小分子RNA干扰鞘氨醇激酶1表达对APP/PS1小鼠海马细胞凋亡的影响

目的:观察腺病毒介导的鞘氨醇激酶1(sphk1)低表达对AD小鼠海马细胞凋亡的影响。方法:构建siRNA-Sphk1腺病毒载体,立体定位法将携带siRNA-Sphk1的腺病毒载体(siRNA-Sphk1组)或等量生理盐水(saline组)注射至APP/PS1双转基因AD模型鼠海马齿状回;30 d后,荧光显微镜下观察各组小鼠海马绿色荧光蛋白的表达,westen blot法观察海马Sphk1及caspase-3蛋白的表达,Tunel法观察海马齿状回细胞凋亡的情况。结果:siRNA-Sphk1组海马齿状回可见绿色荧光的表达,saline组无绿色荧光表达;siRNA-Sphk1组海马Sphk1蛋白的表达较saline组下降(P<0.05),caspase-3蛋白较saline组的表达升高(P<0.05);siRNA-sphk1组小鼠海马组织的细胞凋亡率较saline组和阴性对照组升高(P<0.05)。结论:成功构建siRNA-sphk1的重组腺病毒,移植后,可抑制AD小鼠海马Sphk1蛋白的表达,促进海马齿状回细胞的凋亡。     

1-磷酸鞘氨醇对T细胞功能的影响

1-磷酸鞘氨醇（S1P）是鞘磷脂代谢过程中产生的一种重要信号分子，可与多条信号通路交联而产生广泛的生物学效应。T细胞表达5种S1P受体，即S1P1—S1P5。S1P信号可以调节T细胞的多种免疫效应，包括T细胞增殖和凋亡、T细胞向Th2细胞分化、细胞因子分泌及T细胞迁移等。抑制S1P信号通路的药物FTY720可将T细胞阻滞于次级淋巴器官，造成外周血T细胞显著减少而发挥强烈的免疫抑制作用。本文对S1P的合成和降解、S1P受体及其介导的信号途径、T细胞S1P受体的表达、S1P对T细胞功能的调节及S1P信号通路的免疫抑制药物作了概述．     

1-磷酸鞘氨醇对葡萄糖代谢的调节及其机制

1-磷酸鞘氨醇(S1P)是一种有活性的脂质分子,作用广泛,在多种疾病中发挥作用,如肿瘤、心血管疾病、骨代谢、糖尿病等。研究报道,S1P可以促进胰岛素分泌从而降低血糖,本研究将从S1P促进胰岛素分泌的机制、S1P对胰岛素靶器官的调节以及糖尿病并发症影响方面阐述S1P的作用。     

HMGB1对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的研究高迁移率蛋白1(HMGB1)对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法膀胱癌细胞BIU-87分成对照组、siRNA control组、HMGB1 siRNA组共3组,siRNA control组、HMGB1 siRNA组细胞为感染siRNA control慢病毒和HMGB1 siRNA慢病毒的BIU-87细胞,对照组为不感染慢病毒的BIU-87细胞。用Realtime PCR和Western blot检测细胞中HMGB1表达水平。MTT检测膀胱癌细胞增殖活性,流式细胞术检测膀胱癌细胞凋亡,Western blot检测膀胱癌细胞中CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、活化型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、活化型Caspase-12(Cleaved Caspase-12)、活化转录因子4(ATF4)蛋白水平。结果 HMGB1 siRNA可以下调膀胱癌细胞中HMGB1的表达和转录,siRNA control对膀胱癌细胞中HMGB1表达没有影响。沉默HMGB1后膀胱癌细胞增殖能力下降,细胞凋亡率升高,细胞中凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-12表达水平升高,内质网应激蛋白CHOP、ATF4表达水平也升高。结论 HMGB1沉默可以通过内质网途径诱导膀胱癌细胞凋亡,抑制膀胱癌细胞增殖。     

