高三尖杉酯碱联合AG490对HEL细胞JAK2-STAT5相关信号通路的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱( homoharringtonine,HHT)联合AG490对HEL细胞JAK2-STAT5信号通路的影响及其机制,为临床应用新方案治疗慢性骨髓增殖性肿瘤( MPN)提供理论依据.以20 ng/ml的HHT,100μmol/L AG490,20 ng/ml HHT+ 100 μmol/L AG490处理HEL细胞24、48、72小时以后,用MTT法和流式细胞术检测细胞生长抑制率和凋亡率,药物处理细胞24小时后用WB法检测JAK2突变激活的信号蛋白P-JAK2,P-STAT5以及BCL-xL表达的变化.结果表明,HHT以及AG490作用HEL24小时均能抑制其增长,Annexin V-PI双染流式细胞图显示均能明显诱导HEL早期凋亡,HHT更为明显;免疫电泳分析显示,P-JAK2和P-STAT5表达下调,而JAK2和STATS总蛋白水平稳定.结论:HHT联合AG490能明显抑制HEL细胞增殖并诱导凋亡,两者具有协同作用,其作用机制是HHT作为一种广谱的蛋白酪氨酸激酶抑制剂,协同AG490抑制JAK2突变引起的信号蛋白的酪氨酸位点的磷酸化,从而下调STAT5反应性基因的转录.     

MDS-RA骨髓造血细胞JAK2/STAT5通路活化及AG490干预研究

目的探索一种非受体型酪氨酸激酶2/信号转导子和转录活化子5(JAK2/STAT5)通路特异性抑制剂———苯亚甲基丙二腈脂类衍生物AG490对骨髓增生异常综合征-难治性贫血(MDS-RA)骨髓造血细胞细胞因子及信号转导的影响。方法建立MDS-RA骨髓造血细胞培养体系JAK2、STAT5、Bc l-xL基因表达的荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测方法;粒单集落刺激因子(GM-CSF)激活10例MDS-RA骨髓单个核细胞培养液JAK2、STAT5、Bc l-xL表达,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测AG490组、空白对照组培养体系上清细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-3、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平,FQ-PCR检测上述两组培养体系单个核细胞JAK2、STAT5、Bc l-xL基因表达拷贝数。结果AG490组IL-3、IFN-γ水平明显低于空白对照组(P<0.01),IL-2、INF-α水平差异无显著性;AG490组JAK2、STAT5、Bc l-xL基因表达与空白对照组比较,差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论AG490可以调整MDS-RA骨髓造血细胞培养体系上清细胞因子水平,进而影响JAK2/STAT5通路信号转导,下调Bc l-xL表达。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾小球信号蛋白JAK2和STAT3表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾小球信号蛋白Janus酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）与信号转导子和转录激活子3（STAT3）表达的影响。方法雄性Wistar大鼠60只，随机分为正常对照组、糖尿病组和氯沙坦治疗组。腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱发糖尿病大鼠模型，每日灌胃氯沙坦10mg／kg。采用蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测肾小球细胞JAK2、STAT3和磷酸化STAT3（P-STAT3）蛋白的表达。免疫沉淀和Western blot检测磷酸化JAK2（p-JAK2）情况，逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测肾小球细胞JAK2和STAT3 mRNA的表达。结果在2周和4周时，糖尿病组较对照组肾小球JAK2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3蛋白及其JAK2和STAT3mRNA表达明显增强（P均〈0．01）。氯沙坦治疗组较糖尿病组P-JAK2和P-STAT3表达降低（P〈0．05）。氯沙坦对JAK2和STAT3蛋白及其mRNA的表达无明显影响。结论JAK2和STAT3信号蛋白可能参与了糖尿病早期肾脏的发病过程，氯沙坦对肾脏保护作用可能部分是通过影响JAK／STAT信号途径的激活而实现的。     

血小板源性生长因子-DD对肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径的影响

目的 探讨血小板源性生长因子-DD(PDGF-DD)对肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径的影响.方法 将实验用人肾小球系膜细胞分成对照组、PDGF-DD组(20μg/L)和PDGF-DD+AG490组(20 μg/L PDGF-DD+10 μmol/L AG490).采用免疫组化、蛋白印迹法、反转录聚合酶链反应等方法观察PDGF-DD对肾小球系膜细胞p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1和SOCS3的蛋白及mRNA表达的影响.结果 PDGF-DD刺激后肾小球系膜细胞p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1和SOCS3表达增强,AG490抑制上述蛋白的表达(P＜0.05或＜0.01).结论 PDGF-DD能够激活肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径,促进系膜细胞增殖.     

