恶性胶质瘤耐药细胞通过Beclin1上调自噬抵抗替莫唑胺化疗

目的 分析Beclin 1与临床胶质瘤病理等级和胶质瘤复发间的关系,探讨其在胶质瘤耐药中的作用和机制. 方法 收集南方医科大学珠江医院和南方医院神经外科自2012年4月至2013年4月手术切除的胶质瘤标本53例(WHO分级Ⅰ级7例,复发2例;Ⅱ级9例,复发4例;Ⅲ级11例,复发6例;Ⅳ级9例,复发5例),免疫组化和Western blotting检测胶质瘤标本中Beclin1的表达;体外培养胶质瘤耐药细胞系U251AR和非耐药U251细胞,Western blotting检测细胞中Beclin 1和耐药蛋白P-gP的表达;Western blotting检测双链小分子Beclin 1干扰RNA(siBeclin l)转染U251AR细胞48h后Beclin 1蛋白的表达;CCK8法检测不同浓度替莫唑胺(TMZ)作用U251、U251AR和U251AR-siBeclin 1后细胞活性;Western blotting检测200μmol/L TMZ作用U251、U251AR和U251AR-siBeclin 1 48 h后Capase-3的表达;吖啶橙染色和Western blotting分别检测干扰Beclin 1表达和HCQ对U251AR细胞自噬小体数量和Capase-3表达的影响. 结果 免疫组化染色结果显示Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中Beclin 1阳性细胞数明显高于Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤.Western blotting结果显示Ⅳ级、Ⅱ和Ⅲ级、Ⅰ级中Beclin 1的表达依次降低,Ⅲ、Ⅳ级复发肿瘤Beclin 1的表达量明显高于原发肿瘤,差异有统计学意义(P＜0.05); U251AR中Beclin 1和耐药蛋白P-gP的表达量均高于U251细胞.与干扰对照组和空白对照组比较,转染siBeclin 1 48 h后干扰组Beclin 1蛋白的水平明显下降;在含TMZ(50,100,500和1000 μmol/L)培养基中培养24 h后,U251AR细胞存活率明显高于U251和si-Bec1-U251AR细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).200 μmol/L TMZ作用48 h后,U251细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达量明显高于U251AR和si-Bec l-U251AR细胞.吖啶橙染色显示在TMZ培养U251AR 48 h后,HCQ和Beclin 1干扰都导致自噬小体形成明显减少,Caspase-3的表达增高,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 Beclin 1与胶质瘤恶性程度、复发和耐药相关,可能用于胶质瘤恶性诊断和预后评估.Beclin 1在胶质瘤中的耐药功能可能是通过自噬实现的,联合运用TMZ和自噬抑制剂或Beclin 1干扰剂有助于胶质瘤的治疗.     

氯喹通过抑制自噬促进TRAIL诱导的胶质瘤细胞凋亡

目的探讨氯喹对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的胶质瘤细胞凋亡的影响。方法体外培养人脑胶质瘤细胞U251和Hela细胞,分为对照组、氯喹组、重组人TRAIL蛋白(rhTRAIL)组和联用组(氯喹与rhTRAIL联合应用);MTT法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡,共聚焦显微镜检测GFP-LC3的分布判断细胞自噬水平,Western Blot检测cleaved caspase-8的表达水平。结果氯喹和rhTRAIL均显著增加U251细胞和Hela细胞自噬水平,而且联用较单独应用自噬水平更高,Hela细胞自噬水平明显高于U251细胞。U251细胞和Hela细胞增殖抑制率和细胞凋亡率:氯喹组与对照组均无统计学差异(P0.05),rhTRAIL和联用组均明显高于氯喹组(P0.05),联用组明显高于rhTRAIL组(P0.05)。氯喹组和对照组Cleaved caspases-8水平无统计学差异(P0.05),rhTRAIL和联用组均明显增高(P0.05),联用组明显高于rhTRAIL组(P0.05)。结论氯喹能通过抑制细胞自噬,增强TRAIL诱导的U251细胞凋亡。     