结肠癌差异表达长链非编码RNA在膀胱癌中的表达及其对膀胱癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的检测结肠癌差异表达(CRNDE)长链非编码RNA在膀胱癌组织中的表达,探讨其临床意义,并分析CRNDE在膀胱癌细胞中的生物学功能。方法采用RT-qPCR对31例膀胱癌组织和配对正常组织CRNDE表达水平进行检测,并与患者临床病理参数分析,探讨CRNDE表达水平与膀胱癌临床特征之间的关系;通过细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)、Transwell等实验,探究CRNDE对膀胱癌细胞增殖、迁移能力的影响。膀胱癌组织和正常对照组织比较采用配对t检验,多组间比较采用单因素方差分析,CRNDE表达水平和临床病理参数的比较采用卡方检验,检验水平P=0.05。结果 CRNDE在膀胱癌中表达水平显著高于配对正常组织(t=28.29,P<0.01),CRNDE表达水平在肿瘤大小、年龄、性别、组织学类型方面无显著差异。干扰T24细胞的CRNDE表达后,细胞的增殖能力减弱(F=0.33,P<0.01),迁移能力下降了64%,与对照组相比有显著差异(t=8.99,P<0.01)。结论 CRNDE表达在膀胱癌组织中显著上调,表达水平与性别、年龄、不同肿瘤大小、组织学类型无关,CRNDE的表达可能促进膀胱癌细胞的增殖、迁移。     

MiR-136通过下调靶基因ITGAV表达抑制骨肉瘤细胞增殖及迁移的分子机制

目的：分析miR-136对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞生物学行为的调控机制研究,揭示miR-136在OS中的作用及其机制。方法：检测OS组织和癌旁正常组织中miR-136和整合素αV亚基(integrin subunitalphaV,ITG AV)的表达;采用TargetScan和双荧光素酶报告基因实验、反转录PCR和蛋白质印迹法证实ITGAV是否为miR-136的靶基因;采用CCK-8法、流式细胞法和细胞划痕试验检测miR-136和ITGAV对MG63细胞增殖、周期和迁移的影响。构建OS小鼠模型验证miR-136以及I TG AV对体内肿瘤生长的影响。结果：在O S癌组织中,miR-136明显降低,而I TG AV的表达则明显升高。miR-136能特异性结合ITGAV的3’-UTR并负调控ITGAV。细胞实验结果显示：ITGAV组可以提高OS细胞MG63和U2OS增殖、S期细胞比例以及迁移能力,而miR-136组可抑制OS细胞MG63和U2OS增殖、S期细胞比例以及迁移能力,而miR-136+ITGAV组可以逆转miR-136组对MG63和U2OS细胞增殖、S期细胞比...     

1-磷酸鞘氨醇对血小板活化的影响

目的研究磷脂类代谢产物1-磷酸鞘氨醇(S1P)对血小板活化的影响。方法利用酶联免疫法检测血小板中S1P的含量,利用流式细胞仪检测血小板凋亡、活化状况。结果随着保存时间的延长,血小板悬液中的S1P含量(μmol/L)持续增加,从第1天至第5天分别为:1.38±0.17、2.07±0.25、2.78±0.31、3.53±0.28、4.56±0.46。加入不同浓度的外源性S1P,对保存5d期间的血小板生理指标进行动态监测。不同处理组间,血小板的活化率随加入的S1P浓度的增加而升高,凋亡程度增加,血小板结构发生改变。上述实验结果的差异均有统计学意义(P<0.01)。结论随着血小板保存时间的延长,血小板血浆中S1P含量逐渐增加,血小板功能逐渐降低。提示血小板释放的有生物活性的磷脂代谢产物可能对血小板的功能施加某种影响,可能是引起血小板输注无效的一个重要原因。     

大蒜素对膀胱癌细胞增殖和B细胞淋巴瘤-2表达的影响

目的探讨大蒜素对膀胱癌BIU-87细胞的增殖及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达的影响。方法用不同浓度的大蒜素处理膀胱癌BIU-87细胞36h,以噻唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制率,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Bcl-2 mRNA的表达,蛋白免疫印迹技术检测Bcl-2蛋白表达的变化。结果与对照组比较,经大蒜素处理的BIU-87细胞的生长抑制率增加(P0.05),且效应呈浓度和时间依赖性(P0.05);大蒜素处理细胞后,BIU-87细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白质的表达水平下调(P0.01)。结论大蒜素能抑制BIU-87细胞的增殖,且呈剂量和浓度依赖性,其机制可能与大蒜素下调Bcl-2mRNA和蛋白的表达有关。     