齐墩果酸通过抑制JAK-STAT通路对SAH后早期脑损伤大鼠模型HMGB1表达的影响

目的探究齐墩果酸(OA)通过抑制酪氨酸蛋白激酶(JAK)/信号传导及转录激活因子(STAT)通路对蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤大鼠模型高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达的影响。方法雄性Sprague-Dawley级大鼠60只随机分为4组(n=15),即假手术组(sham)、SAH模型组(SAH)、模型+OA组(SAH+OA)以及模型+AG490组(SAH+AG490)。建模1 h后SAH+OA组腹腔注射OA(20 mg/kg),SAH+AG490组在建模前0. 5 h腹腔注射AG490(5μmol)。观察建模情况,比较各组大鼠神经功能情况、脑组织含水量、血脑屏障、血清炎性因子[白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]、脑组织JAK-STAT通路和HMGB1蛋白水平。结果 SAH组脑组织无实质损伤,但出现显著血块,并出现明显的水肿。SAH组的脑组织含水量和伊文思蓝含量均显著高于sham组(P 0. 01),而SAH+OA组和SAH+AG490组的脑组织含水量和伊文思蓝含量显著低于SAH组(P 0. 01)。建模后大鼠炎性因子水平显著提高,SAH+OA组和SAH+AG490组的IL-6和TNF-α水平显著低于SAH组(P 0. 01)。建模后JAK/STAT和HMGB1蛋白显著上调(P 0. 01),SAH+OA组和SAH+AG490组p-JAK、p-STAT和HMGB1蛋白水平显著低于SAH组(P 0. 01)。结论 OA可能通过抑制JAK/STAT通路下调HMGB1发挥SAH后早期脑损伤保护作用。     

JAK2/STAT3信号通路在应激性溃疡大鼠胃黏膜炎症反应中的作用研究

目的：探讨Janus激酶2（JAK2）/信号转导与转录激活子3（STAT3）信号通路在应激性溃疡（SU）的胃黏膜炎症反应过程中的作用。方法：选用雄性清洁级SD大鼠96只,随机分为4组,分别为：正常对照组（NC组）、应激性溃疡组（SU组）、抑制剂组（AG490组）、二甲基亚砜组（DMSO组）。建立水浸束缚SU大鼠模型。4组大鼠分别于实验开始后2h、4h、8h、16h各取6只,测定胃黏膜血流量（GMBF）,计算溃疡指数（UI）。观察胃黏膜组织学变化,测定TNF-α、IL-1β、IL-6以及JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3的表达量。结果：SU组GMBF明显低于NC组,而UI明显高于NC组（P〈0.01）;AG490组GMBF明显高于SU组,而UI明显低于SU组（P〈0.01）。通过造模前给予抑制剂AG490,胃黏膜病理学变化明显改善。SU组TNF-a、IL-1β、IL-6以及p-JAK2、p-STAT 3表达量明显高于NC组（P〈0.01）,而AG490组较SU组显著降低（P〈0.01）。结论：JAK2/STAT 3信号通路参与了SU大鼠胃黏膜炎症反应过程,使用JAK2特异性抑制剂AG490可以减轻SU大鼠胃黏膜炎症反应。     

腹腔感染性脓毒症可溶性髓样细胞触发受体(sTREM-1)与Janus激酶-信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路的关系

目的 通过动物脓毒症模型探讨可溶性髓样细胞触发受体(sTREM-1)与Janus激酶-信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路的关系.方法 采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制作大鼠脓毒症模型,大鼠随机(随机数字法)分为正常对照组(n=6)、假手术组(n=24)、CLP组(n=48)、JAK 2抑制剂(AG 490)组(n=48)和STAT3抑制剂(雷帕霉素,RPM)组(n=48).留取外周血行流式细胞仪分析CD4+ CD25+ Treg细胞/CD4+T细胞比值.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)测定肝组织sTREM-1 mRNA表达水平.结果 CLP后6h肝sTREM-1 mRNA表达即高于对照组和假手术组,且随时间变化逐渐升高.AG490组肝组织sTREM-1 mRNA的表达在术后6h、24 h(1.572±0.051,2.063±0.025)较同时间点CLP组(1.592±0.036,2.082±0.021)差异无统计学意义(P＜0.05),而在48 h和72 h AG490组肝组织sTREM-1 mRNA的表达(2.522±0.083,3.153±0.021)低于同时间点CLP组(2.592±0.055,3.204±0.013) (P＜0.05).术后6 h RPM组肝组织sTREM-1mRNA的表达(1.581±0.017)较CLP组差异无统计学意义(P＜0.05),而在术后24、48、72 h RPM组肝组织sTREM-1 mRNA的表达(1.486±0.019,1.263±0.011,1.115±0.022)显著低于同时间点CLP组肝组织sTREM-1 mRNA的表达(P＜0.05).结论 sTREM-1因子与JAK/STAT通路有关,阻断JAK/STAT通路能够抑制sTREM-1 mRNA的表达,减缓脓毒症炎症反应的进展.     

