脑缺血上调大鼠神经元和星形胶质细胞CDK4的表达

目的:研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后CDK4在神经元和星形胶质细胞的表达。方法:SD大鼠25只,随机分为假手术组和再灌注1d、3d、7d、14d组,建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,假手术组仅进行手术不造成缺血状态,应用流式细胞术检测各组神经元和星形胶质细胞中CDK4的表达。结果:缺血侧皮质星形胶质细胞和神经元中的CDK4的表达在再灌注7d、14d后表达上调,与假手术组比较有差异(P<0.05);大脑皮质神经元和星形胶质细胞的比较发现,神经元中的CDK4在假手术组、再灌注7d组的表达水平高于星形胶质细胞(P<0.05)。结论:脑缺血后,缺血侧皮质区星形胶质细胞和神经元的CDK4表达上调。     

局灶性脑缺血预处理星形胶质细胞GFAP表达变化

目的观察GFAP在大鼠局灶脑缺血和局灶脑缺血预处理（IPC）中的表达。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,将大鼠分为正常组、MCAO组I、PC＋MCAO组,按缺血时间不同各组又分为3 h6、h1、2 h、1 d、3d7、d组,观察1 d时间点大鼠神经功能、梗死体积,观察不同时间星形胶质细胞变化及其标志物GFAP表达。结果10 min IPC可使大鼠神经功能增加并减少梗死体积,MCAO和IPC＋MCAO后星形胶质细胞标志物GFAP表达随缺血时间延长阳性表达增多,10 minIPC随缺血时间延长,星形胶质细胞阳性细胞数增多,在缺血1、3、7 d明显增加,与MCAO相比差异显著。结论缺血预处理可能通过激活星形胶质细胞产生缺血耐受作用。     

局灶脑缺血边缘区星形胶质细胞的超微结构变化

目的：观察缺血再灌边缘区星形胶质细胞的形态学和超微结构变化，了解其坏死过程中形态学变化特点。方法：SD大鼠随机分为假手术组、单纯缺血组、缺血再灌组。标本冠状面按A，B，C，D4等分切脑。采用线栓并环扎的方法建立大鼠局灶脑缺血模型，单片脑组织TTC染色定位边缘区。取缺血周围区和中心区脑组织，经固定包埋，半薄切片(1μm)，超薄切片。JEOL100透射电镜下观察。结果：缺血3h既可见星形胶质细胞明显变化，以细胞和核肿胀为主。再灌3h胞浆内可见肿大的线粒体和空泡变。缺血6h：细胞水肿加重。缺血6h再灌3h可见细胞肿胀破溃，染色质漏出核周，核周明显水肿。缺血12h，水肿进一步加重。缺血24h及再灌3h星形胶质细胞核破溃变形，核周明显水肿。结论：星形胶质细胞在缺血3h即可发生明显的结构变化，缺血中心区的星形细胞随着缺血时间的延长变化逐渐加重，而边缘区细胞的损伤与缺血时间星不一致性。星形胶质细胞对缺血星高度的敏感性，可以作为判断早期缺血的一个指标。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后反应性星形胶质细胞对海马CA1区细胞增殖的影响

我们采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注动物模型，模拟人类大脑中动脉主干梗塞的病理过程，探讨脑损伤时反应性星形胶质细胞对海马CA1区细胞增殖的影响。     

局灶脑缺血边缘区星形胶质细胞的超微结构变化

目的:观察缺血再灌边缘区星形胶质细胞的形态学和超微结构变化,了解其坏死过程中形态学变化特点。方法:SD大鼠随机分为假手术组、单纯缺血组、缺血再灌组。标本冠状面按A,B,C,D4等分切脑。采用线栓并环扎的方法建立大鼠局灶脑缺血模型,单片脑组织TTC染色定位边缘区。取缺血周围区和中心区脑组织,经固定包埋,半薄切片(1μm),超薄切片。JEOL100透射电镜下观察。结果:缺血3h既可见星形胶质细胞明显变化,以细胞和核肿胀为主。再灌3h胞浆内可见肿大的线粒体和空泡变。缺血6h:细胞水肿加重。缺血6h再灌3h可见细胞肿胀破溃,染色质漏出核周,核周明显水肿。缺血12h,水肿进一步加重。缺血24h及再灌3h星形胶质细胞核破溃变形,核周明显水肿。结论:星形胶质细胞在缺血3h即可发生明显的结构变化,缺血中心区的星形细胞随着缺血时间的延长变化逐渐加重,而边缘区细胞的损伤与缺血时间呈不一致性。星形胶质细胞对缺血呈高度的敏感性,可以作为判断早期缺血的一个指标。     