1-磷酸鞘氨醇对血小板贮存损伤的影响

目的探讨1-磷酸鞘氨醇对手工浓缩血小板的贮存损伤(活化率、凋亡率和细胞内游离Ca2+)的影响。方法向手工浓缩血小板中分别加入0.1、0.5和1.0μmol/L 3个浓度的S1P,采用流式细胞术检测血小板22℃保存2、3、5、7 d的活化率、凋亡率和细胞内游离Ca2+。结果 0.5和1.0μmol/L的外源性S1P可以降低血小板内游离Ca2+的浓度,降低其活化率和凋亡率。结论 1-磷酸鞘氨醇对血小板的贮存损伤起到一定的抑制作用。     

β1整合素表达下调对人结肠癌细胞增殖和化疗敏感性影响

目的 观察β1整合素表达下调对人结肠癌HT-29细胞增殖和化疗敏感性的影响.方法 采用反义寡核苷酸（ASODN）技术转染HT-29细胞,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测β1整合素表达下调情况.MTT法检测HT-29细胞相对存活率.给予梯度浓度氟尿嘧啶（5-FU）,计算IC50.结果 实验组β1整合素条带吸光度积分（IAD）值/β-actin条带IAD值的比值及HT-29细胞的存活率与对照组相比显著降低（F=1 630.08,q=72.40,P〈0.01;t=4.37,P〈0.05）.5-FU＋ASODN组HT-29细胞对5-FU的IC50与5-FU组比较显著下降（t′=37.71,P〈0.05）.结论 β1整合素表达下调可抑制结肠癌细胞增殖,增强结肠癌细胞对化疗药物敏感性.     

LncRNA TUG1 在甲状腺癌组织中的表达及其对细胞增殖和迁移的影响

目的　检测 LncRNA TUG1 在甲状腺癌组织及细胞中的表达,探究其对细胞增殖和迁移的影响。方法　收集 2015年 1 月 ~2018 年 6 月在汉中市人民医院行手术治疗并经病理确诊的 36 例甲状腺癌患者癌组织标本及其相对应的正常癌旁甲状腺组织进行研究。采用 qRT-PCR 法检测甲状腺癌组织及 SW1736,FTC-133 细胞株中 LncRNA TUG1 表达水平。将shRNA 插入慢病毒质粒中构建 LncRNA TUG1 低表达质粒（LV-shTUG1）。采用 MTT 法、集落形成实验及 Transwell 实验检测敲降 LncRNA TUG1 表达对甲状腺癌细胞增殖和迁移的影响;采用蛋白印迹分析实验检测 LncRNA TUG1 对 EMT 相关蛋白E-cadherin和N-cadherin表达的影响。结果　与正常癌旁甲状腺组织相比,甲状腺癌组织中LncRNA TUG1高表达,差异有统计学意义（6.90±1.19 vs 1.51±1.02,t=20.634,P ＜ 0.000）。与 Nthy-ori 3-1 细胞相比,FTC-133 细胞（1.00±0.09vs 4.61±0.15）和 SW1736 细胞（1.00±0.09 vs 2.59±0.23）中 LncRNA TUG1 水平明显升高,差异有统计学意义（t=35.744,P ＜ 0.000;t=11.150,P ＜ 0.000）。敲降 LncRNA TUG1 表达后, SW1736 细胞（1.31±0.19 vs 0.89±0.16）和 FTC-133细胞（2.17±0.09 vs 1.68±0.05）增殖能力较对照组明显降低,克隆形成数目明显减少,差异有统计学意义（t=2.929,P=0.021;t=8.243,P=0.001）。敲降 LncRNA TUG1 表达后,FTC-133 细胞迁移能力（1 675.2±64.2 vs 898.1±156.4）较对照组显著降低,差异有统计学意义（t=7.961,P=0.001）。敲降 LncRNA TUG1 表达后,与对照组相比,E-cadherin 表达量（0.74±0.06 vs 1.66±0.17）显著升高,N-cadherin表达量（1.27±0.18 vs 0.39±0. 07）显著降低,差异有统计学意义（t=8.839,P ＜ 0.000;t=7.892,P=0.001）。结论　LncRNA TUG1 在甲状腺癌组织及细胞中高表达,促进甲状腺癌细胞增殖和迁移,可能通过促进 EMT 的形成进而促进甲状腺癌细胞的生物学行为。     