MDS-RA骨髓造血细胞JAK2/STAT5通路活化及AG490干预研究

目的探索一种非受体型酪氨酸激酶2／信号转导子和转录活化子5（JAK2／STAT5）通路特异性抑制剂——苯亚甲基丙二腈脂类衍生物AG490对骨髓增生异常综合征-难治性贫血（MDS—RA）骨髓造血细胞细胞因子及信号转导的影响。方法建立MDS—RA骨髓造血细胞培养体系JAK2、STATS、Bcl-xL基因表达的荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测方法；粒单集落刺激因子（GM-CSF）激活10例MDS—RA骨髓单个核细胞培养液JAK2、STAT5、Bcl—xL表达，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测AG490组、空白对照组培养体系上清细胞因子自细胞介素（IL）-2、IL-3、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，FQ—PCR检测上述两组培养体系单个核细胞JAl（2、STATS、Bcl—xL基因表达拷贝数。结果AG490组IL-3、IFN-γ水平明显低于空白对照组（P〈0．01），IL-2、INF-α水平差异无显著性；AG490组JAK2、STAT5、Bcl-xL基因表达与空白对照组比较，差异有显著性（P〈0．05，P〈0．01）。结论AG490可以调整MDS-RA骨髓造血细胞培养体系上清细胞因子水平，进而影响JAK2／STAT5通路信号转导，下调Bcl-xL表达。     

Janus激酶/信号转导和转录激活因子3对重症急性胰腺炎大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的体外作用研究

目的 探讨Janus激酶/信号转导和转录激活因子3(JAK/STAT3)信号转导通路在重症急性胰腺炎(SAP)肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤中的作用.方法 用牛磺胆酸钠建立SAP大鼠模型,取血清备用.将经原代培养的肺泡Ⅱ型上皮细胞随机分组,对照组加入不含SAP大鼠血清的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)培养液;SAP组加入含SAP大鼠血清的DMEM培养液;SAP+AG490组用JAK激酶抑制剂AG490预处理细胞,加入含SAP大鼠血清的DMEM培养液.用电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测STAT3活化状态;逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA表达;蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测蛋白水平;流式细胞技术检测肺泡表面活性物质相关蛋白C(SP-C)表达和肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡.结果 与对照组比较,SAP组STAT3活性增强,STAT3 mRNA和蛋白表达均增强,SP-C蛋白表达下降(2 h SP-C荧光指数0.69±0.02比1.02±0.03,P＜0.01),肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡增加[(11.55±1.10)%比(5.30±0.36)%,P＜0.053;与SAP组比较,SAP+AG490组STAT3活性减弱,STAT3 mRNA和蛋白表达减弱,SP-C蛋白表达下降(2 h SP-C荧光指数0.48±0.10比0.69±0.02,P＜0.01),肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡增加[(13.92±0.82)%比(11.55±1.10)%,P＜0.053.结论 提示JAK/STAT3信号转导通路参与了SAP肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的病理生理过程.     

COX-2和MMP-2在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨环氧化酶-2（cyclooxygenase,COX-2）和基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）在乳腺癌中表达的意义和相互关系。方法免疫组化方法（S-P法）观察70例乳腺癌,15例乳腺良性肿瘤与15例正常乳腺组织的COX-2和MMP-2的表达。结果正常乳腺组织和良性肿瘤中COX-2和MMP-2无表达,乳腺癌组织中COX-2和MMP-2的阳性表达率分别为57.14%和61.43%（P〈0.05）,cyclinE和p53的阳性表达与乳腺癌的临床分期密切相关（P〈0.05）;cyclinE和p53在乳腺癌的阳性表达具有相关（P〈0.05）,共同阳性表达的患者5年生存率明显低于阴性者（P〈0.05）。结论COX-2和MMP-2在乳腺癌中均有高表达,在乳腺癌的发病过程中它们的高表达具有协同效应,共同促进乳腺癌的发生和发展。     

