减少缺血再灌注损伤后凋亡的神经元数目，产生细胞保护作用，IPC可诱导缺血再灌注损伤早期缺血敏感神经元中出现Bc1-2及Bc1-xl蛋白的表达。结果提示，抑制神经元凋亡发生可能是IPC对脑缺血再灌注损伤起保护作用的机制之一。     

丁苯酞预处理对大鼠缺血/再灌注肾损伤保护作用的实验研究

目的探讨丁苯酞对SD大鼠肾脏缺血/再灌注损伤的保护作用。方法将60只SD大鼠采用随机排列表分组法分为对照组、预处理组(单纯丁苯酞灌胃)、假手术组、预处理手术组(丁苯酞灌胃并双肾肾动脉夹闭手术)、手术组(单行双肾肾动脉夹闭手术),每组12只。预处理组和及预处理手术组造模前给予丁苯酞80 mg/(kg·d)灌胃2周,制备SD大鼠肾脏缺血/再灌注急性肾损伤(AKI)模型。检测各组大鼠在缺血/再灌注24 h时血肌酐、尿素氮变化情况,苏木精-伊红染色观察肾脏病理。结果假手术组、预处理手术组和手术组尿素氮水平分别为(8.9±1.6)、(33.2±7.7)、(44.9±17.3)mmol/L,显著高于对照组的(6.1±1.2)mmol/L,差异有统计学意义(P<0.05),但预处理手术组尿素氮低于手术组(P<0.05);预处理手术组和手术组血肌酐水平分别为(246±50)μmol/L、(318±81)μmol/L,显著高于对照组的(43±5)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05),但预处理手术组低于手术组(P<0.05)。预处理手术组和手术组病理损伤评分分别为(2.4±0.7)分、(3.0±0.6)分,其余3组数为0分,但预处理手术组肾脏损伤程度低于手术组(P<0.05)。结论丁苯酞预处理对缺血/再灌注性AKI大鼠模型肾功能具有一定的保护作用。     

丁苯酞对脑缺血再灌注损伤保护作用的研究进展

缺血性脑血管疾病（ischemic cerebral vascular disease,ICVD）发病率逐年增高,病死率更是高达60%-80%,及时恢复缺血区脑组织血液供应是挽救脑缺血患者生命的最佳办法,但是恢复血流灌注后又会给脑组织带来新的损伤,即脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI）,这是引起多种脑血管疾病重要的病理生理基础,如何减轻再灌注损伤已经成为医学界研究的热点之一。随着对CIRI研究的深入,对其防治策略的研究也有了长足的发展,许多动物实验表明,西药、传统中药及针灸都对CIRI的治疗取得了一定的成效,找到了多个治疗靶点,但大多靶点单一。寻找多个治疗靶点、多个环节的药物防治CIRI势在必行。通过查阅大量文献发现：丁苯酞作为我国脑血管疾病治疗领域中第一个拥有自主知识产权的国家一类新药,是国际上首个作用于缺血性脑卒中多个靶点、多个环节的创新药物,且不良反应较小,被推荐为急性缺血性卒中的早期用药。现就丁苯酞对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制进行综述。     

丁苯酞注射液对原代培养神经元类缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨丁苯酞注射液对原代培养神经元类缺血再灌注损伤的影响。方法:原代培养大鼠神经元建造实验模型,并随机分为对照组、缺血组(类缺血后再灌注)、实验组(类缺血再灌注后加丁苯酞),造模后鉴定培养细胞为神经元,分组后检测神经元细胞活性、神经元细胞凋亡率。结果:与对照组相比,缺血组的细胞存活率下降,细胞凋亡率增高。实验组细胞存活率高于缺血组,而细胞凋亡率低于缺血组。结论:丁苯酞注射液可显著增加类缺血再灌注神经元细胞再灌注后细胞的存活率,这种神经保护机制在一定程度上是通过其减少神经细胞凋亡而实现的。     