大鼠局灶性脑缺血后Cdh1 mRNA水平及Cdh1蛋白分布的改变

目的:探讨大鼠局灶性脑缺血损伤后Cdh1 mRNA水平的变化及其在不同类型神经细胞中的分布变化。方法:雄性成年SD大鼠30只,线栓法建立右侧大脑中动脉缺血模型,分别于缺血前和缺血再灌注后1、3、7d采用实时荧光定量PCR技术检测缺血侧和非缺血侧脑组织中Cdh1 mRNA的水平;缺血再灌注后7d免疫荧光双标法检测Cdh1在神经元和星形胶质细胞中的分布情况。结果:脑缺血前,两侧脑组织中Cdh1 mRNA的水平差异无统计学意义。缺血再灌注后1、3、7d,缺血侧脑组织Cdh1 mRNA水平均低于非缺血侧脑组织(P0.05);缺血再灌注后7d,与非缺血侧相比,缺血侧神经元明显减少,星形胶质细胞增多;在非缺血侧Cdh1主要表达于神经元,星形胶质细胞中表达较少,在缺血侧Cdh1在神经元及激活的星形胶质细胞中均有表达。结论:大鼠局灶性脑缺血损伤后,缺血侧Cdh1 mRNA的水平较非缺血侧降低,且Cdh1在神经元和星形胶质细胞中分布情况发生变化。     

大鼠局灶性脑缺血后星形胶质细胞的活化及桂哌齐特对神经功能的影响

目的：观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑星形胶质细胞的不同活化状态的动态变化及桂哌齐特对鼠神经功能的影响，探讨星形胶质细胞在脑缺血损伤中的作用机制。方法：健康成年雄性SD大鼠24只，单纯随机分为3组：假手术组(n=6)、模型组(n=8)和桂哌齐特组(n=8)。采用免疫组织化学法检测脑缺血再灌注后22h和70h梗死灶周边区星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达及药物的影响，并进行神经功能评分。结果：大鼠再灌注后22h皮质及纹状体梗死周边区的星形胶质细胞大量增生，细胞突起缩短增粗，染色增强；桂哌齐特组GFAP表达为8484．46&;#177;787．45，与模型组9565．17&;#177;1105．52比较显著减少(P&;lt;0．05)。再灌注后70h相应脑区域内星形胶质细胞GFAP的表达较22h有所减弱，桂哌齐特组GFAP表达显著增强(P&;lt;0.05)，神经功能评分均明显减少(P&;lt;0．05)。结论：脑缺血损伤后GFAP的活化反应在不同的时间具有双向作用，桂哌齐特显著改善神经功能，可能与其调节反应性星形胶质细胞的活性有关。     

大鼠局灶性脑缺血后星形胶质细胞的活化及桂哌齐特对神经功能的影响

目的:观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑星形胶质细胞的不同活化状态的动态变化及桂哌齐特对鼠神经功能的影响,探讨星形胶质细胞在脑缺血损伤中的作用机制。方法:健康成年雄性SD大鼠24只,单纯随机分为3组:假手术组(n=6)、模型组(n=8)和桂哌齐特组(n=8)。采用免疫组织化学法检测脑缺血再灌注后22h和70h梗死灶周边区星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)的表达及药物的影响,并进行神经功能评分。结果:大鼠再灌注后22h皮质及纹状体梗死周边区的星形胶质细胞大量增生,细胞突起缩短增粗,染色增强;桂哌齐特组GFAP表达为8484.46±787.45,与模型组9565.17±1105.52比较显著减少(P<0.05)。再灌注后70h相应脑区域内星形胶质细胞GFAP的表达较22h有所减弱,桂哌齐特组GFAP表达显著增强(P<0.05),神经功能评分均明显减少(P<0.05)。结论:脑缺血损伤后GFAP的活化反应在不同的时间具有双向作用,桂哌齐特显著改善神经功能,可能与其调节反应性星形胶质细胞的活性有关。     