PIAS3过表达抑制人脑胶质瘤U251细胞生长

目的 探讨PIAS3 过表达对人脑胶质瘤U251 细胞生长的作用及其可能的机制.方法 通过实时荧光定量PCR 检测PIAS3 在正常脑细胞和脑胶质瘤U251 细胞中的表达情况.转染PIAS3 过表达载体,提高U251 细胞中PIAS3 表达水平,通过噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖情况.Western Blot 验证PIAS3 表达与增殖相关基因PI3K 及Akt 间关系.结果 PIAS3 在正常脑组织中相对高表达,而在人脑胶质瘤U251 细胞中表达明显下降(P ＜0.01).体外转染PIAS3 过表达载体能明显抑制U251 细胞生长,并且有效抑制PI3K 活性及p-Akt 表达,但对总的Akt 无明显影响.结论 胶质瘤U251 细胞中异常低表达的PIAS3 发挥着重要的增殖促进作用,过表达PIAS3 可通过抑制PI3K/Akt 通路有效抑制U251 细胞增殖.     

miR-127-3p通过下调靶基因MAPK4抑制神经胶质瘤增殖的机制研究

目的 探讨miR-127-3p在神经胶质瘤中的表达水平差异及生物学作用。方法 用RT-PCR法检测神经胶质瘤患者及健康人群脑脊液中miR-127-3p相对表达水平; 用RT-PCR法检测人神经胶质瘤细胞株和人正常神经胶质细胞中的miR-127-3p相对表达水平; 用瞬时转染法上调神经胶质瘤细胞U251中的miR-127-3p相对表达水平,用MTT法检测细胞增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,用Western blot检测凋亡相关蛋白bcl-2、Mcl-1和bax表达水平; Targetscan等在线靶基因预测软件预测miR-127-3p的靶基因,并采用双荧光素酶报告试验和Western blot验证miR-127-3p与靶基因之间的直接作用关系。结果 神经胶质瘤患者(1.33±0.12)脑脊液中的miR-127-3p相对表达水平低于健康人群(3.62±0.26)(t=5.867,P=0.004); U251(0.59±0.05)、U373(0.96±0.08)、U87(0.77±0.03)、SHG44(1.28±0.05)中miR-127-3p相对表达水平均低于人脑正常胶质细胞株HEB(3.64±0.26)(P<0.01); 转染后24、48、72 h 150组、100组和50组细胞吸光度值均低于对照组(P<0.05),并且随着miR-127-3p mimics转染水平增高,U251细胞吸光度值越低; miR-127-3p mimics转染组(39.3±4.6%)细胞早期凋亡率高于对照组(7.2±0.6%)(P<0.05); miR-127-3p mimics转染组(9.3±2.3%)细胞晚期凋亡率高于对照组(2.4±0.5%)(P<0.05); mimic转染组(0.119±0.008)U251细胞bcl-2蛋白表达水平低于对照组(0.556±0.039),mimic转染组(0.168±0.015)U251细胞bax蛋白表达水平高于对照组(0.086±0.006),mimic转染组(0.144±0.009)U251细胞Mcl-1蛋白表达水平低于对照组(0.426±0.028)(P均<0.05); 双荧光素酶报告基因实验显示,只有当MAPK4-WT-3' UTR与miR-127-3p mimic共同转染时荧光素酶活性被抑制,这提示miR-127-3p能与MAPK4直接结合,miR-127-3p mimic转染组(0.121±0.003)U251细胞MAPK4蛋白表达水平低于对照组(0.467±0.028)(P<0.05)。结论 miR-127-3p在神经胶质瘤患者脑脊液中呈低表达,上调miR-127-3p能抑制神经胶质瘤U251细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Bcl凋亡相关基因及抑制靶基因MAPK4有关。     