MMP-2和TIMP-2在大肠癌中的表达及意义

<正>1材料与方法 1.1材料收集深圳市福田人民医院2002-01—2006-12间经手术切除的102例大肠癌(CRC)组织及14例大肠腺瘤组织的石蜡标本。102例CRC中,男性66例,女性36例;年龄31～88岁,平均58岁;高分化癌58例,中分化癌25例,低分     

乳腺癌环氧合酶-2和基质金属蛋白酶-2及其抑制因子的表达

目的 研究环氧合酶(COX)-2、基质金属蛋白酶(MMP)-2及其抑制因子(TIMP-2)在乳腺癌组织中的蛋白表达及其相互关系.方法 建立组织芯片平台,应用免疫组织化学S-P法检测127例乳腺癌组织COX-2、MMP-2和TIMP-2蛋白的表达情况.结果 乳腺癌COX-2、MMP-2和TIMP-2阳性率分别为81.1%(103/127)、96.9%(123/127)和60.6%(77/127);COX-2的表达与乳腺癌腋淋巴结转移和TNM分期均呈正相关(P<0.01,P<0.05),与孕激素受体表达呈负相关(P<0.05);MMP-2蛋白表达与COX-2表达呈显著正相关(r=0.290,P<0.01).结论 乳腺癌COX-2表达状况与肿瘤侵袭转移有密切关系,COX-2可能通过调控MMP-2表达来促进肿瘤侵袭转移.     

COX-2和MMP-2在胃癌组织中的表达及临床意义

目的研究环氧合酶-2（Cydooxygenase-2，COX-2）和基质金属蛋白酶-2（Matrix metalloproteinase-2，MMP-2）的表达以及与胃癌浸润转移的关系，探讨二者间的相互关系。方法采用SP免疫组织化学技术，取吉林大学第一临床医院病理科存档的胃癌石蜡标本46例及正常胃组织15例，每例切片2张，分别检测COX-2和MMP-2的表达情况，分析其与胃癌浸润转移的关系。结果用SPSS10．0统计软件进行分析。结果15例正常胃组织中COX-2和MMP-2的表达为阴性，46例胃癌组织中COX-2的阳性表达率为60．9％（28／46），显著高于正常胃组织（P〈0．05），COX-2阳性表达与胃癌淋巴结转移、临床分期相关（P〈0．05），与胃癌大小、浸润程度、分化程度无关（P〉0．05）。MMP-2的阳性表达率为71．7％（33／46），显著高于正常胃组织（P〈0．05），MMP-2阳性表达与胃癌淋巴结转移、临床分期、浸润深度相关（P〈0．05），与肿瘤大小及分化程度无关（P〉0．05），COX-2与MMP-2表达密切相关（P〈0．05）。结论COX-2和MMP-2在胃癌组织中的表达密切相关，COX-2和MMP-2的高表达促进了胃癌的浸润和转移，提示COX-2和MMP-2可作为判断预后的指标和化学治疗的靶点。     

COX-2和HER-2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的研究COX-2和HER-2在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测了68例非小细胞肺癌组织中COX-2和HER-2的表达水平,分析两者与临床病理参数之间的关系以及分析两者之间的相互关系。结果非小细胞肺癌中COX-2阳性表达率为54/68(79.41%),COX-2的高表达与病理类型及TNM分期相关(P<0.05);HER-2阳性表达率为26/68(38.24%),HER-2的表达与年龄相关(P<0.05)。HER-2与COX-2的表达强度之间呈显著正相关(r=0.2486,P=0.041)。HER-2阳性/COX-2高表达的NSCLC临床分期晚、淋巴结转移率高。结论COX-2在NSCLC中高水平表达并与HER-2密切相关,检测COX-2与HER-2的表达对NSCLC预后的判断可能具有重要价值。     

基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及意义

目的:研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)在卵巢浆液性囊腺肿瘤中的表达及与卵巢浆液性囊腺癌的临床、病理特征之间的关系.方法:通过免疫组化方法检测16例卵巢浆液性囊腺瘤、15例交界性卵巢浆液性囊腺瘤及40例卵巢浆液性囊腺癌中MMP-2和TIMP-2的表达情况,并应用图像分析仪对卵巢浆液性囊腺癌MMP-2、TIMP-2阳性细胞百分面积进行定量检测,计算MMP-2/TIMP-2比值.结果:卵巢浆液性囊腺瘤、交界性卵巢浆液性囊腺瘤及卵巢浆液性囊腺癌中MMP-2的表达分别是25%、60%、73%,TIMP-2的表达分别是31%,47%,63%.MMP-2/TIMP-2比值在卵巢浆液性囊腺癌Ⅲ、Ⅳ期较Ⅰ、Ⅱ期增大,低分化(G3)较中、高分化(G2、C1)增大.结论:MMP-2和TIMP-2可能均与卵巢浆液性囊腺癌的形成和进展有关.     