脑缺血后大鼠神经元和星形胶质细胞p15ink4b表达的差异研究

目的:比较研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p15ink4b在神经元和星形胶质细胞的表达。方法:建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,应用流式细胞术检测各组MCAO再灌注后不同时期神经元和星形胶质细胞中的p15ink4b的表达。结果:缺血侧皮质区星形胶质细胞中的p15ink4b的表达在再灌注3d后开始下调,14d显著下调,与假手术组比较有显著性差异(P<0.05);缺血侧皮质神经元中的p15ink4b在再灌注14d后表达下调,与假手术组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:局灶性脑缺血再灌注损伤后,缺血侧皮质区星形胶质细胞和神经元均有p15ink4b不同程度的表达下调,星形胶质细胞中的p15ink4b表达下调比神经元更为显著。     

针刺对局部脑缺血大鼠大脑皮层基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的：观察针刺对局部脑缺血大鼠大脑皮层基质金属蛋白-2（MMP-2）表达的影响。方法：Wistar大鼠24只,分为A、B、C3组各8只,A组大鼠不做任何处理,B、C组建立大鼠大脑中动脉阻塞模型（MCAO）,C组于造模结束30min后针刺大鼠肢体,5h后再针刺1次,以后每天1次,均20min。3组大鼠均采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）观察大鼠皮层MMP-2 mRNA的表达,免疫组化观察MMP-2蛋白的表达。结果：A组大鼠大脑皮层MMP-2 mRNA和MMP-2蛋白有少量表达,B组增高明显（P〈0.01）;与B组比较,C组MMP-2 mRNA及MMP-2蛋白表达也明显降低（P〈0.01,0.05）。结论：针刺可能通过降低MMP-2表达,减少脑水肿,保护脑组织。     

Evaluation of Cerebral Blood Flow Changes in Focal Cerebral Ischemia Rats by Using Transcranial Doppler Ultrasonography

Ischemic stroke is typically characterized by the disruption of cerebral blood flow. This study aimed to consecutively evaluate the cerebral blood flow changes in a focal ischemia rat model during the occlusion-reperfusion procedure and along the recovery stage after stroke. In 12 Sprague Dawley (SD) rats, a middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAo/r) surgery was conducted, which combines a permanent occlusion of the right common carotid artery (CCA), external carotid artery (ECA) and a transient occlusion of the right internal carotid artery (ICA) and middle cerebral artery (MCA) with a monofilament introduced from the proximal ICA towards the distal right ICA then removed after 90 min. Blood flow velocity (BFV) from the concerned arteries were measured using ultrasonography (13–4 MHz) at the basal stage before the surgery, after the reperfusion stage and during the post-stroke status. At reperfusion stage and after, BFV increased significantly in the left ICA and in the basilar artery (BA) (starting from post-24 h, p < 0.05 vs. basal). Moreover, BFV were reversed in the distal right ICA and reflow was recorded in the right MCA. Time-average maximum BFV in the right MCA at reperfusion and post-stroke 24–96 h was decreased significantly (p < 0.05 vs. basal). The reversed flow in the right ICA was enabled by the settlement of the collateral supply through the circle of Willis which consisted in higher BFV in the opposite ICA and in the BA still 24 h, although the proximal right ICA remain occluded. Ultrasound measurement of BFV helps to provide information on the redistribution of the blood flow supply after the onset of stroke. (E-mail: k.y.tong@polyu.edu.hk)     

即时高压氧对大鼠局灶性脑缺血后梗死体积的影响

目的探讨即时高压氧对大鼠局灶性脑缺血后梗死体积的影响。方法 Sprague-Dawly大鼠随机分成对照组(n=9)、高压空气组(n=9)、高压氧组(n=9)、假手术组(n=5),前三组应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型,高压空气组、高压氧组在高压氧舱内造模,高压氧组于造模后立即行高压氧治疗。各组大鼠均于术后6 h断头取脑,计算各组大鼠脑梗死占脑总体积百分比。结果与对照组相比,高压氧组及高压空气组梗死百分比均显著减少(P0.001),高压氧组减少得更显著(P0.001)。结论即时高压氧治疗能够降低大鼠脑局灶性缺血后梗死体积。     