1-磷酸鞘氨醇受体的作用机制及研究进展

正1-磷酸鞘氨醇(S1P)是一类重要的具有生物活性的信号分子,它们参与调节细胞的生长、分化、衰老和死亡等许多重要信号转化~([1]),S1P作用于1-磷酸鞘氨醇受体(S1PRs)后,能够在许多生理生化过程中起到重要的调节作用~([2])。早在1992年,有研究者指出S1P通过一个假定的跨膜受体可以作为细胞外介质,从而控制细胞活性。到目前为止,5种S1PRs都已确定,最近分别更名为内皮细胞分化鞘脂G蛋白偶联受体1(S1P1)、内皮细胞分化鞘脂G蛋白偶联受体5(S1P2)、内皮细胞分化鞘脂G蛋白偶联受体3     

沉默细胞周期检测点激酶l基因对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨沉默细胞周期检测点激酶l(Chk1)基因对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法培养人膀胱癌T24细胞,根据转染物的不同,将细胞分为siRNA-Chk1组、siRNA-对照序列组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR检测各组细胞中Chk1基因表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,利用流式细胞术检测各组细胞凋亡,利用流式细胞术检测各组细胞周期,利用Western blot法检测各组细胞中Chk1、Cdc25C和Cyclin B1蛋白表达。结果与空白对照组和siRNA-对照序列组比较,siRNA-Chk1组细胞中Chk1 mRNA相对表达量降低(F=43.813,P=0.000);与空白对照组和siRNA-对照序列组比较,siRNA-Chk1组细胞24h、48h、72h和96h时吸光度A值均降低(P0.05);与空白对照组和siRNA-对照序列组比较,siRNA-Chk1组细胞凋亡率显著增加(F=90.736,P=0.000);流式细胞术检测结果显示,siRNA-Chk1组G0/G1期和S期高于siRNA-对照序列组和空白对照组,而G2/M期低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P0.05);与空白对照组和siRNA-对照序列组比较,siRNA-Chk1组细胞中Chk1、Cdc25C和Cyclin B1蛋白相对表达量均降低(P0.05)。结论特异性沉默Chk1基因可抑制人膀胱癌T24细胞增殖,加速细胞凋亡,其机制可能与抑制Chk1/Cdc25C/CyclinB1通路而减少细胞G2/M期阻滞有关。     

ADGRD1抑制非小细胞肺癌细胞增殖和转移的作用及其分子机制

目的 探讨黏附G蛋白耦联受体D1(ADGRD1)在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）的发生发展中的作用及其分子机制。方法 通过肿瘤基因图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库分析ADGRD1在NSCLC中的表达,以及与NSCLC患者预后的关系;利用定量聚合酶链反应（quantitative polymerase chain reaction,qPCR）检测ADGRD1在肺癌及其癌旁正常组织中的表达;在不同的肺癌细胞系中过表达或敲减ADGRD1后利用CCK-8(Cell Counting Kit-8)、细胞克隆形成和迁移实验分别观察ADGRD1对NSCLC细胞增殖和迁移能力的影响;利用western blot实验检测其下游通路探究ADGRD1发挥作用的潜在机制。结果 TCGA数据库分析结果显示,ADGRD1基因在肺癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织（P <0.05）,且与患者的不良预后相关（P <0.01）;20例临床肺癌样本qPCR结果显示,ADGRD1mRNA水平较其癌旁正常组织显著降低（0.56...     

姜黄素协同顺铂对T24膀胱癌细胞增殖和迁移的影响

目的观察姜黄素(Curc)与顺铂(CDDP)协同对T24膀胱癌细胞增殖、迁移抑制作用,并探讨其作用机制。方法姜黄素(Curc,15μM)和化疗药物顺铂(CDDP,0. 4μM)单独使用或者联合使用处理T24膀胱癌细胞。对照组中加入不含任何干预剂的培养液。用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法和平板克隆形成实验检测Curc和CDDP对T24细胞增殖抑制作用及半数抑制浓度(IC_(50));采用细胞划痕和穿透小室(transwell)侵袭实验检测姜黄素联合顺铂对T24细胞迁移的影响;采用免疫印迹试验(Western blotting)检测T24细胞中金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、神经钙粘蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达。结果与对照组相比,姜黄素组和顺铂组均能够明显降低T24细胞的增殖和迁移能力,并可降低MMP-2、N-Cadherin、Vimentin蛋白的表达以及提高TIMP-2蛋白的表达。姜黄素和顺铂联合组可协同减弱T24细胞的增殖和迁移能力,使得IC_(50)提高3. 4倍(P 0. 05),以及协同降低MMP-2、N-Cadherin、Vimentin蛋白的表达以及提高TIMP-2蛋白的表达。结论姜黄素联合顺铂可协同降低T24膀胱癌细胞的增殖迁移侵袭能力。     