14-3-3蛋白在人脑胶质瘤中的表达及生物学意义

目的检测14-3-3蛋白在人脑胶质瘤中的表达情况,探讨其在胶质瘤发生发展中的生物学意义。方法采用免疫组化亲和素-生物素过氧化物酶复合物(ABC)法检测5个胶质瘤细胞系(U251MG,U87MG,BT325,SHG44和C6)、121例人脑胶质瘤石蜡标本和10例正常脑组织中14-3-3蛋白的表达情况。分析14-3-3蛋白的表达在胶质瘤发生发展中的作用。结果在正常脑组织标本中,13-3-3蛋白主要表达于神经元的胞体和突起,仅在少数的胶质细胞中可见14-3-3蛋白的弱表达。然而,5个胶质瘤细胞系和绝大部分星形细胞瘤中可见14-3-3蛋白的阳性表达,其表达阳性率为:Ⅰ级78.6%(11/14),II级75%(18/24),III级76.2%(16/21),IV级80%(20/25)。不同恶性级别的星形细胞瘤中,14-3-3蛋白的阳性表达率无显著差别,但14-3-3蛋白的表达强度和范围有随肿瘤的恶性度增高而增加的趋势。其它类型的胶质瘤中也可见14-3-3蛋白的大量表达,其表达阳性率为:少突胶质细胞瘤66.7%(4/6),间变型少突胶质细胞瘤100%(4/4),室管膜瘤50%(2/4),间变型室管膜瘤66.7%(2/3),脉络从乳头状瘤100%(5/5),松果体细胞瘤100%(3/3),髓母细胞瘤66.7%(8/12)。结论14-3-3蛋白在人脑胶质瘤中有大量的表达。14-3-3蛋白表达上调可能是胶质瘤细胞对抗调亡的一种共同机制,以14-3-3蛋白为靶点有望成为一种有前景的新的胶质瘤生物学治疗方法。     

稳定整合靶向性14—3—3ζ基因RNA干涉载体的胶质瘤细胞系建立

目的构建针对细胞凋亡抑制蛋白14-3-3ζ基因的特异性RNA干涉载体,并建立稳定转染该干涉载体的人胶质瘤细胞系。方法根据14-3-3ζ编码序列,设计并合成针对14-3-3ζ基因的特异性RNA干涉片断,并将其克隆入pSilencer3．1．H1neo干涉载体中,构建14-3-3ζ基因shRNA真核表达载体pSilencer-14-3-3ζ。重组载体pSilencer-14-3-3ζ和pSilencer3．1-Hlneo阴性对照载体pSilencer3．1-HlneoNegative经脂质体LipofectamineTM2000介导法转染胶质瘤细胞株U251;转染细胞经过G418筛选,采用Westernblot方法分别在蛋白水平检测、筛选G418抗性的克隆细胞。结果酶切鉴定和核苷酸序列分析证实,成功构建了14-3-3ζ基因shRNA真核表达载体pSilencer-14-3-3ζ,经酶切、测序鉴定证实克隆正确。获得了稳定转染pSilencer-14-3-3ζ载体的胶质瘤细胞株。结论14-3-3ζ基因特异性RNA干涉载体能够显著抑制14-3-3ζ基因在U251细胞中的表达,这为进一步研究14-3-3ζ在胶质瘤细胞系U251中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。     

碘125粒子内放疗后胶质瘤U251细胞自噬的发生

目的探讨碘125（125I）内放疗后胶质瘤U251细胞发生自噬的情况。方法用甲基噻唑基四唑（MTT）比色法检测不同照射时间及剂量下125I粒子对U251细胞增殖活性的影响。通过单丹（磺）酰戊二胺（MDC）染色,自噬溶酶体活性的检测以及Western blotting蛋白印迹检测微管相关蛋白轻链3（LC3）来证实125I粒子对U251细胞自噬发生的影响。结果125I粒子照射U251细胞后细胞活性明显下降并呈现时间和剂量相关性。MDC染色和溶酶体活性检测以及LC3-Ⅱ蛋白印迹均证实内放疗照射后U251细胞自噬明显增加。结论125I粒子内放疗后U251细胞自噬明显增加。     

姜黄素通过COX-2抑制人脑胶质瘤细胞趋化运动和侵袭

目的探讨姜黄素对人脑胶质瘤U251细胞趋化运动、侵袭能力的影响及其机制。方法 U251细胞置于含10%牛血清白蛋白的RPM1640培养液中培养,用不同浓度姜黄素作用U251细胞,用免疫组化染色并在激光共聚焦显微镜下观察U251细胞环氧化酶2(COX-2)蛋白表达,Transwell小室实验判断姜黄素对U251细胞运动、侵袭能力的影响。结果姜黄素对U251细胞的生长具有抑制作用,而且呈浓度-时间依赖性(P0.05)。姜黄素对U251细胞COX-2蛋白表达具有明显抑制作用(P0.05),姜黄素对U251细胞运动、侵袭能力具有明显抑制作用(P0.05)。结论姜黄素可能通过抑制U251细胞COX-2蛋白表达从而抑制细胞的趋化运动及侵袭能力;并呈时间-浓度依赖性。     