大鼠局灶脑缺血区神经元轴突可塑性的实验研究

为探查脑缺血后期神经元轴突在梗塞灶的出芽和再生情况,运用免疫组织化学技术对３６只雄性ＳＤ大鼠进行了研究。结果：在脑缺血３ｄ－７周,脑梗塞灶周围区ＮＦ２００阳性神经元轴突的形态学改变不显著,但在梗塞灶中央区,神经元轴突排列紊乱,粗细不均和断裂,共数量显著减少;而在脑缺血２－６周,脑梗塞灶中央区神经元轴突的数量逐渐增加。其变化在脑缺血６周最显著,阳性纤维明显增粗、扭曲和染色加深,并从梗塞灶周围区向中央     

水通道蛋白9与血脑屏障通透性在大鼠缺血性脑水肿中的变化

目的:探讨水通道蛋白9(AQP9)及血脑屏障(BBB)通透性在大鼠缺血性脑组织中的表达变化及其与脑水肿形成的关系。方法:SD大鼠60只,随机分为缺血组40只和假手术组20只。缺血组采用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血模型,假手术组不造成缺血。在脑缺血6、12、24、48、72 h,通过光镜对缺血脑组织进行病理观察,检测脑缺血不同时程脑中伊文思蓝(EB)外渗的量,并应用免疫组化技术测定梗死区AQP9的分布及表达水平。结果:脑缺血后,光镜下可见神经元变性坏死,界限不清,核仁消失,血管内皮细胞肿胀,周围间质增大,部分细胞坏死,胶质细胞增生;脑缺血后6h,脑组织EB含量开始增加,并随缺血时间延长逐渐上升,在缺血后48 h达到高峰。在海马、透明隔、脉络丛、大脑皮质等发现AQP9于缺血后6 h开始上升,与EB含量的变化相似,48 h达到高峰,二者与假手术组相比差异有统计学意义(P<0.05);AQP9的表达变化与EB呈正相关(r>0.67,P<0.05)。结论:脑缺血后AQP9表达变化与血BBB的开放和脑水肿的形成密切相关,提示AQP9可能是缺血性脑水肿形成的重要参与因素。     

帕瑞昔布在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用

[目的]探讨帕瑞昔布在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用.[方法] Sprague-Dawley雄性大鼠36只,随机分为3组：假手术组（SH组）、缺血再灌注组（I/R组）、帕瑞昔布组（PA组）.电凝左侧大脑中动脉、夹闭双侧颈总动脉60min以制备脑缺血再灌注模型,再灌注72h时行神经功能缺失评分、2,3,5-氯化三苯四唑（TTC）染色并计算脑梗死容积百分比、Western blot检测缺血侧半影区高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达.[结果] I/R组神经功能缺失评分、梗死容积百分比明显高于PA组（P〈0.05）;与SH组相比,I/R组缺血侧半影区HMGB1表达减少,而PA组较I/R组HMGB1表达减少（P〈0.05）.[结论] 帕瑞昔布可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,可能是通过抑制炎症介质表达而发挥神经保护作用.     

电针结合经颅磁刺激对局灶性脑缺血大鼠pCREB表达的影响

目的：探讨电针结合经颅磁刺激（rTMS）对局灶性脑缺血大鼠磷酸化环腺苷酸反应元件结合蛋白（pCREB）表达的影响及其治疗缺血性脑损伤的机制。方法：Wistar大鼠75只,随机分为A、B、C、D及E组各15只,A组为正常对照,B、C、D及E组大鼠采用线栓法制备局灶性脑缺血模型,术后A、B组不实施处理,C组进行电针治疗,D组给予rTMS治疗,E组给予电针及rTMS联合治疗。通过Western blot检测脑缺血后第7、14及28d3个不同时相大鼠海马胞核内pCREB的表达,并观测神经功能缺损程度评分的变化。结果：脑缺血后不同时相点缺血侧海马pCREB阳性表达和灰度值,B组在7d时高于A组,28d时低于A组（P〈0．05）,14d时与A组比较差异无显著性意义;C、D组和E组各时相点均高于B组,7及14d时高于A组（均P〈0．05）,28d时与A组比较无差异;E组7及14d时相点均高于C及D组（P〈0．05）;C与D组各时相点均无差异。各时相点神经功能缺损评分C、D组和E组均较B组下降（P〈0．01）,尤以E组为明显。结论：电针结合rTMS对脑卒中后神经功能的恢复有显著的促进作用,pCREB的表达增强可能是其治疗缺血性脑卒中的机制之一。