七叶皂苷钠对大鼠局灶性脑缺血损伤炎症反应的作用

目的：观察七叶皂苷钠对大鼠脑缺血再灌注损伤局部炎症反应的影响。方法：线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉，建立缺血再灌注模型，经视交叉的冠状脑组织块行TTC染色测梗死面积，并进行髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO)、细胞间黏附分子－1（inter-cellular adhesion molecule-1,ICAM-1)免疫组化染色。结果：再灌注即刻腹腔内注射七叶皂苷钠的治疗组较对照组神经功能缺损程度显著减轻（P＜0.05)，梗死面积明显缩小（P＜0.05)，MPO阳性细胞数明显减少（P＜0.05)，ICAM-1免疫阳性血管数无显著变化（P＞0.05)。结论：七叶皂苷钠对局灶性脑缺血损伤的保护作用可能与抑制局部炎性渗出有一定的关系。     

红花注射液预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察红花注射液预处理后局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中水、Na+、Ca2+含量的变化,探讨红花注射液预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。SD大鼠40只,随机分为对照组、假手术组、模型组、红花预处理组,每组10只。用Zeal Longa 5级评分法进行神经功能评分;测定各组大鼠脑组织中水、Na+、Ca2+含量。结果:红花预处理组神经功能评分均低于模型组(P<0.05),但高于对照组和假手术组(P<0.05)。对照组和假手术组大鼠脑组织中水、Na+、Ca2+含量比较差异无统计学意义(P>0.05);模型组水、Na+、Ca2+含量明显高于对照组和假手术组,红花预处理组低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:红花注射液预处理可以抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织水肿和Ca2+超载作用,从而对脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。     

辛伐他汀预处理对大鼠局灶性脑缺血不同灌注时间窗脑损伤的保护作用及机制研究

目的 研究辛伐他汀（simvastatin）预处理对不同灌注时间窗脑损伤预防性脑保护作用及机制;探讨通过辛伐他汀预处理延长再灌注时间窗的可行性.方法 线栓法制作大鼠缺血再灌注损伤模型,实验动物随机分为4组：A组为假手术组;B组为缺血/再灌注组;C组为缺血/再灌注组＋辛伐他汀组;D组为缺血/再灌注组＋辛伐他汀＋L-NAME组.B、C、D组又各分为再灌注后2、4、6 h组.各组在相应时间点进行神经功能评分,测梗死体积,测定脑组织超氧化物歧化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）活性以及丙二醛（MDA）含量.结果 C组各时间点的神经功能评分、梗死体积小于B组（P〈0.05）;C组各时间点MDA含量、MPO活性均低于B组（P〈0.05及P〈0.01）,而SOD活性高于B组（P〈0.05及P〈0.01）;D组各时间点相应指标与B组无显著性差异（P〉0.05）.结论 辛伐他汀预处理可改善神经功能评分,缩小梗死体积,其发生机制可能与增加eNOS合成,提高脑组织抗炎、抗氧化能力有关.     

脑源性神经营养因子预先给药对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的探讨不同剂量的脑源性神经营养因子（BDNF）预先给药对大鼠局灶性脑缺血再灌注（I/R）后神经细胞凋亡的影响。方法用大鼠大脑中动脉线栓法（MCAO）建立局灶性脑缺血再灌注模型,BDNF采用侧脑室注射法给药。将30只雄性Wistar大鼠,随机分为5组：正常对照组（C组）、缺血再灌注组（I/R组）、BDNF预先给药低剂量组（L组）、中剂量组（M）、高剂量组（H）;除C组外,其余各组分别行脑缺血1 h再灌注72 h后处死取脑皮层标本待检。采用TUNEL法观察大鼠脑缺血再灌注后脑皮层神经细胞凋亡的变化。结果与I/R组比较,BDNF预先给药各组神经细胞凋亡指数均明显减少（P〈0.01）;在BDNF预先给药各组中,以预先给药高剂量组的神经细胞凋亡指数最小（P〈0.01）。结论不同剂量的BDNF预先给药均能明显减轻脑I/R后神经细胞凋亡,具有不同程度的脑保护作用。且随BDNF预先给药剂量的增加细胞凋亡数量进一步减少。     