抑制自噬晚期阶段增强榭皮素诱导的胶质瘤细胞凋亡

目的研究抑制自噬不同阶段对榭皮素作用于胶质瘤细胞的影响,并对其机制进行初步探讨。方法通过3-甲基腺嘌呤(3-MA)及转染Beclin 1 shRNA质粒抑制自噬早期阶段,通过氯喹(CQ)抑制自噬晚期阶段。噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞活性。通过透射电镜及Western Blot检测自噬水平。通过流式细胞技术及Western Blot检测细胞凋亡。结果榭皮素可以诱导胶质瘤细胞凋亡及自噬的发生。抑制自噬的早期阶段会减弱榭皮素对胶质瘤细胞的毒性作用,抑制自噬的晚期阶段可以增强榭皮素诱导的胶质瘤细胞凋亡。结论氯喹与榭皮素联合用药具有协同作用,可能对胶质瘤的治疗提供新的思路。     

H2O2预处理通过上调14-3-3蛋白表达减轻MPP+对PC12细胞的毒性作用

目的 探讨H2O2预处理(HPP)1-甲基4-苯基吡啶离子(MPP )诱导PC12细胞损伤的保护作用和可能的机制.方法 采用4甲基偶氮唑盐法(MTT法)、自动生化分析仪、4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法及免疫印迹(western blot)技术分别检测细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞凋亡及14-3-3蛋白的表达.结果 H2O2预处理能够上调14-3-3蛋白表达,增加PC12细胞活力(MPP 组52.46%±6.15%,HPP MPP 组83.78%±5.84%),抑制LDH的活性[MPP 组(37.31±3.99)U/L,HPP MPP 组(12.49±2.26)U/L];抑制细胞凋亡(MPP 48.72%±6.68%,HPP MPP 组17.56%±5.21%).结论 H202预处理能减轻MPP 对PCI2细胞的毒性损伤作用,这种保护作用是通过上调14-3-3蛋白的表达实现的.     

14-3-3蛋白在星形细胞瘤中的表达及意义

目的探讨14-3-3蛋白在星形细胞瘤中的表达与肿瘤病理分级和预后间的关系。方法采用免疫组化ABC法检测10例正常脑组织和67例确诊并有随访的人脑星形细胞瘤石蜡标本中14-3-3蛋白的表达情况。分析14-3-3蛋白的表达与肿瘤恶性程度及预后间的关系。结果在正常脑组织标本中，14-3-3蛋白主要表达于神经元胞体和突起，而在少数的胶质细胞中仅见其弱表达。绝大部分星形胶质细胞瘤中可见14-3-3蛋白阳性表达，其阳性表达率为：Ⅱ级76．5％（13／17），Ⅲ级76．2％（16／21），Ⅳ级79．3％（23／29）。不同恶性级别的星形细胞肿瘤中，14-3-3蛋白的阳性表达率无显著差别（P〉0．05），但14-3-3蛋白表达的强度和范围有随肿瘤的恶性度增高而增加的趋势（P〈0．05）。52例14-3-3蛋白阳性表达患者的生存期明显短于15例14-3-3蛋白表达阴性的患者（P〈0．01）。结论14-3-3蛋白在人脑星形细胞瘤中的表达上凋与肿瘤的恶性程度及预后相关。14-3-3蛋白有望成为星形细胞瘤基因治疗的新靶点。     

14-3-3β在人脑星形细胞瘤中的表达及意义

目的探讨14-3-3β在人脑星形细胞瘤中表达与肿瘤病理分级的关系。方法采用免疫组化法检测14-3-3β亚型在80例人脑星形细胞瘤和10例正常脑组织标本中的表达水平。结果在正常脑组织中，14-3-3蛋白6亚型只表达于神经元胞体和突起，在胶质细胞中未见表达。母亚型在人脑星形细胞瘤的表达阳性率及免疫反应评分（IRS）分别为60％、1．86±1．83。Ⅰ～Ⅳ级脑星形细胞瘤中β亚型表达阳性率分别为40％（8／20）、50％（10／20）、70％（14／20）和80％（16／20）。Ⅰ～Ⅳ级脑星形细胞瘤中β亚型IRS分别为0．88．4±0．27、1．15±0．28、2．19±0．37和3．23±0．47。不同恶性级别的脑星形细胞瘤中，14．3-3蛋白β亚型的阳性表达率无显著差异，但其IRS有显著差异（P〈0．05）。结论14-3-3β在人脑星形细胞瘤中高表达，且随着星形细胞瘤病理级别的增高而表达增强，14-3-3蛋白β亚型在脑星形细胞瘤的发生过程中具有重要作用。     