冠状动脉支架置入后血管再狭窄与PR2Y2基因单核苷酸多态性的相关性

背景:越来越多的基础研究显示P2RY2基因在心血管系统中起重要的调节作用.已有研究表明,人类尸=2开y2基因可能与冠状动脉支架置入后再狭窄的发生相关.目的: 验证人类P2RY2基因单核苷酸多态性与冠状动脉支架置入后再狭窄的相关性.设计、时间及地点:病例一对照观察,于2006-03/2008-06在新疆医科大学第一附属医院心脏中心完成.对象:纳入冠状动脉支架置入后再狭窄患者32例,另外选择120例既往无心血管系统疚病史的人作为对照组.方法:选择P2RY2基因的5个单核苷酸多态性rs4944831,rs1783596,rs4944832,rs4382936及rs10898909,通过TaqMan单核苷酸多态性基因分型的方法进行基因分型.主要观察指标:分析并比较2组5个单核苷酸多态性基因型频率和等位基因频率的分布,并应用Logistic回归分析方法分析支架置入后再狭窄主要危险因素对结果的影响.结果:支架置入后再狭窄组与正常对照组相比,rs4944831在基因型和显性模型(TG+GG)的分布差异有显著性意义(P=0.039,0.040);rs10898909在隐性模型(AA)和等位基因的分布差异有显著性意义(P=0.022,0.039).Logistic回归分析显示,TG+GG在2组的差异消失,而AA在2组的差异依然存在(P=0.016).结论:人类P2RY2基因的rs10898909可作为冠状动脉支架置入后再狭窄的标志,其AA基因型与冠状动脉支架置入后再狭窄的发生有关.     

大鼠■创伤牙周组织中PGE2及TXB2水平的分析

目的:观察大鼠创伤牙周组织中的PGE2、TXB2水平的变化,探讨大鼠创伤对牙周组织的影响。方法:将48只大鼠随机分为实验组和对照组,每大组各又分为4小组,每小组6只,创伤3d、2周、4周及12周时处死大鼠,提取创伤牙龈、牙槽骨标本测定PGE2、TXB2含量。检测结果进行统计学分析。结果:对照组各组间PGE2、TXB2含量均无差异(P>0.05)。实验组各组间PGE2、TXB2含量有显著差异(P<0.001),其中3d组除牙龈TXB2高于对照组外(P<0.01),余PGE2、TXB2均明显高于对照组(P<0.001);2周组PGE2、TXB2最高,4周组PGE2、TXB2有所下降,但均高于对照组(P<0.001);12周组PGE2、TXB2明显下降,接近对照组(P>0.05)。结论:创伤牙周组织中PGE2、TXB2的变化规律是由病变到修复到适应的过程。     

基质金属蛋白酶-2及组织金属蛋白酶抑制物-2在子宫内膜异位症中的表达及其临床意义

目的观察MMP-2和TIMP-2在子宫内膜异位症中的表达及意义。方法应用免疫组化（S-P）法检测20例正常子宫内膜、20例子宫内膜异位症的在位内膜及45例异位内膜组织中MMP-2和TIMP-2蛋白的表达。结果：MMP-2在内异症在位内膜组织、异位内膜组织阳性表达率分别与正常内膜组织比较均有显著性差异（P〈0．01）；异位内膜阳性率高于在位内膜，但在统计学上无显著性差异（P〉0．05）。TIMP-2在异位内膜组织的阳性表达率与正常内膜组织、EM在位内膜组织相比均有显著性差异（P〈0．05）；在位内膜组织的阳性表达率低于正常内膜组织，但在统计学上无显著性差异（P〉0．05）。结论：在子宫内膜异位症中MMP-2的高表达，TIMP-2蛋白的低表达，在子宫内膜异位症的发生、发展过程中具有重要作用。     

C2R模型与C2GS2模型在胸外科监护室护理人力资源效率评价中的应用研究

目的 研究某市胸外科监护室护理单元相对效率,为管理者合理配置护理人力资源提供建议.方法 应用C2R模型和C2GS2模型对某市12个胸外科监护室护理单元的相对效率进行评价.结果 从纯粹的投入产出技术层面评估,参评的护理单元中,相对有效的决策单元占75%;相对无效的决策单元通过各指标的理想值可达到相对有效.结论 胸外科监护室护理人力资源存在不足与低效并存的现象;应用DEA模型对护理效率进行评估可以为人力资源配置提供科学依据.