柚皮素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察柚皮素对大鼠居灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法应用3种不同剂量的柚皮素灌服2周后,采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,测定缺血2h再灌注24h后脑含水量、脑梗死体积和脑组织中MDA含量、SOD活性。结果柚皮素可显著降低大鼠缺血再灌注损伤侧脑组织含水量、显著缩小脑梗死体积、降低脑组织MDA含量,提高SOD活性。结论柚皮素对脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其脑保护机制可能与清除自由基有关。     

预防性应用盐酸氟桂利嗪对高血糖SD大鼠局部脑缺血再灌注模型ICAM-1表达的影响

[目的]探讨预防性应用盐酸氟桂利嗪对高血糖条件下SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤是否有保护作用及其可能机制.[方法]雄性健康SD大鼠36只,建立高血糖模型后随机分为两组:高血糖组(n=18)与盐酸氟桂利嗪+高血糖组(简称氟桂利嗪组,n=18),各组按脑缺血90 min再灌注3 h(n=6)、6h(n=6)、24 h(n =6)分为3个亚组.比较氟桂利嗪组与高血糖组各再灌注时间点脑组织病理形态改变及ICAM -l表达的动态变化.[结果]脑组织病理形态观察:氟桂利嗪组随着再灌注时间的延长,脑组织受损程度逐渐加重,但与高血糖组各时间点比较,变性、坏死的神经元较少,组织间水肿较轻.ICAM -1表达:氟桂利嗪组于再灌注3h可见IAM -1阳性表达,24h内逐渐增高(P＜0.05).氟桂利嗪组与高血糖组比较各时间点缺血区ICAM -1表达均减少(P＜0.01).[结论]预防性应用盐酸氟桂利嗪能减轻高血糖条件下的局灶性脑缺血再灌注损伤.     

病变侧亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Survivin及Caspase-3表达的影响

目的 探讨亚低温对局灶性脑缺血再灌注后生存素(Survivin)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法 用线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)局灶脑缺血再灌注模型,随机将168只SD大鼠分为假手术组、常温组和亚低温组,两个缺血组各分为缺血2、3、6、8h后再灌注4h、24h、72h、1周、2周然后处死。亚低温组于缺血后30min,实施病灶侧亚低温持续4h,经免疫组化测定Survivin、Caspase-3阳性细胞数。结果 与常温组各时间点相比,亚低温组各时间点缺血侧Survivin表达水平显著增高,Caspase-3表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 局灶性脑缺血后30min,应用局部亚低温能够减少梗塞面积,促进脑缺血后神经功能恢复,这种保护作用的产生与亚低温促进梗塞灶周围半暗带Survivin表达,抑制Caspase-3的表达从而抑制神经元凋亡有关。     

α-硫辛酸对糖尿病大鼠内质网应激相关分子GRP78和Caspase-12表达的影响

目的 探讨α- 硫辛酸（alpha lipoic acid,A-LA） 对内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS） 介导的糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响。 方法 SD 大鼠随机分为3 组：对照组、糖尿病模型组、α- 硫辛酸组。采用链脲佐菌素以60 mg/kg于左下腹腔一次性注射建立大鼠糖尿病模型。α- 硫辛酸组按60mg/kg 灌胃,对照组和糖尿病组每日给予等量0.9% 氯化钠注射液灌胃。12 周后检测血糖和心功能状态;原位末端转移酶标记技术（TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）检测细胞凋亡;Western Blot 和免疫组织化学法检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78） 与和半胱胺酸蛋白酶蛋白-12（Caspase-12）的蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,糖尿病模型组大鼠血糖值明显增高（P ＜ 0.05）,心功能受损;α- 硫辛酸剂量组对糖尿病大鼠血糖和心功能有一定程度的改善。与对照组相比,糖尿病组大鼠心肌细胞凋亡明显增加（P ＜ 0.05）, GRP78 和Caspase-12 蛋白表达增加。α- 硫辛酸组心肌细胞凋亡明显降低,GRP78 和Caspase-12 蛋白表达有所减少。 结论 α- 硫辛酸对糖尿病心肌组织具有保护作用,其机制可能与降低GRP78 表达,拮抗Caspase-12,阻断ERS 启动的凋亡通路有关。