14-3-3蛋白与吉兰-巴雷综合征早期诊断关系的研究

目的 观察吉兰-巴雷综合征(GBS)急性期脑脊液中是否存在14-3-3蛋白,探讨其与GBS早期诊断是否具有相关性. 方法 采用ELISA KiT方法检测40例GBS患者起病后3 d内、第7天、第14天脑脊液14-3-3蛋白浓度,对照组为10例同期骨科手术患者及25例同期住院的其它神经系统疾病患者;并同时用罗氏P.800全自动生化分析仪检测脑脊液蛋白;观察早期GBS患者脑脊液中14-3-3蛋白含量变化及其与脑脊液蛋白是否具有相关性.结果 GBS组在起病后3 d内、第7天、第14天脑脊液中测得的14-3-3蛋白含量分别为(6.237±2.627)ng/mL、(8.369±3.003)ng/mL、(13.431±6.461)ng/mL;脑脊液蛋白含量分别为(0.308±0.1 13)g/L、(0.378±0.135)g/L、(0.587±0.273)g/L;GBS组脑脊液14-3-3蛋白最早可于起病后20～48 h出现,其含量在起病后第7天、第14天明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);GBS组脑脊液蛋白含量在起病后第14天明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);脑脊液14-3-3蛋白含量与脑脊液蛋白含量存在正相关关系(P<0.05).结论 GBS早期脑脊液中存在14-3-3蛋白,其含量增高可使脑脊液蛋白量随之增高:用ELISA KiT方法检测脑脊液中14-3-3蛋白浓度可用于GBS的早期诊断.     

脑脊液14-3-3蛋白定量检测对散发性Creutzfeldt-Jakob病的诊断价值

目的探讨脑脊液14-3-3蛋白定量检测对散发性Creutzfeldt-Jakob病(sCJD)的诊断价值。方法采用Capture Assay方法定量检测14例sCJD患者(sCJD组)、10例痴呆患者(OD组)、12例非痴呆患者(ND组)脑脊液14-3-3蛋白的含量。结果脑脊液中14-3-3蛋白含量中位数(MD)sCJD组为40.00ng/mg,OD组为2.65ng/mg,ND组为3.10ng/mg;sCJD组脑脊液中14-3-3蛋白含量明显高于OD组及ND组(均P<0.01)。以脑脊液14-3-3蛋白含量≥9ng/ml为分界值时,其对sCJD诊断的敏感性为86.7%,特异性为86.4%,阳性预测值为81.3%,阴性预测值为90.5%。结论应用Capture Assay方法定量检测脑脊液中14-3-3蛋白含量对于临床可疑sCJD的患者有较高的敏感性和特异性。     

14-3-3 gamma and zeta protein expression in active microglia：Immune response mechanisms of Parkinson＇s disease

BACKGROUND： The progressive degeneration of dopaminergic neurons in Parkinson＇s disease is associated with an activated glial reaction, combined with an inflammatory process. These responses lead to the production of cytokines, such as interferon- γ, tumor necrosis factor- α （TNF- α ）, and interleukin-1 β. In addition, 14-3-3 protein is a component of Lewy bodies in Parkinson＇s disease.
OBJECTIVE： To observe the expression of 14-3-3 γ and ζ protein, as well as TNF-α, in mouse microglia, as well as changes after lipopolysaccharide （LPS） activation. To investigate possible mechanisms of dopaminergic neuronal injury due to activated microglia. To and clarify the immune response mechanisms of Parkinson＇s disease.
DESIGN： Randomized controlled observation, cell study.
SETTING： Laboratory of Department of Neurology, the Affiliated Union Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology.
MATERIALS： The BV-2 immortalized murine microglia cell line was purchased from China Unit cell center. LPS was provided by Sigma Company. Cell cultures were purchased from Gibco. Phospho-（Ser） 14-3-3 binding motif antibody was purchased from Santa Cruz Biotechnologies. FITC was provided by Linfei Biotechnology, Wuhan, China. TNF- α ELISA was provided by Jingmei Biotech Co, Wuhan, China. The flow cytometer was provided by Becton Dickinson, Canada.
METHODS： The present experiment was performed at the Laboratory of Department of Neurology, the Affiliated Union Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology from April to December 2006. The microglial cell line, BV-2, was cultured in vitro and stimulated with LPS for 2, 6, 12, and 24 hours. BV-2 cultures without LPS were used as controls. MAIN OUTCOME MEASURES： Expression of 14-3-3 γ protein was detected by flow cytometry. 14-3-3 ζ percentage expression and the mean fluorescence intensity was detected by immunofluorescence. TNF- α expression was detected by ELISA.
RESULTS?     