莪术醇对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和迁移的影响

【目的】探讨莪术醇对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和迁移的影响。【方法】10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养小鼠黑色素瘤B16细胞。不同剂量莪术醇(50、100、200μmol/L)处理B 16细胞后,检测细胞增殖、迁移和miR-7-5p含量;miR-7-5p inhibitor预处理后,再用莪术醇100μmol/L处理B16细胞,检测细胞增殖和迁移。【结果】不同剂量莪术醇(50、100、200μmol/L)处理B 16细胞后,细胞490nm吸光度值均低于对照组,且随着莪术醇浓度的增加,细胞490 n m吸光度值降低显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同剂量莪术醇(50、100、200μmol/L)处理B 16细胞后,穿膜细胞数均低于对照组,且随着莪术醇浓度的增加,穿膜细胞数降低显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过real-time PCR验证miR-7-5p inhibitor转染B16细胞后的抑制效果,NC-inhibitor和miR-7-5p inhibitor转染后细胞miR-7-5p表达分别为(1.02±0.10)和(0.41±0.14),差异有统计学意义(P<0.05)。抑制B16细胞miR-7-5p表达后,观察莪术醇对细胞增殖的调控,与NC inhibitor相比(1.413±0.108),miR-7-5p inhibitor升高莪术醇处理B16细胞490nm吸光度值(1.697±0.089),差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】莪术醇能够抑制小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和迁移,其机制可能与增加miR-7-5p表达有关。     

SPATA5L1真核表达载体的构建及其对KR细胞增殖和迁移的影响

目的通过构建过表达质粒并筛选稳定细胞株,研究SPATA5L1基因对KB细胞增殖和迁移的影响。方法PCR扩增SPATA5L1基因全长,用载体pEX．1构建重组质粒,测序成功后转染人口腔癌KB细胞,并设空载体作对照,经过G418压力筛选后获得单克隆细胞株,Real．timePCR、Westernblot验证SPATA5L1基因的表达,光镜观察SPATA5L1对KB细胞形态的影响,CCK．8法检测细胞增殖情况,划痕实验观察细胞迁移能力。结果测序结果显示质粒构建成功,经过G418压力筛选所得到的稳定表达细胞株,在转录水平和蛋白水平均检测到目的基因的高表达,且细胞由正常状态下的多边形变为梭形,细胞增殖能力和体外迁移能力明显提高（P〈0．05）。结论成功构建pEX-1-SPATA5L1表达载体并获得稳定细胞株,过表达SPATA5L1蛋白能使KB细胞形态变长,增殖和迁移加快。     

鞘氨醇-1-磷酸对人耐受型树突状细胞功能影响的初步研究

目的探讨鞘氨醇-1-磷酸(S1P)对外周血单核细胞诱生的人耐受型树突状细胞(tDC)免疫学功能的调控作用。方法 RT-PCR和流式检测细胞表型以及S1P受体(S1PR s)的表达;加入S1P处理tDC,检测其对tDC表型、细胞因子表达以及信号蛋白细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化的影响。结果 tDC高表达DC标志CD209、共刺激分子CD80、CD86和成熟标志CD83;炎性细胞因子mRNA的表达低于未成熟DC,而抑炎性细胞因子、Fas-L和IDOmRNA的表达均高于iDC;tDC表达S1P的受体,S1P与受体相互作用后可引起信号蛋白ERK的磷酸化,上调tDC抑炎性细胞因子以及Fas-L mRNA的表达,对炎性细胞因子的表达无影响。结论 tDC表达S1P受体1、2、5,S1P信号活化后可上调抑炎性细胞因子mRNA的表达,而其表型和炎性细胞因子的分泌无明显变化,有利于tDC免疫耐受功能的发挥。