14-3-3蛋白在PC12细胞的分布及MPP+对其表达的影响

目的探讨14-3-3蛋白在PC12细胞中的分布及其与MPP 诱导PC12细胞死亡的关系。方法用免疫荧光染色检测14-3-3蛋白的分布,并分别用免疫印迹技术与MTT法检测MPP ,对14-3-3蛋白表达及细胞活力的影响。结果PC12细胞中β、γ、ε、ζ、η和θ亚型免疫反应阳性。14-3-3蛋白表达随着MPP 处理的时间延长呈下降趋势,在6h变化不明显,12h显著下降(P<0.05),到48h后14-3-3蛋白的减少极其显著(P<0.01)。PC12细胞的存活率也呈现同样的变化趋势。结论MPP 引起PC12细胞的死亡可能与细胞内14-3-3蛋白含量的下降有关。     

脑脊液14-3-3蛋白和神经元特异性烯醇化酶对Creutzfeldt-Jakob病的诊断价值

目的探讨脑脊液14-3-3蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)对Creutzfeldt-Jakob病(CJD)的诊断价值。方法采用capture assay方法及酶联免疫吸附法分别定量检测14例CJD患者(CJD组)、10例其他痴呆患者(OD组)及12例非痴呆患者(ND组)脑脊液14-3-3蛋白和NSE的含量,并进行特异性和敏感性分析。结果脑脊液中14-3-3蛋白含量CJD组为40.0ng/ml,OD组为2.65ng/ml,ND组为3.10ng/ml;NSE含量CJD组为(48.43±30.39)ng/ml,OD组为(14.00±11.52)ng/ml,ND组为(20.50±25.67)ng/ml;CJD组脑脊液中14-3-3蛋白及NSE含量明显高于OD组及ND组(均P<0.01)。以脑脊液14-3-3蛋白≥9ng/ml为分界值时,其对CJD诊断的敏感性为86.7%,特异性为86.4%;以NSE≥24ng/ml为分界值时,其敏感性为78.6%,特异性为77.3%;当以14-3-3>9ng/ml及NSE>24ng/ml为分界值,对CJD诊断的敏感性、特异性分别为90%、92.9%。结论脑脊液14-3-3蛋白对CJD的诊断价值高于NSE,两者联合将提高对CJD诊断的敏感性和特异性。     

脑脊液14-3-3蛋白分析在评价多发性硬化轴索损害中的临床价值

目的 评价脑脊液14-3-3蛋白与多发性硬化（MS）患者轴索损害之间的关系。方法 从47例MS患者及36例对照中获取脑脊液标本，用免疫印迹法分析脑脊液14-3-3蛋白条带。结果 MS患者脑脊液14-3-3蛋白阳性率为24．5％，急性期起病的患者12例中7例阳性；阳性的患者其扩展的残疾功能状况量表评分均≥2．0分，且〉4．5分的患者阳性率更高。结论 免疫印迹法分析脑脊液14-3-3蛋白对判断MS患者急性期是否出现轴索损害及遗留神经功能缺损有一定的参考价值。     

Creutzfeldt-Jakob病脑组织14-3-3蛋白表达及其意义

目的探讨Creutzfeldt—Jakob病（CJD）脑组织内14-3-3蛋白表达及其诊断意义。方法实验组为5例cJD额叶组织，对照组为4例非CJD额叶组织。采用14-3-3B和s抗体，通过链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶（S—P）免疫组织化学方法进行检测。并参照KB、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、PrP免疫组织化学染色和129基因型检测结果。结果实验组5例脑组织14—3-3蛋白有较多地表达，其中3例灰质与星形胶质细胞尤著。其表达程度与PrP沉积类型有关，而与PrP129基因型无关。对照组4例中除2例急性脑挫伤仅个别神经细胞有表达外，肾上腺脑白质营养不良与额颞叶痴呆灰质和白质均无表达。结论14-3．3蛋白在脑内较多地表达，有利于CJD的病理诊断。